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肺癌病人呼出气

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肺癌病人呼出气相关的论坛

  • 呼出气采样装置

    请问一下市面上要有没有售卖呼出气采样装置的?用于采集呼出气后进行离线分析

  • 【资料】近九成肺癌的死亡与吸烟有关

    【资料】近九成肺癌的死亡与吸烟有关

    [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/11/200811300112_121038_1600687_3.jpg[/img]今年11月是第八个“国际肺癌关注月”。11月4日,在卫生部疾病预防控制局、中国抗癌协会主办的“对话希望—关注中国肺癌治疗”新闻发布会上,中国医师协会胸外科医师分会常务副会长兼总干事、中国癌症基金会控烟与肺癌防治部主任支修益教授指出,我国每年约有60万人死于肺癌,肺癌已经成为累计危险性最高的癌症。如何防控恶性肿瘤,已成为全社会迫在眉睫的难题。要解决这个难题,支修益的答案是“戒烟”,“吸烟是肺癌发病的第一元凶,超过八成的肺癌病人死亡与吸烟相关。如果真能实现全面禁烟,降低肺癌的发病率会容易得多。”

  • GCMS分析呼出气VOCs,色谱峰不分离,请大佬指点

    仪器配制:1. 三重四极杆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]-TG-5SILMS (30m×0.25mm×0.25μm, Thermo) 色谱柱2. Agilent 7890B/5977B [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]-TG-624 (30m×0.25mm×1.4μm, Thermo )色谱柱分析人体呼出气,两次结果都只有一个峰,请大佬指点

  • 傅若农:重症早期预警——呼出气用SIFT-MS 实时快速检测

    [b][color=#00b0f0]编者注:[/color][/b]傅若农教授生于1930年,1953年毕业于北京大学化学系,而后一直在北京理工大学(原北京工业学院)从事教学与科研工作。1958年,傅若农教授开始带领学生初步进入吸附柱色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的探索 1966到1976年文化大革命的后期,傅若农教授在干校劳动的间隙,系统地阅读并翻译了两本[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]启蒙书,从此进入其后半生一直从事的事业——色谱研究。傅若农教授是我国老一辈色谱研究专家,见证了我国[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]研究的发展,为我国培养了众多色谱研究人才。[url=http://www.instrument.com.cn/news/20140623/134647.shtml][b]第一讲:傅若农讲述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术发展历史及趋势[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140714/136528.shtml][b]第二讲:傅若农:从三家公司GC产品更迭看[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]技术发展[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140811/138629.shtml][b]第三讲:傅若农:从国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]产品看国内[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]发展脉络及现状[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140902/140376.shtml][b]第四讲:傅若农:[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]固定液的前世今生[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141009/143041.shtml][b]第五讲:傅若农:气-固色谱的魅力[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141104/145381.shtml][b]第六讲:傅若农:PLOT[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱的诱惑力[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141205/147891.shtml][b]第七讲:傅若农:酒驾判官——顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的前世今生[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150106/150406.shtml][b]第八讲:傅若农:一扫而光——吹扫捕集-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的发展[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150211/153795.shtml][b]第九讲:傅若农:凌空一瞥洞察一切——神通广大的固相微萃取(SPME)[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150312/155171.shtml][b]第十讲:傅若农:悬“珠”济世——单液滴微萃取(SDME)的妙用[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150417/158106.shtml][b]第十一讲:傅若农:扭转乾坤——神奇的反应顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150519/160962.shtml][b]第十二讲:擒魔序曲——脂质组学研究中的样品处理[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150617/164595.shtml][b]第十三讲:离子液体柱——脂质组学中分离脂肪酸的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150716/167186.shtml][b]第十四讲:脂肪酸[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的故事[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150820/170240.shtml][b]第十五讲:吹口气,知健康——GC-MS检测呼气疾病标记物 [/b][/url][color=#0070c0][b] [/b][/color] 呼吸气检测相比其他通常医疗检测的最大优点是无损伤和安全性,由于它在临床诊断和明确的评估方面具有巨大的优势,所以呼吸气检测今天受到极大的重视,这一方法对一些病人成为每天控制重要指标的必要测试项目(就像检测血糖和尿液一样)。呼吸气检测有多种方法,表 1列出分析呼出气体的一些方法。[align=center]表 1 用于分析呼出气体的一些方法[/align][align=center][img=,673,196]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/646b33a1-b677-47f9-ba7f-04bd4eb610c4.jpg[/img][/align]  上次我们介绍了GC-MS分析人呼出气体中预示疾病的生物标记物。这里我们介绍用SIFT-MS快速实时分析呼出气体中预示疾病的生物标记物的方法。[b]1. 用选择性离子流动管质谱(SIFT-MS)快速、实时、准确地分析呼吸气体中的疾病标记物[/b]  早期的质谱是采用低压电子电离源,用以测定分子量、元素组成以及探究物质的化学结构,后者是利用分子电离后的碎片组成来实现的。近年电离方法的发展是针对直接分析液体或固体样品而设计的,包括快原子轰击(FAB),基质辅助激光吸附/电离(MALDI),和电喷雾电离(ESI)方法。后面2个方法特别适合于分子量大的化合物的鉴定,ESI与液相色谱(HPLC)的结合更为有效。在气体样品电离的方法方面也得到重要的发展,包括化学电离(软电离)的各种变体,多使用正离子电离,以减少初始电离分子碎片的量,大气压电离是化学电离的一个特殊的方法。也开发出用于气体分析在漂移管中从H3O+离子进行质子转移的化学电离方法,叫做质子转移反应质谱(PTR-MS)。  使用电子电离质谱进行大气和呼吸气中微量组分的实时鉴定和定量分析,是一个具有挑战性的任务。因为在离子源中会浸入过多的气体如氮、氧和水蒸气,要解决这些问题,使用多种过滤膜,这些过滤膜只让极性的被测气体进入离子源,而排出大量的空气。但是这些过滤膜仍会阻挡其他一些痕迹量气体(尤其是烃类),所以要针对每种痕迹量气体小心校正过滤膜的穿透性,才能达到准确地定量结果。要不然为了避免不同化合物同时进行电离就只得使用GC-MS进行分析。  如果是能够直接、实时地分析大气中的痕迹量杂质,即解决环境科学,特别是呼吸气体中特殊气体的分析,开发扩大医疗诊断的领域,那就好了。尽管GC-MS可以分析空气和呼气中的10[sup]-12[/sup](ppb)和10[sup]-9[/sup](ppt)的痕迹量组分,但是需要收集大容量的样品到冷冻或吸附阱里。  显然,这就不是实时监测了。而且GC不适合监测像氨和甲醛一类小分子量物质。  David Smith等于1976年开发了选择性离子流动管质谱(SIFT-MS),它是一种可以进行定量分析的质谱方法,它开拓了使用选择性前体正离子进行化学电离的方法,此正离子可在一定的短暂反应时间里与空气或呼吸气体中痕迹量气体进行反应。这一技术是把快速流动管技术、化学电离和定量质谱分析很好的结合在一起,用以对一些空气和呼吸气体中痕迹量物质进行精确的定量分析,检测量可低达10-9浓度级别,分析时间只用几秒钟。  SIFT 的构思和发展始于1976年,是研究离子和中性物质反应的标准方法,开始时用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]离子和中性物质反应的动力学数据,各国进行了大量的实验,积累了大量数据,奠定了离子和中性物质反应的基本概念。[b]2.SIFT-MS 的原理和装置[/b]  SIFT-MS 的工作原理如图 1 所示:[align=center][img=,1053,618]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/3590bc40-6816-42bb-875f-6a5599218cde.jpg[/img][/align][align=center]图 1 SIFT-MS 的工作原理示意图[/align]  在离子源中用微波放电或射频离子源来产生正离子,离子进入一个上游管中,其中有一个四极杆滤质器,用以过滤掉无用离子,留下首选的母离子,通常选择H3O+,NO+和O2+为母离子,母离子通过一个文丘里管(一般管径为1-2 mm)进入到反应流动管中,这里样品气用载气氦以一定速进入流动管,载气压力通常为100 Pa,在这里母离子与样品气反应,反应产物离子进入一个下游管,管长一般为30-100 cm,管末端的文丘里管(一般管径为0.3mm)进入到另一个四极杆滤质器对它们进行质量过滤。用电子倍增器检测,对选择出来的目标反应产物离子进行离子计数,进行定量分析。[b]3.SIFT 中的反应速率常数[/b]  样品+载气注射到不锈钢流动管(内径通常为4-8 cm,内径以dt表示),用罗茨泵抽动,使管中总流速在40-80 m/s,以vg表示,它可以用载气流速,压力pg,温度Tg (K) 和dt进行精确计算,即:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/b41a9e0f-c11e-4741-a31c-cb93ba324a50.jpg[/img](1)[/align]  被加热的离子很快沿着流动管进行扩散,离子沿着流动管的平均速率为Vi这一速率决定着离子与反应气的反应时间 t,Vi要大于Vg,要进行精确测量,理论证明二者的关系为:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/ce6e5c00-85ae-4315-83e3-a6e1f7b23816.jpg[/img](2)[/align]  反应气进样口进入流动管,其流速为ΦR。简单地处理,t是反应长度l(进样口到下游进样孔之间的距离)和Vi之比,但是l需要包括一个小的“末端校正”ε,典型情况下ε为2cm,这是考虑到反应气和载气的一定的混合距离。  为了确定反应的速率系数,需要知道载气中反应气分子的数密度值,可以从载气和反应气的流速得到[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/8605a811-acd1-499a-831f-cfb2e61eca93.jpg[/img](3)[/align]  kb 是玻尔兹曼常数。  下面用一个例子解释如何确定速率常数的,我们选择H3O+为起始离子与丙酮作用,此反应用于呼吸气的分析,这是一个很简单的反应,H3O+的质子进入丙酮分子中:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/01851f86-3930-47bc-80d8-7a3f7254d5e6.jpg[/img][/align]  在流动管中H3O+的原始数密度随时间而降低,Ni可以用下面的动力学公式描述:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/25951713-d73b-45e9-aaad-98459c6d0f5d.jpg[/img][/align]  式(5)中右面第1项表示原始离子(母离子)扩散到流动管壁的损失,以扩散系数 Di和Λ来表征,Λ表示扩散距离,与流动管的直径有关。第2项表示原始离子由于反应的损失,k 是反应(4)质子转移的速率系数,A是反应物(丙酮)的数密度。实际上原始离子H3O+和产物离子(CH3COCH3?H+)的计数率都可以用下游的质谱系统在丙酮蒸汽几个不同的流速下进行测定得到,在丙酮存在下H3O+的计数率I与没有丙酮时的的计数率I0相关,把公式(5)积分可得到:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/e83a1f8f-767e-4a6c-9d14-9c7d0febf661.jpg[/img][/align]  k 的绝对值可从logI对作图得到。  速率系数k是分析测定必须有的数据,见后面的叙述。[b]4 .SIFT-MS 分析法[/b]  从公式(5)和(6)知道,如果反应的前体离子和反应物A的速率系数知道,当分子A流入载气里是,前体离子的计数率就开始降低,这样就可以测定,但是如果一个反应混合物气体同时进入载气里,那么前体离子计数率的降低是所有可反应气体造成的,就不能达到分析混合物的目的。但是,如果每一个反应气体和前体离子反应生成不同的产物离子。那么反应产物的信号就既可以定性又可以定量,所以SIFT-MS分析集中于用下游质谱仪测定前体和反应气体产物离子的计数率,所以它提供一个实时定量分析复杂混合物中的痕迹量气体,比如环境气体和呼吸气体。[b]5 .呼吸气体分析实例[/b]  Turner等人采用SIFT-MS对30位健康志愿者(19位男性,11位女性)进行为期六个月呼出气中乙醇和乙醛的监测,每周8:45 到 13:00(午餐前)志愿者取样,对乙醇和乙醛即可用SIFT-MS进行测定,使用H3O+为前体离子,测得乙醇平均浓度为196 ppb。乙醛的平均浓度为24 ppb。测得正常人呼出气中乙醇浓度在0到1663ppb之间,平均值为450ppb,乙醛浓度在0到104ppb之间,平均值为41ppb。环境中乙醇的背景浓度为50ppb左右,但是几乎没有检测到环境中的乙醛。但是在测定前2 h要是吃了甜饮料/食品乙醇的浓度会增加。(Rapid Commun Mass Spectrom,2006,20(1):6l-68 王海东等,现代科学仪器,2013,(4):40-45)[b](1) 具体方法概述[/b]  SIFT-MS有两种不同的运行模式,一种是全扫描模式,即在一定m/z范围内得到通常的质谱图,用于鉴定前体、产物离子和他们相应的计数率,在线计算机立刻计算这些痕迹量气体在呼吸气中的分压,为此要有可鉴定的产物离子,而且它们还要包括在分析所需要的动力学数据库中,动力学数据库包括速率系数和前体离子/痕迹量气体化合物反应的产物离子。对各种类型的化合物(醇类、醛类、酮类、烃类等)和三种前体离子经过SIFT的详细研究,构建了数据库。  另一种是多离子检测模式,在这一模式下,下游分析用质谱仪用很快的切换方式对前体离子和反应产物离子的选择性m/z值进行处理,定量分析水蒸气和痕迹量目标化合物。这一模式可以更为精确地定量分析痕迹量目标化合物。  图 2是使用多离子检测模式,使用H3O+为前体离子的SIFT-MS进行测定,获得乙醇和甲醇浓度在三次呼出气体随时间变化的曲线。本研究是用这一模式测定肺泡空气中的乙醇和乙醛浓度,在测定呼吸气体的间隙同时测定周围空气中的乙醇和乙醛浓度,看它是否影响对呼吸气体中目标化合物的测定。[align=center][img=,1114,616]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/4c7af3d2-78e7-416e-b183-8b5cd24840b7.jpg[/img][/align][align=center]图 2 SIFT-MS 定量分析呼吸气中乙醇和甲醇的浓度随时间的变化图[/align]  SIFT-MS 定量分析呼吸气中乙醇,浓度随时间的变化是使用前体离子、前体离子水化物和乙醇特征产物离子及水化物(C2H5OH2+,m/z 47)信号比进行计算,还要知道反应时间和样品及载气的流速。  乙醇可以很快地与所有三种前体离子(H3O+,NO+, O2+)反应,与H3O+是直接进行反应,得到m/z 47的质子化乙醇,如下面的反应式:[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/c307f24e-b3b6-4c03-9cee-127e17345b4b.jpg[/img] (7)[/align]  此反应(7)是放热反应,决定于碰撞速率。  当含有水汽的呼吸气进入载气时,产物离子很快形成水合离子,含有一个水分子和两个水分子的质子化乙醇其m/z为65(C2H5OH2+?H2O)和83(C2H5OH2+?(H2O)2),他们必须要计算到乙醇的测定当中。乙醛的离子化也类似于乙醇,它们是CH3CHOH2+ m/z 45, CH3CHOH2+?H2O m/z 63,和CH3CHOH2+?(H2O)2 m/z 81,分析时要计算进去[b](2) 检测30个志愿者呼气结果[/b]  采用SIFT-MS对30位健康志愿者(19位男性,11位女性)进行为期六个月呼出气中乙醇和乙醛的监测,表2是在6个月期间测试30个志愿者呼气中乙醇含量的数据。对每一个志愿者每天测定他们的呼出气的乙醇浓度,是3次连续呼吸气的平均值,如图2中的数据,总数为478个平均值,测定了1434次呼气。每个志愿者呼气中的乙醇浓度平均值是为期半年积累的数据。连同测定的标准偏差(SD)数据见表2.按志愿者的年龄从上到下排列,也列出他(她)们的性别和身体质量指数(BMI)。个体之间乙醇浓度的散布很宽,所有志愿者的乙醇浓度在0 到 1663 ppb之间,平均值为196 ppb,SD 为 244 ppb,中间值为112 ppb。表 2 6个月期间测试30个志愿者呼气中乙醇含量的数据[align=center][img=,812,558]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/02ebfcd9-bf25-45f5-9469-7b0f89e5a611.jpg[/img][/align]  *BMI =身体质量指数(Body Mass Index)(体重除以身高的平方)表 3 6个月期间测试30个志愿者呼气中乙醛含量的数据[align=center][img=,668,421]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/43a33ac9-b4cf-4e19-97a9-2502239e716f.jpg[/img][/align]  30个志愿者呼气中乙醇浓度的散布见图3(a),是所有478次肺泡呼吸气中乙醇的浓度,这一分布接近于对数正态分布,符合预期的呼吸代谢的水平。[align=center][img=,790,561]http://img1.17img.cn/17img/images/201509/insimg/2effd15c-face-4776-9af4-8447e32abcbc.jpg[/img][/align][align=center]图 3 30个志愿者6个月内呼吸气中乙醇和乙醛浓度测定的分布图[/align]  棒图纵坐标为样品数,a和 d 是针对所有样品,b和 e是志愿者在测试前2 h没有食用含糖食品或饮料的数据,c 和f是志愿者在测试前2 h吃了含糖食品或饮料的数据  根据这一文章作者们的研究指出吃了含糖食品或饮料会增加呼吸气中乙醇的浓度,这是由于蔗糖通过口腔菌群或肠道菌群的作用产生乙醇。他们研究这一现象,是否会显著影响呼吸气中乙醇浓度的测定,所以分别研究了在测定前两小时吃和没吃甜品志愿者的呼吸气中的乙醇浓度。图 3 中的(b)是志愿者在测试2h 前没有吃甜品的292呼吸气样品得到的结果,图 3 中的(c)是志愿者在测试2h 前没有吃甜品的186呼吸气样品得到的结果,考察呼气中乙醇浓度的增加是否实施由于蔗糖通过口腔菌群或肠道菌群的作用所产生乙醇。  以前的研究已经阐述过,环境空气中乙醇背景浓度对呼吸气中乙醇浓度的测定的影响,本研究说明背景乙醇浓度很容易检测出来(环境中的乙醛背景浓度测不出来)。[b]小结[/b] 我这里引述的研究是2005年的工作,已经过去10年了,跟进的工作不多,可见还没有被人们认识,也涉及到仪器的昂贵,虽然已经有商品仪器,但是没有普及。看来进一步发展这一方法还需要医学和化学工作者结合,以及仪器的普及。

  • PLoS ONE:患疟疾可抑制肺癌生长转移

    疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应,并抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤生长和转移;疟疾能让荷瘤的机体长期保存肿瘤特异性免疫记忆。广州科学家在肺癌的治疗研究上跨出可喜一步。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712042663.jpg广州科学家的研究表明,疟原虫感染(即疟疾)可抑制小鼠肺癌生长和转移。记者日前从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员陈小平领衔的团队与广州医学院呼吸疾病研究所所长钟南山院士合作开展的肺癌免疫治疗实验研究取得了系列进展,研究团队正在利用疟原虫作为载体研制治疗性肺癌疫苗。相关论文已于近日在线发表在美国《公共科学图书馆-综合》(PLoS ONE)。该论文以上述两个合作单位共建的呼吸疾病国家重点实验室为作者单位发表。灵感来源:疟疾发生越严重地区,肺癌发病率和死亡率越低陈小平说,他和他的团队最早关注到的是疟疾发病率跟肺癌发病率和死亡率成反比的关系。他说,通过对世界卫生组织数据库20多年来的数据进行分析,他们发现,疟疾发生越严重的地区,肺癌发病率和死亡率越低,反之亦然。即使在同一国家,“这种消长趋势也很明显。”于是,他们决定在小鼠身上做实验,以证明疟疾发生对肺癌是否有抑制作用。他们将小鼠分成两组,一组小鼠只打入肺癌细胞,另外一组同时打入疟原虫和肺癌细胞,然后进行观察。可喜发现:疟疾感染明显抑制小鼠肺癌的生长和转移经过5年的反复多批实验和观察,研究人员发现:没有经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长迅速,很快发生转移和死亡;经过疟原虫感染的小鼠肿瘤生长缓慢,很少发生转移,寿命显著延长,其中约有10%的小鼠肿瘤全部消退。研究人员进一步发现,当小鼠肿瘤生长到一定程度时,用手术摘除肿瘤病灶,然后将手术后的小鼠分为两组,一组接种疟原虫,另一组不接种疟原虫,结果显示,接种疟原虫小鼠的寿命显著比没有接种疟原虫的小鼠的寿命长。这提示,已经发生转移的肿瘤细胞也受到疟原虫感染的抑制。显然,疟原虫感染(疟疾)能够显著抑制小鼠肺癌的生长和转移,显著延长荷瘤小鼠的生存时间;同时,研究人员还发现,疟原虫感染能明显抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤血管的生成。陈小平解释:“肿瘤血管的生成受到抑制,使肿瘤的供血不足,就可以抑制肿瘤的增大。”研究结果:疟疾可增强机体对肺癌免疫力陈小平介绍,研究人员进一步进行了免疫学机理研究。他们发现,疟原虫感染激活了小鼠机体的天然免疫系统,诱导产生了大量的IFN-γ和TNF-α等细胞因子,而IFN-γ和TNF-α对肿瘤就有很明显的抑制作用。同时,疟原虫感染还使小鼠机体内一种叫自然杀伤(NK)细胞的免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显增强。“机体内拥有的IFN-γ和TNF-α细胞因子和NK细胞属于一种天然免疫。”陈小平说,“感染疟疾会增强小鼠对肺癌的天然免疫力。”“疟疾还可以诱导产生一种针对肿瘤的获得性免疫反应。”陈小平解释,疟疾可以激活一种树突状细胞,增强其吞噬抗原的能力,并把抗原提交给一种可以抑制肿瘤细胞的T细胞。陈小平说,疟疾可诱导机体产生肿瘤局部及全身系统性的肿瘤特异性免疫反应,能使大约10%荷瘤小鼠的肿瘤完全消退,并能长期保存有效的肿瘤特异性免疫记忆。总之,疟疾可通过激活天然免疫和特异性免疫反应,并抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤生长和转移。前景:有望研发新型有效的治疗性肺癌疫苗“当然,我们现在的研究还只是在实验室阶段,还不能马上应用到临床肺癌病人的治疗。”陈小平说,不过,肿瘤的实验研究不像艾滋病研究那样需要猴模型等大动物模型,只要在小鼠模型实验成功,就可能申请临床试验。“也就是说,根据我们现有的研究结果,有可能考虑申请临床试验了。”陈小平说,这项研究有着积极的应用前景。“良性疟疾可能用于肺癌的免疫治疗,也可能作为携带肿瘤抗原的新载体用于开发新型有效的治疗性肺癌疫苗。”他说,研究还发现,疟原虫感染与肺癌DNA疫苗联合应用有明显的协同作用。“目前,我们已经在研发治疗性肺癌疫苗。”他说,“主要是把肿瘤抗原的基因克隆到疟原虫的基因组里,同时利用基因敲除法,敲除疟原虫的毒性基因,希望能够制成安全有效的治疗性肺癌疫苗。”关于疫苗制成的时间表,他说,尚不能确定。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092712033212.jpgdoi:10.1371/journal.pone.0024407PMC:PMID:Antitumor Effect of Malaria Parasite Infection in a Murine Lewis Lung Cancer Model through Induction of Innate and Adaptive ImmunityLili Chen, Zhengxiang He, Li Qin, Qinyan Li, Xibao Shi, Siting Zhao, Ling Chen, Nanshan Zhong, Xiaoping ChenBackground:Lung cancer is the most common malignancy in humans and its high fatality means that no effective treatment is available. Developing new therapeutic strategies for lung cancer is urgently needed. Malaria has been reported to stimulate host immune responses, which are believed to be efficacious for combating some clinical cancers. This study is aimed to provide evidence that malaria parasite infection is therapeutic for lung cancer.Methodology/Principal Findings:Antitumor effect of malaria infection was examined in both subcutaneously and intravenously implanted murine Lewis lung cancer (LLC) model. The results showed that malaria infection inhibited LLC growth and metastasis and prolonged the survival of tumor-bearing mice. Histological analysis of tumors from mice infected with malaria revealed that angiogenesis was inhibited, which correlated with increased terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (TUNEL) st

  • 傅若农:吹口气,知健康——GC-MS检测呼气疾病标记物

    [b][color=#00b0f0]编者注:[/color][/b]傅若农教授生于1930年,1953年毕业于北京大学化学系,而后一直在北京理工大学(原北京工业学院)从事教学与科研工作。1958年,傅若农教授开始带领学生初步进入吸附柱色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的探索 1966到1976年文化大革命的后期,傅若农教授在干校劳动的间隙,系统地阅读并翻译了两本[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]启蒙书,从此进入其后半生一直从事的事业——色谱研究。傅若农教授是我国老一辈色谱研究专家,见证了我国[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]研究的发展,为我国培养了众多色谱研究人才。[url=http://www.instrument.com.cn/news/20140623/134647.shtml][b][color=#0070c0]第一讲:傅若农讲述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术发展历史及趋势[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140714/136528.shtml][b][color=#0070c0]第二讲:傅若农:从三家公司GC产品更迭看[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]技术发展[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140811/138629.shtml][b][color=#0070c0]第三讲:傅若农:从国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]产品看国内[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]发展脉络及现状[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140902/140376.shtml][b][color=#0070c0]第四讲:傅若农:[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]固定液的前世今生[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141009/143041.shtml][b][color=#0070c0]第五讲:傅若农:气-固色谱的魅力[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141104/145381.shtml][b][color=#0070c0]第六讲:傅若农:PLOT[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱的诱惑力[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141205/147891.shtml][b][color=#0070c0]第七讲:傅若农:酒驾判官——顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的前世今生[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150106/150406.shtml][b][color=#0070c0]第八讲:傅若农:一扫而光——吹扫捕集-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的发展[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150211/153795.shtml][b][color=#0070c0]第九讲:傅若农:凌空一瞥洞察一切——神通广大的固相微萃取(SPME)[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150312/155171.shtml][b][color=#0070c0]第十讲:傅若农:悬“珠”济世——单液滴微萃取(SDME)的妙用[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150417/158106.shtml][b][color=#0070c0]第十一讲:傅若农:扭转乾坤——神奇的反应顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150519/160962.shtml][b][color=#0070c0]第十二讲:擒魔序曲——脂质组学研究中的样品处理[/color][color=#0070c0][/color][/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150617/164595.shtml][color=#00b0f0][b][color=#0070c0]第十三讲:离子液体柱——脂质组学中分离脂肪酸的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱[/color][color=#0070c0][/color][color=#0070c0][/color][/b][/color][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150716/167186.shtml][color=#00b0f0][b][color=#0070c0]第十四讲:脂肪酸[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的故事[/color][color=#0070c0][/color][color=#0070c0][/color][/b][/color][/url] 人体呼吸气体的测试是一种无损伤的检测方法,日益受到重视,它可以评估健康状态、检测疾病类型,呼吸气体的检测可以利用简单的分析仪器进行。古代希腊医生已经知道人类呼吸气体的气味可以用于疾病的诊断,糖尿病人的呼吸气味由于含有丙酮,具有恶臭,呼吸气具有尿骚味预示肾脏有毛病。肺脓肿病人的呼吸气具有下水道的气味,这是由于厌氧菌繁殖而形成的气味。而有肝病的病人呼出气体具有臭鱼烂虾气味。  当我们从口中呼出气体,有成千上万的分子排放到空气中,呼出气体样品常常是无机气体(如NO, CO2, 和 CO)、挥发性有机化合物(例如异戊二烯、乙烷、戊烷和丙酮)以及其他典型的非挥发性物质的混合物(例如:异前列素、过氧化亚硝酸盐、细胞激素等)。由于这些分子源于内源性和外源性物质,详细分析这些物质的组成,可以提供多种体内所发生的生理学过程的特征(即呼吸谱),以及摄取和吸收物质的途径。如果获取和分析得到的呼吸谱是正确的,那么他就可以为你提供一个当前的健康状态,以及可预示将来的可能的后果。  呼吸气检测相比其他通常医疗检测的最大优点是非侵害性和安全性,由于其在临床诊断和明确的评估方面具有巨大的优势,所以呼吸气检测今天受到极大的重视,这一方法成为一些病人每天控制重要指标的必要测试项目(就像测血糖和尿液一样)。  已经开发了多种方法可以检测呼出气体,可以把它们分为几大类:  1. 基于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]和质谱联用(GC-MS)(或其他类型的质谱方法)  2. 化学传感器  3. 激光-吸收光谱  在表 1 中列出这些分析方法以及相关信息。表 1 用于分析呼出气体的一些方法[align=center][img=,655,193]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/e4ae96e5-f897-456e-9062-19d09d296e08.jpg[/img][/align]文献:  1 Cao W,et al, Crit Rev Anal Chem,2007, 37:3.  1. Pleil J D, et al, Clin Chem, 1997, 43:723.  2. Smith D, et al, Int Review Phys Chem, 1996,15:231  3. McCurdy M R, et al,J Breath Res, 2007,1 : 1.  4. Pleil J D, et al, J Toxicol Environ Health, B, 2008,11: 613.  5. Schubert J K, et al, G.F.E. Expert Rev Mol Diag, 2004, 4 : 619.  6. Zayasu K, et al, Am J Respir Crit Care Med, 1997,156:1140.  7. Hansel A, et al, Int J Mass Spectrom Ion Processes, 1995, 150: 609.  8. Boschetti A, et al, Postharv Biol Technol,1999, 17:143.  10 Huang H H, et al, Sens Actuators, B, 2004,101: 316.[b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析呼吸气体[/b]  使用最多的是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url](GC)或者[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]与质谱、离子淌度谱(IMS)结合来分析人的呼出气体。用GC直接进行分析,把样品直接注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的进样口即可,样品混合物经色谱柱分离成单一化合物(或几个化合物),用各种检测器检测其含量,人呼出气多为极性化合物,要用极性色谱柱进行分析。GC-FID是使用最多的模式,因为FID灵敏度高,线性范围宽,噪声低。GC和MS结合是现代分析检测的极为普遍的方法。下面举一个例子说明用GC-MS来对肺癌和其他肺病病人呼吸气进行测定。  呼吸气体可以鉴定出由于细胞膜脂质中脂肪酸被过氧化而产生的饱和烃和含氧化合物,用以鉴别肺癌患者。意大利 Diana Poli等(J Chromatogr B,2010,878:2643-2651)研究发现通过呼吸气体中含有的VOCs(脂肪族和芳香族烃)的类别可以区分非小细胞肺癌患者(非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma )属于肺癌的一种,它包括鳞癌、腺癌、大细胞癌,与小细胞癌相比,其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚,非小细胞肺癌约占肺癌总敉的80-85% ,目前采用化疗的方式进行治疗 )、慢性阻塞性肺病(COPD)患者、非临床症状吸烟者和健康人,灵敏度达72.2%,特异性达93.6%。在此基础上研究者们进一步寻找呼出气体中的其他物质可以更灵敏地区分健康人和肺病患者,并早期检查出肺癌患者。  多种羰基化合物作为二级氧化产物,他们选择挥发性直链醛作为组织破坏的生物标记物,特别是饱和醛像己醛、庚醛和壬醛是n-3和n-6不饱和脂肪酸(PUFAs)的过氧化产物,它们是细胞膜磷脂的主要成分,同时因为挥发性醛不溶解在血液中,所以当它形成时就会进入到呼吸气体中。  在呼吸气体中这种物质的浓度在10?12M(pM)和10?9M(nM)之间,所以在测定时需要进行预浓缩。这一研究中使用固相微萃取(SPME)进行预浓缩,用纤维内衍生化方法可以很好地解决呼吸气体中挥发性化合物的浓缩,包括脂肪和芳香烃,以及羰基化合物。但是并非能把所有呼吸气中的各种化合物都直接萃取出来,这决定于吸附剂涂层和萃取化合物的物理化学性质。  这一研究的目的是使用SPME上进行衍生化方法结合[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱的方法检测人呼气的最后一部分气体(肺泡气),肺泡气参与肺中的气体交换。[b]1. 人体呼气取样[/b]  取样如图1 所示:[align=center][img=,352,366]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/73c261c9-6342-4ddb-8b29-305dd7d51e26.jpg[/img][/align][align=center][img=,284,425]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/307031d7-8bfe-4c5b-8ec7-b2c5624f1cf6.jpg[/img][/align]图1 人体用Bio-VOC管呼气取样 取样是让进行试验个体进行一次肺活量测试呼吸,以便得到最后150mL呼出气体。加入1μL 10[sup]?[/sup][sup]5[/sup]M内标物(IS)(丙醛, n-丁醛, n-戊醛, n-己醛, n-庚醛, n-辛醛,n-壬醛, 2-甲基戊醛),把Bio-VOC管在4℃下保存,在2 h内进行分析。Bio-VOC管在使用前要进行再生,即用氮气彻底吹拂干净。[b]2 SPME 进行样品衍生化[/b]  SPME萃取头保存在图 2 的装置里。  醛类用65μm PDMS/DVB萃取头进行萃取,新萃取头要先进行老和处理,在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]进样口中,在250℃下在氢气气流里加热30 min,每次使用前在气化室里于280℃下加热 1 min,目的是除去可能有的污染物,然后把萃取头插入4ml 带有聚四氟乙烯盖的茶色样品瓶中,瓶内装有浓度为17 mg/mL 的1mL PFBHA(五氟苄基羟胺盐酸盐)水溶液,在室温和电磁搅拌下萃取10 min,然后把此萃取头放入Bio-VOC呼吸气进样装置中于室温下处理45min(进行萃取头上的衍生化), 之后在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的进样口中于280℃下进行热脱附。PFBHA试剂与醛类进行衍生化反应得到两种PFBHA-肟异构体(顺,反异构体)。[align=center][img=,453,310]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/2be3e5b2-1340-448c-a51f-4586ba7b2969.jpg[/img][/align]图 2 SPME萃取头保存装置 保存管包括上管(A)和密封管(B),萃取头(C)必须旋紧在A管中 然后插入到下面的B管中,B管用带弹簧的聚四氟乙烯盖密封[b]3 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱分析(GC-MS)[/b] 使用HP 6890 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]和HP 5973质谱选择性检测器进行分析。色谱柱使用HP-5MS(30m×0.25mmID 0.50 μm膜厚),氢气作载气,载气流速为1ml/min。色谱条件:柱温:以8℃/min速度从100℃升温到150℃,然后再以30℃/min速度升温到250℃,然后保持1 min。整个分析时间为10.58 min。用选择离子检测(SIM) 进行定量分析。获取质谱碎片m/z181(间隔时间400ms),每个醛的鉴定离子为181,是五氟苄-肟的特征离子碎片。同时以纯化合物的保留时间进行确认。[b]4 测试对象[/b] 40个在接受肺切除治疗之前的非小细胞肺癌(NSCLC)I 或 II期患者,所有患者都进行了胸腹部CT扫描,做了脑CT,腹部超声检测或骨质的闪烁扫描,没有一个患者进行过抗癌治疗。 38个对照健康没有临床治疗的人员,他们没有肿瘤或临床肺病历史。研究对象的特点见表 2。 吸烟是根据受试者自己讲述目前的吸烟情况,他们报告了吸烟的数量和吸烟的年数,在一年前就停止吸烟者定义为前-吸烟者(ex-smokers)。NSCLC的确认是根据组织学检查确定的,有23个肺腺癌(ADCs)患者,13个鳞状细胞癌(SCCs) 患者,和一个大细胞癌患者,但是所有这些患者都是临床手术前I 或 II期,最后病理学显示I期有29人(18个IA期11个临床IB),6个IIB,5个IIIA。见表2.表2. 测试对象特点[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/09890691-2141-4f44-970b-bbd4bcbd33c3.jpg[/img][/align][b]5 测试结果探究[/b] 肺癌的早期诊断可以提高存活率,呼吸气的检测可以探测出呼吸道肿瘤形成的信息,而且呼吸气体的检测无伤害、安全,有利于在临床实践中的应用。由于肺比其他器官更直接暴露于较高氧气浓度的环境中,所以更容易诱发呼吸道疾病。研究数据显示肺癌是由于脂质被氧化而引起,很少人知道在呼出气体中含有直链醛类,知道在呼出气中含有直链醛类和肺癌有关的人更少。有研究结果显示,在肺癌患者的其他生物样品(如尿样、血液/血浆以及凝缩的呼吸气)中含有醛类。在健康人、哮喘患者和慢性阻塞性肺病(COPD)患者的液态呼吸气体(EBC)中也检测到醛类,特别是丙二酰二醛。 呼吸气体分析需要娴熟的技术和昂贵的仪器,因为这些目标化合物来自脂质过氧化过程,含量很低(10[sup]?[/sup][sup]12[/sup]M 到10[sup]?[/sup][sup]9 [/sup]M) ,所以需要严格的预浓缩步骤。使用SPME可以简化人呼出气体的分析,而且SPME已经在VOCs分析中有大量应用,而且SPME不会受到大量水分的影响,所以这一方法十分适合于人呼出气体的预浓缩。呼出气体中含有大量水汽,会影响预浓缩和某些化合物的GC-MS分析。不过SPME需要进行严格的操作参数的优化和认证,特别是对痕迹量化合物的情况。并非所有呼出气体的组分都可以轻易地被萃取,这就要选择SPME萃取头的选择性了,在许多情况下就需要进行事先的衍生化处理。 SPME萃取头上用PFHBA进行衍生化从生物样品中萃取醛类乙腈有所使用,本研究作者改进了这一方法,使用Bio-VOC 能够检测到呼出气体中的痕迹量的醛类,可以无害地从呼吸道中抽取小气泡,除去己醛、庚醛和壬醛(它们是3n和16n不饱和脂肪酸被过氧化产生)外,本研究作者还研究了其他直链醛类,覆盖了整个丙醛(C3)到壬醛(C9),甲醛和乙醛没有包括,因为它们他们存在于户内和户外环境中,是烟草燃烧的产物,而且许多肺癌患者过去吸烟,或者现在还在吸烟。而且呼出气体中乙醛的含量还取决于乙醇的代谢。检测对象的呼出气中的醛含量见表3表3 不同人群呼出气体检测结果[align=center][img=,659,263]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/8c5c169b-7177-4a9f-bd98-26787c3fb459.jpg[/img][/align][b]6 测试中的问题[/b] 呼出气体醛类的稳定性,醛是不稳定化合物,在呼出气体中的醛会随时间而降解,但是在SPME上吸附并衍生化的醛要稳定的多,见图3所示[align=center][img=,567,492]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/6017e878-1352-44c4-8312-a7e6f23af89e.jpg[/img][/align][align=center][img=,515,484]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/f8ad4a39-89b4-4347-9971-c2fed8a0e18d.jpg[/img][/align] 图 3 呼出气体中醛类随时间降解图(propanal 丙醛,butanal 丁醛,pentanal 戊醛,hexanal己醛,Heptanal庚醛, octanal辛醛)为了对比外源和内源醛含量,如图 4所示[align=center][img=,687,488]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/ea38f46b-53ef-4901-b398-c6d336e70de4.jpg[/img][/align][align=center][img=,590,470]http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/cddaa414-9479-4894-a2f0-569187d430e8.jpg[/img][/align]图 4 内源和环境中醛类含量测定的对比(Exhaled Air 呼气,Environmant 环境)[b]小结[/b] 把这一方法用于NSCLC早期患者和一组无临床症状人群,结果证明所择的醛类谱对区分无临床症状不吸烟人群和NSCLC早期患者有效,鉴别NSCLC早期患者成功率为90%。鉴别对照健康人群成功率为92.1%。吸烟或年龄影响不大。

  • IJBRA:生物标志物测试或能早期诊断肺癌

    http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201112/2011121209251602.jpg肺腺癌是常见于非吸烟者的一种非小细胞肺癌形式,间皮瘤是能被石棉触发的一种罕见癌症。纽约大学癌症研究所研究人员正在从事于一种血液测试,这种血液测试的目的是测定与这些癌症形式相关的抗体,早期诊断疾病,甚至点出高风险的人。肺腺癌和间皮瘤癌细胞在它们的表面有聚糖生物标志物,病人甚至是早期的也有这些聚糖的抗体,研究人员已创造了用286个不同聚糖点提前制备的印刷聚糖芯片。作为高能量平台的一部分,这能被用于筛查血清样本来鉴定生物标志物。课题组正在比较来自患恶性间皮瘤病人的与接触石棉但无疾病症状的高疾病风险人的血清。虽然这个测试是在非常早的阶段,但它能帮助医生提醒有发生这些癌症风险的人。这可能尤其对可能没有被正式地筛查的非吸烟者有用,对那些可能对治疗反应不好需要更侵略性治疗方法牟疾病晚期病人也一样有用。这将允许为病人特定治疗和更好结果的治疗(与在医疗系统上更低负担一样),也能帮助鉴定药物发展的新路线。

  • 【分享】首个治疗肺癌新药益肺清化颗粒出口马来西亚

    首个治疗肺癌新药益肺清化颗粒出口马来西亚 在日前于北京召开召开的世界卫生组织传统医药大会上近上,马来西亚有关人员表示,该国卫生部已正式批准批量进口由中国中医科学院研制的肺癌治疗新药——益肺清化颗粒。 益肺清化颗粒是中国中医科学院首席研究员、全国中医肿瘤医疗中心主任朴炳奎教授在主持国家“七五”、“八五”攻关课题“益气养阴清热解毒制剂治疗中晚期原发性肺癌的临床与实验研究”基础之上,研制出的治疗肺癌的新成果,该成果曾获中国中医科学院及国家中医药管理局科技进步奖,并受到美国国立卫生研究院癌症中心的高度关注并开展了相关研究合作。经由中国中医科学院广安门医院为临床负责单位,联合12家省级肿瘤医院协作验证,通过对几百例肺癌患者临床观察验证,新药“益肺清化”在临床患者有效率、肿瘤病灶稳定率,生存质量提高率及提高免疫功能、一二三年生存率及生存时间方面均明显高于对照组。 信息来源:经济参考报

  • 【转帖】研究表明吸烟者肺癌有别于非吸烟者肺癌

    加拿大研究人员11月9日报告说,吸烟者罹患的肺癌与非吸烟者罹患的肺癌有着不同的基因突变,看起来不是同一种癌症。研究人员指出,这一发现有着重要意义,因为这意味着应该针对不同肺癌的不同基因变异进行相应的研究、治疗和诊断,而不是对所有患者采用同一套方法。据《温哥华太阳报》报道,加拿大不列颠哥伦比亚省癌症中心的研究人员利用基因分析技术,比较了两组肺癌患者的组织样本,一组是30名从未吸烟的患者,另一组是53名当时吸烟或曾经吸烟的患者。分析发现,从未吸烟者肺部肿瘤里的DNA突变数量是吸烟者或曾经吸烟者的近两倍,两类患者的肺癌可能有着不同的分子机制。研究人员8日在美国费城举行的美国癌症研究协会的一个会议上提交了相关报告。研究人员说,香烟中的致癌物引发基因突变,导致癌细胞生长,而新研究显示,导致非吸烟者罹患肺癌的可能是其他致癌物,并非来自香烟。由于人们常常以为从未吸烟者不会得肺癌,因此非吸烟的肺癌患者被确诊时通常已经到了无法治愈的晚期,如何早期发现非吸烟者的肺癌是一个重要课题。据报道,加拿大正在开展如何有效进行肺癌早期诊断的研究。过去30年里,加拿大采用现行的管理方法,仅使肺癌死亡率下降了3%。研究人员希望找到一套有效的肺癌筛查方法,能让肺癌死亡率下降20%。

  • 我国肺癌检测技术获突破性进展 新技术使部分肺癌检测提速减价

    最新发现与创新 中国科技网讯 经3年多临床攻关,复旦大学附属肿瘤医院陈海泉教授领衔的课题组,发明了一种能快速准确检测携带“ALK融合基因”的肺癌分子诊断技术,可为患者节省巨额检测费用,并为晚期肺癌患者选择“有特效的”分子靶向药物进行个性化治疗赢得宝贵时间。相关论文已发表在最近出版的国际著名肿瘤学期刊《临床癌症研究》上。 “ALK融合基因”是癌基因,存在于3%—7%的非小细胞肺癌中,以该癌基因为靶点的分子靶向药物Crizotinib可显著提高肺癌患者的生存率。但如何快速而准确地诊断出携带“ALK融合基因”的肺癌,一直是世界性难题。目前,国际上“ALK融合基因”检测技术复杂,至少需2天时间完成,每例价格高达1500美元。 陈海泉在一次研究中意外发现,当“ALK融合基因”发生断裂后,人体内的“激酶域”表达会显著增高,而“非激酶域”则不表达或低表达。根据这一特点,陈海泉课题组创造性地发明了一种“实时定量的ALK融合基因检测”新技术,通过检测“ALK融合基因”断裂点前后ALK基因的表达水平差异,快速而准确地诊断出ALK融合基因。经验证,应用该新技术对950例非小细胞肺癌标本的检测结果发现了40例携带“ALK融合基因”的阳性标本,敏感性、特异性均达100%。此外,该技术还具有高通量、低成本等优势,可在90分钟内完成48例样本的检测,每例检测成本不超过30元。 据悉,为表彰陈海泉的杰出贡献,美国胸科医师学院已决定,在即将举行的2012年年会上授予其“阿尔弗雷德·索弗研究奖”。(通讯员 孙国根 记者 王春) 《科技日报》(2012-09-24 一版)

  • 肺癌概述及早期诊断

    [align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌[/size][/font][font='黑体'][size=18px]概述及早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]由国际癌症研究机构发布的全球癌症统计数据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GLOBO-CAN2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]说明,我国肺癌发病率和死亡率分别占全球的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]40%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],肺癌防治已成为癌症防控的一大挑战。依据病理学类型不同,肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。提升小细胞肺癌与非小细胞肺癌早期诊断的准确性有利于提高肺癌患者的预后生存率。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]肺癌是一种肺组织内细胞发生癌变的疾病。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌的病因比较复杂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],如长期吸烟、大气污染等。肺癌的临床表现有咳嗽、胸痛、咳血、发热和气急等。咳嗽常表现为阵发性刺激咳嗽,咳血则是持续性或反复性产生少量血痰。肿块会阻塞、压迫大支气管,造成患者胸闷气急。对于晚期肺癌患者,容易发生脑转移或肝转移和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]骨转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2020[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年美国最新统计数据显示,早期肺癌的总生存率不超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]31%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],肺癌转移后的生存率更是不到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3%[/size][/font][font='宋体'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]非小细胞肺癌和小细胞肺癌[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]非小细胞肺癌,又称“非小细胞癌”,是肺癌的一种。非小细胞肺癌包括鳞状细胞癌、大细胞癌和腺癌。吸烟者或有吸烟史人群易患肺癌。非小细胞肺癌约占所有肺癌的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]80-85%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。非小细胞肺癌细胞的生长分裂速度比小细胞肺癌细胞慢,在患者体内扩散和转移较晚。非小细胞肺癌的生存率取决于分期和类型,早期肺癌的五年生存率超过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。目前临床主要采用化疗手段治疗。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]小细胞肺癌是一种侵袭性很强的神经内分泌瘤,进展迅速,吸烟者或有吸烟史人群易患癌。小细胞肺癌约占肺癌病例的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]15-20%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。大多数小细胞肺癌在发现时已发生局部转移。小细胞肺癌的生存率相对较低,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年生存率约为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font] [font='黑体'][size=17px]肺癌的诊断方法[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]目前,小细胞肺癌与非小细胞肺癌的诊断主要依赖于影像及病理切片结果。高危人群如肺部结节患者可以通过低剂量螺旋[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]筛查发现早期肺癌患者,结合穿刺或手术局部切除进行冰冻切片确诊。病理诊断还包括对免疫组化的评估,有助于确定肺癌的类型、分期和治疗方案。以非小细胞肺癌为例,病理组织大切片技术能够分析组织异质性,以确定癌症的组织类型和分化程度。除影像学与病理组织切片方法以外,诊断时还可以检查血液中的癌症标志物,如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CEA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CA125[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CYFRA21-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等。另外,诊断有时使用基因检测来检测肺癌相关基因突变,以辅助诊断和指导治疗。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]肺癌早期诊断[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]已知小细胞肺癌与非小细胞肺癌患者的临床治疗手段大有不同,因此开发出用于小细胞肺癌与非小细胞肺癌的准确的早期诊断方法迫在眉睫。目前,常用的方法一是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]检查,但[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]准确率高,且有辐射暴露风险;二是常规血液癌症标志物筛查,如癌胚抗原、细胞角蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]19[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]片段等,但假阳性率高、特异性有限;三是组织活检,组织活检的准确度较前两种方法高,但取材困难、患者依从性差[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][13][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可作为无创检测手段,与上述方法相比具有突出优势。研究证明,肺癌患者的某些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]浓度高于健康人组[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px],这说明外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可应用于肺癌的诊断。另外,外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可用于肺癌的分型诊断,如肺腺癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-30e-3p, mir-30a-3p, mir-181-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-361-5p[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][15][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px],而肺鳞癌的特异性诊断标志物是[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir-15b-5p, mir-10b-5p[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mir320b[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][16][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。然而,外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断方法真正实现大规模临床使用前还需要克服提取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mi RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]难度较大、没有统一的标准等困难。[/size][/font] [align=left][font='黑体'][size=18px]外[/size][/font][font='黑体'][size=18px]泌体用于[/size][/font][font='黑体'][size=18px]癌症治疗[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]除用于分型诊断外,由于外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体对癌症细胞的增殖、转移等也有影响,外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可开发[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]药,用于癌症的治疗。有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究称外泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导肺癌细胞上皮间充质转化,实验人员发现来自[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]A549[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H460[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体显著[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]促进了肺癌症细胞上皮间充质转化,并促进皮下异种移植瘤的生长[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][17][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px];另有研究报道,癌症相关成纤维细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以将外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]到肺癌细胞中,通过上调[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]抑制外周血单核细胞的杀伤作用,并通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]OIP5-AS1/miR-142-5p/PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]轴促进[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肺癌进展[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。不仅如此,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CAFs[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体也会被肺癌细胞内化、吸收,其外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体携带的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MiR-210[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通过靶向[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UPF1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]激活[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PTEN/PI3K/AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通路诱导癌症细胞上皮间充质转化,进而促进肺癌的迁移和侵袭[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][19][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font]

  • 北京肺癌暴增43%,雾霾害人不浅!

    北京肺癌暴增43%,雾霾害人不浅!

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262201_579607_3004888_3.png 自2000年开始,肿瘤就已经超过了心脑血管疾病,成为世界头号“死神”——每年有超过500万人死于肿瘤。为了激发全球共同攻克癌症的决心与期盼,UICC于2000年发起了“世界癌症日”活动,就在今年,又发布了两个惊人的统计数据,又一次给我们敲响了防癌控癌的警钟。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262202_579608_3004888_3.png 消息一:据北京市肿瘤防治办公室专家透露,10年间,北京市肺癌的发病率约增长了43%,肺癌的发病年龄趋于年轻化;  消息二:中国首个评估PM2.5长期暴露对公众健康所产生影响的研究报告出炉,报告指出,大气PM2.5污染导致全国31座省会城市或直辖市中25.7万人超额死亡,超额死亡率平均接近1‰。而在超额死亡的病例中,有相当一部分是肺癌。  肺癌,我国发病率、死亡率均位于第一的癌症,现在死亡率还在以每年4.45%的速度在上升。2006年我国第三次居民死亡原因抽样调查结果显示,肺癌占全部癌症死亡的22.7%。中国抗癌协会科普宣传部部长、北京宣武医院胸外科主任支修益形象地比喻肺癌为被烟气、大气、油气、生气等“气”出来的病。  吸烟、环境污染、职业接触、肺部慢性病以及遗传基因易感性等是导致肺癌的主要原因。虽然吸烟一直被认为是导致肺癌的第一诱因,可近年来的多项研究表明,伴随着控烟措施的推行,吸烟导致的肺癌发病率上升势头得到明显控制,但与环境影响呈正向相关的肺癌发病率却出现飞速上涨势头。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262202_579609_3004888_3.png 在北京、天津等雾霾高发地区,肺癌的发生率明显高于全国平均水平。北京市肿瘤防治办公室副主任王宁说,北京市肺癌发病率由2002年的39.56/10万上升至2011年的63.09/10万,已远远高出全国平均水平。天津市的肺癌发病率约为60/10万,新发癌症患者中有1/5为肺癌患者,且呈现明显年轻化趋势。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512262203_579610_3004888_3.png 去年国际癌症研究机构(IARC)已把大气污染认定为致癌物,严格地讲,大气颗粒物,也就是所谓的PM2.5,是一种确认的人类致癌物。北京的生活节奏、工作强度之大,估计也只有身在北京的人才能深刻体会到!生活在北京真的太不容易了,关注健康已经刻不容缓!

  • 傅若农:各个医院用呼出气检测幽门螺旋杆菌的方法“火”了

    [b][color=#0070c0]编者注:[/color][/b]傅若农教授生于1930年,1953年毕业于北京大学化学系,而后一直在北京理工大学(原北京工业学院)从事教学与科研工作。1958年,傅若农教授开始带领学生初步进入吸附柱色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的探索 1966到1976年文化大革命的后期,傅若农教授在干校劳动的间隙,系统地阅读并翻译了两本[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]启蒙书,从此进入其后半生一直从事的事业——色谱研究。傅若农教授是我国老一辈色谱研究专家,见证了我国[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]研究的发展,为我国培养了众多色谱研究人才。[url=http://www.instrument.com.cn/news/20140623/134647.shtml][b]第一讲:傅若农讲述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术发展历史及趋势[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140714/136528.shtml][b]第二讲:傅若农:从三家公司[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]产品更迭看[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]技术发展[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140811/138629.shtml][b]第三讲:傅若农:从国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]产品看国内[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]发展脉络及现状[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140902/140376.shtml][b]第四讲:傅若农:[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]固定液的前世今生[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141009/143041.shtml][b]第五讲:傅若农:气-固色谱的魅力[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141104/145381.shtml][b]第六讲:傅若农:PLOT[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱的诱惑力[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20141205/147891.shtml][b]第七讲:傅若农:酒驾判官——顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的前世今生[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150106/150406.shtml][b]第八讲:傅若农:一扫而光——吹扫捕集-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的发展[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150211/153795.shtml][b]第九讲:傅若农:凌空一瞥洞察一切——神通广大的固相微萃取(SPME)[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150312/155171.shtml][b]第十讲:傅若农:悬“珠”济世——单液滴微萃取(SDME)的妙用[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150417/158106.shtml][b]第十一讲:傅若农:扭转乾坤——神奇的反应顶空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20140714/136528.shtml][b]第十二讲:擒魔序曲——脂质组学研究中的样品处理[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150617/164595.shtml][b]第十三讲:离子液体柱——脂质组学中分离脂肪酸的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150716/167186.shtml][b]第十四讲:脂肪酸[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的故事[/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150820/170240.shtml][b]第十五讲:吹口气,知健康——[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]-MS检测呼气疾病标记物  [/b][/url][url=http://www.instrument.com.cn/news/20150929/173804.shtml][b]第十六讲:重症早期预警——呼出气用SIFT-MS 实时快速检测[/b][/url][b] 前言 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS或SIFT-MS检测呼出气体的方法有推广的可能 [/b]  前面我们讲述了用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS或SIFT-MS检测呼出气体的方法,当然这两种方法使用起来比较麻烦,专业性强了一些,但是像现在医院使用的一些检测仪器,如核磁共振不也是非常广泛吗?而且像[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS或SIFT-MS都可以设计为专用设备,使用简化操作模式。比如现在十分流行的14C尿素呼气试验检测幽门螺旋杆菌(HP)的方法。 幽门螺旋杆菌(HP)的感染与多种上消化道疾病相关,因此临床检查HP的感染对多种上消化道疾病的治疗起着十分积极的指导作用。目前大多数医院检测HP感染的主要方法为快速尿素酶实验及胃粘膜Giemsa染色,但该两种方法为侵入性有创检测手段,对患者有一定的损伤 而14C尿素呼气实验(14C-UBT)为非侵人性无创检测手段,具有简便、快速、可靠等特点,正逐渐被临床应用(四川医学,2006,27 (8):798))。14C-UBT的原理: HP能生产大量的尿素酶,尿素酶可分解尿素生成氨和二氧化碳,人服用含14C标记的尿素后,可被HP生产的尿素酶分解为14C标记的CO2,并从肺呼出。收集呼气样本,用气体同位素质谱仪检测同位素标记14C的量即可判断是否感染HP。SIFT-MS 更简单,更快速,更实时,更普适。经过临床医生、色谱学者和仪器制造厂家的共同努力是可以把[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS或SIFT-MS用于临床检测的。  [b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS或SIFT-MS检测呼出气体的方法的比较[/b]  我在第15和16篇文章介绍了使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS和选择性离子流动管质谱(SIFT-MS)分析呼吸气体中疾病标记物的方法。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS是十分成熟可靠的方法,应用极为广泛,为了比较这两种方法,这里介绍新西兰M. J. McEwan等人的研究工作,他们比较了这两种方法分析各种挥发性气体的效果(Rapid Commun Mass Spectrom, 2014, 28: 10-18)。  [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS是十分成熟的方法,积累了大量成熟技术和色谱及质谱数据,有7万个化合物在极性和非极性色谱柱上保留指数的数据库,以及有21万个化合物的电子轰击源质谱数据库,可以用于化合物的鉴定(NIST/EPA/NIH Mass Spectral Database (NIST11) and NIST Mass Spectral Search Program (version 2.0g). U.S. Dept. of Commerce, Standard Reference Data Program, Gaithersburg, MD, 2011)。 当然[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS也有一些必备的条件,直接气态进样或液态顶空进样挥发性有机物去掉还是有些困难,很多情况下需要进行预浓缩,顶空进样挥发性有机物主要使用吹扫捕集技术,用惰性气体把有机挥发性物质从水溶液中吹扫出来,再吸附在吸着剂上,经过浓缩,再经过热解析进样分析(就像我们在第15篇文章已经介绍了使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 分析人体呼出气体的方法)。SIFT-MS方法实时、直接、快速,不像[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS那样成熟,不过比14C-UBT方法更简单一些,无需事前服用含14C标记的尿素。  SIFT-MS方法有过一些研究,证明这一方法可以准确、实时、快速地分析挥发性有机化合物(VOCs ),但是没有直接和其他方法进行过比较。McEwan等人详细地比较了SIFT-MS和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS两个方法的检测数据。[b]1 分析用标样[/b]  为了有效性使用常规法测定所要分析的25个VOC标样(最通用的方法是US EPA的TO-14A 和 TO-15),此标样是稀释在氮气中,每个化合物浓度为1ppm,见表1[align=center]表1 比较所用标样中的化合物[/align][align=center] [img]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/c14b7004-319d-47e8-abb0-55503d58e360.jpg[/img][/align]  [b]第1组实验[/b]  利用已经有的SIFT-MS数据库,只要知道相关的离子-分子动力学数据,不用任何校准就可以测定Tedlar样品袋中样品的浓度。为了测定SIFT-MS的响应值,把样品稀释:在样品袋中用1-L气密注射器注入1 L 零空气,用气密注射器把校准用标准气注入到零空气中,稀释气的浓度范围为1ppm(v) 到5ppb(v)。  使用表1中的25个标准化合物对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS进行的校准,用气密注射器从标准气钢瓶中吸取一定容积的标样,与含水分的空气一起注入15-L的样品罐,形成一个10ppb浓度的测试样品。从一个含有1ppm浓度的一溴一氯甲烷、4-溴氟苯、氯苯-d5 和1,4-二氟苯的标样中吸取一定量的标样,以相同方式制备一个浓度为50ppb 的内标物,标定[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS系统使用US EPA TO-15的方法。吸取0.5 到50 ppb浓度的6个标样进行标定。用质谱评估日间重复性。  [b]第2组实验[/b]  使用表1 中的另外一组17个VOCs,对SIFT-MS 和 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS进行直接比较,这17个化合物见表 2.[align=center]表 2 直接比较用的17个化合物[/align][align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/b07a077e-f5dc-4293-895b-f5ead5cdc664.jpg[/img][/align]  从这17个化合物中选择挥发性相近的几个物质,制备3组液体混合物。  使用10-μL气密注射器往4个样品罐中液体上面加入不同量的顶空样品。用含湿零空气让样品罐造成 5 psig的正压。然后用SIFT-MS方法进行快速定量测定,确定其符合[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS系统所需的线性范围,在0.5 到 50 ppb之间。对SIFT-MS从动力学数据库导出的浓度还要做一些小的修正,使其分析物的浓度在校正混合物标样浓度的10%之内。还要对样品罐内正压力为 5 psig进行修正,因为分析物的压力为大气压力。另外7个化合物不在混合物里面,也用来检测两种仪器的背景信号水平。  [b]第3组实验[/b]  第3组实验是用两组实际样品来比较[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 和 SIFT-MS方法测定的结果,所选两组实际样品,一组是从被染料油污染土壤排出的气体,另一组是来自一个冰毒(甲基苯丙胺)实验室,经过净化的气体。在分析时环境样品或土壤中的蒸汽使用限流孔采样器,以180mL/min,在样品罐剩余压力为127 Torr时完成,充以零空气稀释使之成为正压,稀释因子约为2。[b]2 SIFT-MS方法和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS测定[/b]  在此研究中作者们使用便携式Voice200 SIFT-MS 仪器 (Syft Technologies Ltd, Christchurch, New Zealand)([url=http://www.syft.com]www.syft.com[/url] ),在此仪器上可以用湿空气在0.35 Torr下微波放电产生三种反应离子(H3O+, NO+ 和 O2+), 形成的反应离子在流动管前经四极杆质谱过滤,并和氦载气(0.6 Torr)一起进入流动管,这些离子沿着曲线管流动,通过一个锐孔进入流动管末端,这里正好是针孔透镜后面,然后用一个分流涡轮泵把离子泵入下游四极杆质谱,进行质谱选择并计量。为了无遗漏地分析所有的被分析物,每相隔10 ms进行三种反应离子的切换。为了避免样品由于吸附而损失,仪器的进样口进行了钝化处理,进样口与样品罐通过一个经Silonite钝化的Micro-QT?微型阀(Entech Instruments Inc.)连接,Tedlar样品袋用一段短的聚四氟乙烯管连接。反应离子与样品的反应时间为3.7 s。  [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 分析是由R.J. Hill Laboratories Limited.完成的,这一实验室经ISO 17025标准认证,可以进行 US EPA TO-15方法的分析。使用 7890A [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]和 5975C MSD进行分析,色谱柱为. HP-1 固定相的 60 m×0.32 mm i.d. 毛细管柱,载气为氦气,流速 36 cm/ s,色谱柱箱起始温度35°,保持4 min,以4°C/min升温到110℃,保持0.1 min,之后以15°C/min升温到220℃保持5 min,总分析时间为36.2 min,4 min后进行质谱数据收集,从m/z 29到160,持续到10 min,另外的分析把质谱范围改变为m/z 34 到270。[b]3 结果  实验 1[/b]  使用Voice200分析表 1 所列出的 25个化合物的结果见表3,所测定的结果是利用文献报道的速率系数和相关反应离子反应的转移比例而得到的。对于每个被分析物,可能研究三种不同试剂的离子反应,不过在25个或多个分析物基体中,一些产物离子可能具有相同的质量(异构体),因此异构体和试剂离子的离子产物不包括在分析结果中。  表3的结果表明,用试剂离子测定得到分析物浓度是基于现有数据库的动力学数据,86%结果是在35%的误差之内。一些异常值可能只是由于取样袋被污染造成的。其中一个例子是萘的结果,可能又由于从Tedlar袋吸附造成的损失,导致所有三种试剂离子结果都偏低。另外,丙酮和丁酮的结果偏低,如果用一个渗透管取样,丙酮在校正后的结果,误差在10%的范围内。  表3的右边的两列显示检测限(LOD)和定量限(LOQ)。  SIFT-MS仪器响应值浓度与标准值的对应关系如图1所示。用零空气稀释产生一系列的不同浓度样品进行测量,浓度在1 ppmv到5 ppbv之间,得到校准曲线,其相关系数≥0.997。典型的关系如图1所示。图1(a)为烃化合物,(b)为的氯化烃。[align=center][img=,824,594]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/1692112e-4c17-47fa-92d4-0a6263d53955.jpg[/img][/align][align=center][img=,914,595]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/b462a608-d60c-49ef-b52e-c5652521763f.jpg[/img][/align][align=center][img=,1000,322]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/b1109f97-4ff6-4907-ab67-b8722e3aae64.jpg[/img][/align][align=center][img=,579,447]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/94185f28-745a-4ff4-ad79-cfd1107519b8.jpg[/img][img=,542,421]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/e8971913-f28f-4753-8921-2f58075112d6.jpg[/img][/align]  [b]实验 2 SIFT-MS 和 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 方法测试挥发性混合物的比较[/b]  样品罐中目标挥发物(从低浓度到中等浓度ppb/v)用SIFT-MS和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS进行测试,列于表4。斜体的VOCs代表背景含量浓度,测试每个仪器和方法,但不在混合物中。总之,对17个VOCs两种方法是相符合的。偏差大于30%的只有高苯乙烯(SIFT-MS比[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS的结果高),丙酮和二硫化物在所有混合物样品中SIFT-MS的结果低于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS。这些问题有待进一步研究。[align=center]表 4 SIFT-MS和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 测试结果[/align][align=center][img=,759,437]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/7c0249cc-ac7d-4926-aa16-ca2b440b3d40.jpg[/img][/align]  a 这些化合物不包括在混合物中,用于仪器背景信号的检测。  b C2-烷基苯包括乙苯和三个二甲苯位置异构体用于SIFT-MS的研究,这一实验只把乙苯加到混合物中。  c C3-烷基苯包括所有异构体用于SIFT-MS的研究,这一实验只把1,3,5-三甲苯加到混合物中。  d [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS没有测定乙腈  [b]实验3:对4个实际样品的测定[/b]  4个实际样品测试结果的比较列于表5。第一个样品来自一个被燃油罐污染的土壤,样品取自油罐周围燃料流过和渗漏的地方。其中的挥发性有机化合物的比较结果在第1栏中,第2栏表示来自油流过污染土壤上方空气中的分析物浓度样,第3栏是来自土壤样品的分析结果。第二个样品是来自一个冰毒实验室中空气样品的分析结果。  结果说明对非污染样品如空气样品,所测定结果两种方法是很一致的,被污染的样品(土壤气体)中小分子的芳烃(苯,甲苯,C2-烷基苯)的结果很一致。但是在土壤样品中的另外一些化合物结果一致性差,结果不一致是因为土壤饱和吸收烃类化合物所致,这些烃类化合物造成SIFT-MS产物离子重叠,在这种情况下,SIFT-MS在样品化合物组分多时会受到干扰。而在冰毒实验室中空气样品的分析结果却很一致。  表 5 实际样品测试结果的比较[align=center][img=,915,648]http://img1.17img.cn/17img/images/201511/insimg/4008f0f4-1301-498c-ae3e-5e7c270023b2.jpg[/img][/align]  a C2-烷基苯包括乙苯和三个二甲苯位置异构体用于SIFT-MS的研究, [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 可测定这些异构体  b C3-烷基苯包括所有异构体用于SIFT-MS的研究,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 可测定这些异构体  c 没有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS的数据,因为2-甲基丁烷有干扰。  d [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS没有数据[b]结论[/b]  在一个符合USA EPA TO15要求的实验室进行SIFT-MS 和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS方法的比较, SIFT-MS方法进行标准气体样品的测定,尽管没用这些样品实现对仪器进行校准,使用了文献中的动力学数据,对大多数化合物还是符合要求的。比较了17个化合物的测定,说明SIFT-MS方法可以取代[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS方法。对四个实际样品的比较,说明 SIFT-MS可用于实际样品的分析。  SIFT-MS方法是一个实时、快速分析痕迹量(ppt/v)的方法,无需事先进行样品吸附-解析,分离步骤。[b]后记[/b]  既然各个医院都用呼出气快速检测幽门螺旋杆菌的方法来诊断胃病(胃癌),说明用呼出气快速筛查疾病是一种很好的方法,而且使用了同位素质谱技术。那么SIFT-MS检验疾病的方法也是可行的,SIFT-MS无需使用同位素检测试剂。如果医学、化学、仪器专家共同努力进一步发展这一方法还是有希望用于医疗检测的。

  • 小细胞肺癌简介

    [align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌简介[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]癌症是目前全世界的社会公共卫生问题,是美国第二大死因。其中肺癌的发生率和死亡率均居第一位,并呈逐年上升的趋势[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][1][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。肺癌包括小细胞肺癌与非小细胞肺癌,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌是一种[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]高度恶性的神经内分泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤,约占肺癌的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][2][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在病理、分子生物学和临床[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]治疗等方面[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]与其他[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]类型[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肺癌有很大的不同[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的发生与烟草暴露密切相关,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]几乎所有的小细胞肺癌患者都是目前或以前的重度吸烟者[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][3][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小细胞肺癌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的特点是肿瘤生长迅速,早期扩散转移,血管丰富,基因组高度不稳定性,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TP53[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RB1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的普遍失活,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]确诊后存活两年以上的患者患第二原发肿瘤的风险明显增加[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][4][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。小细胞肺癌被诊断时常常就已经发生广泛转移,最初对细胞毒性治疗敏感,但总是随着对进一步治疗的耐药性而迅速复发,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]年生存率[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]7%[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][5][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],每年大约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]万人因此丧命。在过去三十年间,小细胞肺癌治疗没有明显进展,迫切需要新的治疗方法及药物。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]肿瘤的发生是一个多因素、多步骤、环境与基因共同作用的结果,是多细胞机体内基因突变或基因表达异常导致大量蛋白和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RNA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达失调所引起的。小细胞肺癌因为生长速度快,易发生转移、复发及耐药,并且近三十年间没有明显的治疗进展,被称为“顽固性癌症”。小细胞肺癌的诊断缺乏特异性的指标,被发现时往往已发生广泛转移;目前,针对小细胞肺癌的主要治疗手段仍是以铂类为主的化疗;小细胞肺癌早期对化疗敏感,随后很快发生复发及耐药;且手术患者数量较少,病理标本收集困难,这些均使小细胞肺癌治疗进展缓慢。随着近些年靶向药物及免疫治疗的发展,联合用药及寻找新的靶点成为治疗小细胞肺癌的新的方向。有研究显示,相对于非小细胞肺癌,小细胞肺癌中肿瘤干细胞的数量较多,肿瘤干细胞标志物表达量明显较高,针对于肿瘤干细胞标志物的研究对小细胞肺癌的诊断及治疗具有重要意义。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在非小细胞肺癌中,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]促进细胞增殖及糖代谢,并调节肿瘤耐药[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000][18][/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。为了研究[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验及软琼脂克隆形成实验验证[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对于人小细胞肺癌细胞生长增殖的作用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验可检测活细胞的数量,可验证细胞的生长及增殖情况,[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。软琼脂克隆形成实验是验证悬浮细胞单细胞克隆能力的常用手段,通过观察克隆形成数量及大小来判断[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]单细胞克隆形成的能力[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],已有报道证明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MSI1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对小细胞肺癌细胞的生长增殖起到明显促进作用。[/color][/size][/font]

  • 【讨论】“吃辣椒导致肺癌”?

    【讨论】“吃辣椒导致肺癌”?

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104160845_289146_2185349_3.jpg吃辣椒导致肺癌?最近,某著名的“养生大师”在某电视台的某节目上宣称,自己看到国外有专家小组“终于发现抽烟不是得肺癌的原因,而是吃辣椒导致的”。“大师”对这个“新发现”颇为不屑,因为“咱们的中医老祖宗几千年前就说了,吃辣椒伤肺,不能过辣……”

  • 【转帖】灰霾将取代吸烟 成肺癌头号杀手

    【转帖】灰霾将取代吸烟 成肺癌头号杀手

    [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903251131_140444_1621459_3.jpg[/img]昨天(23日),广州又是一个灰霾天气。昨日(23日)的气象日论坛上,中国气象局广州热带海洋气象研究所首席研究员吴兑介绍,珠三角的灰霾程度在国内发达地区最轻,但过去10年华南地区空气污染物浓度有增无减,灰霾将取代吸烟,成为肺癌的头号杀手。 国内空气污染未算灰霾 据介绍,长三角、珠三角和京津渤地区是政治、经济发展前沿地区,空气污染程度也位居前列。 广东近几年花大力气治理灰霾,“老是说空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量优、良,但天总是灰的。”不少人都有这样的感觉,吴兑解释,目前环保部门的空气污染指数评定对象中,没有把灰霾的特征污染物细粒子纳入进去,所以空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]量并没与灰霾直接挂钩。 另外,空气中的污染物浓度从20微克/立方米减少到40微克/立方米,能见度就会从40公里减少到10公里,但污染物浓度从40微克/立方米减少到120微克/立方米,能见度只是从10公里减少到7、8公里。“政府的治污力度非常不容易,但市民不容易看到成效。” 灰霾评定标准年内出台 吴兑表示,国家气象部门已经委托广东省气象局编制全国灰霾评定标准,拟把灰霾的标准界线定为“污染物浓度为65微克/立方米”,即高于此标准属于灰霾,低于就属于良好。这个《霾天气的观测与预报》本月将向全国各相关部门及60位专家征询意见,下月上旬把初步标准上报国家审查,预计年内正式出台。 卫星观察显示,在过去10年,华中和华南的气溶胶和气体污染物浓度变得非常高。吴兑分析了广州52年的地面灰霾历史测量数据,表明1954年-2006年间肺癌发生率伴随空气污染事件的显著增长而大幅增加。统计数据表明,空气污染在相当大的程度上提高了呼吸道发病率和心肺疾病死亡率,空气中悬浮粒子引起肺癌的潜在周期是7年,也就是说灰霾将取代吸烟,成为肺癌的头号杀手。

  • 生物制品抗肿瘤第1类新药完成临床研究

    对正常细胞无影响 对癌细胞“精确制导” 最新发现与创新 中国科技网讯 由上海歌佰德生物技术有限公司自主研发的我国生物制品抗肿瘤第1类新药——注射用重组人凋亡素2配体项目,历经10多年研发顺利完成临床前、Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期的临床研究,今天举行揭盲仪式。 肺癌目前居我国城市人口恶性肿瘤死亡原因首位,其中非小细胞肺癌又占肺癌患病者总数的75%左右。临床上常规治疗方法为手术、放疗、化疗等,但这些方法对于无手术指征的晚期肺癌病人疗效低下且毒副作用明显。 注射用重组人凋亡素2配体(rh-Apo2l),能够特异性地识别肿瘤细胞并诱导其凋亡,而对正常细胞无影响,是对癌细胞精确制导“导弹”,显示出良好的安全性与有效性。而且,由于重组人凋亡素2配体为蛋白质分子,属于人体天然分子的一个片段,因此不会产生耐药性。此外还能通过与国外完全不同的方法来克隆和重组表达此因子,用基因工程实现批量生产,满足临床应用的治疗剂量。目前Ⅲ期临床试验已经结束,产品有望2013年年底上市。 国内权威临床统计专家陈峰教授介绍,在Ⅲ期针对非小细胞肺癌病人的双盲试验中,使用注射用重组人凋亡素2配体的试验组与对照组有显著差异,其中中位PFS(无进展生存期)可以达到200余天,迈入国际领先水平行列。 凋亡素2配体的成功研发不但填补了晚期癌症,尤其是非小细胞肺癌病人治疗过程中的技术空白,对患者的生存期延长与生存质量改善均有明确的效果,且相较于同类进口药物价格优势非常明显,仅为进口药物的1/10,将为肿瘤病人带来福音。(傅晗玮 记者 王春) 《科技日报》(2012-7-4 一版)

  • 血浆外泌体在肺癌诊断中的应用

    血浆外泌体在肺癌诊断中的应用

    [align=center][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在肺癌诊断中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][font='宋体']外泌体作为重要的信息载体,参与肿瘤的发生、进展、转移和化疗耐药等过程,外泌体携带大量的遗传物质,已成为液体活检最理想的分析目标。外泌体也是目前最有前途的非侵入性诊断和预后的生物标志物之一。目前,超速离心法是外泌体分离的金标准。为了实现外泌体的临床价值,本研究以超速离心法富集了人血浆中的外泌体,并对健康人及肺腺癌患者的血浆样品做了区分,用于下游的肺癌诊断[/font][font='宋体']。[/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌诊断的策略[/size][/font][/align]肺癌仍然是世界范围内癌症相关死亡的主要诱因,因为大多数患者被诊断时均为晚期。因此,我们初步评估了超速离心法富集外泌体用于肺癌诊断的潜在适用性。我们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集1 mL血浆样本中的外泌体,对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体,结合数据分析,评估血浆外泌体在监测肺癌诊断方面潜在的适用性。[align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血浆中外泌体表征[/size][/font][/align]测试了超速离心法对复杂血浆样品的适用性。首先,利用纳米颗粒示踪分析对超速离心法得到的血浆外泌体进行了表征。如图(a)所示, 纳米颗粒示踪分析显示分离的外泌体粒径分布同样较窄,平均粒径为128.8 nm。与细胞上清样品类似,Western blot方法验证了分离外泌体的有效性。如图(b)所示,经富集后,典型的低丰度外泌体标记物同样得到了有效检测。以上结果证明,超速离心法能[img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]够成功的用于血浆中外泌体的富集。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] (a)重悬液中血浆外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征,(b)[/size][/font][font='黑体'][size=14px]Western blot方法[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征血浆[/size][/font][font='黑体'][size=14px]外泌体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9[/size][/font][font='黑体'][size=14px]蛋白条带[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断[/size][/font][/align][font='宋体']我[/font]们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集血浆样本中的外泌体。采用纳米颗粒示踪分析技术对血浆外泌体标进行表征。如图所示,与健康对照组相比,肺癌患者的血浆外泌体显著上调。对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体,结合数据分析,证明血浆外泌体在监测肺癌诊断方面具有潜在的适用性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310171534194891_9083_6197575_3.png[/img][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px]健康人与肺癌患者血浆中外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析[/size][/font][font='黑体'][size=14px]技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=18px]小结[/size][/font][/align]超速离心法可以高效、特异性地从人血浆中富集、纯化外泌体,在此我们评估了超速离心法在复杂血浆样品中的适用性。肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因,因为在原发癌症扩散之前进行早期诊断具有挑战性。以6例肺癌患者(6例健康供者为对照)的人血浆为样本,进一步研究超速离心法富集外泌体在肺癌筛查和诊断中的应用。这些结果证实了血浆外泌体在肺癌筛查和监测中的应用潜力。

  • 重磅:FDA授权呼出GCMS用于新冠检测

    2022年4月14日,美国食品和药品管理局(FDA)发布了一则新闻,为世界上第一个COVID-19诊断测试颁发了紧急授权,该测试可检测与新冠病毒感染相关的呼吸样本中的化合物。该测试可以在收集和分析患者标本的环境中进行,例如医生办公室,医院和移动测试站点,使用大约一件随身行李大小的仪器。该测试由合格的,训练有素的操作员在州法律许可或有授权的医疗保健提供者的监督下进行,可以在不到三分钟的时间内提供结果。[align=center][img=1.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/4e42e07b-fdd3-45c3-a279-1c0918a5ba21.png[/img][/align]FDA设备和放射健康中心主任Jeff Shuren博士说,“此次的授权是新冠诊断技术寻求不断创新的有一个例证。FDA将会继续支持开发新型的新冠病毒检测技术,目标是解决当前大流行的困境,并在下一次突发公共卫生事件中为美国树立更好的地位。”此次授权的是一家总部在美国德克萨斯州,刚成立四年的创业公司,员工不到50人,专注于便携式的新冠病毒,阿片类药物和大麻检测方案的公司。[align=center][img=2.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/c00b2d06-48a6-4afb-8061-a83cd7f121a4.png[/img][/align]该公司的InspectIR COVID-19 呼出气检测仪在一项针对2,409人(包括有症状和无症状的人)的大型研究中得到了验证,研究表明该方法具有91.2%的灵敏度和99.3%的特异性。研究还显示,在包含4.2%阳性比例的人群中,该测试的阴性预测值为99.6%,这意味着在疾病流行率低的地区,收到阴性测试结果的人大概率是真阴性。在一项专注于奥密克戎变体的随访临床研究中,该检验的灵敏度与之相似。InspectIR COVID-19 呼出气检测仪基于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]技术([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GCMS[/color][/url])来分离和识别化学混合物,并迅速检测出呼出气体中与新冠病毒感染有关的五种挥发性有机化合物(VOCs)。当InspectIR COVID-19 呼出气检测仪检测到这些生物标志物时,会返回一个推定的(未经证实的)阳性检测结果,并需要通过进一步的分子检测来证实。阴性测试结果也同时需要结合患者最近的接触情况、病史以及是否存在符合新冠感染的临床症状和体征来考虑,该测试的结果不能排除是否感染新冠病毒,也不能作为治疗或患者管理决策的唯一依据,包括感染控制决策。[align=center][img=3.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/ddd4c64d-6cda-469e-a475-3d13da771261.png[/img][/align][color=#ff0000]继去年新加坡批准呼出[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]谱用于新冠感染人群筛查之后,FDA此次的政策加码势必会极大推动呼出[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]谱在此类公共安全事件中的大规模应用,未来几年内科研和商业市场一定会风起云涌。[/color]参考信息:https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-first-covid-19-diagnostic-test-using-breath-sampleshttps://inspect-ir.com/https://www.bloombergquint.com/coronavirus-outbreak/covid-breath-test-provisionally-approved-for-use-in-singapore

  • 喝酸奶多的人患肺癌的可能性比不喝酸奶的人低19%!

    24日,期刊JAMA Oncology刊载范德比尔特大学的研究,在汇总140万人的饮食和肺癌发病率数据后,研究人员之后8年的随访中发现,喝酸奶多的人(平均每天约90-120毫升)患肺癌的可能性比不喝酸奶的人低19%。肺癌主要由肺部炎症引起,肠道微生物组在对减轻炎症中起着重要的作用。

  • 深圳先进院非实性肺癌肿瘤负荷定量研究取得新进展

    中科院深圳先进技术研究院医工所医学成像研究中心张丽娟副研究员近期在非实性肺癌肿瘤负荷的定量研究方面取得进展,相关成果发表在Radiology杂志上。 倍增时间在判断肿瘤的性质及预后方面具有重要临床意义。不同于实性肿瘤,非实性肺癌在体积增加之前常存在一段不确定的“内生长”期,即肿瘤组织向肺泡内空间填充,组织学上表现为癌细胞沿肺泡表面的增殖,而肿瘤的径线并无改变。这种生长方式使得经典倍增时间计算方法不再适用,长期以来该疾病的临床诊疗也因此颇受困扰。 医学影像技术的发展使得使用计算机辅助断层成像在体估算肿瘤负荷成为可能。该研究联合应用医学病理及影像的方法,全面分析了非实型肺癌的内生长模式,并对其肿瘤负荷作了定量分析,首次发现肿瘤的影像密度值每增加100单位,肿瘤负荷约增加10%。 该研究为有非实性肺肿瘤的生长提供了有效的评估方法,对肺癌的诊疗有重要临床应用价值。同时,也为丰富肺癌的WHO分期提供了新的思路。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201207/W020120711526142827307.jpg

  • 日吃一香肠患肠癌率增两成

    肠癌是对人体健康最具威胁的癌症之一。世界癌症研究基金会最新研究发现,食用加工肉制品将大大提高人们患肠癌的风险。如果人们每天食用一根香肠或三片熏肉,患肠癌几率将增加20%。医学专家因此呼吁人们提高防癌意识,选择合理饮食及健康生活方式。   结论 少吃加工肉类  总部位于英国伦敦的世界癌症研究基金会提醒人们,每天食用加工肉制品的量不宜超过50克,否则人们患肠癌的风险将增加20%。英国《每日邮报》3月31日援引基金会医学顾问马丁怀斯曼的话报道,专家已有确切证据证明,食用加工肉制品与患癌有密切联系。  加工肉制品由腌、熏、晒、烤或添加化学防腐剂等方式制成,包括火腿、熏肉、香肠、热狗等。肉制品加工过程会产生几种致癌物质,其中包括亚硝基化合物。怀斯曼说:“当人们面对熏肉、火腿或香肠时,最安全的做法就是一点儿也不吃。”  危害 肠癌成第二大“杀手”  研究显示,英国每20人中就有1人患有肠癌,每年死于肠癌的人达1.6万。因此,肠癌成为继肺癌之后威胁英国人健康的第二大“杀手”。  世界癌症研究基金会把4月定为“关注肠癌月”。活动于4月1日拉开序幕。英国政府已开始推行肠癌检查计划,每隔一年为60岁以上的肠癌高发人群提供检查。医学专家则认为,防范肠癌的有效办法是少吃加工肉制品。  建议 多食用鱼类豆类  世界癌症研究基金会的医学专家发现,如果人们改变不健康生活方式,坚持合理饮食、不吸烟、不酗酒等,癌症发病率可能降低50%。  基金会提醒人们每周摄入牛肉、羊肉、猪肉等红色肉类熟食的总量最好控制在500克以内,并尽量购买含脂量低的瘦肉。低脂的鱼类和含蛋白质丰富的豆类可以作为红肉的替代物。人们还可以用鸡肉或鱼肉取代熏肉和香肠。经常食用含纤维素丰富的水果和蔬菜也可以有效降低患癌风险。除注意饮食外,人们还应该经常运动、防止肥胖,并减少酒精摄入量。假如人们要饮酒,男性最好控制在每天2个单位,女性最好控制在每天1个单位。1个单位指半品脱(约0.286升)啤酒或一小杯葡萄酒。  链接  妻子心理决定抗癌效果  美国癌症学会的一份研究报告表明,当夫妻两人中有一人身患癌症时,无论患癌者是否为丈夫,他的健康状况都会受到妻子心理状况的直接影响。  这一研究由癌症学会下属行为研究中心研究员金英美博士(音译)主导撰写,发表在最新一期《行为医学纪事》上。研究者对168对夫妇开展研究。每对夫妇中都有一人在研究开始大约两年前被诊断患有前列腺癌或乳腺癌。  研究人员发现,癌症病人自身的心理压力大不大是决定其生活质量的最关键因素。大体上,癌症病人和配偶的忧虑程度类似,相互间的影响并不大。然而,研究人员发现,女性乳腺癌病人的心理压力程度与其丈夫的身体健康有联系,前列腺癌病人的妻子所承受心理压力程度也会影响患者健康程度。

  • 【转帖】4名职工患肺癌死亡 西南合成制药公司被罚15万

    针对西南合成制药股份有限公司4名制药工患肺癌死亡的事件,昨天,卫生部经过调查后通报,已对该公司予以罚款15万元的行政处罚;同时关闭该公司酮基布洛芬(KP)车间。 2006年11月14日,媒体报道了西南合成制药股份有限公司二分厂酮基布洛芬(KP)车间发生4名职工患肺癌死亡的情况。 卫生部立即要求重庆市卫生局及时组织有关人员调查核实。 经核查,该公司存在四大主要问题:一是未认真落实职业病防治法律法规规定的职业健康监护等有关法律制度,职业病防治工作不到位;二是轻视职业病危害对劳动者健康造成的后果。事件发生后没有采取积极有效的措施控制危害、改善劳动条件。对监督检查提出的整改意见应付拖延;三是对接触有毒害作业劳动者的健康监护不到位,缺乏动态的劳动者健康资料。未开展作业场所危害检测评价工作;四是职业病防护设施不能有效运行,劳动者个人防护用品没有发放记录。

  • PM2.5竟然与肺癌致死率相关,如何看待PM2.5与霾的关系

    PM2.5竟然与肺癌致死率相关,如何看待PM2.5与霾的关系

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/02/201302171510_425634_1608710_3.jpg今天早上,北京又迎来雾霾天气,刚巧今天在网上看到一个研究,给大家共享。PM2.5竟然与肺癌致死率相关,已经是不可忽视的民生问题,你又是如何看待PM2.5与霾的关系呢

  • 分子检测指导下的肺癌精准治疗策略

    [align=center]分子检测指导下的肺癌精准治疗策略[/align][size=16px]肺癌是最常见的恶性肿瘤,也是恶性肿瘤死亡的主要原因。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入发展以及检测技术的提高,肺癌治疗开始进入分子检测指导下的精准治疗时代,更多免疫调控分子和新的免疫检查点的不断被发现,使免疫治疗成为未来肺癌等肿瘤治疗的重要发展方向。[/size][size=16px]目前,在肺癌中获批([/size][size=16px]FDA[/size][size=16px])或已写入[/size][size=16px]NCCN[/size][size=16px]指南的抗[/size][size=16px]PD-1[/size][size=16px]以及抗[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]药物主要包括以下几种:抗[/size][size=16px] PD-1[/size][size=16px]抗体包括:[/size][size=16px]Nivolumab[1][/size][size=16px],[/size][size=16px]Pembrolizumab[2,3][/size][size=16px];抗[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]抗体包括:[/size][size=16px] Atezolizumab [4,5][/size][size=16px],[/size][size=16px]Durvalumab[6][/size][size=16px]。整体来看,免疫治疗相对于传统的细胞毒性治疗,在治疗有效的人群中,能有效的减低副作用,并能长期获益。此外,相比于免疫单药治疗,联合治疗可提高疗效,延长患者的生存时间。目前免疫治疗单药在实体瘤中的[/size][size=16px]ORR[/size][size=16px]大都在[/size][size=16px]20%[/size][size=16px]左右,而采用联合治疗的策略比如联合化疗,抗肿瘤血管生成药物治疗等,其[/size][size=16px]ORR[/size][size=16px]则可提高至[/size][size=16px]50%[/size][size=16px]以上。[/size][size=16px]目前,关于免疫治疗疗效预测标志物,[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]表达、[/size][size=16px]MSI[/size][size=16px]状态以及[/size][size=16px]TMB[/size][size=16px]已被写入[/size][size=16px]NCCN[/size][size=16px]指南,作为一些免疫药物用药的伴随指标。然而,这几项指标亦不是免疫治疗的理想预测因子,比如并不是所有的[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]阳性患者均能从免疫治疗中获益,同时,部分[/size][size=16px]PD-L1[/size][size=16px]阴性的患者仍能从中获益。因此,免疫治疗的疗效预测标志物,特别是免疫联合治疗的生物标志物,仍需要进一步探索。[/size][size=16px]肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤[/size][size=16px],[/size][size=16px] [/size][size=16px]免疫治疗引领了多个肿瘤治疗领域的变革,给肺癌患者带来了极大的生存获益。然而,不管是免疫单药还是联合治疗,仅有部分患者可以从治疗中获得持久疗效和长期生存。目前,针对如何实现精准免疫治疗,研究者开始了诸多尝试,探寻生物标志物。除去已被写入指南的免疫治疗生物标志物([/size][size=16px]PD-1[/size][size=16px]表达、[/size][size=16px]TMB[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]MSI/[/size][size=16px]dMMR[/size][size=16px])外,肿瘤新抗原([/size][size=16px]TNB[/size][size=16px])、免疫微环境相关的肿瘤免疫浸润淋巴细胞([/size][size=16px]Tumor infiltrating lymphocyte, TILs[/size][size=16px])和[/size][size=16px]T[/size][size=16px]细胞炎性基因表达谱([/size][size=16px]GEP[/size][size=16px])等,以及其它一系列与免疫治疗疗效相关的正、负驱动基因突变、[/size][size=16px]免疫超进展[/size][size=16px]的相关的因子等都分别已有相关研究报道。[/size]

  • 【新闻追踪】西南合成制药发生职业病事件四职工患肺癌死亡

    国家卫生部昨天发布的通报说,西南合成制药有限公司发生的职业病危害事件已经被查处,给予罚款十五万元人民币的行政处罚,同时提请重庆市人民政府责令关闭该公司酮基布洛芬(KP)车间。  去年十一月十四日,有媒体报道,西南合成制药股份有限公司二分厂酮基布洛芬(KP)车间四名职工患肺癌死亡。  卫生部对此高度重视,责成有关部门调查核实发现:该公司未认真落实职业病防治法律法规规定的职业健康监护、职业病危害警示标识、职业卫生培训、职业病危害因素检测评价等有关法律制度,职业病防治工作不到位;轻视职业病危害对劳动者健康造成的后果,事件发生后没有采取积极有效的措施控制危害、改善劳动条件;对监督检查提出的整改意见,采取应付、拖延的做法,规避责任;对接触有毒害作业劳动者的健康监护不到位,缺乏动态的劳动者健康资料;未开展作业场所危害检测评价工作,没有作业场所的职业危害检测资料,档案资料不完整、不规范;职业病防护设施不能保证有效运行,劳动者个人防护用品没有发放记录。   卫生部要求北京、江苏、湖北等九省卫生行政部门对辖区内生产酮基布洛芬(KP)同类企业开展职业病危害调查,进一步了解国内生产酮基布洛芬(KP)同类企业职工的健康状况。

  • MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备:打开水浴锅,设置温度37℃;紫外线将超净台消毒30 min;配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出,用一次性PE手套包裹冻存管,迅速放入水浴锅中震荡,使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液,900 r/min离心8分钟,弃去上清,得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基,并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中,放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞,用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中,选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞,用PBS溶液将细胞吹至漂浮,并移入15 mL离心管中,两种细胞均900 r/min离心8分钟,弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基,在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀,将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀,放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化,将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108,充分混匀,准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀,取其中500 μL放入细胞计数仪中计数,取出1.2×106个细胞置入新的离心管中,加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染,培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心,换成不加双抗的完全培养基继续培养,72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好,加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心,PBS缓冲液清洗2次,900 r/min离心8 min,得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol,用移液枪吸打至细胞完全破裂,加入200 μL氯仿,震荡30 s,室温静置10 min,以有效分离无机相和有机相,随后4℃,12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中,加入与上清等体积的异丙醇,轻柔颠倒震荡数次,室温静置10 min,随后4℃,12,000 g/min离心10 min。弃去上清,加入75%无水乙醇,4℃,12,000 g/min离心5 min。弃去上清,沉淀置于冰上自然干燥,但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测,用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀,瞬时离心,37℃ 2 min,55℃ 15 min,85℃ 5 min,得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系:Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序: Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验,用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中,900 r/min离心8 min,并用PBS溶液洗涤2次,以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL,与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后,4℃,12000 g/min离心15 min,将上清移至新的离心管中,得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液,充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释,最小浓度为125 μg/mL,并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀,铺入96孔板中。37℃孵育30 min,测定波长562 nm处OD(光密度值)值,并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,20:1稀释后,与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min,用酶标仪测定波长562 nm处OD值,根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,加入相应体积4×SDS Loading Buffer,沸水浴煮5 min,分别取40 μg细胞总蛋白,在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后,将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液,用TBST缓冲液洗3次,每次10 min,加入MSI1兔单克隆抗体(1:1000),并以GAPDH为内参,加入GAPDH鼠单克隆抗体(1:5000);4℃孵育过夜,次日用TBST缓冲液洗膜3次,每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG(1:5000),在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG(1:5000),37℃敷育1 h,TBST 缓冲液洗膜3次,每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测,暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复,应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比,结果采用t检验,并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA,利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况,结果如图2-1显示,MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达(**代表与正常肺上皮细胞相比,小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义,P0.01)。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞,使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选,然后在荧光显微镜下观察如图2-2,可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光,表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞,利用嘌呤霉素筛选,并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA,并测量RNA浓度及完整性,用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见,RNA有三条带,从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA,且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右,A260/A230的值为2.30左右,说明提取的RNA质量和完整性很好,可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量,结果如图2-3所示,与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低(P0.01),抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达(***代表与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义,P0.001)。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品(2 mg/mL)进行等比稀释,最低浓度为125 ug/mL,并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值,以OD值为纵坐标,对应蛋白质浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质,利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示,与对照组相比,MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达:(a)MSI1蛋白表达条带;(b)MSI1蛋白的相对表达量。(*表示与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义,P0.05)。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况,利用Q-PCR技术检测在RNA水平,MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达,结果显示,MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象,构建MSI1低表达细胞模型,应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达,结果显示,H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功,可以用于后续实验。

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