多肽物质用流动相

多肽药物的液相分析，流动相一般都是什么啊？检测波长呢？

在反相色谱分析多肽含量时，流动相常用三氟乙酸，而不用磷酸、乙酸或分子量很小的甲酸呢？三氟乙酸起到了离子对试剂的作用了吗？

我现在的流动相是A---ACN 5%, 水 95% 和0.05% TFA B---ACN 80%, 水 20% 和0.04% TFA，在采用NSI的情况下（已经考虑调整电压和喷头位置等情况），当流动相B的比例在低于60%时，喷头总是断断续续出现气泡和液滴，喷雾状况差，信号断断续续（出喷雾时信号强度还可以，但喷雾就是不连续），咨询技术支持说只能用纯有机相冲，但是冲完再做样品时还是遇到同样的情况；在此想请问朋友们在不影响液相对成分的分离效果情况下（我做的是复杂多肽的分离）流动相的组成方面是否可以做些修改，比如添加某些特殊物质，使其尽量少产生气泡，提高喷雾的连续性？[color=#DC143C]最新进展 [/color] 非常感谢各位有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]经验的朋友提供的建议！ 我更换了流动相：A---5% ACN, 95% 水和 0.1% FA；B---95% ACN，5% 水和 0.1% FA 我用B冲洗了15min后在40min内使B从100%梯度降低至0，之后一直维持A为100%，我注意观察了近20min，喷雾偶尔会有暂停，总体情况比之前好多了； 然后我又走空样，按平时正常的梯度做了一个循环，在B梯度升高、维持、降为0之后，喷雾也还能维持得不错（离子注入时间值和信号强度值都挺不错） 现在我想重复几个空样循环，看它是否仍然稳定

[color=#444444]用高效液相色谱仪测亚硝嘧啶 流动相用甲醇：0.1%冰乙酸 峰形不好看 拖尾严重 用什么流动相好呢[/color]

[color=#444444][color=#444444]分离黄芩苷 绿原酸 连翘苷的一些问题[/color][color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]分离黄芩苷 绿原酸 连翘苷 先用的液相色谱摸索流动相及流动相的比例什么的 最后选用乙腈和乙酸胺 但试过之后 发现峰分的不太开 采用梯度洗脱效果也不明显 感觉有两种物质的峰重合了 因为只得到俩峰 柱子是2.1*150 的 流速是0.2μg/min 想请问 如何才可以较好的分离 是流动相的问题么？那应该选什么流动相呢？柱子不能变 只有2.1*150 的[/color][/color]

常规的硅胶柱，我第一次听说 使用以下的流动相 乙腈：甲醇（97：3），添加1%的磷酸。PH不祥。不知道是我孤陋寡闻了，还是确实可以这样用。分离磷脂类物质，据说是参考文献，条件成熟。现在遇到的问题是 保留时间 延迟 10min，半天内。会不会这样的流动相对柱子产生了，不可逆的影响？各位老师，讨论下吧。

求教各位高人，液相分析一个酸性物质，用的C18柱，流动相越酸，保留时间却确越短，这是什么原因呢？

[color=#444444]我是做多肽的，用四乙基高氯酸铵（0.1M，pH=2.05）作为高效液相色谱流动相，因为这东西实在太贵了，配1L流动相就要花400多块钱，求助各位大神能否根据性质找个类似的东西替换啊[/color]

流动相的PH对物质保留时间的影响?

液相色谱开发时，对物质进行用紫外扫描确定最大吸收波长，溶剂是要用流动相还是什么都行？

我正在分析一个含有手性异构体的物质（非对映），常规的流动相最好的在35分钟前后分离度是1.1。因为我想用一个方法同时检测异构体和有关物质，所以不打算用手性柱，想考虑一下用手性流动相的方法。粗略思路大概清楚，就是加入手性氨基酸和二价金属离子。但是具体的操作就不明了，比如这种方法对产品性质有什么要求，不知道我的产品能否适应此种方法，流动相要选择何种氨基酸，怎么调节pH之类的，谁能指点一下或者给个参考资料的。我做的产品是两性物质。pka1=2.8，pka2=7.9。

请问专家，我在用反HPLC测多肽，分出四个峰，前三个挤在一起，时间在5nim，10nim后出一矮宽峰，流动相 已氰：水（10：90）TFA0.05%。请问怎麽改流动相呢？生物多肽类HPLC效果如何评价呢？谢谢！

[em04] 摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。一些新方法、新思路的应用。不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。 1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 1.1 高效液相色谱（HPLC） 1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC） 1.1.2 疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC） 1.1.3 分子排阻色谱（Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC） SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便，如人重组生长激素（hgH）的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体，利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEC具有半衰期长、作用强的特点。一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。 1．1．4离子交换色谱（Iron-Exchange chromatography,IEXC） 　　IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。 1．1．5膜蛋白色谱（Chromatography of Membrane Protein,CMP） CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。 1．1．6高效置换色谱（High-Performance Displacement Chromatography,HPDC）　　HPDC是利用小分子高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离的目的。它具有分离组分含量较少成分的特性。利用HPDC鉴定分离了低于总量1%组分的活性人重组生长激素（rHG ）。在研究非毒性交换剂时Jayarama发现硫酸化葡萄糖（Detran Sulfate，DS）是对β乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。 1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC） PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。 1.2 亲和层析（Affinity Chromatography，AC） AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基由天然的，也有根据其结构人工合成的。Patel等人利用一系列亲和柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。 1.3 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）--分离分析方法 CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis，CZE）、毛细管等电聚焦电泳（Capillary Isoeletric Focusing，CIEF）毛细管凝胶电泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）和胶束电动毛细管层析（Micellar Electokinetic Electrophoresis Chromatorgraphy,MECC）等。 1.3.1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE） CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛细管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如调节电池泳液的PH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低PH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子如Zn2+等，此时分离速度快而且准确。 1．3．2细管等电聚电泳（Capillary Isleletric Focusing,CIEF） 由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽类分离开来。CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。 1．3. 3毛细管凝胶电泳 (Capillary Gel Electrophoresis,CGE) CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。目前，又有一种非交联欢、线性、疏水多聚凝胶柱被用于多肽物质的分离分析，此电泳法适于含疏水侧链较多的肽分离，这种凝胶易于灌注，使用寿命长，性质较为稳定。 1．3．4胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electorphoresis Chromatography, MECC） MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。特别对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可使之形成带有一定电荷的胶束，从而得到很好的分离效果。有文献报道在电解液中加入环糊精等物质，可使用权含疏水结构组分的多肽选择性与环糊精的环孔作用，从而利用疏水作用使多肽得到分离。 1．4多肽蛋白质分离工程的系统应用 以上提到的分离多肽的技术在实际应用过程中多相互结合，根据分离多肽性质的不同，采用不同的分离手段。特别是后基因组时代，对于蛋白质组深入的研究，人们对于分离多肽及蛋白质的手段不断改进，综合利用了蛋白质和多肽的各种性质，采用包括前面提到的常规蛋白多肽提取方法，同时利用了高效液相色谱，毛细管电泳，2-D电泳等手段分离得到细胞或组织中尽可能多的蛋白多肽。在蛋白质组学研究中系统应用蛋白和多肽分离鉴定的技术在此研究中即是分离手段也是分析方法之一。特别是以下提到的质谱技术的发展，大大的提高了蛋白多肽类物质的分析鉴定的效率。

HPLC，请问测竹浆中糖类物质，流动相用什么？固定相呢？温度怎么设？

用甲醇中胆固醇标准物质校准荧光检测器，大家都用什么条件啊，流动相及比例

最近在做离子对试剂的流动相来检测多肽，从开始做到现在，保留时间一直都不是很稳定，流动相用的是甲烷磺酸钠和乙腈，加高氯酸，用氢氧化钠来调PH，酸性ph。保留时间有时候是20min,有时候是22min，有时候是21min，还有27min,和25min的。不知道各位使用离子对试剂多的高手有没碰到类似的问题，导致保留时间漂移的原因一直都没找到。我在想是室温的原因吗，但是不像，同一天不同的仪器就算是一起配的流动相分两份使用保留时间就不一样，用两根同型号的柱子。难道是平衡时间不够吗，但是就算平衡半天时间，平衡之前和平衡之后的保留时间还是一样的（比如平衡前时间是25min,平衡后还是25min）。请教各位高手，帮忙分析下原因，或者你们碰到类似的问题是怎么解决的

请问专家，用HPLC分析蛋白多肽，流动相加入三氟乙酸作用是什磨？磷酸盐缓冲液可代替吗？谢谢！

流动相极性的改变对分离物质有什么不同影响?

感觉自己对一些问题很迷茫，在做实验过程中遇到不少问题，在这里想各位高手请教一下，拿到一个化合物，如何选择适合的流动相呢？如果是酸性物质，流动相一般添加什么，依据是什么？？（比如说，一般检测弱酸，流动相添加一定量的磷酸、醋酸、甲酸等，或者采用磷酸盐缓冲液），检测碱性物质呢？我对碱性物质尤其头疼，摸索条件总是不太顺利，请大家详细讲解一下，谢谢！还有个问题，化合物的pKa如何查询？

关于6-OHDA检测问题请教各位大侠：6-OHDA检测方法有哪些？我看过的文献中全都是用HPLC-ECD，还有没有其他方法了？多谢（推荐文献也行，谢了）具体地说：我做动物实验，用铁建立帕金森模型，最后想测定到底生成了多少6-OHDA，侧含量。我查了一些论文，方法基本都比较雷同，都是用的HPLC-ECD，包括流动相，流速基本都一样。我想请教各位，有没有做这方面实验的大侠，给点指导我目前找到的论文，HPLC-ECD检测6-OHDA的流动相，最后都是用85%磷酸调pH值到2.3，博士后嫌85%磷酸太贵，让我找别的。可是我一直没有找到。今天她又催我，看看各位有没有阅读过相关文献的，给推荐一下。多谢了

采用水为流动相的高效液相色谱方法都有哪些优缺点啊?一般用于分离什么物质，分离效果怎么样 ？？谢谢！！

安捷伦1200高效液相色谱仪分析同一种物质，用同一种方法，用同一种流动相为什么会有不同的保留时间。

大家好，本人色谱菜鸟，想请教大家一个液相色谱流动相方面的问题。维生素B1，B2是酸性的物质，但在国标5413.11中测试B1含量使用的流动相是0.05mol/L的醋酸钠溶液，用FLD检测，醋酸钠不是碱性的吗？用在酸性物质分离的原因是什么呢？

流动相为磷酸二氢钠溶液：甲醇：乙腈=50：35：15，加入氯化十六烷三甲胺至最终浓度为0.002mol/L，用磷酸调节ph至3.5。减压抽滤。第一天配置好的流动相，目标物质出峰时间为11min。第二天继续使用前一天的流动相，目标物质出峰时间为7min。这是什么原因？

本人非分析专业，实验室液相色谱经常用磷酸做流动相，磷酸相经常生出藻类等容易堵塞系统，想请教下为什么用磷酸做流动相，有没有其他类似的实际可以用，磷酸做流动相通常用于什么检测？

反向液相色谱，c18,纯化多肽，纯化的溶液里有dmf。想问问流动相的配制：AB相的配制可以都不加TFA吗？

请教一下,本人做一样品,流动相里有三乙胺,三氟乙酸,十二烷基硫酸钠,水,乙腈,但现在我进流动相后总会出三个杂质峰,谁有好办法帮忙解决下.如何才能去掉流动相峰.已用流动相冲多次,换多台机器了,都是有这几个峰.谢谢

平时做沙星时是用四丁基溴化铵+乙腈做流动相的，不过觉得峰不好。就是想问一下大家，还有没有另外一种流动相可能代替四丁基溴化铵？我今天试了用0.05mol/L的柠檬酸，用25cm柱时24分钟出峰（92柠檬酸：8乙腈）。那么大家有用过这流动相吗，讨论一下。

大家好：我现在正在合成对羟基扁桃酸，原料是乙醛酸，两个物质的极性都很大，到液相里出现连峰，一直分不开，流动相甲醇和水的各种比例都试过了，就是分不开，现在请问各位对流动相的配置或者别的方面有没有什么好的建议啊！我用的是C18反相柱。 小弟这里万分感激！

我最近刚刚接触液相，同一种物质检测了5次，每次都是更换了流动相，五次的出峰时间都不同，我想请教大家一下，出峰相差多少可以接受。谢谢！！