方法优化

安捷伦1290-QQQ6430上优化涕灭威母离子 208 ：1.做Scan时找不到母离子，这时候我们需要把毛细管电压正模式和负模式都降到1000去，这样做全扫找到了母离子。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603051303_586080_2779413_3.png这两个值改为10002.锁定母离子后就去找子离子这时候需要增加响应，所以把毛细管电压调回4000 35003.找子离子，裂解电压默认值一般是135，但因为涕灭威比较容易碎裂，所以我们裂解电压设置为 20 30 50 60 就可以了，这模式中可以添加四个扫描范围。4.顺利找到涕灭威的两个子离子 116.1 89.1 ，满足四分要求。5.接着优化它的裂解电压 碰撞能量 加速电压。结果 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603051310_586082_2779413_3.png裂解电压和能量都和其它物质差别大，116.1的碰撞能量竟然是0的时候响应最高。1290-QQQ6490的优化情况这个优化流程和上面一样，但是6490的参数比较多 通过优化具体参数如下：干燥器温度150 流速18L/min 鞘气温度350 鞘气流速12L/min 毛细管电压+3500 , -2000喷嘴电压+ 500. -1000 分子漏斗 +高端70 低端40 ，- 高端90低端60 这里的分子漏斗电压只适合做涕灭威一个时得到响应更高 检测浓度0.1ng/mL完全无压力。如果需要同时和其它物质一起检测 分子漏斗只要改回 +高端150 低端60 ，即可。但是EMV+电压需要加200最后优化结果 母离子 208.2 子离子89.1 115.8 碰撞能量分别是10和0，裂解电压都为380（仪器不可调），加速电压为5总结下:6430毛细管电压可以影响响应，但是太高时可能找不到母离子，原因分析物质容易碎裂，需要降低电压才能找到母离子。6490设计和6430不一样，有分子漏斗需要优化，对于易碎裂的物质需要把电压降低。而且碰撞能量是0，优化时，需要注意。如你们喜欢，可以加入我们的小团队。 名为：shooter 团队里面有大学的教授（帅气的老外教授（我们的最终决策人）），各个地方的检验人员，和对液相感兴趣的年轻朋友。我们团队现在的进程是讨论液相色谱的条件，通过我们来把一些在液相上分析时间长的旧方法改为快速高效的方法（必须要成为实例）。 希望你们的加入，具体方法在论坛留言给我，我会尽快回复你们。 我们需要的你是能和我们融合为一个Team！

GC分析方法参数优化在速率理论中，参数基本可以分为三部分，一是导致峰展宽的动力学因素，即与H、n、u有关的参数；二是与热力学有关的参数，即α；三是与流动相和固定相相关的参数容量因子k。分离条件的优化就是设法调节有关参数，以便在尽可能短的分析时间内获得满意的分离结果。首先我们要注意，虽然这些参数是相互关联的，但基本参数α、k、H或n可或多或少的独立调节。1、 改变n和H这两个参数首先与柱长L有关，L增大时，n就成比例的增加，但分析时间也增加。理想的方法是在不增加柱长的条件下减小H已达到增加u的目的。可采取的措施有采用接近uopt的载气流速，采用小内径的色谱柱，如果是填充柱就采用较小的填料粒度。2、 改变k改变k是提高分离度R的最容易的方法。图1所示为k与R以及分析时间的关系，可见，k在一定范围内增加可有效地提高分离度，但当k大于5时R的变化就很小了，反而使保留时间迅速增加。所以，GC分析中k值最好控制在2~5之间，一般要求不超过10.否则会大大延长分析时间。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/06/201606281454_598472_944_3.jpg图 1 k和R和tR的影响改变k的最简单的方法是改变柱温，降低柱温可明显提高k。此外，降低载气流速也是提高k的常用方法。3、 改变αΑ可以看成是一个准热力学参数，在流动相和固定相一定时，它只与柱温有关。当两个组分的α接近1时，改变H和k都难以在可接受的时间内实现完全分离。此时，应在保持k值为2~10之间的前提下，设法改变α。下面是按由易到难的顺序排列的几个改变α的方法：一、改变柱温二、改变固定相，及更换色谱柱三、利用化学作用，如通过衍生化反应改变待测物的结构。

[align=center][img=,600,475]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251150070539_3134_932_3.jpg!w356x282.jpg[/img][/align]非食用着色剂酸性橙Ⅱ，Acid Orange 7，染料索引号：C.I. 15510，是一种常用的工业染料，有强致癌性。因其色泽鲜艳、匀染性好、价格低廉等特点，酸性橙Ⅱ常被不法商家偷偷使用于食品生产加工，因而酸性橙Ⅱ被列入食品中禁用着色剂的检测范围。目前，国家已经发布3个推荐性的食品中酸性橙Ⅱ专用检测标准，但由于不同实验室间仪器、人员、实验耗材、样品等条件存在差异，完全执行方法就能达到回收率、精密度要求的情况很少。因此，根据实际情况进行方法的优化是必要的。最近，小编在用不同的基质按照标准《SN/T 3536-2013 出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法》做酸性橙Ⅱ回收实验时，发现回收率不很理想，而且6.1.2所规定的固态样品前处理方法非常耗时（特别是净化前提取液需“浓缩约至10mL”这一步）。因此小编依据标准方法对不同实验环节进行了一些优化，在这里将全过程分享给各位朋友以供参考交流~[align=center][size=16px][b]样品净化步骤[/b][/size][/align][align=left]样品净化步骤优化涉及[b]SPE小柱与滤膜的选择[/b]、[b]固相萃取操作步骤[/b]。[/align][align=left]首先，我们需要按标准方法进行实验，验证所用SPE小柱与滤膜是否满足当下实验条件需求：[/align][align=left][b]1. 根据标准3.6节（见下图）选择对应的SPE小柱。[/b][/align][img=,600,45]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251151252979_312_932_3.png!w690x52.jpg[/img][align=left]由此，小编选择了月旭Welchrom NH2小柱（500mg/6ml,30pk，货号：00509-11006）。[/align][align=left][b]2. 使用酸性橙Ⅱ标准溶液，按标准6.1.3节的净化方法[/b][font=-apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]（见下图）[/color][/size][/font][b]进行固相萃取操作[/b][font=-apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]（小柱的活化方法见3.6）[/color][/size][/font][b]，留取每一操作步骤的样液用于上机检测。[/b][/align][align=center][b][img=,600,111]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251152154343_6193_932_3.jpg!w558x104.jpg[/img][/b][/align]在这里，小编移取0.1mL 10mg/L酸性橙Ⅱ标准溶液，加10mL水混匀作为上样溶液,并根据6.1.3分别收集上样液、淋洗液、洗脱液、二次洗脱液进行上机检测（此方法又称“分步留样”，是分析SPE操作过程中影响回收率的环节及原因的常用方法）。[b]3. 选择合适的滤膜过滤样液，上机检测。[/b]根据6.1.3，样液上机前要过膜净化。我们都知道，滤膜作用是净化样液，防止杂质污染色谱柱。但使用滤膜（或使用不合适的滤膜）可能会影响目标物的回收率甚至引入杂峰。因此，小编尝试了三种过膜方式：1) 不过膜；2) 水系滤膜；3) Nylon滤膜。[align=center][img=,600,218]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251153185149_6941_932_3.jpg!w690x251.jpg[/img][/align][color=#a0a0a0]蓝色为样液不过膜，峰面积12.0191[/color][color=#a0a0a0]粉色为样液过水系滤膜，峰面积11.4695[/color][color=#a0a0a0]黑色为样液过Nylon滤膜，峰面积6.4975[/color]结果发现过膜后，过膜样液的图谱峰面积：过Nylon滤膜＜过水系滤膜＜不过膜，说明过水系膜或有机系膜都对目标物造成一定损失。因此后续实验的样液均不过膜上机。建议本实验样液上机前不过膜。[align=left]最后，小编发现上样液、淋洗液以及两次的洗脱液中都没有目标物酸性橙Ⅱ检出，酸性橙Ⅱ最终的回收率已经达到了95%-105%，满足了检测的要求。[/align][align=center][size=16px][b]样品提取步骤优化[/b][/size][/align][align=left][b][size=12px]其次，按照标准方法小编进行了空白基质加标实验，验证样品提取步骤是否影响不同基质样品中目标物的回收。实验方法如下图所示。[/size][/b][/align][align=center][size=12px][img=,600,475]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251155000983_2703_932_3.jpg!w664x526.jpg[/img][/size][/align]实验过程中，小编发现：6.1.2 固态试样提取方法中提及：要用20mL乙醇-氨溶液（配制方法见3.4）提取2遍，再合并提取液，浓缩至10mL。此时洗脱液总量约[b]40mL[/b]，需40℃浓缩至[b]10mL[/b]左右【相当于除去乙醇】。整个浓缩过程非常耗时，差不多处理一个样要[b]一小时[/b]，而且最终的结果回收率非常不理想。按照第一次实验的结果，小编进行了一些优化，标准上是全部提取液浓缩至10mL左右后净化，改为移取了其中20mL经浓缩至约5mL后上样。根据第二次实验结果，回收率已经达到了90%-100%，满足了检测的要求。最终优化后的实验步骤和谱图[align=center][b][size=16px][img=,600,350]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251155541183_7553_932_3.png!w664x388.jpg[/img][/size][/b][/align][b][size=16px]一、提取[/size]称[/b]取样品2g（±0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙醇-氨溶液，超声提取30min，离心10min（4000r/min），吸取上清液于另一50mL离心管中；残渣中加入20mL乙醇-氨溶液，重复提取一次，合并两次上清液，混匀，准确移取20mL上清液，40℃旋转蒸发至少于5mL,转移至15mL离心管中，用水定容至10mL，待净化。[size=16px][b]二、净化[/b][/size][align=left][size=12px]SPE柱：月旭Welchrom NH2规格：500 mg/6mL[/size][/align][align=left][size=12px]活化：依次用5mL甲醇，5mL2%甲酸水溶液过柱，弃去流出液[/size][/align][align=left][size=12px]上样：将待净化液全部上样，自然流干，弃去流出液[/size][/align][align=left][size=12px]淋洗：依次用5mL2%甲酸水溶液，再用5mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液[/size][/align][align=left][size=12px]洗脱：用5mL10%氨水甲醇溶液，收集于15mL试管中，抽干小柱[/size][/align][align=left][size=12px]浓缩：氮吹至近干，用水定容至1mL,上HPLC检测。[/size][/align][b][size=16px]三、仪器条件[/size][/b][align=left][size=12px]色谱柱：月旭UltimateXB-C18,4.6×250mm,5μm[/size][/align][align=left]流动相：乙酸铵：甲醇=35:65[/align][align=left]柱温：35℃[/align][align=left]进样量：20μL[/align][align=left]检测波长：484nm[/align][align=left]流速：1.0mL/min[/align][align=center][img=,600,322]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/12/201912251157524053_1160_932_3.jpg!w556x299.jpg[/img][/align][align=center][size=16px][b]总结[/b][/size][/align]在优化标准方法的时候：1）先选择合适的SPE小柱，用目标物标准溶液进行固相萃取操作，分步排查SPE步骤，确认小柱与标准方法是否满足具体要求；2）再按标准方法，做空白基质加标，确认前处理样品提取步骤中目标物的损失情况，分析造成目标物损失的原因及步骤，有针对性优化方法；3）接着做样品和样加标，看目标物回收率情况，优化提取量或提取次数；最后得出一个稳定的方法，保证满足标准回收率要求进行检测。