电荷异构体分析

蛋白质的翻译后修饰常常会影响蛋白质的结构和功能，反映在生物制药工业上，会对药品的安全性和有效性产生重大影响。翻译后修饰常常表现为电荷变异体，因此电荷异构体的分析成为了质量控制的一个关键项。目前常见的电荷异构体分析方法为IEF／cIEF或iCIEF，可以鉴别生物药，对生物药的纯度进行分析，测定电荷异构体的等电点以及各种异构体的分布。但是，等电聚焦或者毛细管等电聚焦存在很多短板，最明显的就是无法大规模制备异构体。美国基因泰克公司的科学家曾经用一种叫做自由流电泳的工具，高分辨率高通量大规模对单抗的电荷异构体进行分离制备，并结合各种分析手段，对每一个异构体进行了深度表征。现分享论文如下，欢迎大家讨论！

[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E5%8D%95%E5%85%8B%E9%9A%86%E6%8A%97%E4%BD%93&zhida_source=entity&is_preview=1]单克隆抗体[/url]在生产及存储过程中会由于抗体分子自身性质、环境应力、储存方式等因素，而发生复杂的[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%BF%BB%E8%AF%91%E5%90%8E%E4%BF%AE%E9%A5%B0&zhida_source=entity&is_preview=1]翻译后修饰[/url]，如氧化、脱酰胺、糖基化、C末端赖氨酸切除、N末端[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%84%A6%E8%B0%B7%E6%B0%A8%E9%85%B8&zhida_source=entity&is_preview=1]焦谷氨酸[/url]化、降解/聚合等，造成抗体在电荷分布方面高度的异质性。电荷异构体的产生会影响抗体药物的结合能力、生物学活性、免疫原性以及结构稳定性等，进而影响抗体药物的[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E8%8D%AF%E7%89%A9%E4%BB%A3%E8%B0%A2%E5%8A%A8%E5%8A%9B%E5%AD%A6&zhida_source=entity&is_preview=1]药物代谢动力学[/url]、安全性和有效性。电荷变化的复杂性常常给评估完整的电荷变化概况带来巨大的挑战。 目前，有多种方式（IEX-HPLC、FFE、icIEF等）对电荷异构体进行馏分收集，从而进一步对产品进行表征。奕安济世生物药业[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%90%86%E5%8C%96%E5%88%86%E6%9E%90&zhida_source=entity&is_preview=1]理化分析[/url]平台具有成熟的IEX-HPLC馏分收集技术，可获得较高的目标收集组分含量，馏分收集纯度1（IEX-HPLC）可达85%以上。收集装置如图1所示，主要是由HPLC和馏分[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E6%94%B6%E9%9B%86%E5%99%A8&zhida_source=entity&is_preview=1]收集器[/url]串联组成。 [img=,564,573]https://pic3.zhimg.com/80/v2-78e01950668b0065dab04fab05ee789c_720w.webp[/img] 图1. IEX-HPLC馏分收集系统 为提高馏分收集效率，前期一般需要在所用原始分析方法（IEX-HPLC）基础上进行优化，在保持主洗脱梯度程序不变的情况下，缩短方法的平衡时间，增加进样质量。其中，在不改变[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E8%BF%9B%E6%A0%B7%E5%99%A8&zhida_source=entity&is_preview=1]进样器[/url]定量环体积基础上，通过叠加多次进样然后一次洗脱的方式以增加进样质量，可大大提高目标组分的收集效率。图2展示了不同进样质量的CEX-HPLC色谱图，单次进样/洗脱的抗体质量可达9 mg。 [img=,1080,607]https://pic3.zhimg.com/80/v2-46cd62d44d255c528a3f8bcee8f154dc_720w.webp[/img] 图2. 叠加进样及收集区域 为了提高目标组分的收集效率，采用进样9 mg的抗体质量进行馏分收集，收集区域如图2（下）所示。将盲收2得到的馏分样品结合二次精制的方式，再经系列换液、浓缩，最终得到的目标收集组分经CEX-HPLC检测图谱如图3所示，馏分收集纯度见表1。其中第二个碱性峰的（Basic Fraction 2）由于发生N端焦谷氨酸环化，导致其收集纯度降低，其余馏分收集样品纯度可达90%以上。 [img=,1080,514]https://pic3.zhimg.com/80/v2-b788cb0eeea822394cc29c8fa691b362_720w.webp[/img] 图3. 馏分收集样品CEX-HPLC检测结果叠图 表1. 馏分收集纯度 [img=,799,344]https://pica.zhimg.com/80/v2-543c0452a10c60c5842ac68703621d3c_720w.webp[/img] 馏分收集样品的纯度达到后续表征研究要求后，需对其进行储存条件进行稳定性评估。以确保其质量在表征研究过程中，未发生明显改变。馏分收集后的样品将进一步用于表征研究，对CQA评估、工艺变更、产品批次间差异、质量标准制定等具有重要的指导意义。

在做日化香精分析的时候总会出现某些物质的异构体，比如佳乐麝香异构体，那么请教下，这个异构体是否要加到佳乐麝香的含量去？我认为是要将异构体加入到原物质上！

求西司他丁手性异构体的分析方法？

本人最近做溴代苯乙酮的邻间对异构体分析，其中邻位和对，间位能很好的分离，但是对位和间位却一点分离迹象都没有，有哪位大侠能指点一下，小弟不胜感激！急急急！！！

拟除虫菊酯类农药，含有手性异构体，哪家机构可以做分析？关键是可以出具方法验证报告的谢谢路过的大侠们

我在分析一种天然提取的同分异构体，我是采用把它们都归一成一个峰，通过改变分析条件，还是把几个异构体分开，来测，都是用异构体的混合物的标准品作标样，没有每一个异构体的标准品。也就是说即使分开了，计算时也还是把几个面积加在一起计算。我想问这两种方法，哪一个可行？如果都可行的话，哪一个最准确。有一个老师给我说，不能将它们分开，分开后，校正系数无法计算，因为分子量相同，只是结构不同，最后无法计算含量。对此我不是很理解，如果标样和试样都能分开的话，计算不是也没有问题吗？咨询一下大家的意见？

各位大侠，请教一个问题，如果我想用GCMS分析4个碳的同分异构体，应该用什么柱子呢？十分感谢

请问如何分析苯甲酸、苯二甲酸（含异构体）、苯三甲酸（含异构体）、苯四甲酸（含异构体）、苯五甲酸、苯六甲酸。用氢离子火焰型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]分析中同分异构体验证和确认？

GC-MS可以分析同分异构体吗？例如二甲苯同系物。 能分析化学结构非常相似的化合物吗？

什么方法可以检测L-精氨酸的异构体？有人做过吗？谢谢各位热心人了……除了毛细管电色谱以外的方法。有人做过精氨酸异构体检查吗？类似的也好呀，小女子不胜感激……

比如说薄荷醇有很多种异构体，L-薄荷醇，DL-薄荷醇，新薄荷醇，异薄荷醇等，左旋蒎烯和右旋蒎烯呢？同分异构体的出峰时间会一样吗？还是会差很远？

最近需要建立一个R-正己基与R-己基异构体的液相分析方法，这几个物质的极性相近，出峰时间相差不大，混合溶液出的峰完全分不开，就是一个肩峰，请问怎么能把这几个物质分离开？

非对映异构体仅仅是构型上的差别，为何理化性质会差别很大呢？而且液相分析时很多非对映异构体用普通的反相就能分开，为什么仅仅一个构型上的差别会导致这么大的理化性质差异呢？求指教

哪位资深专家能有这方面的解释:我们用液相色谱分析的产品中有同分异构体的,比如说烯酰吗啉、苯醚甲环唑这样的样品，我们在分析过程中，它有同分异构体，能同时出两个峰。我现在有个问题是：在分析过程中，是应该让它们完全分开呢？还是不用让它们分开？因为如果它们不是完全分开的话，做出来的含量就低一些；如果分不开的话，甚至就出一个峰，这样的话含量就高。我想知道有没有这方面比较清楚的给解说一下。急需！多谢！

如题，正相分析氯氰菊酯的四个异构体时，峰保留时间不断延后，为什么？谢谢。

不知道大家在分析日化香精时有没有觉得同分异构体很头疼，现在遇到紫罗兰酮各种异构体，大家看看都是什么东西？（付上分析报告）

[color=#444444]请问大家有没有遇到反应生成顺反异构体的问题，在色谱中显示相邻很近的两个峰（可以分开），用内标法该如何进行定量（不知道为具体为哪个顺反异构体且标准物无商售，我的产物为2-甲氧基环己醇）。诸如此类的异构体在色谱中该如何定量分析？[/color]

在分析未知组分时，可以通过归一等方法进行定性定量分析，但是往往会出现很多同分异构体，比如二甲苯，有邻间等四个峰，其总质量可以得出，但是如何根据其面积比，分析出其各个同分异构体的质量比呢？？

各位老师大家好，我现在遇到一个很棘手的问题，就是一对烯烃的异构体没有办法分离，大家有没有什么烯烃异构体分析的经验啊，请指点迷津啊！ 这对烯烃的碳原子在20个左右，就是烯烃的双建的位置不一样，很难分离，液相气相能想到的方法差不多都试过了，还是没有分开。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=43821]分析氯氰菊酯异构体的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]条件与探讨[/url]

大家好，我最近在分析一个含有对应异构体的一个样品，但是怎么分离结果都不是很理想。我采用的分析方法见下：waters2690，流动相：甲醇：60——80，乙酸：40——20，20min，最后改变了几次流动相梯度和时间，但是均存在肩峰。敢问各位大侠是怎么分离对应异构体的？

请教各位大侠,谁知道用于分析甲苯二异氰酸酯同分异构体的方法或色谱柱?请与我联系.多谢!电话:0317-3557630邮箱:hczhangqing@sohu.com

目前大多数研究人员 使用gcms对同分异构体的化合物的定性分析是如何做的 有没有这方面的相关文献 比如算法方面的 谢谢大师指导

[color=#444444]本人正在用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]器分析混合物质，混合物中有三对同分异构体，改变程序升温的条件，分离有所改善，但是三个同分异构体之间的分离度达不到1.5以上，请问该怎么做呢。谢谢！[/color]

异构体和同分异构体的区别

我想分析含有十二烷基苯酚及其同分异构体的化合物，请问用什么色谱柱好呢 ，有哪位做过相关的分析吗？谢谢大家