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高荷质比多肽离子
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高荷质比多肽离子相关的方案
应用具有扩展质量数范围的三重四 极杆质谱仪对高质荷比多肽离子进 行常规分析
前言使用液相色谱/三重四极杆质谱仪对蛋白质进行常规的高通量定量分析时,我们将多肽作为相应蛋白质的替代物。选择独特的多肽以及适合每种目标多肽的MRM 离子对是分析成功的关键步骤。考虑到仪器质量数范围限制,分析时通常不会选择具有高 m/z 母离子或子离子的多肽。但是,若要解决生物学问题,此类多肽也许能提供关键信息,甚至可能是唯一的分析选择。此类例子包括具有大型疏水性跨膜结构域的膜蛋白、带有多种翻译后修饰结构的蛋白质,以及内源性多肽等等。
应用具有扩展质量数范围的三重四极杆质谱仪对高质荷比多肽离子进行常规分析
Agilent 6495B 三重四极杆液质联用系统的质量数范围达 3000 u,分析高 m/z 子离子的 MRM 离子对时优异的重现性。在复杂的消解物样品中,使用高 m/z 母离子或子离子的优势之一是这些离子的背景噪音更低。此外,分析结果具有优异的精密度和准确性。
LCMS-2050在多肽分子量定性分析检测中的应用
本文使用高效液相色谱四极杆质谱联用仪LCMS-2050对泛素(Ubiquitin)多肽进行分子量测定。采用DUIS(ESI+APCI)正离子模式对待测样品进行质谱扫描,以LabSolutions软件对质谱扫描图进行解卷积多电荷分析,各质谱扫描图中均能观测到对应多肽的不同电荷数离子信号。结果显示,8种多电荷离子通过解卷积分析确认了分子量为8564.81,与理论值的偏差为-0.03Da,质量准确度高,体现了LCMS-2050质量范围宽的特点,适合多肽、寡核苷酸等大分子物质的分子量检测(多电荷分析)。
离子色谱抑制型电导法测定多肽药物中残留哌啶
本文采用采用离子色谱方法抑制电导检测,简单灵敏地测定出多肽中哌啶的含量, 检测限可达1.0mg/kg方法操作简单便捷,且重现性好,回收率高,适用于此类样品分析。
卡比多巴在ChromCore 120 C18上的分离(中国药典2020)
采用纳谱分析5μ m的ChromCore 120 C18色谱柱对卡比多巴系统适用性溶液和供试品溶液进行分离和检测, 主峰峰形良好, 周围无干扰杂峰, 该方法操作简单, 灵敏度高, 重复性好, 符合药典要求, 可用于卡比多巴中有效成分的分离和测定, 为该药物的质量保证提供检测依据。Column:ChromCore 120 C18, 5 μ mDimension:4.6× 250 mm
卡比多巴-UHPLC在ChromCore120C18上的分离(中国药典2020)
采用纳谱分析1.8μ m的ChromCore 120 C18色谱柱对卡比多巴系统适用性溶液和供试品溶液进行分离和检测, 主峰峰形良好, 周围无干扰杂峰, 该方法操作简单, 灵敏度高, 重复性好, 符合药典要求, 可用于卡比多巴中有效成分的分离和测定, 为该药物的质量保证提供检测依据。Column:ChromCore 120 C18, 1.8 μ mDimension:2.1× 100 mm
卡比多巴在3μm的ChromCore120C18上的分离(中国药典)
采用纳谱分析3μ m的ChromCore 120 C18色谱柱对卡比多巴系统适用性溶液和供试品溶液进行分离和检测, 主峰峰形良好, 周围无干扰杂峰, 该方法操作简单, 灵敏度高, 重复性好, 符合药典要求, 可用于卡比多巴中有效成分的分离和测定, 为该药物的质量保证提供检测依据。Column:ChromCore 120 C18, 3 μ mDimension:4.6× 150 mm
参考2020版《中国药典》采用TSKgel色谱柱分析卡比多巴
采用东曹C18色谱柱TSKgel ODS-100V (4.6mmI.D.×250mm),分析卡比多巴的分离效果,系统适用性溶液色谱图中,理论塔板数按卡比多巴峰计算为12597,不低于5000。甲基多巴峰与卡比多巴峰的分离度为4.43,大于4.0,达到国家标准的分离要求。
强极性多肽样品分离纯化
常见的组成多肽的氨基酸有20种,根据其极性和酸碱性可以分为以下几组:非极性(疏水)、极性(不带电荷)、酸性以及碱性(参见图1)。在一条多肽序列中,如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸(图1中粉红色标出部分),如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等,那么该多肽可能具有较强的极性,易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中,若采用普通的C18分离柱,将会发生疏水坍塌现象(具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》)。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化,在本案例中,利用某强极性多肽作为样品,在C18AQ柱上进行了分离纯化,获得了可用于下一步研究的目标产物。
如何选择多肽合成的树脂类型?第二部分
ChemMatrix® 多肽合成树脂,高效,快速,载样量高,副产物少。我们将会持续使用ChemMatrix树脂或者其他聚乙二醇类树脂,因为它具有更好的溶胀和亲水性。
基于双三元液相高通量在线除盐技术与 Orbitrap高分辨质谱联用在合成类多肽药物杂质鉴定中的应用
Orbitrap高分辨质谱仪具有高灵敏度、高分辨率、高准确度和高稳定性的优势性能,与液相色谱联用可实现对多肽药物氨基酸序列的确证、氨基酸修饰的定性和定量,多肽药物杂质的鉴定和定量,以及多肽药物的动力学研究。本实验采用在线多组分中心切割二维除盐方法,一次进样完成了多目标杂质的在线除盐,显著的改善了分析效率,与Orbitrap高分辨质谱联用,强强联合,提高了杂质鉴定的通量和准确度。
采用柱后 TFA-Fix 技术或抑制器技术降低 流动相中三氟乙酸 (TFA) 对多肽质谱信号抑制作用
柱后 TFA-Fix 技术和抑制器离子交换的方法,经过实验验证,表明两种方法都具有降低流动相中 TFA 对多肽的质谱抑制作用,提高样品在 MS 上的灵敏度。采用双三元液相色谱系统,充分利用双泵的功能,同时进行样品分析和柱后自动试剂添加,大大提高多肽样品在 MS 上的灵敏度。
利用Q-TOF定性分析多肽类药物生长抑素中的聚集体
本文使用岛津LCMS-Q-TOF液质联用系统结合尺寸排阻色谱法,开发了一种定性检测多肽类药物生长抑素中聚集体的方法,使用岛津LabSolutions Insight Explore软件对色谱峰进行解析,并对多电荷结果进行解卷积分析。实验结果显示,该方法可以分离多肽类药物生长抑素的主成分和聚集体,分离出的4个色谱峰分别为生长抑素的四聚体,三聚体,非共价二聚体和共价二聚体。
重负离子复合物在软电荷界面形成独特的水结构
采用由立陶宛Ekspla公司的PL2231型高功率皮秒激光器和光学参量发生器等设备构成的振动和频光谱测量系统,对重负离子复合物在软电荷界面形成独特的水结构的现象进行了实验研究。
瑞士万通:合成多肽药物中三氟乙酸残留物分析
三氟乙酸常用于多肽的合成、纯化过程,多肽药物中三氟乙酸含量是一项重要的监测指标。本文建立了离子色谱法测定合成多肽药物中三氟乙酸残留含量的方法,获得了满意的结果。本法还可同时测定合成多肽药物中乙酸根、氯离子、磷酸根、硫酸根等无机阴离子。
多肽制备分析解决方案—液相色谱仪及制备系统应用
多肽类药物作用于体内各系统和细胞的生理功能,有良好的疗效和安全性。与传统的药物相比,多肽药物具有活性显著,特异性较强;与蛋白大分子药物相比,多肽类药物免疫原性相对较小,单位活性更高,且其合成和纯化也更容易。因此多肽药物临床治疗领域应用较多,其主要治领域包括治疗肿瘤、糖尿病、骨质疏松、疫苗等等。随着多肽药物的迅猛发展,多肽药物的分析和纯化需求也逐年递增。依利特推出的多肽药物的分析和纯化一站式解决方案,供相关人员参考使用。
离子色谱柱切换法测定氟化盐高纯试剂中的杂质阴离子
离子色谱法对于测定常规阴离子具有很高的灵敏度和较低的检出限,其在化工试剂中杂质成份分析的应用研究已有较多报道。离子色谱法直接测定氟化盐中杂质阴离子,因为待测物的色谱峰会被样品基体的F-峰所干扰,难以达到有效的分离分析。本研究利用HF为弱酸的特点,将氟化盐样品通过磺酸型离子排斥柱ICE-AS6(其固定相表面附着的一层带负电荷水合层,称为Donnan膜),金属阳离子(如Li+、Na+、K+等)与H+交换,F-与H+形成弱电离的HF不受Donnan排斥,能进入树脂的内微孔,而待测离子因排斥效应首先通过色谱柱,从而将待测离子从浓的氟化盐溶液中分离出来;将分离出的待测离子富集于 IonPac TAC-ULP1阴离子浓缩柱上;经柱切换,淋洗液将待测组分从浓缩柱上洗脱下来,待测离子经过 IonPac AS23阴离子交换色谱柱分离,以抑制型电导检测器检测。本方法所建立的离子色谱柱切换方法,用于测定氟化盐(如LiF、NaF和KF)试剂中的杂质阴离子(Cl-、NO3-、PO43-和SO42-)的含量,解决了测定氟化物的高基体干扰问题。
AGC DID氦离子气相色谱分析仪在 He、Ne 提纯工艺中的应用高纯氖分析、高纯氦分析、氖中氦分析
随着社会的发展,特种气体不再是只局限于科研单位的研究对象,而是逐渐走向民用化、产业化,人们对特种气体的需求量也越来越大。而高纯的氦气、氖气作为特种气体中少有的几种惰性气体,不仅科研价值极高,而且应用的领域也越来越广泛。涉及到诸如电子、点光源、激光、超导、光导纤维、低温、等离子体显示器、航天及医疗等诸多领域。在氦气和氖气的提纯工艺中,需要使用到多台仪器设备来对主要的监测点进行监测,然后根据结果适时地调整工艺参数,最终生产出优质的高纯氦气和氖气。在氦气和氖气提纯时,在四个主要的监测点上选用了多台色谱分析仪来完成此项工作,此套设备中所采用的分析仪器均来自于爱尔兰AGC公司。1、粗He/Ne除氮后的N2含量分析2、粗He/Ne除氮系统后的He/Ne/H2/N2含量的分析 3、产品He的纯度分析4、产品Ne的纯度分析,包括氖中氦分析
使用CEM LIBERTY BLUE合成长达228个氨基酸的多肽
CEM专利的环形电磁场结构设计,使氨基酸构成的卷曲肽链充分展开,进行彻底的去保护、耦合和裂解,反应变得极其快速,完全,高纯。Liberty BLUE比传统方法提高了近20倍;标准的10肽 ACP 序列合成纯度竟达到 98%,使得许多合成反应甚至可免去纯化步骤;可以完成传统方法不可能实现的困难合成。实现更多更长的氨基酸耦合,防止长链多肽聚合,消除双重耦合和外消旋现象,同时降低树脂的要求。BLUE 开辟了多肽合成的新纪元,使生物化学和蛋白质研究具备了空前的多肽合成的能力,是以前传统合成方法根本无法想象的。市场上没有任何一台多肽合成仪能与 BLUE相媲美。
通过可控制的微波加热进行快速固相多肽合成
本文描述一种快速有效的微波辅助固相合成方法,用以合成序列为WDTVRISFK的短肽,使用传统的Fmoc(9-芴氧羰基)/tBu(叔丁基)保护基策略。该合成方法是基于反应中的周期性脉冲微波辐射和间歇性冷却技术,在Fmoc保护基的脱除及偶联反应中均应用此技术。在应用微反应器技术后得到了高纯度和高收率的目标多肽。该反应在一个CEM单模微波反应器中进行,并且使用光纤进行连续测温。
使用 Agilent AdvanceBio Peptide Plus色谱柱分析合成多肽杂质
通常,使用 UV 检测的多肽色谱分离是通过 C18 柱以及三氟乙酸 (TFA) 改性的流动相完成,这种方法可以改善分离度,但同时会抑制质谱 (MS) 信号。甲酸 (FA) 是用于 MS 检测的首选流动相改性剂,但它可能会导致传统 C18 柱无法达到最佳分离效果。本应用简报介绍了通过单一液相色谱方法,采用 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱分离合成多肽杂质,并使用 UV 或 MS 进行检测。本方法使用 FA 作为流动相改性剂,可以提供足够的分离度以鉴定并定量多肽杂质。
基于Obitrap超高分辨质谱平台的 多肽药物特立帕肽的定量分析
多肽药物是介于大分子蛋白/抗体类药物和小分子药物之间的一类重要的药物分子,因其生物活性高、靶向专一性高、选择性高、毒副作用低等优点而被广泛应用于疾病治疗领域[1]。ThermoObitrap因其超高的分辨率,质量轴稳定性,已经广泛应用在了多肽药物结构表征中。Obitrap 作为高分辩还具有极高灵敏度和线性范围,因此也被越来越多的应用到药物的定量研究中。PTH 是甲状旁腺主细胞分泌的由84个氨基酸组成的多肽类激素,其对于维持钙磷代谢的稳定起着至关重要的作用。特立帕肽(SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF,4117.7 Da)是一种人工重组合成的人PTH 1-34多肽,是第一个被美国食品药品监督管理局(Food and DrugAdministration,FDA)批准的抗骨质疏松性骨折的骨合成药物。
通过离子电荷滴定控制碳纳米管的功能化效率
许多微粒系统取决于颗粒悬浮体系的稳定性和再分散能力,而它的PH范围不能太过局限。一种达到稳定性的方法为通过适当的离子端基修饰改变它的界面。越高的离子电荷密度,单个颗粒间的排斥力就越高,从而可以克服范德华吸引力。离子排斥可以通过静电学的颗粒界面电势(PIP)和总的离子表面电势表征。PH稳定范围和总离子电势,都可以通过Stabino II ® 电位滴定轻松控制。
采用柱后TFA-Fix 技术或抑制器技术降低 流动相中三氟乙酸(TFA) 对多肽质谱信号抑制作用
本文采用双三元液相色谱系统(DGLC),充分利用双泵的优势,将两个泵分别作为流动相的输液泵和柱后溶液的传输泵,实现与质谱的全自动连接。采用TFA-Fix 技术或者抑制器技术降低流动相中TFA 对MS 的离子产生的抑制作用,尤其是柱后抑制器技术大大提高了多肽样品在质谱上的灵敏度。
采用柱后TFA-Fix技术或抑制器技术降低流动相中三氟乙酸(TFA)对多肽质谱信号抑制作用
本文采用双三元液相色谱系统(DGLC),充分利用双泵的优势,将两个泵分别作为流动相的输液泵和柱后溶液的传输泵,实现与质谱的全自动连接。采用TFA-Fix 技术或者抑制器技术降低流动相中TFA 对MS 的离子产生的抑制作用,尤其是柱后抑制器技术大大提高了多肽样品在质谱上的灵敏度。
多肽生物分析解决方案
随着越来越多的肽类药物的研发和上市,从临床前药物开发阶段获得药代动力学信息,到药物临床研究,再到治疗药物监测阶段,都离不开生物样本中多肽的定量分析技术。此外,具有诊断潜力的内源性肽类生物标志物的定量,以及蛋白特征肽段分析也依赖于多肽的生物分析技术。艾杰尔飞诺美提供多肽生物样本的制备技术,以及从小分子到大分子的色谱柱解决方案,助力多肽生物分析方法的高效开发。
IPHASE/汇智和源 多肽类药物体外ADME研究一站式产品解决方案
然而,多肽药物也有不可忽视的缺点,其化学与生理稳定性都较差,容易受到体内蛋白水解酶的降解,给多肽药物的研发带来了很多挑战。本文将从多肽类药物的药代动力学层面进行浅析,了解多肽类药物体外ADME研究策略,确定多肽类药物基础体外研究模型,助力多肽类药物早期研发!
使用 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱进行可重现的 LC/MS 多肽分离
多肽分离是生物药物表征过程中至关重要的一步。肽谱分析在药品开发中作为主要的质量控制 (QC) 步骤,其中包括通过酶解生成多肽片段,然后进行反相分离和质谱鉴定。由于蛋白质混合物的蛋白水解消化物固有的复杂性,高效、高分离度的多肽分离显得尤为重要。保留时间和峰面积/峰 高等肽谱分析的质量属性是获得可靠肽谱分析结果的关键。因此,需要采用稳定可重现的 LC/MS 方法严格表征多肽片段,从而可靠地评估分析结果。本研究证明,使用可兼容质谱的 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱以及 含甲酸改性剂的流动相可实现高效的多肽分离。本研究筛选了多种类型的样品用于评估多肽分离的色谱柱性能。结果表现出优异的保留时间、峰面积、峰高和半峰宽 (FWHM) 重现性。
高通量自动化微波增强多肽合成
CEM 的微波多肽合成仪可与 HT 自动树脂装载配合,允许用户排列并自动连续合成多达 24 个多肽。对于队列中的每个多肽,成批的单个树脂被预加载到 HT 上,然后自动转移到 Liberty 合成仪进行肽合成。
岛津生物药整体解决方案(五)—多肽类药物分析篇
多肽合成方法可分为生物合成法及化学合成法,随着基因重组技术的发展,多肽生物合成法除传统的天然提取法,酶解法、基因重组法也在多肽合成逐步得到应用;多肽化学合成法通过氨基酸之间的缩合反应来实现氨基酸连接延长,以获得特定序列的多肽。化学合成法具有研发周期短、可快速生产等优点,逐渐成为主流。在多肽药物的开发和生产过程中需要对产品和工艺相关杂质进行检测和评估,以保证药物质量可靠并且安全有效;目前主要的参考指南有国家药品监督管理局(NMPA)药品审评中心于2023年2月颁布的《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则(试行)》以及之前发布的《制备工艺和过程控制对合成多肽药物有关物质的影响》、《合成多肽药物质控及杂质谱研究》等,涉及到氨基酸的组成和序列分析、多肽的分子量、含量、纯度和结构表征等质控分析,可利用HPLC、LC-MS、Q-TOF、MALDI-TOF、Edman降解法等进行相关检测分析。
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