电泳迁移率实验

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）可以：（1）研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

高效毛细管电泳技术由于具有分离效率高、样品用量少、分析速度快、环境友好、应用范围广以及在很大程度上所显示的高选择性等优点，可用于无机小离子和以有机酸或生物碱为代表的有机小分子的分离分析，并已愈来愈引起分析工作者的关注，成为一种很常见的分析手段。毛细管电泳法可以检测天然水、饮用水和废水样品中的无机阴离子有：氯化物、亚硝酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氟化物和磷酸盐离子。 毛细管电泳法测定无机阴离子浓度是基于阴离子在电场中因不同的电泳迁移率而产生的微分迁移的分离。分析阴离子的定性和定量检测是通过间接检测紫外吸收。

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人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人高迁移率族蛋白1(HMG1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人高迁移率族蛋白1(HMG1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人高迁移率族蛋白1(HMG1)抗原、生物素化的人高迁移率族蛋白1(HMG1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人高迁移率族蛋白1(HMG1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

高效微流电动液相色谱法（eHPLC）是综合了毛细管高效液相色谱（cHPLC）和毛细管电泳（CE）的优势而发展起来的微分离色谱技术，具有柱效高，分析时间短，样品和溶剂消耗低等优点。高效微流电动液相色谱法可根据样品在电场中的分离系数和电泳迁移率的不同，对样品进行分离。 这种微分离技术作为传统HPLC技术的替代品迅速发展，将亚微米材料和eHPLC技术相结合，可通过低压实现线性流速。存在对映异构体的药物，在生物体中的药效、毒性和反应不同。目前，大多数工业液相色谱手性填料柱的直径为3、5和10μ m，也有人对1-2μ m直径的色谱填料的应用进行了大量的研究。但亚微米手性色谱的应用不常见。本公司基于亚微米填料，对手性药物进行分离与检测，为手性药物的拆分和分离提供一个新的思路和方法。

NR/R双向电泳的基本原理是根据LaemmLi的SDS电泳原理设计的，NR指的是非还原相，R指的是还原相。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可将不同相对分子质量的蛋白质按相对分子质量大小分离开来。NR/R双向对角线电泳的第一向是在非还原条件下的SDS电泳，电泳结束后将胶条切下，置于含 2-硫基乙醇的样品处理液中处理，使其-S-S-键被还原断裂，将处理后的胶条置于第二向SDS电泳槽的夹层中凝胶上方，然后进行第二向电泳。电泳结果中凡是即无链内二硫键又无链间二硫键的蛋白质均处于对角线上，凡含有链间二硫键的蛋白质，因二硫键断裂，使两条或两条以上的肽链分开，相对分子质量变小，迁移率加大，而出现在对角线的下方，凡含有链内二硫键的蛋白质，因二硫键断裂，而使肽链松散，迁移率降低，而出现在对角线的上方。

近年来，聚丙烯酰胺脲梯度电泳成为研究蛋白质去折叠与再折叠的非常重要的实验技术之一。脲梯度电泳的基本原理是在常规的聚丙烯酰胺凝胶中加入非离子型变性剂-尿素，使其形成脲浓度梯度。电泳时将脲梯度置于垂直电泳方向，使同一蛋白质样品在连续变化的不同浓度的脲环境中电泳，蛋白质分子随脲浓度变化而发生的结构状态的变化，因而表现出不同的迁移率，最终在显色后的凝胶中呈现出反映蛋白质构象变化的二维图像。

闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA（cccDNA）、线性质粒DNA（L-DNA）和开环质粒DNA（ocDNA）。

LUMEX成功的将毛细管电泳发展成为实验室的常规分析手段，并一直占据该领域的市场领导地位。成熟的仪器、优化的配置、大量的应用方法包集于一体，被用户称为目前性价比最优的毛细管电泳仪。采用毛细管电泳法可以测定天然水、饮用水和废水中的乙酸（醋酸根离子）。该方法是基于样品过滤和稀释后通过毛细管电泳迁移分离后在266 nm处进行分析。样品中乙酸（醋酸盐阴离子）的测量范围为0.01～10000mg/L。分析优势特点：1.高效分离效率(百万级理论塔板数)；2.样品试剂和样品量消耗低；3.极低的分析成本，毛细管柱一般无需更换；4.操作简单便捷，实现快速分析 (5-10分钟)。

LUMEX毛细管电泳法能够快速测定果汁、啤酒、葡萄酒、白兰地、白兰地醇和原料样品中的无机阳离子（钠离子、钾离子、钙离子和镁离子）。毛细管电泳法评价阳离子浓度的方法是基于电场中阳离子迁移率的不同引起的，通过间接检测在254nm处或267nm处测量UV吸收波长进行分析和鉴定。该方法不受氨、锂、锶、钡、锰、铁（II）的阴离子的存在所影响，这对于所分析的饮料来说是非常有用的。

LUMEX毛细管电泳法可以测定软饮料（果汁，汽水饮料）和酒精饮料（葡萄酒，啤酒）中的有机酸含量。该方法是基于电场中有机酸阴离子的迁移和分离的迁移率不同，通过检测溶液在254 nm波长处的光密度来识别和定量分析所分析的组分。无机阴离子（氯化物、亚硝酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氟化物、磷酸盐、碳酸盐）、抗坏血酸和防腐剂（苯甲酸和山梨酸）不影响有机酸的测定。 与HPLC法测定饮料样品中的有机酸相比，毛细管电泳有几个优点：1.分离效率高；2.低分析成本；3.没有昂贵的色谱柱；4.分析时间短。

LUMEX毛细管电泳法可以测定软饮料（果汁，汽水饮料）和酒精饮料（葡萄酒，啤酒）中的有机酸含量。该方法是基于电场中有机酸阴离子的迁移和分离的迁移率不同，通过检测溶液在254 nm波长处的光密度来识别和定量分析所分析的组分。无机阴离子（氯化物、亚硝酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氟化物、磷酸盐、碳酸盐）、抗坏血酸和防腐剂（苯甲酸和山梨酸）不影响有机酸的测定。 与HPLC法测定饮料样品中的有机酸相比，毛细管电泳有几个优点：1.分离效率高；2.低分析成本；3.没有昂贵的色谱柱；4.分析时间短。

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建立天然包装材料箬叶及粽米中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸5种黄酮类化合物的高效液相色谱的分析方法。通过测定一次蒸煮、二次蒸煮、不同保存条件等因素对箬叶及粽米中黄酮类化合物含量变化的影响,阐明了不同条件下箬叶中黄酮类化合物在粽子中的迁移规律。结果表明:一次蒸煮后,荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸5种黄酮化合物从箬叶迁移到粽米的迁移率为7.41%~45.18% 二次蒸煮时,在120 min内箬叶中5种黄酮类化合物的迁移率为18.07%~65.94%,特别是在前30 min中,箬叶中黄酮类化合物降低明显,分别占120 min总减少量的51.61%~72.48%,并且二次蒸煮的迁移率大于一次蒸煮。在30 d的保存时间内,箬叶中黄酮类化合物在前15 d减少明显,占总减少量的68.60%~85.50%(除异牡荆苷为0外) 第15天后迁出缓慢 30 d内总迁移率分别为25.90%~64.84%(除异牡荆苷为0外)。随着二次蒸煮时间与保存时间的变化,荭草苷与异荭草苷较迁移缓慢。新鲜保存的方式最有利于异牡荆苷在粽子中迁移,速冻保存最有利于荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、对香豆酸的迁移。异牡荆苷在真空保存和速冻保存时短时间内不发生迁移。

微量白蛋白尿是反映肾小球疾病和损伤的一个非常灵敏的指标，在预示糖尿病肾病方面已使用多年。近年有资料显示，微量白蛋白尿也是非糖尿病患者心血管疾病发病的一个危险因子，收到广泛重视。因此尿液中白蛋白的准确测定就就显得很重要。 毛细管电泳法测定尿液中的白蛋白是基于其阴离子形式在电场中的电泳迁移并通过测量215～220 nm范围内的紫外吸光度而直接检测。在分析之前，样品需要通过超滤膜脱盐或“Sephadex® G-25”柱上进行脱盐处理。

LUMEX毛细管电泳法可以测定软饮料（果汁，汽水饮料）和酒精饮料（葡萄酒，啤酒）中的有机酸含量。该方法是基于电场中有机酸阴离子的迁移和分离的迁移率不同，通过检测溶液在254 nm波长处的光密度来识别和定量分析所分析的组分。无机阴离子（氯化物、亚硝酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氟化物、磷酸盐、碳酸盐）、抗坏血酸和防腐剂（苯甲酸和山梨酸）不影响有机酸的测定。 与HPLC法测定饮料样品中的有机酸相比，毛细管电泳有几个优点：1.分离效率高；2.低分析成本；3.没有昂贵的色谱柱；4.分析时间短。

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实验方法原理:1、碱变性法提取质粒DNA：细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。2、琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳技术（Agarosegelelectroghoresis）是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。凝胶分辨率决定于使用材料的浓度，并由此决定凝胶的孔径。琼脂糖凝胶可分辩0.1——6.0kb的双链DNA片段。琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。它首先利用琼脂糖的分子筛效应，此外，在弱碱性条件下，DNA分子带负电荷，从负极向正极移动。根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同，它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。借助溴化乙锭（EB）能与双链DNA结合的作用，利用EB染色，并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。

首次报道了使用热蒸发界面的微芯片等速电泳 (μ ITP) 与离子迁移谱 (IMS) 的在线耦合。这种组合结合了 µ ITP 的预浓缩能力，然后通过 IMS 对复杂样品中的痕量化合物进行明确鉴定。选择作为模型分析物的短链羧酸首先在 pH 5-6 的不连续电解质系统中通过 µ ITP 进行分离，然后在将它们转移到 IMS 分析仪期间在 130 ° C 下蒸发。对影响分离的样品组分通过蒸发系统的传输的各种参数进行了优化，以最大程度地减少分析物的分散和损失并提高灵敏度。标准溶液中羧酸的以下分析属性： 0.1–0.3 mg L-1检测限，0.4–0.9 mg L -1定量限，从定量限到 75 mg L -1 的线性校准范围，IMS 响应的 0.2–0.3% RSD 和 98–102% 准确度。开发的 µ ITP-IMS 组合的分析潜力在各种食品、药物和生物样品的分析中得到了证明，其中研究的酸是天然存在的。这些包括：苹果醋、葡萄酒、鱼露、唾液和滴耳液。在实际样品中，IMS 响应的 RSD 为 0.3-0.6%，准确度为 93-109%。

离子迁移率谱技术具有高灵敏度（ppb范围）、快速反应（ms范围）、设计紧凑、在大气压下操作以及能够分离异构化合物等优点。在这个简短的报告中，我们展示了IMS对六氟化硫（SF6）的灵敏度和快速反应。

01999) , 检出限(S /N =3)为116 mg/L, 迁移时间和峰面积的相对标准偏差(n =7)分别为214%和318%。用该法测定了功能食品、乳制饮品和饮料等样品中的牛磺酸, 相对标准偏差为017%～317% , 加标回收率为93%～111%。关键词: 牛磺酸 高效毛细管电泳法 柱前衍生 功能食品 饮品

电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。

细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环节。细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。目前人们对恶性肿瘤的研究是多方面的，从癌症的产生到转移，血管供给以及分裂增殖都一直是医学和生物学研究的热点。恶性肿瘤与良性肿瘤的最大区别就在于是否可以对周遭组织进行浸润，结果是形成边界不分明的癌组织，或是进入血管转移到远端（见远端转移）。根据观察可将癌症浸润分为四步。首先癌细胞表面的粘附分子会减少，与周围的细胞彼此分离，被“解除束缚”。同时癌细胞与基底膜的粘附却会增加，这是癌细胞通过增加自身基底面层粘连蛋白（laminin）受体实现的。然后癌细胞会释放蛋白酶，用以降解细胞外基质成分，如Ⅳ型胶原酶，使基底膜受损，产生缝隙。最后是癌细胞阿米巴运动样的迁移，钻过基底膜的缝隙，到达底下的间质组织。癌细胞此后会继续用蛋白酶为自己在间质组织开路，直到血管，然后它会以同样方式进入血管，经血到转移后，又以同样方式出管。因此，癌症的形成与肿瘤细胞的迁移能力密不可分，这也成为了一个诊断和治疗癌症的一个靶点。研究细胞迁移的方法有很多，比如划痕法、实时细胞追踪、Transwell和细胞芯片等，本文将一一介绍现今比较主流的与细胞迁移相关的实验方法。

摘要：本文系统地研究了邻、间、对甲酚三种异构体在毛细管区带电泳中的迁移行为。通过实验研究讨论了缓冲溶液类型、缓冲溶液的pH值、缓冲溶液的浓度和添加剂等因素对三种异构体分离的影响,获得了优化的分离条件。结果表明,在使用未涂层石英毛细管柱(50μm×50cm,有效长度为45 cm),检测波长225 nm,磷酸盐-环糊精-硼砂缓冲溶液浓度30 mmol/L,缓冲液pH值为11.60,分离电压为15 kV的条件下,甲酚三种异构体得到基线分离。关键词：毛细管区带电泳 甲酚 异构体