电荷异构体

蛋白质的翻译后修饰常常会影响蛋白质的结构和功能，反映在生物制药工业上，会对药品的安全性和有效性产生重大影响。翻译后修饰常常表现为电荷变异体，因此电荷异构体的分析成为了质量控制的一个关键项。目前常见的电荷异构体分析方法为IEF／cIEF或iCIEF，可以鉴别生物药，对生物药的纯度进行分析，测定电荷异构体的等电点以及各种异构体的分布。但是，等电聚焦或者毛细管等电聚焦存在很多短板，最明显的就是无法大规模制备异构体。美国基因泰克公司的科学家曾经用一种叫做自由流电泳的工具，高分辨率高通量大规模对单抗的电荷异构体进行分离制备，并结合各种分析手段，对每一个异构体进行了深度表征。现分享论文如下，欢迎大家讨论！

[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E5%8D%95%E5%85%8B%E9%9A%86%E6%8A%97%E4%BD%93&zhida_source=entity&is_preview=1]单克隆抗体[/url]在生产及存储过程中会由于抗体分子自身性质、环境应力、储存方式等因素，而发生复杂的[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%BF%BB%E8%AF%91%E5%90%8E%E4%BF%AE%E9%A5%B0&zhida_source=entity&is_preview=1]翻译后修饰[/url]，如氧化、脱酰胺、糖基化、C末端赖氨酸切除、N末端[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%84%A6%E8%B0%B7%E6%B0%A8%E9%85%B8&zhida_source=entity&is_preview=1]焦谷氨酸[/url]化、降解/聚合等，造成抗体在电荷分布方面高度的异质性。电荷异构体的产生会影响抗体药物的结合能力、生物学活性、免疫原性以及结构稳定性等，进而影响抗体药物的[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E8%8D%AF%E7%89%A9%E4%BB%A3%E8%B0%A2%E5%8A%A8%E5%8A%9B%E5%AD%A6&zhida_source=entity&is_preview=1]药物代谢动力学[/url]、安全性和有效性。电荷变化的复杂性常常给评估完整的电荷变化概况带来巨大的挑战。 目前，有多种方式（IEX-HPLC、FFE、icIEF等）对电荷异构体进行馏分收集，从而进一步对产品进行表征。奕安济世生物药业[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E7%90%86%E5%8C%96%E5%88%86%E6%9E%90&zhida_source=entity&is_preview=1]理化分析[/url]平台具有成熟的IEX-HPLC馏分收集技术，可获得较高的目标收集组分含量，馏分收集纯度1（IEX-HPLC）可达85%以上。收集装置如图1所示，主要是由HPLC和馏分[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E6%94%B6%E9%9B%86%E5%99%A8&zhida_source=entity&is_preview=1]收集器[/url]串联组成。 [img=,564,573]https://pic3.zhimg.com/80/v2-78e01950668b0065dab04fab05ee789c_720w.webp[/img] 图1. IEX-HPLC馏分收集系统 为提高馏分收集效率，前期一般需要在所用原始分析方法（IEX-HPLC）基础上进行优化，在保持主洗脱梯度程序不变的情况下，缩短方法的平衡时间，增加进样质量。其中，在不改变[url=https://zhida.zhihu.com/search?q=%E8%BF%9B%E6%A0%B7%E5%99%A8&zhida_source=entity&is_preview=1]进样器[/url]定量环体积基础上，通过叠加多次进样然后一次洗脱的方式以增加进样质量，可大大提高目标组分的收集效率。图2展示了不同进样质量的CEX-HPLC色谱图，单次进样/洗脱的抗体质量可达9 mg。 [img=,1080,607]https://pic3.zhimg.com/80/v2-46cd62d44d255c528a3f8bcee8f154dc_720w.webp[/img] 图2. 叠加进样及收集区域 为了提高目标组分的收集效率，采用进样9 mg的抗体质量进行馏分收集，收集区域如图2（下）所示。将盲收2得到的馏分样品结合二次精制的方式，再经系列换液、浓缩，最终得到的目标收集组分经CEX-HPLC检测图谱如图3所示，馏分收集纯度见表1。其中第二个碱性峰的（Basic Fraction 2）由于发生N端焦谷氨酸环化，导致其收集纯度降低，其余馏分收集样品纯度可达90%以上。 [img=,1080,514]https://pic3.zhimg.com/80/v2-b788cb0eeea822394cc29c8fa691b362_720w.webp[/img] 图3. 馏分收集样品CEX-HPLC检测结果叠图 表1. 馏分收集纯度 [img=,799,344]https://pica.zhimg.com/80/v2-543c0452a10c60c5842ac68703621d3c_720w.webp[/img] 馏分收集样品的纯度达到后续表征研究要求后，需对其进行储存条件进行稳定性评估。以确保其质量在表征研究过程中，未发生明显改变。馏分收集后的样品将进一步用于表征研究，对CQA评估、工艺变更、产品批次间差异、质量标准制定等具有重要的指导意义。

比如说薄荷醇有很多种异构体，L-薄荷醇，DL-薄荷醇，新薄荷醇，异薄荷醇等，左旋蒎烯和右旋蒎烯呢？同分异构体的出峰时间会一样吗？还是会差很远？

异构体和同分异构体的区别

好像常规的有机四大谱都分辨不了手性异构体啊，至于分离可以用手性色谱摸索一下。有没有其他可以判断手性异构体的绝对构型以及区分手性异构体的技术啊？望大侠们指教。

[size=3][b]请问在对手性化合物（RS）原料药进行光学纯度控制中，用手性柱对其杂质对映异构体（SR）进行控制，而用普通的C18柱对非对应异构体（RR+SS）进行控制，但此RR与SS在C18上是重合的，这样可以吗？前提是该四个异构体无法在手性柱的一个流动相体系中出现，所以才出此下策。[/b][/size]

各位大侠，用岛津GC2010，计算同分异构体的时候，该用浓度校准还是组校准。比如，氯菊酯有两个同分异构体，两个同分异构体都是50ppb，那该用组还是浓度校准的哪个去计算，做曲线时，组的浓度应该怎么设定，是50ppb，还是100ppb。六六六和DDT的计算也是这样的吗？

在做日化香精分析的时候总会出现某些物质的异构体，比如佳乐麝香异构体，那么请教下，这个异构体是否要加到佳乐麝香的含量去？我认为是要将异构体加入到原物质上！

欧盟限量基准中规定了氰戊菊酯：RR+SS 异构体 RS+SR异构体的限量。两个异构体在不同的物体中限量是不一样的，请问一下，我现在没有他们单独的标准品，怎么通过峰来判断，在保留时间上氰戊菊酯有两个峰，这四种同分异构体是怎么出峰的，出峰顺序是怎么样的。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]，DB-5柱，非常感谢！

同分异构体分离，求助。。？？水：甲醇=35：65等度分离，同分异构体分离效果一般，请大虾帮助，如何分离效果更好一些？跑梯度请给出条件，谢谢??

非对映异构体仅仅是构型上的差别，为何理化性质会差别很大呢？而且液相分析时很多非对映异构体用普通的反相就能分开，为什么仅仅一个构型上的差别会导致这么大的理化性质差异呢？求指教

[color=#444444]请问大家有没有遇到反应生成顺反异构体的问题，在色谱中显示相邻很近的两个峰（可以分开），用内标法该如何进行定量（不知道为具体为哪个顺反异构体且标准物无商售，我的产物为2-甲氧基环己醇）。诸如此类的异构体在色谱中该如何定量分析？[/color]

最近发现一个很烦的问题，做茶叶中S-氰戊菊酯定量已经好几年了，最近又做大米农残。发现做过大米样品后，S-氰戊菊酯变成了两个峰，与氰戊菊酯异构体混合物标样出峰几乎一样，都出了两个峰。于是换了新柱子，问题解决了，S-氰戊菊酯峰很好，一个峰。但是昨天刚做了7个大米样，再进标样，发现问题又出了。有什么好办法呢？以前一根柱子仅做茶叶和蔬菜能用好久，现在这一做大米这样了。另外，还发现Lambda-氯氟氰菊酯也存在这个问题。可能大米净化没做彻底也有关系。老化柱子后情况没有一点改善，不知有没有解决办法。菊酯类异构体转换问题大家是否也有遇到过？

氯氰菊酯Cypermethrin，化学名称为(R S)–α–氰基–(3–苯氧苄基)(1RS,3R S 1R S,3S R)–3–(2,2–二氯乙烯基)–2,2–二甲基环丙烷羧酸酯，分子式为C22H19Cl2NO3；共有8种光学异构体。杀虫活性的强弱与分子构型的手征性有关；其中，顺式氯氰菊酯含有(S)–(1R，3R)和(R)－(1S，3S)两个对映体；反式氯氰菊酯含有(S)－(1R，3S)和(R)–(1S，3R)两个对映体；均为高效体。顺式、反式氯氰菊酯的分子结构见下图。奇怪的是所有的异构体只有一个cas号052315-07-8？是否CAS不区分光学和空间异构体？但是右旋葡萄糖（D-glucos）的CAS号是50-99-7，左旋葡萄糖（L-glucose）是921-60-8，α右旋葡萄糖（α-D-glucose）是26655-34-5？[IMG]file:///C:/Documents%20and%20Settings/owner/桌面/Doc1.htm[/IMG]

各位大侠好！如果我的样品中存在手性异构体，主结构是S型，异构体是R型。我用正相色谱法将S型和R型分开，用外标法测得其中R型异构体的含量，如果我想知道S型主成分的含量应该怎样计算。在反相色谱中，S型和R型的保留时间相同，没有分开。谢谢！

请问维生素E的那种异构体，α，β，γ，δ的异构体的抗氧化性强？

OCIMENE 9.817,10.301这两个异构体的顺反式大家帮区分下！谢谢大家！

各位老师大家好，我现在遇到一个很棘手的问题，就是一对烯烃的异构体没有办法分离，大家有没有什么烯烃异构体分析的经验啊，请指点迷津啊！ 这对烯烃的碳原子在20个左右，就是烯烃的双建的位置不一样，很难分离，液相气相能想到的方法差不多都试过了，还是没有分开。

我用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]连用分离了二甲苯的三个异构体，分离效果还不错，不过谱库检索，三个异构体分不开，同一个峰有时检索为间二甲苯，有时检索为对二甲苯，邻二甲苯有时会检索为乙苯。请教专家，三个异构体出峰顺序是怎么样的？谢谢！

请问一下各位老师，同分异构体的保留时间是不是会不一样?

分离结构异构体，最适当的选择是（ A ）。A、吸附色谱 B、反相离子对色谱 C、亲和色谱 D、空间排阻色谱这题的答案为什么选择A啊

TDI样品，分离异构体，按照国标进行，分离不好，在这基础之上调整流量和温度，达不到要求的效果。还有什么办法吗

哪位资深专家能有这方面的解释:我们用液相色谱分析的产品中有同分异构体的,比如说烯酰吗啉、苯醚甲环唑这样的样品，我们在分析过程中，它有同分异构体，能同时出两个峰。我现在有个问题是：在分析过程中，是应该让它们完全分开呢？还是不用让它们分开？因为如果它们不是完全分开的话，做出来的含量就低一些；如果分不开的话，甚至就出一个峰，这样的话含量就高。我想知道有没有这方面比较清楚的给解说一下。急需！多谢！

不知道大家在分析日化香精时有没有觉得同分异构体很头疼，现在遇到紫罗兰酮各种异构体，大家看看都是什么东西？（付上分析报告）

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=105317]同分异构体[/url]大家帮我看看，同分异构体，只是双键的位置不同，怎么分离啊。用了C18的柱子，试了很多条件都是分不开。

多溴那么多异构体！标准品也不可能都买。现在就买了些常规的，大概二十几个。做的时候先SCAN一下，在已有标准品的出峰位置看一下，然后定性定量。但是其他的怎么弄呢，而且异构体的出峰时间相差也比较大？

什么方法可以检测L-精氨酸的异构体？有人做过吗？谢谢各位热心人了……除了毛细管电色谱以外的方法。有人做过精氨酸异构体检查吗？类似的也好呀，小女子不胜感激……

想问一下如果农残检测同分异构体氯氰菊酯只出了3个，其中有一个没出，那这个氯氰菊酯算不算有检出？如果算的话没出的那一个可以不计算是吧？