多肽标记物

生物活性检测有体外（in vitro）及体内（in vivo）两种路径。in vitro 评价方法包括但不限于酶动力学、结合力测定 而生物层干涉技术（BLI）在这篇文章中被提出是结合力测定的方法之一，特别是靶点明确的多肽药物，比如利拉鲁肽（与GLP-1受体）和特立帕肽（与PTH受体）。Octet分子互作仪（原ForteBio）是基于生物层干涉技术（BLI）的实时非标记互作检测设备，具有高通量、高灵敏度、使用简单、成本低等优点，已成为多肽药物研发过程中不可或缺的设备之一。

多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，通常由10~100个氨基酸分子组成，其连接方式与蛋白质相同，相对分子质量低于10000。多肽普遍存在于生物体内，迄今在生物体内发现的多肽已达数万种，其广泛参与和调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动，在生命活动中发挥重要作用。

多肽合成方法可分为生物合成法及化学合成法，随着基因重组技术的发展，多肽生物合成法除传统的天然提取法，酶解法、基因重组法也在多肽合成逐步得到应用；多肽化学合成法通过氨基酸之间的缩合反应来实现氨基酸连接延长，以获得特定序列的多肽。化学合成法具有研发周期短、可快速生产等优点，逐渐成为主流。在多肽药物的开发和生产过程中需要对产品和工艺相关杂质进行检测和评估，以保证药物质量可靠并且安全有效；目前主要的参考指南有国家药品监督管理局（NMPA）药品审评中心于2023年2月颁布的《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则（试行）》以及之前发布的《制备工艺和过程控制对合成多肽药物有关物质的影响》、《合成多肽药物质控及杂质谱研究》等，涉及到氨基酸的组成和序列分析、多肽的分子量、含量、纯度和结构表征等质控分析，可利用HPLC、LC-MS、Q-TOF、MALDI-TOF、Edman降解法等进行相关检测分析。

新近研究表明，通过质谱法已建立了多种独特的血清多肽组表达模式库，而血清多肽组表达模式与临床症状密切相关。阐明血清中多肽组成的序列特征及其产生机制，将有助于将血清多肽组表达模式作为可靠的疾病标识而更加广为接受。我们采用一种高度优化的多肽提取方法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行的研究表明，仅靠一套有限的血清多肽表达模式（一个特征），即可将3 种类型的实体肿瘤患者和未患癌的对照受试者准确地区分开来。61 个特征肽段的靶序列识别结果显示，这些肽又可分为密切相关的几个簇，大多数是由于造成肿瘤类型特异性差异的胞外蛋白酶活性影响了体内结合蛋白质的水解过程和补体的降解过程而产生的。这一特征肽段家族成员虽少、但功能极为强大，可精确预测前列腺癌样本的分级，其准确度与其他标准方法可比。总之，本研究表面，疾病的肽段标记物表达谱和蛋白酶活性的差异之间存在直接的相互关联，而且，本文中所描述的几种肽段表达模式在临床上有望用作癌症检出和分级的标记物，同时我们的发现对未来的肽段生物标记物的研究也具有重要的提示意义。

三氟乙酸常用于多肽的合成、纯化过程，多肽药物中三氟乙酸含量是一项重要的监测指标。本文建立了离子色谱法测定合成多肽药物中三氟乙酸残留含量的方法，获得了满意的结果。本法还可同时测定合成多肽药物中乙酸根、氯离子、磷酸根、硫酸根等无机阴离子。

分子量是评价聚乙二醇修饰多肽或重组蛋白药物的重要指标，本文展示了应用MALDI-TOF检测聚乙二醇化多肽药物及用于修饰反应的多肽、聚乙二醇等原料分子量的应用案例，本方法操作简便、分析速度快，可作为多肽药物修饰产物确认、原料质量控制的参考。

人组织多肽抗原(TPA)检测试剂盒人组织多肽抗原(TPA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人组织多肽抗原(TPA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人组织多肽抗原(TPA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人组织多肽抗原(TPA)抗原、生物素化的人组织多肽抗原(TPA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人组织多肽抗原(TPA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人胃泌素释放多肽(GRP)检测试剂盒人胃泌素释放多肽(GRP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人胃泌素释放多肽(GRP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人胃泌素释放多肽(GRP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人胃泌素释放多肽(GRP)抗原、生物素化的人胃泌素释放多肽(GRP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胃泌素释放多肽(GRP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

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多肽药物是介于大分子蛋白/抗体类药物和小分子药物之间的一类重要的药物分子，因其生物活性高、靶向专一性高、选择性高、毒副作用低等优点而被广泛应用于疾病治疗领域[1]。ThermoObitrap因其超高的分辨率，质量轴稳定性，已经广泛应用在了多肽药物结构表征中。Obitrap 作为高分辩还具有极高灵敏度和线性范围，因此也被越来越多的应用到药物的定量研究中。PTH 是甲状旁腺主细胞分泌的由84个氨基酸组成的多肽类激素，其对于维持钙磷代谢的稳定起着至关重要的作用。特立帕肽（SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF，4117.7 Da）是一种人工重组合成的人PTH 1-34多肽，是第一个被美国食品药品监督管理局（Food and DrugAdministration，FDA）批准的抗骨质疏松性骨折的骨合成药物。

随着越来越多的肽类药物的研发和上市，从临床前药物开发阶段获得药代动力学信息，到药物临床研究，再到治疗药物监测阶段，都离不开生物样本中多肽的定量分析技术。此外，具有诊断潜力的内源性肽类生物标志物的定量，以及蛋白特征肽段分析也依赖于多肽的生物分析技术。艾杰尔飞诺美提供多肽生物样本的制备技术，以及从小分子到大分子的色谱柱解决方案，助力多肽生物分析方法的高效开发。

本文使用岛津LCMS-Q-TOF液质联用系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种定性检测多肽类药物生长抑素中聚集体的方法，使用岛津LabSolutions Insight Explore软件对色谱峰进行解析，并对多电荷结果进行解卷积分析。实验结果显示，该方法可以分离多肽类药物生长抑素的主成分和聚集体，分离出的4个色谱峰分别为生长抑素的四聚体，三聚体，非共价二聚体和共价二聚体。

Orbitrap高分辨质谱仪具有高灵敏度、高分辨率、高准确度和高稳定性的优势性能，与液相色谱联用可实现对多肽药物氨基酸序列的确证、氨基酸修饰的定性和定量，多肽药物杂质的鉴定和定量，以及多肽药物的动力学研究。本实验采用在线多组分中心切割二维除盐方法，一次进样完成了多目标杂质的在线除盐，显著的改善了分析效率，与Orbitrap高分辨质谱联用，强强联合，提高了杂质鉴定的通量和准确度。

人多肽YY(Peptide-YY)检测试剂盒人多肽YY(Peptide-YY)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人多肽YY(Peptide-YY)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人多肽YY(Peptide-YY)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人多肽YY(Peptide-YY)抗原、生物素化的人多肽YY(Peptide-YY)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人多肽YY(Peptide-YY)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)检测试剂盒人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)抗原、生物素化的人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

本文采用岛津生物惰性液相系统结合尺寸排阻色谱法，开发了一种检测多肽药物中共价结合二聚体和非共价结合二聚体杂质的新方法。优选的洗脱液和SEC色谱柱可以实现多肽主成分、共价结合二聚体和非共价结合二聚体的有效分离，分离度大于1.5。连续六次进样，三个目标峰保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别在0.024~0.025%和0.048~0.130%之间，重复性良好。多肽药物强制性降解实验样品中检出非共价结合二聚体，峰面积百分比为6.934%。

然而，多肽药物也有不可忽视的缺点，其化学与生理稳定性都较差，容易受到体内蛋白水解酶的降解，给多肽药物的研发带来了很多挑战。本文将从多肽类药物的药代动力学层面进行浅析，了解多肽类药物体外ADME研究策略，确定多肽类药物基础体外研究模型，助力多肽类药物早期研发！

本文采用采用离子色谱方法抑制电导检测，简单灵敏地测定出多肽中哌啶的含量, 检测限可达1.0mg/kg方法操作简单便捷，且重现性好，回收率高，适用于此类样品分析。

多肽类药物作用于体内各系统和细胞的生理功能，有良好的疗效和安全性。与传统的药物相比，多肽药物具有活性显著，特异性较强；与蛋白大分子药物相比，多肽类药物免疫原性相对较小，单位活性更高，且其合成和纯化也更容易。因此多肽药物临床治疗领域应用较多，其主要治领域包括治疗肿瘤、糖尿病、骨质疏松、疫苗等等。随着多肽药物的迅猛发展，多肽药物的分析和纯化需求也逐年递增。依利特推出的多肽药物的分析和纯化一站式解决方案，供相关人员参考使用。

The presence of hidden nut and tree nut allergens in foods can result in serioushealth issues, necessitating a method capable of detecting and quantifying them attrace levels using a single robust assay. To find specific peptide markers that can beused to determine the presence or absence of specific nuts in food, proteins uniqueto11 tree nuts (almond, pecan, cashew, walnut, hazelnut, pine nut, brazil nut,macadamia nut, pine nut, chestnut, and coconut) and peanut were enzymaticallydigested and analyzed using accurate-mass Q-TOF LC/MS. Each marker peptide wasselected by establishing its presence in raw and roasted nuts, processed andunprocessed food, abundance (sensitivity), sequence size, and uniqueness to a specific nut. The National Center for Biotechnology Information (NCBI) nr databasesearches were performed to confirm peptide identities, and to ensure that themarker peptides chosen were not present in other nuts or common food ingredientssuch as barley, corn, rice, soy, and wheat. Two marker peptides were selected foreach tree nut, and four were selected for peanuts. Analysis of peptide digests fromgrains such as barley, corn, rice, quinoa, soy, and wheat did not present interfer-ences. The peptide markers were tested to determine if they could be used toscreen common foods for the presence of the 11 tree nuts and peanut at sub-ppmlevels. Foods containing nuts as listed on the label showed a response for the cor-rect nut. Foods processed using equipment also used to process other tree nuts orpeanuts were in certain cases found to contain these other nuts.

本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用测定大鼠血浆中多肽类药物BNP类似物的方法。血浆样品经蛋白沉淀处理，再经岛津GL离心固相萃取小柱Mono Spin C18进行离心固相萃取，可在6.0 min内快速、准确地测定其中的BNP类似物。该方法采用奥曲肽作为内标定量，方法最低定量限5 ng/mL，BNP类似物线性范围为5~2000 ng/mL，相关系数大于0.997，线性良好。低、中、高浓度质控样品，每个浓度的样品平行处理6份， 其精密度与准确度分别在1.98～6.95 %与87.1~112.7%之间，方法精密度和准确度良好。不同浓度质控样品回收率在93.3%~111.1%之间，基质效应因子在89.1%~98.9%之间，内标归一化基质效应因子在93.4%~103.7%之间。空白大鼠血浆不干扰最低定量限的准确测定，目标物BNP类似物和内标奥曲肽之间无相互干扰，方法选择性良好。高浓度样品（2000 ng/mL）分析完成后进行空白样品分析，BNP类似物和内标奥曲肽的通道中均没有明显的目标化合物干扰。该方法灵敏、稳定，可以用于血浆中新型多肽药物BNP类似物的定量测定。

本应用介绍了一种代谢组学方法，用于分析白茶中的非挥发性化合物，从而寻找白茶陈化的可能化学标记物。研究采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪与Agilent 6540/6545 Q-TOF LC/MS 进行原始数据的采集，然后对数据进行提取和统计分析。本应用采用安捷伦的 MPP 软件作为主要的化学计量学软件进行数据统计分析。结果表明，随着陈化时间的延长，白茶中的某些化合物发生了显著变化，初步鉴定得到 125 种此类差异化合物。在这些初步鉴定得到的化合物中，有 7 种是储存过程中产生的新化合物，被鉴定为 8-C N-乙基-2-吡咯烷酮取代的黄烷-3-醇 (EPSF)。EPSF 的含量随着储存时间的延长而增高，其前体物质茶氨酸和黄烷-3-醇的含量则随之减小，表明 EPSF 可能为长期储存白茶中的标记化合物。

94%）的多肽产品，为此类小分子多肽样品的分离纯化提供了一种高效、快速且成本低廉的解决方案。

本文将比较使用无标记细胞分析技术进行细胞计数与使用传统的荧光染料标记细胞核和整个细胞进行计数的区别。同样展示出如何通过无标记细胞分析技术来替代荧光染料标记的方法来获得化合物处理细胞后的IC50曲线。

通过结合使用高精度质谱仪（MSn ) 与多元统计分析和公式预测工具对代谢生物标记物进行搜索生物样品中像代谢产物，包括在血液和组织中的内源性代谢物和药物等低分子量化合物，都是非常重要的候选化合物。LCMS-IT-TOF 高效液相色谱质谱仪可提供多种代谢物的高度精确质量信息。该系统结合了通过优化的LC系统的分离与高性能的混合（四极离子阱（QIT）/飞行时间 （TOF））质谱仪。以下为通过使用LCMS-IT-TOF对患有II型糖尿病的老鼠模型（Zucker鼠）血浆中生物标记物的分析。预处理后的样品由LCMS-IT-TOF进行分析，使用多元分析软件对主成分的分析用来确定正常型与患有II型糖尿病老鼠的差异。

常见的组成多肽的氨基酸有20种，根据其极性和酸碱性可以分为以下几组：非极性（疏水）、极性（不带电荷）、酸性以及碱性（参见图1）。在一条多肽序列中，如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸（图1中粉红色标出部分），如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等，那么该多肽可能具有较强的极性，易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中，若采用普通的C18分离柱，将会发生疏水坍塌现象（具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》）。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化，在本案例中，利用某强极性多肽作为样品，在C18AQ柱上进行了分离纯化，获得了可用于下一步研究的目标产物。

多肽分离是生物药物表征过程中至关重要的一步。肽谱分析在药品开发中作为主要的质量控制 (QC) 步骤，其中包括通过酶解生成多肽片段，然后进行反相分离和质谱鉴定。由于蛋白质混合物的蛋白水解消化物固有的复杂性，高效、高分离度的多肽分离显得尤为重要。保留时间和峰面积/峰 高等肽谱分析的质量属性是获得可靠肽谱分析结果的关键。因此，需要采用稳定可重现的 LC/MS 方法严格表征多肽片段，从而可靠地评估分析结果。本研究证明，使用可兼容质谱的 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱以及 含甲酸改性剂的流动相可实现高效的多肽分离。本研究筛选了多种类型的样品用于评估多肽分离的色谱柱性能。结果表现出优异的保留时间、峰面积、峰高和半峰宽 (FWHM) 重现性。

人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)检测试剂盒人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)抗原、生物素化的人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

前言使用液相色谱/三重四极杆质谱仪对蛋白质进行常规的高通量定量分析时，我们将多肽作为相应蛋白质的替代物。选择独特的多肽以及适合每种目标多肽的MRM 离子对是分析成功的关键步骤。考虑到仪器质量数范围限制，分析时通常不会选择具有高 m/z 母离子或子离子的多肽。但是，若要解决生物学问题，此类多肽也许能提供关键信息，甚至可能是唯一的分析选择。此类例子包括具有大型疏水性跨膜结构域的膜蛋白、带有多种翻译后修饰结构的蛋白质，以及内源性多肽等等。

CEM 的微波多肽合成仪可与 HT 自动树脂装载配合，允许用户排列并自动连续合成多达 24 个多肽。对于队列中的每个多肽，成批的单个树脂被预加载到 HT 上，然后自动转移到 Liberty 合成仪进行肽合成。