冻存

细胞冻存是细胞培养的关键步骤，一般推荐的冻存液比例为：1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态良好的细胞进行冻存处理，小编实验室有一个秘密配方，就是10%DMSO和90%的纯血清，这个冻存液有一些奢侈，但是对于一些比较脆弱的细胞，或者是一些冻存条件比较差的实验室（例如没有-80冰箱）有非常良好的效果。除此之外和大家分享六大注意事项1、错误的时机：细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。解决：最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。2、细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。解决：离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）。3、盖子不紧：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。解决：选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别）。4、单薄的冻存盒：放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。解决：选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）。5、-80度太久：放在－80度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）解决：尽快转入液氮。6、液氮不足：液面不能漫过所有细胞。解决：定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下。

细胞冻存是细胞培养的关键步骤，一般推荐的冻存液比例为：1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态良好的细胞进行冻存处理，小编实验室有一个秘密配方，就是10%DMSO和90%的纯血清，这个冻存液有一些奢侈，但是对于一些比较脆弱的细胞，或者是一些冻存条件比较差的实验室（例如没有-80冰箱）有非常良好的效果。除此之外和大家分享六大注意事项1、错误的时机：细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。解决：最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。2、细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。解决：离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）。3、盖子不紧：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。解决：选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别）。4、单薄的冻存盒：放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。解决：选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）。5、-80度太久：放在－80度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）解决：尽快转入液氮。6、液氮不足：液面不能漫过所有细胞。解决：定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下。

各位，我想请教一下，就是菌种的保存，用甘油保存，是否一定要用冻存管？冻存管是什么样的啊？里面一定要有小磁珠吗？还可以用什么其他的东西代替吗？多谢

请问各位有经验人士:做农残的标准中经常写着"将样品捣碎均匀后与-18℃保存"如果今天制备的样品,明天才测,那么冻存-18℃的样品怎么取样,是待其解冻之后吗?一般自然常温解冻过程也要花时间的,这个时间内样品中目标物不会受到影响吗?请问怎样的处理方式更合适?

生物冻存容器是用于保存冷冻细胞、组织和生物样品的设备。为了保证冷冻样品的质量和稳定性，温度控制是至关重要的。[b]　　温度范围[/b]　　生物冻存容器的温度通常在-196°C至-80°C之间。其中，-196°C是液氮的沸点，也被称为“液氮温度”，是最低的温度，适用于长期保存、维护和传递细胞系和生物样品。而-80°C是常用的冷冻温度，适用于短期或中期保存和运输样品。在选择温度范围时，需要根据样品的特性和需求进行考虑。[b]　　温度分布[/b]　　生物冻存容器内部的温度分布也是决定样品质量和稳定性的重要因素。温度均匀性可以通过容器设计、冷却系统和位置选择等因素来实现。一般来说，温度均匀性应控制在±1°C以内，以确保样品在整个保存过程中温度稳定。　[b]　温度控制方式[/b]　　生物冻存容器的温度控制方式通常分为两种：机械式和电子式。机械式温度控制器采用机械装置和热敏元件来控制温度，具有成本低、操作简单等优点，但精度相对较低。而电子式温度控制器则采用数字显示屏和传感器等电子元件来控制温度，具有精度高、稳定性好等优点，但成本相对较高。在选择温度控制方式时，需要根据实际需求和预算进行考虑。[b]　　[url=http://www.cnpetjy.com/]液氮容器[/url]设计[/b]　　生物冻存容器的设计也是影响温度控制的重要因素。一方面，容器应该具备良好的绝热性能，以减少温度波动和能源消耗。另一方面，容器内部应该设计合理，以便于样品放置和取出，并且能够保证样品与容器内壁之间的距离，避免样品直接接触冷却介质。

液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。3、步骤：（1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。（2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。（3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。（4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。4、注意事项：（1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80～90％致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。（2）细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力；在-70度可保存数月。（3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micron　FGLP　Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。（4）冷冻保存之细胞浓度：①normal human fibroblast:1～3×106cells/ml②hybridoma:1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去。③adherent tumor lines:5～7×106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma解冻后须较高之浓度，而HeLa只需1～3×106cells/ml④other suspensions:5～10×106cells/ml，human lymphocyte须至少5×106cells/ml。（5）冷冻保护剂浓度为5或10％DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。（6）冻存可用10%～90%的血清，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积（4度时），复苏存活率在80%～90%以上，对原代培养细胞，以90%血清冻存更为有效。二、冷冻细胞活化1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、步骤：（1）操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。（2）自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。（3）将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。（4）取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。（5）取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀，放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。（6）解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。（7）若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。三、细胞计数与存活测试1、原理：（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。（3）存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。2、材料：0.4%w/v trypan blue(GibcoBRL15250-061)；Erythosin bluish stain；取0.1gram Erythrosin bluish(SigmaE-9259)及0.05gram preservative methyl paraben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球计数盘及盖玻片(Hemocytometerandcoverslip)；计数器(counter)；低倍倒立显微镜；粒子计数器(Coultercounter,CoulterElectronics)。白细胞稀释液（4%乙酸溶液）。3、步骤：（1）取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue(orErythrosinbluish)等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。（2）取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色-Erythrosin bluish)。（3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypanblue等体积混合)，最后乘以104，即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。注：4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml；每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml计数板计数时，最适浓度为5～10×105细胞/ml，此范围外计数误差偏大。高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。5、范例：T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2；细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106；细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106存活率：225/243﹦92.6%

细胞冻存是长期保存、运输和共享生物材料的重要手段，对于各种生物医学研究领域具有重要的作用。然而，不同的细胞冻存方法可能会影响细胞的质量和存活率。本文将探讨不同厂家提供的细胞冻存方法，并分析它们对细胞质量的影响。　　厂家差异及其对细胞质量的影响　　目前，市面上有许多细胞冻存试剂盒供应商，其中一些主要的厂家包括Thermo Fisher Scientific、Sigma-Aldrich、Qiagen和Promega等。这些厂家提供的细胞冻存试剂盒都有其独特的优点和缺点。　　以细胞存活率为例，Thermo Fisher Scientific公司提供的CryoStor冻存剂的细胞存活率达到了98.5%，而Sigma-Aldrich公司提供的CryoSure-DMSO冻存剂的细胞存活率仅为85%。这表明，不同厂家提供的细胞冻存试剂盒对细胞存活率的影响存在差异。　　此外，不同的冻存方法也可能影响细胞的质量。例如，在使用Thermo Fisher Scientific公司的CryoStor 冻存剂时，冷冻速率、先冷冻后复温的步骤和使用的液氮均对细胞的冻存质量产生影响。另外，Sigma-Aldrich公司的CryoSure-DMSO冻存剂需要在冷冻过程中将细胞悬浮于冻存剂中，并使用20%的DMSO作为保护剂，以确保细胞质量。　　因此，选择细胞冻存试剂盒时，需要注意不同厂家提供的细胞冻存试剂盒的差异，以及冷冻的方法是否适合特定类型的细胞。 关注：[url=http://www.yedanguan365.com/]液氮罐[/url] [url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐[/url] [url=http://www.mvecryo.com/]mve液氮罐[/url]

目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。二、细胞冻存操作步骤：(1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。(2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时(此步可省略)，再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

[color=#444444]我们做常温糕点，没有速冻设施和冻库，产品存储条件能写冷冻储存么，我必须在多长时间内把常温产品冻上才合适？谢谢[/color]

这个帖子里讨论到样品储存的问题：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130107/4499140/有个疑问就是，冻存管为什么能用到超低温，甚至液氮里呢？

如题，我将配好的苯、四氯化碳DMSO溶液，冰箱冷藏冻存，会影响浓度不？装在agilent气相液体进样瓶中，瓶盖旋得很紧，每瓶只装了1ml。试过，只知瓶子冻不坏。dmso冻住后，里面的苯、四氯化碳何去何从？

用黑曲霉第2代斜面上的菌株如何制作甘油冻存管？20%的甘油里面需要有0.05%的吐温80吗？配制20%的甘油是用生理盐水还是用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液？

血浆加入5%甲酸置于-20℃冻存，化冻后呈果胶颗粒状，求解？是由于ph的改变，一些物质的物理状态发生了变化吗？评论区放照片，特别像果粒橙...

带有ph指示剂的溶液冻存后，颜色会变化，是不是因为冷冻后，H离子的含量发生了变化？

微生物冻干粉再水化后可以储存多久再检测？准备测金黄色葡萄球菌定量检测、需要计数的

请教各位大侠：菌种保藏用冻存管上带二维码的标签用什么设备贴的？

各位好,小弟用的是agilent 1100系的機,軟件是hp chemstation有時候電腦積分的結果就是不太好看, 就手動去積分了.手動積分後的結果可以存嗎? 每次重新開出來也要手動, 始終每次手動的結果都有出入哪....謝謝幫忙

当细胞冻存实验室的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐突然停电时，可能会导致细胞样本的损失，这是一种紧急情况，需要立即采取行动。在这种情况下，以下措施可以帮助最大限度地保护细胞样本的完整性和存活率。　　迅速检查罐内液氮水平　　立即检查[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐内的液氮水平。保持内部液氮充足，这样即便是停电也不会受到影响。只能说是在数传传输或者监控上受到 一定影响。[img=[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐,535,359]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291156457455_4069_3312634_3.jpg!w535x359.jpg[/img]　　优化细胞样本的储存条件　　除了转移样本外，还需要考虑优化细胞样本的储存条件，以尽量减少在停电期间的损失。这包括尽量减少容器的开启次数，以减少温度波动，以及保持容器封闭并放置在阴凉处，以防止温度上升。此外，可以考虑使用保温材料包裹容器，进一步减缓温度变化的速度。[img=mve液氮罐,612,408]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291157084887_8186_3312634_3.jpg!w612x408.jpg[/img]　　制定停电应对计划　　在长期运行的实验室中，制定停电应对计划是至关重要的。这包括定期检查设备的状态，确保备用液氮罐的充足以及培训实验室人员如何应对突发情况。定期的预防性维护和培训可以大大提高实验室对紧急情况的应对能力，并减少潜在的损失。[b][url=http://www.mvecryoge.com/1626.html]液氮罐使用消毒液消毒可行吗?[/url][url=http://www.mvecryoge.com/1625.html]液氮罐内部的小杂质怎么清理比较好？[/url][url=http://www.mvecryoge.com/1624.html]网上购买液氮自己在家冷冻可行吗[/url][url=http://www.mvecryoge.com/1623.html]定制容器类液氮罐厂家推荐[/url][/b][img=,488,303]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291159028695_2143_3312634_3.jpg!w488x303.jpg[/img] [url=http://www.yedanguan1688.com/]定制液氮罐[/url]

俄科学家称超大质量黑洞中存更先进地外生命http://www.people.com.cn/mediafile/pic/20111009/93/15700973533005149301.jpg俄罗斯宇宙学家维切列夫-道库恰耶夫(Vyacheslav Dokuchaev)称，最终伴随着人类的技术发展，我们能够生活在超大质量黑洞之中，但目前超级文明的外星人可能已存在于黑洞，它们能够打败地球人类。　　据英国每日邮报报道，目前，俄罗斯宇宙学家维切列夫-道库恰耶夫(Vyacheslav Dokuchaev)称，最终伴随着人类的技术发展，我们能够生活在超大质量黑洞之中，但目前超级文明的外星人可能已存在于黑洞，它们能够打败地球人类。　　尽管超大质量黑洞被认为是太空中最具破坏性，完全不适宜生命居住，但仍有可能生命体存在于超大质量黑洞之中。道库恰耶夫表示，这与科学分支有点儿相似，如果真有生命存活于超大质量黑洞中，它们将进化成为星系中最先进的文明。　　超大质量黑洞具有强大的引力作用，可吸引任何物体，其中包括光，迄今未发现能够脱离“黑洞表面”的物质。但是俄罗斯科学院莫斯科核研究学会的道库恰耶夫表示，最新研究显示在某些类型的黑洞中可能存在着高级文明的证据。

小白又来咨询问题-我们做蔬菜水果的农残检测，在样品打碎后冷冻在冰箱里最多能存多长时间？存多长时间能不影响实验结果？还有就是，不同的蔬菜水果需要打碎到什么程度？

[color=#444444]帮朋友咨询问题-做蔬菜水果的农残检测，在样品打碎后冷冻在冰箱里最多能存多长时间？存多长时间能不影响实验结果？还有就是，不同的蔬菜水果需要打碎到什么程度？[/color]

标准品的贮存不同的标准品应根据其理化性质、贮存要求的不同选择适宜的贮存环境和条件，分别置于规定的位置。常见的标准品保存方法常温保存：通常用于化学性质比较稳定的标准品，建议保存于干燥阴凉的地方。+4度冷藏：用于常温下不是很稳定的物质，保存于冰箱冷藏室。-20度冷冻：用于化学性质不稳定，常温下容易分解的物质。-80度冷冻：一些具有活性的物质，需要保存于特定的-80度的冰箱。

在植物样品中，水稻的叶片因含有较多硅，故比较难磨。即便是用机械研磨设备，有时也不容易研细，可以说如果水稻叶片如果研好了，草本植物的叶片就都没啥大问题了。我们是通过在某省农科院的实验室反复试验，得到以下条件提供参考： 1 将离心管编号，对应编号将相应的水稻叶片截成1cm左右的小段，每个离心管中放3段，用镊子夹住中间位置，放入管底。2 分装珠子：内侧两排装2颗5mm珠子和5颗3mm珠子；外侧两排装1颗5毫米珠子和6颗3mm珠子。3 冷冻：将摆好的夹具，放到泡沫盒中，加液氮冷冻，3-5分钟，充分冷冻夹具及管内样品。4 *转速与时间设定：1500转/分钟 3min5 研磨：在上夹具时，要注意一是要带上厚一点的手套，防止被液氮冻伤；一是要迅速，且要保证螺栓拧紧，卡上保险扣。然后，启动研磨。6 取下夹具，使整体离心管盖子向上，在桌面上拍一拍，使样品粉末沉落管底，进行下一步实验。*目前研磨仪的速度可以达到更高，但考虑离心管材质差异，建议一开始不要设定太高的速度，根据实际情况调整。感谢大家的积极回复，虽然没有像样的照片，但我还是很佩服各位的见识，正如“雾非雾”所说，刚研磨出的样品就是粉末状的，细度比咱们平时冲的豆奶，芝麻糊之类的粉末更细一点，但由于在常温下很容易化冻，如果不抓紧处理，这种粉末很快就会变成“菜泥”状，就是给宝宝吃的那种蔬菜泥。 另外其实就像雾非雾所说，很多实验室也是将样品经低温冷冻，一般是-80℃，这种低温对样品中温度敏感的成分保护已经足够了，但浸液氮的作用除了降温还有一个重要的作用就是脱水，使样品变干变脆，研磨过程中研磨珠与样品进行刚性作用，就像铁锤砸石头，作用力完全被样品吸收，才会被打得粉碎。以前像水稻叶片这种样品之所以不好磨，就是因为叶片本身比较韧，低温冻过之后变蔫变软，研磨珠有劲使不上。 目前我们在植物样品的研磨上获得了不少的经验，下一步还会在其他类型的样品上下功夫，当然，在不透露更多机密的情况下，我会拿来和大家分享。

[b]　　细胞储存液氮罐有哪些常见问题?[/b]　　1. 液氮泄漏：由于液氮的低温特性，液氮罐可能会发生泄漏。泄漏会导致液氮罐内的温度上升，从而影响细胞样品的保存质量。　　2. 结霜过多：在液氮罐内频繁开启和关闭时，可能会导致罐壁结霜过多，影响细胞样品的保存效果。　　3. 罐口密封不严：如果细胞储存液氮罐的罐口密封不严，空气和水分可能会进入罐内，影响细胞样品的保存质量。　　4. 细胞样品冻结：如果液氮罐内的温度过低或未能均匀冷却，细胞样品可能会被过度冻结，导致细胞死亡或质量下降。[b]　　如何解决细胞储存液氮罐常见问题?[/b]　　1. 液氮泄漏：定期检查液氮罐的密封性能，确保无泄漏现象发生。如果发现泄漏，需要及时修复或更换受损部件。　　2. 结霜过多：减少频繁开启和关闭液氮罐的次数，避免罐壁结霜过多。若结霜现象已经发生，可以使用专门工具清除结霜，保证罐壁干燥。　　3. 罐口密封不严：定期检查罐口密封圈的状态，确保其完好无损。如有损坏，及时更换密封圈，确保罐口密封性良好。　　4. 细胞样品冻结：在存放细胞样品前，先将液氮罐内的温度均匀冷却至适宜的范围。此外，可以根据细胞样品的特点，选择合适的冷冻液进行保存，以降低细胞冻结的风险。[url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐[/url]　　[b]其他需要注意的事项[/b]　　1. 定期检查液氮罐的液位：液氮罐内的液位应保持在适当范围内，避免过高或过低。定期检查液位，并根据需要添加或排除液氮。　　2. 正确使用细胞冻存管：选择质量好的细胞冻存管，确保其密封性良好，以防止细胞样品受到空气和水分的污染。　　3. 定期清理液氮罐：定期清理液氮罐内的污垢和杂质，保持罐内干净整洁。清理时应注意安全，避免直接接触液氮和使用有害化学物质。　　4. 避免频繁开启和关闭液氮罐：频繁开启和关闭液氮罐会导致温度变化，影响细胞样品的保存效果。因此，在使用过程中应尽量减少开启和关闭液氮罐的次数。　　细胞储存液氮罐是保存细胞样品的重要设备，但在使用过程中常会遇到一些问题。通过定期检查液氮罐的密封性能、控制结霜、保证罐口密封性和正确保存细胞样品，可以有效解决液氮泄漏、结霜过多、罐口密封不严和细胞样品冻结等常见问题。此外，定期检查液位、正确使用细胞冻存管、定期清理液氮罐和避免频繁开启和关闭液氮罐也是需要注意的事项。只有正确使用和维护细胞储存液氮罐，才能保证细胞样品的长期保存质量和稳定性。

请问各位热心大神，用甘油保存第二代菌种的话，菌液与甘油的比例是多少啊？你们一般用几毫升的冻存管的？

1 内容1.1 化学试剂储存规定1.1.1 质量检验室化学试剂贮存环境1.1.1.1 质量检验室化学试剂应单独贮于专用的药品贮存柜内。贮存柜应阴凉避光，防止由于光照及室温偏高造成试剂变质、失效。1.1.1.2 化学试剂贮存柜应设在安全位置，室内严禁明火，消防设施器材完备，以防一旦事故发生造成伤害和损失。1.1.1.3 盛放化学试剂的贮存柜应用防尘、耐腐蚀、避光的材料制成，取用方便。1.1.1.4 化学性质与防护、灭火方法相互抵触的化学危险物品，不得在同一柜或同一储存室内存放。1.1.1.5 危险品应贮存于专柜中。1.1.2 质量检验室化学试剂的贮存1.1.2.1 化学试剂贮存由专人负责。1.1.2.2 保管员应由具有一定的专业知识，具有高度责任心的专业技术人员担任，保证按规定要求贮存化学试剂。1.1.2.3 质量检验室操作区橱柜及操作台上，只允许放规定数量的化学试剂，不许超量存放。多余的试剂须在规定的贮存柜中贮存。1.1.2.4 检验中使用的化学试剂种类繁多，须严格按其性质（如剧毒、麻醉、易燃、易爆、易挥发、腐蚀品、贵重品等）和贮存要求存放。——分类：一般液体、固体分类。每一类又按有机、无机、危险品、低温贮存品等再次归类，按序排列，分别码放整齐，造册登记。——贮存：易潮解吸湿、易失水风化、易挥发、易吸收二氧化碳，易氧化、易吸水变质的试剂，需密塞或蜡封保存。见光易变色、分解、氧化的试剂应避光保存。爆炸品、剧毒品、易燃品、腐蚀品等应单独存放。高活性试剂应低温干燥保存。4.1.2.5 试剂应包装完好，封口严密，标签完整，内容清晰，贮存条件明确。1.1.2.6 试剂发生颜色变化，浑浊等现象时，须立即停止使用。1.1.2.7 保持室内清洁、通风、温湿度正常，保证贮存条件符合要求。1.1.2.8 每月检查一次消防灭火设施及器材，保证可随时开启使用。1.1.3 试剂的贮存1.1.3.1 配制试剂一般在实验操作区内保存，保存条件略低于化学试剂贮存室，因而其管理尤为重要。除执行化学试剂贮存要求外，应特别注意外观的变化。1.1.3.2 由使用人员负责保管。如发现异常不得使用，须重新配制。1.1.3.3 注意室内通风和避免阳光直射。1.1.3.4 试剂应密闭保存，瓶口或盖毁坏应及时更换。1.2 化学试剂的使用规定1.2.1 不了解试剂性质者不得使用。1.2.2 使用前应辩明试剂名称、浓度、纯度级别、生产厂家、牌号、批号，是否过使用期限。无瓶签或瓶签字迹不清、过期试剂不得使用。1.2.3使用前观察试剂形状、颜色、透明度、有无沉淀等异常情况。变质试剂不得使用。1.2.4 按使用量取用，用剩余的试剂不得倒回原试剂瓶。1.2.5 注意保护瓶签，避免试剂污染瓶签。1.2.6.3 瓶口—勿敞开太久，以免灰尘及赃物落入。1.2.7 需冷冻贮存的试剂使用时勿反复冻溶，避免加速试剂变质。应按日用量分装冷冻，按量取用。1.2.8 低沸点试剂用毕立即放回，防止温度升高试剂变质。1.2.9 贮存于冰箱中的试剂应定置码放整齐，用毕归还原处。

随着居民生活水平的提高，巧克力越来越多的受到大家的喜爱，从而进入到千家万户的零食盘中。但是，据说，巧克力不易长时间的冷藏或者冷冻。那么，多久算是长时间呢？你们的巧克力一般都是怎样放置的呢？

大家聊聊，贝克曼的冷却液大家都如何储存的呢？我们以前放在冰箱的冷冻室里面储存的，还有其他的储存方法吗？