农药对食用菌菌丝生长的影响 食用菌的农药残留问题受到更多的社会关注,目前造成农药残留超标的的主要原因有一是施药技术不到位,设备落后,施用农药过程中操作不规范,污染环境和作物;二是选用农药的种类、剂量、安全间隔施药不合理,滥用高毒、高残留农药;三是不在安全间隔期收获农作物,从而威胁食用菌产品质量安全。本文研究了农药对食用菌菌丝生长影响,探索了安全使用农药的方法,对食用菌安全生产有一定的指导作用。1 材料和方法1.1 试验材料1.1.1 农药种类 德国拜耳作物科学有限公司的2.5%溴氰菊酯乳油 江苏扬农化工集团有限公司的10%氯氰菊酯乳油 山东圣鹏农药有限公司的10%联苯菊酯乳油 浙江威尔达化工有限公司的20%甲氰菊酯乳油 江苏苏州佳辉化工有限公司的480克/升毒死蜱乳油 南通江山农药化工股份有限公司的77.5%敌敌畏乳油 江苏龙灯化学有限公司的70%可湿性粉剂 江苏扬农化工有限公司的70%甲基托布津可湿性粉剂和50%多菌灵可湿 性粉剂1.1.2 菌种试验食用菌有5种,分别为真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇,均为福建省主栽食用菌的品种,菌种由*******菌物研究中心提供。1.2 方法1.2.1 PDA培养基的配制去皮切块处理马铃薯,称取200 g,加蒸馏水1L煮沸,滤去土豆残渣,再加20 g葡萄糖和15~20 g琼脂煮沸,趁热充分溶解后纱布过滤定容,分装三角瓶,冷却后贮存备用。1.2.2未灭菌的农药对五种食用菌菌丝的影响农药浓度配置:农药对真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇生长影响的试验中,每种农药设5个浓度处理(表3-1),共21个处理,包括一个空白对照。每个处理水平设3个重复。所用的农药在实验室预先配好母液,存放备用。农药对真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇的生长影响:将农药(农药在高温下会分解,故而不高温灭菌)经过滤菌器后(粉剂不过滤)添加至已灭菌的PDA培养基的三角瓶中,按照表2的处理水平配置成含有农药的培养基后倒平板,冷却待用。用直径为1 cm的无菌打孔器打孔母种的培养基,挑取统一生长情况的母种块接种于上述农药浓度水平处理平板中,以纯PDA平板作为空白对照组,置于23-25℃下培养,待空白对照组菌丝生长至平板的三分之二,结束实验观察,测量各个处理水平菌落半径的大小。[img=,622,434]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301423_01_2903169_3.png[/img]2 结果与分析2.1农药对五种食用菌菌丝的影响2.1.1 九种农药对真姬菇的菌丝生长影响[img=,660,511]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301423_02_2903169_3.png[/img]从表2可知,敌敌畏与溴氰菊酯对真姬菇的菌丝有抑制作用。高浓度和低浓度有极显著差异,在浓度为0.2mg/kg时候,菌丝生长速度和0.1mg/kg、0.4mg/kg相比有显著差异。在0.1 mg/kg~0.4 mg/kg真姬菇生长速度增加,在浓度0.4mg/kg时,生长速度达到最大,在0.6 mg/kg~1.0 mg/kg真姬菇生长速度减小。百菌清在0~0.4mg/kg浓度范围内,菌丝生度速度显著差异随着浓度繁升高,真姬菇生长速率不断减慢。甲基托布津添的空白组与高浓度有显著差异,其他浓度之间在5%水平无显著差异,即在0.1 mg/kg~1 mg/kg之间,真姬菇菌丝生长速度无明显差异。氯氰菊酯在0.1 mg/kg~1 mg/kg之间会促进真姬菇生长,甲氰菊酯在0.4mg/kg浓度与其它处理有极显著差异(除1.0 mg/kg的水平浓度外)。联苯菊酯浓度为0.1mg/kg与空白组、中、高浓度有极显著差异,且菌丝生长速度最大,随后生长速率逐渐降低。毒死蜱的添加浓度不断增加时,真姬菇的菌丝先增加后减小,在添加浓度为0.01mg/kg与0.1mg/kg时,生长情况有极显著差异,浓度为0.05mg/kg时,真姬菇菌丝生长最快。2.1.2 九种农药对黑木耳的菌丝生长影响 [img=,624,474]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301424_01_2903169_3.png[/img]由表3可知,敌敌畏、溴氰菊酯以及联苯菊酯对黑木耳的菌丝有抑制作用,联苯菊酯在浓度高于0.1mg/kg时会抑制黑木耳生长。多菌灵在浓度高于0.2mg/kg时会抑制黑木耳生长。百菌清在浓度为0.2mg/kg与1mg/kg水平浓度有极显著差异,与其他浓度无极显著差异。甲基托布津在浓度为0.2mg/kg与空白组无极显著差异,与其他处理的浓度有极显著差异,甲基托布津浓度为0.2mg/kg时,黑木耳菌丝生长最快。当氯氰菊酯的添加浓度由低升高时,黑木耳的菌丝生长先增大后减小,当浓度是0.2mg/kg时,与其这处理的菌丝生长速度有极显著差异。不同浓度的甲氰菊酯处理,结果有极显著差异,甲氰菊酯浓度是0.2mg/kg,黑木耳菌丝生长最快。不同浓度的毒死蜱对菌丝生长情况不相同,当浓度为0.2mg/kg时,菌丝生长速率达到最大,同时和其他浓度的生长有极显著差异。2.1.3九种农药对双孢蘑菇的菌丝生长影响 [img=,636,476]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301424_02_2903169_3.png[/img]从表4可以发现,敌敌畏与溴氰菊酯抑制双孢蘑菇的菌丝生长。多菌灵在添加浓度为0.6mg/kg时候,菌丝生长最快。百菌清六个处理培养双孢蘑菇,所有处理水平之间无极显著差异。百菌清的在0.2mg/kg时,双孢蘑菇的菌丝生长速度最快。甲基托布津、甲氰菊酯的添加浓度为0.2mg/kg与添加浓度为0.4mg/kg的处理组分的结果之间有极显著差异,说明甲基托布津、甲氰菊酯的添加浓度是0.2mg/kg时,双孢蘑菇的菌丝生长率达到最大。在氯氰菊酯添加浓度不断增变大的过程中,双孢蘑菇生长先变大后减小,在浓度达到0.4 mg/kg时,生长速率最快,同时该组分处理与其他组分处理呈极显著差异。联苯菊酯浓度为0.2mg/kg~0.4 mg/kg与空白组和最高浓度的结果有极显著差异,在0.2mg/kg浓度水平,双孢蘑菇生长达到最大。毒死蜱的浓度为0.01mg/kg时,双孢蘑菇生长达到最大,与空白组无极显著差异性,与其他组分处理有极显著差异。2.1.4九种农药对平菇的菌丝生长影响 [img=,628,459]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301424_03_2903169_3.png[/img] 由表5可以看出,敌敌畏与溴氰菊酯对平菇的菌丝有抑制作用。对平菇在多菌灵的六个浓度中生长速度进行显著分析,0.2mg/kg~0.4 mg/kg的处理水平对空白组分、0.1 mg/kg的处理组份有极显著差异,说明在浓度0.2mg/kg~0.4 mg/kg时候,菌丝生长速度达到最大。百菌清在0.2mg/kg处理组份与其他组份有极显著差异,当百菌清添加浓度由低至高时,平菇生长速度先增加最大后减小。甲基托布津在浓度为0.2mg/kg~0.4 mg/kg时的结果与其他处理水平有极显著差异,在甲基托布津在浓度为0.2mg/kg时,平菇生长最快。随着氯氰菊酯的浓度不断变大,平菇的生长速度不断减小,中、低浓度组份生长情况与高浓度的有极显著差异。低浓度处理组份的甲氰菊酯对平菇生长无明显影响,高浓度处理组份抑制平菇菌丝生长。在联苯菊酯的处理组份为0.2mg/kg~0.4 mg/kg与空白组、高浓度处理组份有极显著差异,故而在0.2mg/kg浓度时,平菇生长达到最大。在毒死蜱处理水平不断增加时,菌丝生长先增大后减小,在0.01mg/kg~0.05mg/kg生长到最大,且与其他组份浓度生长情况有极显著差异。2.1.5九种农药对白灵菇的菌丝生长影响 [img=,636,441]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301425_01_2903169_3.png[/img] 由表6可知:敌敌畏、溴氰菊酯以及联苯菊酯对白灵菇的菌丝有抑制作用。当联苯菊酯的添加浓度大于0.1mg/kg时对白灵菇有抑制作用。多菌灵在浓度为0.2mg/kg时(除空白组外)与其他水平处理有极显著差异,菌丝生长速度先增大都减小。当甲基托布津、百菌清添加浓度为0.4mg/kg时,试验结果与其他水平处理有极显著差异,即菌丝生长速度先增大都减小。从表可以看到低浓度对白灵菇生长情况有促进作用,在浓度0.1mg/kg之后生长速度减慢。在甲氰菊酯在0.2mg/kg时,与其他水平处理有极显著差异,说明在0.2mg/kg浓度白灵菇生长速度达到最大值,生长趋势是先增大后减小。当毒死蜱的浓度有小变大的过程中,白灵菇的生长速度先变快后减慢,当浓度为0.5mg/kg时,生长速度与其他水平处理有极显著差异。3小结与讨论采用PDA平板法,研究了9种农药对5种食用菌菌丝生长的影响。在实验操作过程中由于农药会在高温中消解,故农药直接加入PDA培养基,具有强烈的毒性和气味,可以清晰观察到添加的农药种类的不同时,对五种食用菌的生长菌丝的生长影响明显不同。当PDA培养基中所添加的农药浓度不断增加的过程中,部分菌丝生长所受到影响也越来越明显实验结果表明敌敌畏以及溴氰菊酯对菌丝的抑制作用最大,敌敌畏对真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇这五类食用菌的菌丝生长抑制率达到100%,联苯菊酯使得平菇、双孢蘑菇的生长减慢,当联苯菊酯浓度大于0.5mg/kg时,黑木耳和白灵菇不生长。毒死蜱的浓度增加时,黑木耳、平菇、双孢蘑菇的菌丝生长逐渐减慢。对照空白组分,当甲基托布津的浓度不断变大时,白灵菇、黑木耳、平菇、双孢蘑菇的生长趋势均是先增大后减小,同时对真姬菇菌丝生长影响不大,所以在真姬菇菌丝生长过程中,可以使用该农药。多菌灵、氯氰菊酯对平菇、黑木耳生长有抑制作用。而百菌清对真姬菇和白灵菇生长有抑制作用,故而在食用菌菌丝生长过程中慎用对应的农药。
[b]食用菌菌丝对铅、镉、汞、砷的吸收规律[/b]重金属会富集于食用菌的子实体内。故此,人们对食用菌吸附重金属的能力越来越关注,食用菌吸附重金属的能力大小是由食用菌生长环境以及其本身相关的生物特性决定。研究食用菌菌丝吸附重金属的能力,对降低食用菌产品的重金属含量奠定了一定的基础。[b]1材料与方法1.1 试验材料1.1.1重金属的种类[/b] 硝酸铅(PbNO[sub]3[/sub]):1x500 g 国药集团化学试剂有限公司 氯化隔(CdCl[sub]2[/sub]):1x100 g 国药集团化学试剂有限公司 氯化汞(HgCl[sub]2[/sub]):1x250 g 国药集团化学试剂有限公司 三氧化二砷(As[sub]2[/sub]O[sub]3[/sub]):1x500 g 国药集团化学试剂有限公司[b]1.1.2菌种[/b]试验食用菌有6种,分别为真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇,这些菌种是福建省主栽食用菌的品种,取自于******菌种研究中心。[b]1.1.3仪器[/b] AA-6300C 岛津石墨炉[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计 AA-7000 岛津原子荧光分光光度计[b]1.2 方法[/b]重金属药液浓度配置:铅、镉、汞、砷对真姬菇、黑木耳、双孢蘑菇、平菇、白灵菇的菌丝吸附规律的研究试验中,每种重金属设5个浓度处理(表5-1),以不添加任何重金属为空白对照。每个处理设3个重复,每个重复20瓶三角瓶。所用的重金属药液是预先配好的母液。铅配成20 g/L离子浓度的母液,镉、汞配成2 g/L离子浓度的母液,砷配成1.5 g/L离子浓度的母液,存放备用。先将配置好的液体培养基分装至250mL的三角锥形瓶中,每瓶150mL,再将重金属母液分别添加至各个瓶液体培养基中,于灭菌锅中高温灭菌。取出待冷却后后,在无菌的条件下分别加入3~4块母种块(取已生长好的菌种培养皿,用直径1cm打孔器打出的菌种块),再将三角瓶置于24℃、120r/min的摇床中,均匀振荡培养15-~20d,取出过滤菌丝球,检测菌丝中铅、镉采用石墨炉原子分光光度法,测定汞和砷采用原子荧光光度法测量。[img=,690,638]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301539_01_2903169_3.png[/img][img=,452,633]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301540_01_2903169_3.png[/img]注:富集系数=菌丝中重金属含量/培养基中重金属浓度,下同。Note:Enrichment coefficient=heavy metalscontent of fruit body/concentration of compost.Here in after注:本章节所有生长影响图单位(mg/L)与液体培养基的体积相对应[align=left] 从表5-2中可知:不同食用菌对铅的吸附能力不同,当铅浓度较低时(0~10 mg/kg)5种食用菌菌丝对铅的富集系数较大,双孢蘑菇和平菇的富集系数最大,分别为59.79和50.62;随着培养基中的铅添加浓度增大,5种食用菌菌丝的富集系数逐渐减小。当培养基中的铅添加浓度为0~10 mg/kg时,5种食用菌对铅的吸附能力大小为:双孢蘑菇、平菇>黑木耳>白灵菇>真姬菇;当培养基中的 铅添加浓度为25mg/kg~200mg/kg时,5种食用菌菌丝吸附重金属的能力大小为:平菇>黑木耳>白灵菇>真姬菇>双孢蘑菇。[/align][align=left] 培养基中铅的添加量(x)与菌丝中重金属含量(y)之间的关系用DPS分析后建立罗杰斯特曲线数学模型,通式即为:y=c/(1+e[sup]a-bx[/sup])。结合图5-1与表5-2发现,5种食用菌菌丝中铅的含量和培养基添加的铅浓度具有良好的拟合效果,R[sup]2[/sup]都在0.99以上。从图5-1可以发现当培养基中铅的添加浓度达到200mg/kg时,五种食用菌菌丝对铅离子的吸附量已近趋近饱和状态。[/align][align=left][img=,668,389]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301542_01_2903169_3.png[/img][/align][align=left][img=,495,618]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301542_03_2903169_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left]由表5-3得出不同浓度处理下五种食用菌,菌丝所吸附的镉含量。当培养基中镉的添加浓度不同时候,双孢蘑菇和平菇菌丝对镉的富集系数不断增加,真姬菇和白灵菇菌丝对镉的富集系数先增加后较小,而黑木耳菌丝在镉添加浓度为1mg/kg之后几乎不变。当镉的添加浓度为2mg/kg时,双孢蘑菇的菌丝富集系数达到最大是319.7。当添加浓度为0.5mg/kg时,平菇菌丝对镉的富集系数达到最大为520.6。[/align][align=left][/align][align=left]当浓度为0.1mg/kg和2mg/kg时,对培养基中镉的吸附能力大小比较是:平菇>双孢蘑菇>黑木耳>白灵菇>真姬菇;当浓度为0.5mg/kg时,5种食用菌菌丝吸附能力比较是:平菇>真姬菇>双孢蘑菇>黑木耳>白灵菇。[/align][align=left][/align][align=left] 结合图5-2与表5-3发现,5种食用菌菌丝中镉的含量以及培养基添加的镉浓度相关性的拟合度不错,R[sup]2[/sup]都在0.99以上(只有真姬菇和平菇的罗杰斯特曲线相关系数在0.9以上)。通过分析可以得到用这种数学罗杰斯特曲线数学模型可以说明培养基中重金属与菌丝中镉含量具体的相关关系。从图5-2可以发现当培养基中镉的添加浓度达到10mg/kg时,五种食用菌菌丝对铅离子的吸附量已近接近饱和状态,而双孢蘑菇以及平菇在镉的添加浓度为2mg/kg以后,菌丝不生长,说明吸附能力已经达到饱和的状态。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center]表5-4 不同浓度处理下五种食用菌菌丝中汞的含量及罗杰斯特方程[/align][align=left][/align][align=center]Table 5-4 The concentrations of Mercury in five mushrooms treated byheavy metals and Roger Lancaster equation[/align][align=left][/align][align=left][img=,660,391]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301544_01_2903169_3.png[/img][/align][align=left][img=,527,623]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301545_02_2903169_3.png[/img][/align][align=left]由表5-4得出不同浓度处理下五种食用菌,菌丝所吸附的汞含量。当培养基中汞的添加浓度增加时,平菇和双孢蘑菇的菌丝对汞的富集系数不断减小,而黑木耳、真姬菇菌和白灵菇的菌丝丝对汞的富集系数先增加后减小。真姬菇菌丝富集汞的系数在汞的添加浓度为0.5mg/kg时达到最大是610.3,真姬菇和白灵菇菌丝富集汞的系数分别在1mg/kg和2mg/kg时达到最大为100.5和159.7。五种食用菌对汞的吸附能力不相同。但总体上来说,培养基中添加不同汞离子浓度,真姬菇菌丝相对其他四种菇菌丝(双孢蘑菇、平菇、黑木耳、白灵菇)对汞的吸附能力强。[/align][align=left] 结合图5-3与表5-4发现,培养基添加的汞浓度与5种食用菌菌丝中汞的含量的数学罗杰斯特曲线相关系数R[sup]2[/sup]都在0.9以上,通过分析可以知道用该数学模型可以说明培养基中重金属与菌丝中汞含量的相关关系。从图5-2可以发现当培养基中汞的添加浓度达到10mg/kg时,五种食用菌菌丝对铅离子的吸附量已近趋近饱和状态,而双孢蘑菇以及白灵菇在添加浓度为2mg/kg以后,菌丝生长缓慢,说明对汞的吸附能力已经达到饱和的状态。[/align][align=left][img=,681,454]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301547_01_2903169_3.png[/img][/align][align=center]表5-5 不同浓度处理下五种食用菌菌丝中砷的含量及罗杰斯特方程[/align][align=center]Table 5-5 The concentrations of Arsenic in five mushrooms treated by heavy metalsand Roger Lancaster equation[/align][align=center][img=,519,616]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301549_01_2903169_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=left]由表5-5得出不同浓度处理下五种食用菌,菌丝所吸附的砷含量。当添加砷的浓度不同时,五种食用菌对砷的吸附能力不相同。另外当砷的添加浓度不断增加时,五种食用菌菌丝对砷的富集系数都随之减小。当砷的添加浓度为0.1mg/kg和1mg/kg时,五种食用菌对砷吸附能力大小比较是:双孢蘑菇>黑木耳>真姬菇>白灵菇>平菇;当浓度为5mg/kg和10mg/kg时,5种食用菌菌丝吸附能力比较分别是:真姬菇>黑木耳>白灵菇>平菇=双孢蘑菇、黑木耳>白灵菇>真姬菇>平菇,双孢蘑菇。[/align][align=center][/align][align=left]结合图5-4与表5-5发现,建立添加的砷离子浓度与5种食用菌菌丝吸附砷的含量的罗杰斯特方程。结果分析可以得出,该方程曲线的相关性均达到0.99以上,说明罗杰斯特方程可以较好说明添加的砷离子浓度与5种食用菌菌丝吸附砷的含量关系的拟合程度。[/align][align=center][/align][b]3 小结与讨论[/b][align=center][/align][align=left]在液体发酵培养基中添加不同重金属离子的浓度与菌丝中相对应的重金属含量作图(图5-1~5-4),从这几个图可以得出五种食用菌的菌丝对重金属残留吸附量与培养基中重金属的添加浓度的相关性,图中大多数表现为“S”型曲线的关系。当添加在培养基中的重金属的浓度不断增加时候,不同的菌丝对重金属的吸收大多数有小变化到大,最后趋于某个上限值。对曲线方程y=c/(1+e[sup]a-bx[/sup])的数学进行可以得到,当x值为0时候,y值为c/(1+e[sup]a[/sup]),而当x趋近无穷大时,y值也无限接近于c,即培养基中重金属量的添加浓度达到最大时,食用菌菌丝对重金属的吸附趋于一个极限值,即最大可能吸附量(只是一个纯理论值,在实际生产中要考虑食用菌菌丝生长环境的重金属污染及抑制作用)。[/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align]
加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力,只要有10至100个病毒体进入人体,就会导致感染,目前还没有有效的抗病毒剂。研究小组利用实验鼠的诺如病毒替代人类诺如病毒进行了实验。他们将蛋白中含有的溶菌酶在100摄氏度下加热40分钟,使其变性。接下来,将含有1%加热处理过的溶菌酶的溶液与实验鼠诺如病毒混合在一起,并观察了1分钟之后的变化。溶菌酶是蛋白等含有的一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。研究人员发现,诺如病毒基因量大幅减少,以致无法检出,并观察到病毒体出现膨胀。他们认为这是由于包裹病毒基因的外壳被破坏导致的。研究人员指出,实验鼠诺如病毒和人类诺如病毒从遗传学上来看非常类似,所以这种加热变性处理的蛋白溶菌酶对人类诺如病毒应该也有效果。他们希望将其制成消毒喷雾剂,在下一年度达到实用化。
GB/T 15673—2009《食用菌中粗蛋白含量的测定》[img]http://bbs.instrument.com.cn/images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=197394]GBT 15673-2009食用菌中粗蛋白含量的测定.pdf[/url]
我们有个蛋白质含量约45%-60%的蛋白型固体饮料,公司制定菌落总数的检测标准依据GB/T 4789.21进行检验,可是在我们公司检验菌落总数是合格的但送我们省质检院检验就会检测出十几万的菌落总数?GB/T 4789.21这检验方法我们公司很多产品都在用都没有出现问题,就是蛋白型固体饮料与质检院检测结果相差太大。请教各位高手是不是蛋白型固体饮料做微检时有特殊的处理方法?或者需要注意什么?谢谢
[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在当今的生物技术领域,高通量重组蛋白表达技术在基础研究和商业应用中扮演着非常重要的角色。随着后基因组时代的到来,研究人员对大规模蛋白表达和纯化的需求日益增长,大肠杆菌因其易于遗传操作、低成本、生长迅速成为生产重组蛋白的首选微生物宿主。本文将综述大肠杆菌中高通量重组蛋白表达的现状和未来展望,探讨从目的基因获取到蛋白表达和纯化的先进技术,并讨论如何克服[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff]重组蛋白表达[/color][/font][/u][/url][font=宋体]过程中的挑战。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]高通量重组蛋白表达技术[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量研究是一种能够同时检测数千个生物分子,使大规模重复成为可能的研究。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代初,第一台[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]测序仪被开发出来,人类基因组计划随之开启,高通量技术在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、蛋白质、脂质和代谢物检测的需求也急剧增加。自该技术提出以来,大肠杆菌中高通量重组蛋白表达和纯化已经得到了广泛的应用。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]1. [/font][b][font=宋体]目的基因的制备[/font][/b][font=宋体][font=宋体]获取目的基因是重组蛋白表达的第一步。传统的方法是从[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库中直接克隆基因,但这种方法存在局限性,如从库中筛选基因较为费时以及难以添加融合标签等。高通量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术是目前获取目的基因最常用的技术,设计引物并调整好参数后,即可在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]仪中自动完成目的基因的制备。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]2. [/font][b][font=宋体]表达载体的高通量构建[/font][/b][font=宋体][font=宋体]研究人员开发了多种构建表达载体的克隆方法,包括基于限制性内切酶的克隆、重组克隆和不依赖于连接反应的克隆等。这些方法各有优势和局限性,但在近年来都有显著改进。例如,基于限制性内切酶的克隆因其简单、高效、通用和成本效益而备受关注。一个理想的大肠杆菌表达载体应具备选择标记、复制起点、转录启动子、[/font][font=Calibri]5'[/font][font=宋体]非翻译区([/font][font=Calibri]5'UTR[/font][font=宋体])和翻译起始位点。此外,融合标签的添加对于目的基因的转录和蛋白表达同样至关重要。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]3. [/font][b][font=宋体]大肠杆菌表达菌株的选择和细胞培养[/font][/b][font=宋体][font=宋体]为保证蛋白质表达成功及其表达质量,应选择合适的大肠杆菌菌株,如[/font][font=Calibri]BL21[/font][font=宋体]及其衍生菌株是较常用的重组蛋白生产菌株。培养大肠杆菌比较简单的方法是分批培养,但此方法对生长的控制比较有限。近年来,高通量培养技术使研究人员能够在一系列发酵条件下处理大量样品,大大加快了生产时间。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]4. [/font][b][font=宋体]高通量蛋白表达和纯化[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量平台可以快速克隆基因、挑选菌落、分离质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、转化细菌、表达和纯化蛋白质。这些平台虽然成本高昂,但为复杂的分子生物学实验操作提供了极大的便利。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论与展望[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌中的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]高通量重组蛋白表达技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]极大的推进了重组蛋白的表达进程。尽管存在挑战,但通过不断优化和创新,研究人员正在朝着更高效可靠的蛋白质生产系统改进。未来的发展方向包括进一步优化克隆方法、开发新的融合标签、改进表达载体和菌株,以及利用高通量技术实现从[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]到大规模蛋白质生产的快速转变等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=Calibri]Jia B, Jeon CO. High-throughput recombinant protein expression in Escherichia coli: current status and future perspectives. Open Biol. 2016 6(8):160196. doi:10.1098/rsob.160196[/font]
本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂,具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料,在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽,因此存在着各种蛋白胨,一般来说,用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此,蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨,而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有:蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 不同来源的蛋白质和不同的水解条件,其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水,过热不凝固,在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料,也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等,可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业,氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业,生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大,临床用于抗炎消肿,工业上用于皮革制造,生丝处理,食品加工。在国际市场上,胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准: 常规各项理化指标: 1. 澄清度(磷酸盐、碱性沉淀):无沉淀、澄清 2. 2%水溶液:透明 3. 酸碱度:6-7 4. 氨基氮:≥3% 5. 色氨酸:≥0.8% 6. 胨含量:≥80% 7. 总氮:≥13% 8. 水份:≤5% 9. 灰份:≤6% 10. 氯化钠:≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物,与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上,属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。
中文名称:蛋白酶英文名称:protease;proteinase其他名称:蛋白水解酶(proteolytic enzyme)定义:催化蛋白质中肽键水解的酶。根据酶的活性中心起催化作用的基团属性,可分为:丝氨酸/苏氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.21.-/EC 3.4.25.-)、巯基蛋白酶(编号:EC 3.4.22.-).、金属蛋白酶(编号:EC 3.4.24.-)和天冬氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.23.-)等。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶,主要由霉菌、细菌,其次由酵母、放线菌生产。该产品主要由上海斯诺美生物医学技术服务中心提供。
【中文名称】腐殖酸蛋白饲料【英文名称】humic acid-protein fodder【性状】 黑色固体。【用途】 用作饲料添加剂,促进禽畜生长,提高繁殖能力,减少疾病,助消化。【制备或来源】 将风化的煤粉碎后,用氢氧化钠综合提取,加尿素、硫酸铵等经混合、灭菌,然后,接种发酵、浓缩、干燥即得成品。【其他】 除含动物所需的蛋白质(≥48%)外,还含有动物生长激素。【生产单位】 黑龙江鹤岗市蛋白饲料厂
[font=宋体][font=宋体]重组蛋白([/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体])是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因([/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]),连接到适合的表达载体,导入到特定的宿主细胞,利用宿主细胞的遗传系统,表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]:原核表达系统:最常用的大肠杆菌蛋白表达,真核表达系统如酵母,哺乳动物细胞蛋白表达(常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前,重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分,常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时,蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外,每个表达系统都有其独特的优势和挑战,这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议,以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]
[font=宋体][b]什么是重组蛋白?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连,这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念,融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。融合蛋白又称标签([/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]),常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结:在生物制药领域,重组蛋白具有较高的活性和纯度,更易吸收,安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素:[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统?[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易,应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说,重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务,例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单)[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息,详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]
[size=16px]素食者在蛋白质摄入上一直面临着挑战,尽管素食食品富含多种营养成分,但素食者在蛋白质摄入方面存在不足。首先,植物性食品中的蛋白质含量相对较低,且氨基酸组成不如动物性蛋白完整,素食者需要摄入更多的植物性食品才能满足蛋白质的需求。然而,过多的植物性食品摄入可能导致热量过剩、膳食纤维过多等问题。其次,一些素食者可能存在对某些植物性食品的过敏或不耐受情况,例如大豆、坚果等食品中的蛋白质可能引发人体过敏反应,而谷物中的麸质[i][/i]则可能引起不耐受反应等。此外,植物性蛋白质的生物利用率较低,需要素食者通过合理搭配食物来提高蛋白质的摄入效率。[/size][size=16px]在传统素食者蛋白质摄入不足的背景下,素食蛋白棒产品正逐渐在素食者中普及起来。[/size][size=16px]素食蛋白棒是一种高蛋白、低脂肪、便携的零食,能够方便素食者在日常饮食中补充蛋白质,满足素食者对蛋白质的需求。素食蛋白棒的热量和脂肪含量相对较低,使得素食者可以在控制热量摄入的同时,获得足够的蛋白质补充。[b]一是丰富的营养价值[/b]:作为素食蛋白棒中重要蛋白来源的酵母蛋白,是一种来源于酿酒酵母的优质完全蛋白,拥有高蛋白质含量与优质氨基酸配比,其蛋白质含量高达80%以上,富含人体所需的全部8种必需氨基酸,且其氨基酸配比合理,易被人体吸收利用。酵母蛋白除了赋予素食蛋白棒高蛋白质含量外,还提供B族维生素和矿物质等多种营养成分,有助于维持身体的正常代谢和健康状态。研究表明,酵母蛋白中的活性成分能够调节肠道菌群平衡,促进有益菌的增殖,抑制有害菌的生长,从而改善肠道环境,提高肠道健康水平。[b]二是环保与可持续性和性价比优势[/b]:酵母蛋白来源于微生物发酵,相比动物源蛋白和植物源蛋白更加环保和可持续,它不需要大量的土地、水和饲料资源,也不产生温室气体排放。目前,酵母蛋白的生产已完全工业化,生产效率高、成本低,使得酵母蛋白与乳清蛋白等动物蛋白相比在价格上具有一定的优势,同时避免了动物源蛋白和植物源蛋白可能带来的过敏源问题。[/size]
70kDa)中的七个得到了可溶性表达,而其它的融合标签(GST,MBP和hexahistidine)系统则只得到了四个可溶性表达的蛋白。表1. 用大量的目标蛋白评估NusA标签对提高融合蛋白可溶性的作用参考文献a目的蛋白数目目的插入序列种属目标蛋白大小范围NusA融合蛋白可溶性比例Shih等(2002)40酵母,哺乳动物,植物,昆虫9-10060Korf等(2005)75人6-12760bKohl等(2008)96人1-11844ca. Korf等和Kohl等的研究中包含了六组氨酸标签。b. 可溶性蛋白量大于等于10%即认为该融合蛋白可溶。c. 纯化后的融合蛋白如果在SDS-PAGE后考染在合适位置出现条带即认为可溶。Korf等的还发现对于定位于真核细胞细胞器,质膜或者骨架的蛋白,相对于其它标签系统来讲,NusA标签是最好的可溶性表达的选择。Kohl等(2008)也发现只要在20-25℃诱导表达,NusA标签能够大大提高难表达的蛋白比如膜蛋白的可溶性。与Korf等的研究结果一致,Kohl等也发现25℃诱导表达比30℃或37℃诱导表达可以纯化得到更多的NusA融合蛋白。切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白表2总结了16个采用NusA标签成功获得可溶性蛋白,在切除标签后这些蛋白仍有正确折叠结构和活性。大部分这种研究是是关于分子量小于或接近20kDa的目标蛋白。纯化后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括:■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶(Ermolova 2003)——目标蛋白切除标签后用BDA(蓝色葡聚糖)亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。■ Xklp3a,Tep3Ag和E8R(De Marco 2004)——用蛋白酶切割后,His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除。与Ni2+亲和结合的标签被紧密地结合在树脂上,在流出液中则可以得到纯化的目的蛋白。所有这三种蛋白在纯化后都正确折叠且均一分散在溶液中。纯化的膜结合蛋白E8R牛痘病毒蛋白在Tris缓冲液中除去NusA后出现了沉淀,然而加入0.02%的月桂酰基麦芽糖苷和150mM的氯化钠后,蛋白又重新变得可溶。■ 环麦芽糖糊精酶(Turner 2005)——这个蛋白属于α-淀粉酶家族。这个家族的蛋白通常在大肠杆菌中很难以活性形式表达出来。将其与肠激酶混合孵育24小时以上会使其活性逐渐增强,直到达到未经肠激酶处理过的融合蛋白的2倍以上,这也说明标签的存在降低了该酶的活性。可以用固化了Cu2+的亲和层析柱去除切除的融合标签。■ 八种人趋化因子(Magis-trelli 2005)——所有的蛋白都在OrigamiTM B菌株中表达提高它们在胞质中的二硫键形成率。在趋化因子编码序列的C端引入了AviTMTag(亲和素)生物素化序列。切割后的细胞趋化因子可以用单体的亲和素树脂亲和层析与切割下的NusA标签和蛋白酶混合物分离开。所有切割纯化后的蛋白在细胞趋化实验中都显示了活性,而没有一个融合蛋白有这样的活性。■ 蚯蚓血红蛋白(Karlsen 2005)——酶切后,用分子筛分离纯化蚯蚓血红蛋白,纯化后的蛋白通过圆二色谱检测得到的α-螺旋结构与模型预期结果一致,且纯化后的蛋白可以以单体的形式稳定保存。■ 人白介素-29(Li 2006)——用S-蛋白亲和层析比Ni2+亲和层析可以得到更纯的目的蛋白。将融合蛋白N端的NusA/His•Tag®/S•Tag™标签切掉后,用链亲和素琼脂去除生物素标记的凝血酶。用水疱性口膜炎病毒(VSV)处理固定的人羊膜上皮细胞(WISH 细胞)后,通过检测纯化的IL-29对细胞的保护效应来检测其抗病毒活性。■ 人干扰素-λ2(Li 2007)——酶切后,用Novagen提供的EKaptureTM琼脂除去重组的肠激酶。先用纯化后的干扰素-λ2处理WISH细胞,24小时后加入VSV病毒,可以观察到干扰素-λ2可以有效地保护细胞免于病毒介导的病变。表2. 切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白参考文献目的蛋白目的蛋白分子量(kDa)切割用蛋白酶融合蛋白亲和层析固定介质纯化后目的蛋白产量(mg/L)Ermolova等(2003)植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶32凝血酶Ni2+1.5De Marco等(2004)Xklp3ATep3AgE8R15NRa32bTEV酶TEV酶TEV酶Ni2+5.02.54.0Turner等(2005)环麦芽糖糊精酶69肠激酶Cu2+1.6Magistrelli等(2005)八种人趋化因子8-21Xa因子Ni2+30-100Karlsen等(2005)蚯蚓血红蛋白15TEV酶Ni2+NRaLi和He(2006)人白介素-2920凝血酶S-蛋白60Li和Huang(2007)人干扰素-λ220肠激酶Ni2+65a. 未报道b. 根据NCBI报道预测的全长蛋白分子量与NusA标签融合且具有活性的蛋白 与这些切除NusA标签后保持活性且正确折叠的蛋白不同,还有很多报道指出目的蛋白在“NusA-目的蛋白”的融合形式时具有很好的活性。比如单链(ScFv)催化活性抗体14D9(Zheng 2003),来自Aequorea victoria的绿色荧光蛋白(Nallamsetty 2006),人二氢叶酸还原酶(Nallamsetty 2006),来自Ensis directus蛏子的精氨酸酶激酶(Compaan 2003),来自B. thuringiensis的修饰δ-内毒素(Kumar 2005),人BCMA跨膜受体(Guan 2006),植物α-双加氧酶1(Liu 2006),以及来自Plasmodium falciparum的b-ketoacyl-acyl载体蛋白合成酶(Lack 2006)等,反映了各种不同背景的蛋白都显示出了与NusA标签融合后的活性。NusA标签提高蛋白可溶性的可能机制 Houry(1999)等揭示NusA蛋白是分子伴侣GroEL在体内的必须底物。而GroEL与其共作用因子GroES是大肠杆菌唯一的在所有生长条件下必需的分子伴侣系统。Douette等(2005)研究了融合蛋白NusA-UCP1(uncoupling protein 1)的可溶产量。UCP1是一种线粒体膜蛋白。这些作者发现16℃培养时,当GroEL共过表达的情况下,融合蛋白的可溶性有更大的提高。这个结果也表明NusA与分子伴侣途径相作用,从而阻止参与蛋白的聚集。总结 已有充分的证据证明NusA标签系统能显著提高多种不同来源蛋白的可溶性表达,而这些蛋白在单独表达时往往形成不可溶的包涵体。在一些研究报告中,用蛋白酶切除NusA标签能使目的蛋白仍保持正确折叠和生物学活性;相反,在另外许多报道中也指出当目的蛋白与NusA融合而非切除时,融合蛋白也同样具有活性。NusA标签系统的成功至少部分地是由于其与大肠杆菌分子伴侣系统相互作用的结果。
我今天已经把装有乳糖蛋白胨的培养基115[size=2]℃[/size]20min高压灭菌好了,但样品明天才来,那我这培养基可以放到明天才用吗?
[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中,免疫分析方法被广泛应用,包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验([/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体])和免疫沉淀法([/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体])等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应,通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内,产生免疫反应后分离抗体,进而进行检测。尽管应用广泛,但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体,操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合,两者实现共同表达。通过对融合标签的检测,我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段,将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合,广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究,已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作,降低了成本,而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下:[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签([/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]),可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析([/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]),对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽([/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]),同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素化序列完全不同,可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]-甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移([/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体])获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测:生物素或各种颜色荧光的底物(如荧光素、若丹明)可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌,酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体](谷胱甘肽巯基转移酶)[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化:该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体](绿色萤光蛋白)是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端,该系统已广泛应用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等,相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中,起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先,需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]:标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景,因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测:若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达,你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势,成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应:[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有:[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先,裂解您的样本,以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时,加入靶向融合标签的抗体,抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合,后者拉出您的目标蛋白,以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像:荧光蛋白([/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体])是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白([/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体])和它的衍生物([/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]),以及一些红色变体,如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置,都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠,致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次,标签可能会中断亚细胞定位信号,这种情况下,蛋白能够正确翻译和折叠,但在细胞内所处的位置是错误的。因此,您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而,倘若你没有确切的蛋白结构,或蛋白功能域图谱,建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆,以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛,尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]
拉丝蛋白放到225毫升生理盐水中太粘稠了 怎么也吸不出来1毫升啊?请大神指教!!
[font=SimSun, STSong, &]大豆拉丝蛋白在食品标签配料上该如何标识才算规范?若执行的标准是SB/T10453-2007《膨化豆制品》,该如何在产品中标识?[/font]
功能性蛋白及一例分析自19世纪中叶荷兰化学家Gerardus Mul-der从动物组织和植物体中提取出蛋白质以来,人们发现了越来越多的蛋白质,据估计生物界中蛋白质的种类可达1010~1012之多;在这如此众多的蛋白质中,功能性蛋白发挥着极其重要的生理功能 。功能性蛋白也有人称其为活性蛋白。它们的特点是都有识别功能,能与其他分子特异性结合.完成各种复杂的生命活动:在结构上主要是一些球状蛋白质。1 功能性蛋白的种类按其作用方式不同可分为酶蛋白、运输蛋白、运动蛋白、免疫球蛋白、毒蛋白、激素蛋白(1)酶蛋白: 细胞的生长和繁殖、代谢物的合成和分解、能量的产生和利用,这些过程所需要的物质都是通过无数的生物化学反应来提供的.而这些反应又都是在一类特殊蛋白质—酶蛋白的催化下完成的。酶的催化效率极高,且具有高度的专一性,也正是这种高度的专一性使一种特定的酶只能作用于一种或少数几种结构相似的化合物,这就要求有各种不同的酶去作用于不同的化合物。在酶的作用下,生物细胞才得以合成各种复杂的化合物,也才能使各种大分子物质被分解、吸收和利用.且这些反应都要在适合于生物体本身的温度、压力和pH值等非常温和的条件下进行,能使生物细胞按照这种方式进行化学变化是蛋白质最重要的功能之一。常见的酶蛋白如淀粉酶使淀粉分解形成葡萄糖,蛋白酶、肽酶使蛋白质分解为氨基酸;溶菌酶使细菌细胞壁中的肤聚糖被破坏;凝血系统酶的有序作用使凝血过程得以有条不紊地进行.合成酶能合成多种体内所需要的大分子物质。应用举例:由于近年来鱼粉资源价格上涨,冷向军等人通过向鱼粉含量较低(10﹪)的饲料个添加蛋白酶AG使鱼的前肠蛋白酶有显著提高。同样有实验证明在玉米-豆粕型粮食中添加蛋白酶可以改善肉鸡的生长性能,提高蛋白质的消化率。(2)运输蛋白:有些蛋白质起载体的作用可以运输特定的物质到达必须的部位,使其完成特定的功能,这种蛋白质称为运输蛋白。如哺乳动物的血红蛋白能将氧从氧气充裕的肺内运送到各个组织中去:血清蛋白能与游离脂肪酶等多种物质结合,并将这些物质在脂肪组织与身体的其他部位间运送(最典型的β1-脂蛋白可随血流运输脂肪),铁传递蛋白能传递血液中的铁。无脊椎动物体内的血蓝蛋白,大豆根瘤中的豆血红蛋白也起着输送氧气的作用。另外还有一些能携带物质通过细胞膜进出细胞的蛋白质,如细菌过膜运输中的载体蛋白等,它们都属于运输蛋白。(3)运动蛋白:参与运动功能的蛋白质种类较多如脊椎动物中骨骼肌的主要成分就是肌动蛋白和肌球蛋白,肌肉的收缩就是靠着这两种互相联系的平行丝状蛋白相对滑动来完成的;细菌的运动器官——鞭毛也是由鞭毛蛋白组成的;绿藻的运动也离不开蛋白质;有丝分裂的完成,精子的运动等都与运动蛋白有关,所以绝大多数生物的运动和收缩过程都是运动蛋白参与的结果。应用举例:邱永忠等人在研究烟草花叶病毒(TMV)在植物细胞间的运动时发现用体外定位突变引起L株上,被点突变的DNA体外转录成RNA后感染感病烟草,结果定位突变的L株表型30kD蛋白基因四种位点不同的移码突变和一种基因中间大部分缺失的突变体均使病毒不能感染植株。这证明TMV 30kD蛋白与病毒运动有关,而与病毒复制无关。同时因为胞间连丝一般只能让小于1kD的分子通过,其通透范围远小于病毒颗粒,也小于折叠的病毒核酸分子,Wolf等实验证明正时因为30kD蛋白才使得植株分子半径扩散了三倍多。(4)免疫球蛋白:指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和一些分泌液中。脊椎动物的免疫系统能抵抗外来的入侵物质,如病毒、细菌以及其他机体的细胞,当外来的这些入侵物质(抗原)进入机体后就会激发机体的免疫系统而产生特异性的免疫球蛋白(抗体),通常每一种抗体对于相应的某一特定抗原具有高度的专一性,抗原与抗体结合形成抗原-抗体复合物.使入侵物质——抗原失活而排出体外,从而消除外来物质对机体的干扰。由此看来蛋白质不仅参与了高等动物的免疫反应,而且起着重要的作用,由于抗原和抗体结合的高度专一性,必然有数量众多的抗体作用于不同的抗原物质,据估计抗体的类型可能有10O万种,即免疫球蛋白可能有100万种之多。(5)毒蛋白:动物、植物和微生物都可以产生某些特殊的物质来防御敌害,这些物质中绝大多数是蛋白质类物质,由于它们对高等动物具有毒性,故称为毒蛋白。蝎类能产生毒性很强的蝎毒蛋白.用来攻击敌害,保护自己;蛇类产生的神经毒素和心赃毒素其主要成分也是小分子量的蛋白质;毒蘑菇中的相当一部分蘑菇毒素也是蛋白质;细菌产生的毒素,毒性极强的肉毒梭菌毒素(人的致死量小于19m)和破伤风痉挛毒素、白喉杆菌毒素等外毒素均是蛋白质。应用举例:王峰等人研究核糖体失活蛋白(RIPS)是一类能够抑制细胞核糖体合成蛋白质,从而导致宿主死亡的毒蛋白,广泛存在于植物、细菌中。发现其在在细胞内的转运途径研究很多,目前较为清楚的是逆向转运途径,其中以蓖麻毒素、志贺菌毒素、霍乱毒素为代表,大体过程为:内吞一内吞小体一高尔基体一内质网一胞液。(6)激素蛋白:是由特殊细胞所产生的一类物质,它们通过与靶细胞或系统内其它器官的相互作用来发挥其代谢上的功能,其实许多激素本身就是蛋白质,这样的蛋白质称为激素蛋白,它们在生物合成上具有重要的功能。如胰高血糖素、胰岛素、胃泌素、生长激素、促甲状腺激素、促肾上腺皮质激素和促脂解激素等均是蛋白
[size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]什么是大豆分离蛋白?[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。[/font][/size][b][size=12pt][font=微软雅黑]喷雾干燥在大豆分离蛋白中的应用-生产工艺[/font][/size][/b][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白(Soy Protein Isolate,简称 SPI)是指干基蛋白质含量≥90%的粉状大豆制品,大豆分离蛋白的制取工艺有多种,如碱溶酸沉法、膜分离法等,其中碱溶酸沉法生产大豆分离蛋白是目前世界上最常用的工艺,它以低温脱脂脱溶豆粕为原料,通过碱溶及等电点沉淀将脱脂豆粕中的可溶性和不溶性碳水化合物除去。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]工艺流程:低温豆粕-碱液提取-离心分离-酸沉-离心分离-中和-杀菌-喷雾干燥-大豆分离蛋白。[/font][/size]
本人正在作胶原蛋白的初始污染菌试验,可是不知道具体的检测方法,请各位高手指点,能告诉具体的操作过程就更好了。
8.0,加入后需静置20min),进行超声破碎,超声条件:400W,工作5秒,间隔5秒,重复一定次数,(根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件)。直至菌体溶液变清澈为止,大约花费时间 。2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液,10000rpm离心10分钟,分别对上清和沉淀进行检测,并用全菌作为阳性对照,检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。注意事项:(1) 超声破碎具体条件可根据实验情况而定,要掌握好功率和每次超声时间,降低蛋白被降解的可能。(2) 功率大时,每次超声时间可缩短,不能让温度升高,应保持在4度左右,超声时保持冰浴。(3)菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford 法或者紫外吸收法。(4)可通过SDS-PAGE 电泳观察菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。
请问下,浓缩饲料添加油包(大豆粉+豆油)进去,蛋白怎么计算,是不是按大豆粉在浓缩饲料的占比计算。比如原浓缩料蛋白为24,油包里大豆粉为每吨500kg,大豆粉蛋白为35,加入油包后,此时的浓缩料蛋白应为多少?
[font=宋体][b]重组蛋白、融合蛋白与天然蛋白的区别:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用基因工程技术产生的,通常是由转基因动物的乳腺产生,其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术,可以使哺乳动物本身变成[/font][font=宋体]“批量生产药物的工厂”。方法:是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白又称为[/font][font=宋体]“标签蛋白”,常用的标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]标签。融合蛋白是通过[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连,通过这种方式表达出来的蛋白质,就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]天然蛋白质是在自然界中存在的,不经过人工的任何修饰或加工,比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]重组蛋白常见问题解析:[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]蛋白为什么要冻干?冻干对蛋白的影响有哪些?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质对热敏感,冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来,提高蛋白的稳定性并延长保存时间,同时降低运费。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂?一般冻干保护剂有哪几种?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加[/font][font=Calibri]8%[/font][font=宋体](质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集;甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂,可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]温馨提示:对于大多数蛋白,重悬后在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃仅能短期保存[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。如想长期保存,请先配制成稀释液[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]其中必须含有载体蛋白,如[/font][font=Calibri]0.1% BSA[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]5%HSA[/font][font=宋体],或[/font][font=Calibri]10% FBS)[/font][font=宋体],然后分装冻存于[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃或[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃。一定要避免反复冻融,因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]如何重构冻干粉?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明,因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说,我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中,轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]为什么我的管内几乎看不见蛋白产品?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如牛血清白蛋白[/font][font=Calibri](BSA)[/font][font=宋体],人血清白蛋白[/font][font=Calibri](HSA)[/font][font=宋体]和蔗糖等,并以最低含盐量的溶液进行冻干时,常常不能形成白色网架结构,而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内,形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]应如何确定细胞因子的种属交叉活性?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]除少数例外,大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。[/font][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞,但比活性可能低于对应的人类细胞因子。 [/font][font=Calibri]3) IL-7[/font][font=宋体]等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。[/font][font=Calibri]4) [/font][font=宋体]干扰素,[/font][font=Calibri]GM-CSF, IL-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]等细胞因子种属特异,对非同源细胞几乎没有活性。[/font][font=Calibri]5) [/font][font=宋体]相反,成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGFs)[/font][font=宋体]和神经营养素[/font][font=Calibri](neurotrophins)[/font][font=宋体]高度保守,在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]什么是载体蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]载体蛋白如[/font] [font=Calibri]HSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]BSA [/font][font=宋体]用于提高重组蛋白的稳定性,并有助于避免产品粘在小瓶壁上。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]我应该如何储存重组蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于长期储存,蛋白质溶液应与载体蛋白(例如[/font] [font=Calibri]0.1% BSA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]0.1% HSA[/font][font=宋体])分装保存,并在 [/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下冷冻保存。请记住,每个冷冻[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明,否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下,则提供此保证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]如何确定重组蛋白的数量?为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们通过[/font][font=Calibri]BCA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时,如果您进行不同的检测,差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体,在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试,但是,同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同(这种情况很少发生)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]重组蛋白资源[/b][/url]详情可以查看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font]
[font=宋体]重组蛋白的表达(尤其是使用细菌载体和宿主)是一项成熟的技术。难点在于如何将其以活化形式分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重组蛋白的纯化是生物学研究中的重要技术。为了研究蛋白的特定功能和结构,研究人员必须将重组蛋白从生物体中分离并纯化。蛋白纯化方法主要利用不同重组蛋白之间的相似性和差异性。可以根据蛋白之间的相似性去除非蛋白物质,然后根据蛋白之间的差异分离纯化目标重组蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是一种可以提高重组蛋白的溶解度、简化蛋白纯化的简单有效的工具,并通过简单的方法跟踪蛋白表达和纯化过程。此外,蛋白标签是追踪活细胞中蛋白和进程的一种有效工具,可以通过显微镜直接跟踪或者通过[/font][font=Calibri]Western blot[/font][font=宋体]、免疫沉淀或免疫染色间接进行跟踪。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化的原理:[/b][/font][font=宋体]不同的重组蛋白具有不同的氨基酸序列和空间结构,导致其物理、化学和生物学特性存在差异。我们也可以根据目标蛋白与其他蛋白和裂解液的性质差异设计合理的蛋白纯化方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大多数的纯化方案需要不止一步才能达到理想的纯度水平。该过程中的每一步都会造成一定的产品损失,假设每一步的获得率为[/font][font=Calibri]80%[/font][font=宋体]。因此,建议尽可能减少纯化步骤。起始原料的选择是纯化过程设计的关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在背景信息、检测方法和样品规格都已到位的情况下,可以考虑采用三阶段纯化策略。纯化分为捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段,每个阶段都有特定的目标。捕获阶段的目标是分离、浓缩和稳定目标产物。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification]蛋白纯化[/url]操作步骤:[/b][/font][font=宋体]理想情况下,最终的纯化过程包括样品制备,其中包括在需要时进行萃取和澄清,然后进行上述捕获、中度纯化和精细纯化三个阶段的纯化。步骤的数量始终取决于所需的纯度和蛋白的预期用途。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同表达系统的蛋白纯化服务,有细菌系统蛋白纯化、哺乳动物瞬时系统蛋白纯化、杆状病毒系统蛋白纯化。详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification[/font][/font]
[font=宋体, SimSun][size=15px]蛋白质按来源可以分为动物蛋白和植物蛋白,两者所含的氨基酸是不同的。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]一般说,植物蛋白和动物蛋白从本质上没有太大的区别,但是在氨基酸组成和数量上有一定的不同。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]尽管植物蛋白取材来源广泛,但其蛋白的种类和相对数量与人体的要求有一定差距。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]例如,植物蛋白中缺乏免疫球蛋白[i][/i],谷类中则相对缺乏赖氨酸等。植物蛋白的消化、吸收要比动物蛋白差,但是植物蛋白的优势是不含有胆固醇。动物蛋白相对与人类的营养结构比较吻合,其蛋白质的种类和结构更加接近人体的蛋白结构和数量,而且一般都含有人体必需的8种氨基酸(特别是蛋制品和奶制品),所以动物蛋白质比植物蛋白质营养价值高。[/size][/font]
[font=宋体][font=宋体]重组蛋白是利用[/font][font=Calibri]DNA(RNA)[/font][font=宋体]重组技术表达的蛋白重组。蛋白表达是将目的基因通过电转化或者热激等手段转入合适的宿主中,利用宿主的特定生理、生化和遗传特点进行目标蛋白大量表达及纯化的生物技术。目前,较为主流的表达宿主有大肠杆菌([/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体])、毕赤酵母([/font][font=Calibri]P.pastoris[/font][font=宋体])、昆虫[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杆状病毒([/font][font=Calibri]Bac-to-Bac[/font][font=宋体]系统)以及哺乳动物细胞系([/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])等。鉴于目标蛋白的应用场景和自身理化性质的差异,选择合适的表达宿主尤为关键。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]大肠杆菌([/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]):[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]表达系统:原核[/font][font=宋体]优势:经济、快速、高产量、应用广泛[/font][font=宋体]劣势:包涵体;无翻译后修饰;大分子蛋白表达困难[/font][font=宋体]推荐表达:细菌类蛋白;抗原类蛋白;细胞因子;酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]酵母细胞:[/font][/b][font=宋体]表达系统:真核[/font][font=宋体]优势:经济、快速、高产量;部分翻译修饰[/font][font=宋体]劣势:非人源糖基化;高甘露糖修饰[/font][font=宋体]推荐表达:细胞因子;少分子量蛋白;酶类[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞:[/font][/font][/b][font=宋体]表达系统:真核[/font][font=宋体]优势:基因容量大;可溶蛋白;适合毒性蛋白;类似哺乳动物系统;翻译后修饰[/font][font=宋体]劣势:周期长;成本高;缺少部分糖基化[/font][font=宋体]推荐表达:细胞质蛋白;毒性蛋白;跨膜蛋白;分泌蛋白;激酶;[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]哺乳动物细胞[/font][font=宋体]表达[/font][font=宋体]:[/font][/b][font=宋体]表达系统:真核[/font][font=宋体]优势:可溶蛋白;更低内毒素;更好的活性;更好的翻译后修饰;可瞬时转染与稳定转染表达[/font][font=宋体]劣势:周期长;成本高;[/font][font=宋体]推荐表达:分泌蛋白;跨膜蛋白;重组抗体;抗体等[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有原核细胞表达平台、哺乳动物瞬时表达平台、杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫蛋白表达平台,同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]原核([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]E. coli[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b])蛋白表达服务[/b][/url]……可实现重组蛋白和重组抗体的高通量和高产量表达,可为客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-antibody-production-service][b]重组表达服务[/b][/url]及一站式定制需求。详情可以关注 大肠杆菌蛋白表达平台:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/e-coli-protein-expression[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]
下面这个是大豆与羊毛动物纤维,蚕丝二组分混合物分析方法,溶解大豆蛋白,利用蛋白含量占大豆蛋白复合纤维的比例来确定大豆蛋白复合纤维含量,有点不可理解?大豆蛋白复合纤维,目前是大豆蛋白和聚乙烯醇复合,仅仅用蛋白溶解后,剩余的聚乙烯醇的含量来‘推算’出来大豆蛋白复合纤维的含量,是有点欠妥,虽然规定了大豆蛋白复合纤维的蛋白含量,但是实际的大豆蛋白复合纤维中,大豆蛋白和聚乙烯醇含量的比例不一定的,也就是说比例不是那么固定的,这样的检测方法对检测公司来说是没有任何问题的,也是标准的一个进步,但对生产企业来说,确实是致命的,没有规定大豆蛋白复合纤维的配比必须是多少,这个检测很可能每批次大豆与羊毛动物纤维,蚕丝产品的标示和实际检测结果是不合格的。而实际生产添加的各成分是标准的?比如填充,大豆与羊毛动物纤维,蚕丝混合,生产企业是烘干后,按照回潮率计算,按重量比添加混合的,这样企业就根据这样的比例进行标示,这个是最准确的,也是最合理的?大家认为呢?[img=,690,172]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/201710250916_01_2154459_3.png!w690x172.jpg[/img][img=,690,138]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/201710250913_01_2154459_3.png!w690x138.jpg[/img]
1、C反应蛋白概述 1930年Tillet和Francis在急性大叶性肺炎患者血清中发现一种物质,能在钙离子存在时与肺炎球菌C-多糖起沉淀反应,随后证实这种能与C-多糖反应的物质是一种蛋白质,因而将这种蛋白质命名为C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)。 CRP是机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时肝细胞合成的急性相蛋白(注:急性时相反应包括感染、炎症及创伤时某些血清蛋白浓度的变化,这些蛋白除CRP外,还包括血清淀粉样蛋白A、纤维蛋白原、触珠蛋白、α1酸性糖蛋白、铜蓝蛋白、α1抗胰蛋白酶等。其中CRP在健康人血清中浓度<5mg/L,而在细菌感染或组织损伤时,浓度可升高上千倍,循环中的CRP半衰期为19小时,故被认为其最有价值),由五个相同的亚基依靠非共价键形成的环状五聚体,这一特征性结构使其归类于五聚素(一组具有免疫防御特性的钙结合蛋白)家族。CRP是机体非特异性免疫机制的一部分,它结合C-多糖,在Ca2+存在时可结合细胞膜上磷酸胆碱,可激活补体的经典途径,增强白细胞的吞噬作用,调节淋巴细胞或单核/巨噬系统功能,促进巨噬细胞组织因子的生成,在动脉粥样硬化斑块中也可检测到CRP。 人CRP主要生物学功能: 通过与配体(凋亡与坏死的细胞,或入侵的细菌、真菌、寄生虫等的磷酰胆碱)结合,激活补体和单核吞噬细胞系统,将载有配体的病理物质或病原体清除。 (1)识别外来物质,激活补体系统; (2)增强条理作用,增强吞噬细胞吞噬作用; (3)与血小板激活因子(RAF)结合,降低炎症反应; (4)与染色体结合,消除坏死组织里的细胞DNA。
10月8日,有媒体报道称,经过第三方机构检测,市售的Fancl、Lumi、丸美、汤臣倍健、颜如玉、无限极、安婕妤等七款胶原蛋白产品均出现胶原蛋白含量不足的问题,其中汤臣倍健、颜如玉、无限极的三款产品甚至未能检出胶原蛋白的特征物“羟脯氨酸”。由此,业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论。由此,业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论,频频陷入舆论危机。同时还了解到目前胶原蛋白产品始终未有统一标准,特异性指标也未能明确。不过多方认可,目前胶原蛋白的检测标准主要是测羟脯氨酸的含量。琳琅满目的胶原蛋白产品中胶原蛋白的含量是否合格?如何检测?国家相关的标准状况怎样?
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