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蛋白提取液

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蛋白提取液相关的论坛

  • 蛋白提取率怎么计算

    进行蛋白提取优化实验，探究不同提取方法对蛋白提取率的影响，这个蛋白提取率改怎么计算？比如说用水提法提取动物组织中的蛋白，通过考马斯亮蓝计算提取液中的蛋白浓度，这个浓度是不是就可以作为蛋白提取率指标？还是说要先把动物组织通过开始定氮法测一个总的蛋白含量，再用提取液中蛋白含量与总蛋白含量的比值来作为提取率指标？

  • 植物蛋白提取方法

    一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。　　蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g　　这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！　二、植物组织蛋白质提取方法　　　三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。　　药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。　　这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！　　三、组织：肠黏膜　　目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达　　应用TRIPURE提取蛋白质步骤：　　含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）　　倒转混匀，置室温10min　　离心：12000 g，10min，4度，弃上清　　加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）　　振荡，置室温20min　　离心： 7500g，5 min，4度，弃上清　　重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次　　沉淀中加入100％乙醇 2ml　　充分振荡混匀，置室温20min　　离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀　　离心：10000g，10min，4度　　取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）　　存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。　　解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。

  • 有做蛋白提取的大佬吗

    对蛋白提取率有些疑问。我看文献都是先用国标测定样品的总蛋白，然后再用考马斯亮蓝法测定从样品中提取得到的提取物的蛋白含量。再通过比值计算提取率。我的疑问是为什么总蛋白和提取物种蛋白含量不用同一种方法测定呢，用两种方法测定蛋白含量不会有影响吗。可不可以总蛋白和提取物蛋白含量都用国标凯氏定氮法测定或者都用考马斯亮蓝法测定呢？

  • 膜蛋白提取原理及方法

    [font=宋体][font=宋体]在生物细胞的世界里，膜蛋白是一个不可或缺的角色。它们不仅参与细胞的识别、信号转导和物质运输等重要功能，还成为了药物研发的重要靶点。动物细胞的膜脂主要有[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]种，而膜蛋白的种类繁多，虽然多数膜蛋白分子数量较少，但它们赋予了细胞膜至关重要的生物学功能。[/font][/font][font=宋体]根据与脂分子的结合方式和分离难易程度，膜蛋白主要分为外在膜蛋白和内在膜蛋白两大类。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）外在膜蛋白为水溶性蛋白，通过离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合。因此，通过改变溶液的离子强度或提高温度，就可以轻松地从膜上分离出来，而不会破坏膜的结构。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂[/font][font=Calibri](detergent)[/font][font=宋体]使其膜解后才可分离出来。[/font][/font][b][font=宋体]膜蛋白提取方法：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1)[/font][font=宋体]膜蛋白色谱[/font][font=Calibri](Chromatography of Membrane Protein,CMP)[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]CMP[/font][font=宋体]分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]）溶解膜蛋白后形成[/font][font=Calibri]SDS-[/font][font=宋体]融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（[/font][font=Calibri]P-[/font][font=宋体]端），又具有阳离子钙（[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]结合量。利用原子散射法研究[/font][font=Calibri]cAMP[/font][font=宋体]的分离机制发现，样品与[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]结合后在离子交换柱上存在[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2)[/font][font=宋体]顺序抽提法：根据细胞蛋白溶解性的差异，用具有不同溶解能力的蛋白溶解液进行抽提的方法。用[/font][font=Calibri]Tris[/font][font=宋体]碱溶液裂解细胞提取高溶解性蛋白；把未溶解的沉淀用标准液溶解提取高疏水性蛋白；最后用含复合表面活性剂的蛋白溶解液，可以再次抽提前两次抽提后不能溶解的膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3)[/font][font=宋体]离心蛋白提取法（[/font][font=Calibri]centrifugal protein extraction[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体]原理：高渗的蛋白裂解液让细胞溶胀破裂后，超高速离心[/font][font=宋体][font=Calibri]4)detergent-based[/font][font=宋体]：提取时先用裂解液裂解胞膜（选用不同的去污试剂是关键），梯度离心分离细胞器[/font][font=Calibri](ER)[/font][font=宋体]，然后分级抽提方法。例如，去掉细胞器之后的[/font][font=Calibri]DEBRIS[/font][font=宋体]就是核膜，再裂解得到核膜蛋白。而膜蛋白是裂胞膜时不溶的部分。[/font][/font][font=宋体]总的感受：细胞的量要很充足。之后的定性鉴定常用的方法有双向免疫扩散、免疫电泳及聚丙稀酰胺凝胶电泳等。纯化蛋白质浓度的定量测定可用双缩脲法、酚试剂法或紫外光吸收法定量鉴定膜蛋白，方便迅速。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]除了上述的提取方法，还有其他一些方法可以用于提取膜蛋白。例如，可以采用超声波破碎法或反复冻融法来破坏生物膜的结构，从而使膜蛋白释放出来。此外，还可以使用一些特殊的分离技术，如超离心或凝胶电泳，来分离和纯化膜蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]值得注意的是，不同的膜蛋白具有不同的性质和稳定性，因此需要采用不同的提取方法。在选择提取方法时，需要考虑的因素包括目标膜蛋白的分子量、溶解度、稳定性以及生物膜的组成和性质等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，提取和纯化膜蛋白是一项具有挑战性的任务，需要综合考虑多种因素。通过对不同方法的了解和比较，我们可以根据实际需求选择合适的方法来提取和纯化目标膜蛋白，为进一步的研究和应用奠定基础。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein][b]多次跨膜蛋白开发技术平台[/b][/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 蛋白提取过程方法

    蛋白提取过程中，将组织样本冻干磨粉后加入水，盐、酸、碱等溶液进行提取，然后离心取上清和直接取少量组织以一定料液比加入缓冲液（200mM Tris-HCl、150mM NaCl、10mM EDTA、PH8.0）进行匀浆然后离心取上清这两种提取方式有什么区别？

  • 有机沉淀法总蛋白提取实用小教程

    从 植物 叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质，而且是具有潜力的新一代营养保健食品，因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要，让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC 亦称叶蛋白胶。其特点是：(1)水化作用 即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜;(2)电荷排斥作用 水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态;(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法);还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失;减少对蛋白质的人为修饰;破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等;②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS 等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂;③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等;④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5 mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。三、仪器和试剂仪器离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。试剂1. 20 mL 样品提取缓冲液：2.5 mL 0.5 mol/LTris-HClhttp://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1381399946_small.jpg3. -20 ℃下预冷丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)4. -20 ℃预冷的80%丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)5. 饱和硫酸铵溶液 称取(NH4)2SO4 80 g，加蒸馏水100 mL，加热50～60 ℃，搅拌溶解，室温过夜，用浓氨水调pH 至7.06. 0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液10%NaCl 0.1mol 醋酸95%乙醇7. 植物叶片(草本植物、木本植物叶片等都可)四、实验步骤植物叶蛋白的提取主要有盐析法、有机溶剂沉淀法、加热法(含逐步和快速加热)、 离心分离法、结晶和重结晶法等。依据今后的开发方向(以饲料为基础，以食品、饮品为开发方向)及简便易行和使用的原则，主要采用盐析法、加热法和有机溶剂法分离提取叶蛋白(冷提和热提)。不同的提取方法，对样品的处理方式、程度和要求不同，结果也有差异。1. (NH4)2SO4 沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 植物叶蛋白，用液氮充分研磨转入离心管中，加入3 mL 提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白后，4 ℃10000 r/min 离心20 min，弃沉淀，上清液中加入(NH4)2SO4，混匀1 h，按1：2(v/v)加入-20 ℃预冷的80%丙酮，混匀后4 ℃12000 r/min 离心10 min，沉淀在-20 ℃冰箱中放置20 min，使丙酮完全挥发后加适量上样缓冲液，待沉淀充分溶解后，4 ℃12000 r/min 离心5 min，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。2. 改良丙酮沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 左右的植物叶片，用液氮研磨，色素多的可按材料鲜重的10%加入PVP，并将充分研磨过的样品转入离心管中，加入4 mL 的提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白。放置后的样品充分摇匀，4 ℃10000 r/min 离心30min，弃沉淀，上清液中加入2.5～3倍体积的村-20 ℃条件下过夜，让蛋白充分沉淀。之后，4 ℃10000 r/min 离心30min，其上清，沉淀置于-20 ℃下，使丙酮完全挥发，如有必要加入上样缓冲液溶解沉淀。缓冲液用量300 ul，沉淀充分溶解后，转移至1.5 mL 离心管中，4 ℃12000 r/min 离心15min ，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。该方法提取的蛋白质，提取效率高，杂质干扰少，电泳结果蛋白条带清晰，数量多。 3. 植物叶片总蛋白的提取—三氯醋酸—丙酮沉淀法①在液氮中研磨适量的叶片;②悬浮于含10%的三氯醋酸和含0.07% β-巯基乙醇(可用DTT 代替)的丙酮溶液在-20 ℃条件下冰浴;③让蛋白质沉淀过夜后离心(4 ℃ 10000 r/min 离心30~60min)，弃上清;④重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的预冷丙酮溶液中;⑤离心(同上)后真空干燥沉淀;⑥用上样缓冲液溶解沉淀，离心;⑦Brandford 法定量蛋白，然后分装至Eppendof 管中保存在-78 ℃备用。4. 分步提取可溶性叶蛋白(1)蛋白质浸出①水溶性蛋白质浸出：用0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液(或蒸馏水)将样品制成匀浆液，然后离心15min(4000 r/min)，收集上清液即蛋白质浸出液，再将沉淀物按上述操作重复两次。②盐溶性蛋白质浸出用10%NaCl 将前者剩余沉淀物分离提取两次，收集蛋白质浸出液。(2)蛋白质沉淀用0.1mol 醋酸将蛋白质浸出液pH 值调至蛋白质等电点(pH4.5左右)，即8体积蛋白质浸出液加入1体积0.1 mol 醋酸，混匀，离心15min(3000 r/min)，弃去上清液，沉淀物即为可溶性叶蛋白。(3)蛋白质收集于沉淀物中加入95%乙醇，混匀，用定量滤纸过滤或抽滤，待风干后收集。植物总蛋白的提取方法以有机盐沉淀法为主，本文中介绍到的(NH4)2SO4沉淀法、丙酮沉淀法、三氯乙酸—丙酮沉淀法和分步提取法，各个方法各有特点和适用范围，各位如有更好的植物总蛋白提取方法，欢迎补充。

  • 蛋白质提取方法-------列举10种方法

    一、植物组织蛋白质提取方法（summer）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法 (summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜 （newinbio）目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE 提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE 用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4 度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2 次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS 后沉淀不溶解，还是很大的一块，4 度离心后又多了白色沉定，SDS 结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。四、lysis solution:（yog）Protein extraction buffer (Camiolo buffer):100 ml= (0.075M Potassium Acetate) 0.736g(0.3M) NaCl 1.753g(0.1M) L-arginine basic salt 1.742g(0.01M) EDTA-HCl 0.292g(0.25%) Triton X-100 250. ulup to 100 ml with dH20. pH 7.4. Then 0.2 um filter.1. Freeze tissue in liquid nitrogen.2. Rinse in PBS then mince.3. Add 1 ml Camiolo extraction buffer per 100 mg of tissue.4. Homogenize for 1 minute at 4\'C.5. Spin at 3,000. rpm/15 minutes/4\'C.6. Remove supernatant and save in another tube.7. If necessary, dialize the supernatant against PBS with50mM/L Tris-HCl pH 7.4.五、植物材料：水稻苗，叶鞘，根（ynibcas）1、200 毫克样品置于冰上磨碎2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min 取上清3、重复离心5minlysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40

  • 蛋白提取前处理问题

    实验目的：提取海参中的金属结合蛋白我看很多文献做鱼肝脏什么的都是先用制作成丙酮粉，或用其他方法脱色脱脂，我想问一下，不脱色脱色对提取蛋白结果影响大吗？

  • 动植物膜脂和膜蛋白提取方法

    [align=left][font='times new roman'][size=16px]动植物膜脂和膜蛋白提取方法[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜脂提取物的制备[/size][/font][/align]对于大豆卵磷脂样品，首先去除胶囊，将100 mg大豆卵磷脂样品用10 mL正己烷/异丙醇（1:1，v/v）稀释溶解，样品在4℃下超声10 min，样品再经0.45 μm微孔膜过滤，以备后续使用。肺腺癌细胞膜脂的提取方法参照Folch法。首先裂解肺腺癌细胞，向细胞液中加入18 mL已经配好的氯仿-甲醇（2:1，v/v）混合溶剂，摇匀后置于高速低温离心机4℃，3000 r/min离心10 min（摇匀过程中时刻注意溶液的温度，尽量避免温度过高）。然后向该体系中加入约2 mL的超纯水，摇匀后离心。上清液移除后用少量的甲醇-水（1:1，v/v）小心清洗上表面，得到肺腺癌磷脂提取物，过0.45 μm滤膜后，N[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]吹干，备用。冰箱-20℃保存，临用时现配溶液。[align=left][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肝脏膜蛋白质的制备[/size][/font][/align]参考试剂盒提取小鼠肝脏膜蛋白质的步骤如下：，试剂准备和组织预处理：取148 mg小鼠肝脏组织，用手术剪刀剪碎，移入4 mL离心管中，加入1 mL的膜蛋白提取剂A，冰浴15 min，之后将离心管中液体移入冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆70次。去除未破碎的细胞：在4℃下将样品于900 g离心10 min，为了确保上清液的纯度应尽量避免接触沉淀。收集肝脏浆蛋白和细胞膜碎片：将上清液继续在4℃下1400 g离心40 min，获得细胞膜碎片。上清液（肝脏浆蛋白）应置于-70℃下保存备用。提取肝脏膜蛋白质：尽量将上一步骤中上清液吸取干净，避免肝脏浆蛋白的干扰。加入300 μL膜蛋白提取剂B，高速涡旋10 s后立即进行冰浴10 min，重复上述步骤三次。随后立即4℃下14,000 g离心15 min，吸取上清肝脏膜蛋白溶液，-70℃下保存备用。

  • 【转帖】中药提取液浓缩新工艺和新技术进展

    中药提取液浓缩新工艺和新技术进展中药提取液的浓缩是中药制药的重要工序之一。目前存在着浓缩温度高,浓缩时间长,有效成分及挥发性成分有损失,一步浓缩难以实现高相对密度的质量要求,设备易结垢,废液排放等问题。为了解决这些问题,开发了一系列先进的中药提取液浓缩新工艺和新技术,主要包括:悬浮冷冻浓缩、渐进冷冻浓缩、自然外循环两相流浓缩、在线防挂壁三相流浓缩、反渗透、膜蒸馏、渗透蒸馏、大孔吸附树脂分离浓缩等。因为中药提取液体系非常复杂,有水提取液和醇提取液等 提取液除含有效成分外,还含有一定量的鞣质、蛋白、胶类、糖类和树脂等杂质,所以需要对这些浓缩新工艺和新技术各自的特点、适应性、工艺和技术成熟度等加以了解,从而选择保持中医药特色,具有很强的适应性,不存在各种浓缩问题,技术成熟度高的浓缩新工艺和新技术。分析了近年来出现的中药提取液浓缩新工艺和新技术的特点及应用价值,并提出了进一步努力的方向,以期为中药制药企业等选择合适的浓缩新工艺和新技术提供参考和借鉴。 　　[关键词] 　中药 提取液 浓缩 进展 冷冻浓缩 蒸发浓缩 膜浓缩 树脂吸附 　　[中图分类号] R 283 　[文献标识码] A 　[文章编号] 100125302 (2006) 0320184204 　　 中药制药一般包括提取、浓缩、纯化、干燥和制剂等。其中,提取液的浓缩是现代中药制药的关键单元操作之一。 为了提高浓缩效果和药品质量,近年来开发了许多有价值的中药浓缩新工艺和新技术。合理引进这些先进实用的共性技术和装置,可以提升中药制药业的科技含量和整体制造水平。对主要的浓缩新工艺和新技术进行分析和述评,以供选择参考。涉及的浓缩新方法有蒸发浓缩、冷冻浓缩、膜浓缩和吸附树脂分离浓缩等。

  • 【求助】（已应助）想找提取胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的文献

    想找提取胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的文献，先谢谢各位了！1、猪胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分离和纯化，中国生化药物杂志，1988年 03期：1-5 2、胰岛素-胰酶联产工艺研究初报，生化药物杂志，1986年 04期：56-573、猪胰脏蛋白酶的生产，生化药物杂志，1984年 04期：1-44、亲和层析和离子交换组合技术分离胰脏中的蛋白酶及其抑制剂，生化药物杂志，1989年，1期：26-29。

  • 转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白

    如果说一个人一次献血200ml，一亩转基因水稻产出的血清白蛋白量约等于300人献的血——转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白——转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白2012年09月01日 来源： 中国科技网 关注转基因 白蛋白供应紧张一直困扰着人类。我国每年需求150—160吨，全球每年需求量则高达500吨，由于血浆来源紧张，我国目前从血浆中提取量仅可供应1/3，其中2/3依赖进口。 2011年10月31日，武汉大学生命科学学院教授杨代常撰写的论文《利用转基因水稻规模化生产重组人血清白蛋白》在《美国科学院院报》发表，吸引了世界的目光。 文章用翔实的科学数据证明，植物来源的重组人血清白蛋白与临床使用的血浆来源血清白蛋白，无论是在生理生化性质，还是功能用途等方面，都具有高度的等同性。 为何这项研究引发种种关注？稻米血清白蛋白是否会危及生态及人身安全？其何时能用于临床治疗？……带着这些问题，记者采访了杨代常和他的团队。 “借腹生子”：从水稻胚乳中提取血清白蛋白 植物种子生物反应器，是将植物种子作为一个蛋白质“生产车间”，利用植物作为合成蛋白质的“机器”来合成人类所需的蛋白质。“通俗地解释，便是‘借腹生子’。”杨代常说。 国外从1989年已开始利用DNA重组技术生产血清白蛋白，但由于血清白蛋白产量低、纯化工艺复杂、生产成本远高于市场成本，始终无法进入市场。 杨代常带领研究团队，从水稻基因组数据入手，根据水稻种子储藏蛋白与血清白蛋白的生化性质差异，设计出从提取到纯化的一整套工艺方案，最大限度地提取血清白蛋白，最低限度去除种子的内源蛋白，成为一项原始创新的科研成果。 “具体来说，是由表达元件组成的载体，通过遗传工程整合到水稻基因组内，在种子特异性调控元件的指导下，水稻种子在成熟过程中也不断地合成和积累人血清白蛋白，然后通过规模化种植获得原料，再经过提取、纯化等步骤获得高纯度的血清白蛋白。”杨代常介绍，目前大约每亩水稻可以产生1.5—2公斤血清白蛋白，如果说一个人一次能献血200ml，一亩转基因水稻产出的血清白蛋白量约等于300人献血。 “天然屏蔽”：可杜绝肝炎、艾滋病毒等风险 植物源重组血清白蛋白优势明显，它来源于非动物，避免了各种病毒和病原菌的污染，并由于不受血浆供应限制，可无限量供应。但是转基因农业作物安全性向来争议不断，植物源血清白蛋白有望未来直接应用于人体中，有人担心会危及生态及人身安全。 对此，杨代常解释，首先，就人血清白蛋白本身安全性而言，血清白蛋白本就是人体的蛋白质，占血浆中蛋白的30%，是一种安全的蛋白质。目前，根据获取的数据，植物来源的人血清白蛋白从生物活性、分子结构和理化性质与血浆来源的人血清白蛋白完全一致，从水稻胚乳中提取的血清白蛋白可杜绝携带如肝炎病毒、艾滋病毒等风险。研究发现，人体对植物蛋白的耐受能力大于对细菌和酵母的耐受能力。从安全性考虑，已建立高纯度符合医药级别纯度的血清白蛋白。其次，就转基因生物安全而言，由于采取地理和时间双重隔离方法，要求比美国更为严格。第三，为杜绝进入食物链，在研究中采取了专用收割机、烘干机、稻米加工设备以及专用仓库等措施，建立了严格的监管规范，能做到可管可控和可追溯。 未来预期：进入临床需4至5年 从2005年始，杨代常自主研发的水稻胚乳细胞蛋白质高效表达技术平台，填补了国际上此项技术规模化生产的空白，已获美、日、欧盟以及我国的多项专利。 杨代常说，目前，植物源重组血清白蛋白的质量已达到非临床应用标准，可替代血源人血白蛋白用于细胞培养基添加剂，成为细胞培养中血浆来源的血清白蛋白的替代品；可减少培养基中胎牛血清的使用量；还可用于高纯试剂、细胞冷冻保护剂、医疗器械包埋剂、药物载体、化妆品组分、体外诊断等。 国外已在疫苗及生物医药产品的细胞培养的稳定剂上使用。我国按照国家药监局的要求，要通过临床研究后才能进入临床应用。 通过治疗大鼠肝硬化腹水对比，进行植物源重组血清白蛋白的药效研究，发现大鼠肝硬化腹水的治疗效果在降低腹围、增加尿量和尿蛋白量等指标优于血浆来源的血清白蛋白。 “植物源重组血清白蛋白正在进行临床前研究，已完成大部分的药学研究，预计在2013年上半年可望完成临床前研究；预计进入临床研究至少需要2年时间，进入临床应用至少需要4—5年或更长的时间，这取决于临床研究的结果与进度以及国家的法规。”杨代常说。 从实验室走向产业化 去年年初，杨代常带着多年的研发成果，入驻武汉东湖国家自主创新示范区光谷生物城，一年内实现了项目产业化。 “这一过程我们走得很艰难。”杨代常说，为了让投资者更有信心，他在商业模式上从长中短期产品计划入手，将技术做好做精。在科技部转基因重大专项、国家863计划和武汉东湖国家自主创新示范区光谷生物城的支持下，加速了项目产业化进程。 “我国生物产业要走在世界前列，在心理上要打破‘奴性’思维，在政策上要突破传统观念，要敢做别人不能做或不敢做的事情。”杨代常说，“现在一谈到转基因，很多人就‘谈虎色变’。实际上，理解上存在很多误区。转基因技术是通过遗传工程的手段，将人类需要的基因（一段DNA片段）导入到植物或任何一种生物的一项高科技技术，是人类由必然王国走向自由王国的必由之路。” 近日，杨代常的科研团队又传出喜讯，在水稻中“种”出了“人抗胰蛋白酶”。目前，重组抗胰蛋白酶与重组血清白蛋白一样，有效地避免人血液中病毒病原菌感染的风险，但需要进行一系列的免疫原性、急性、毒性等相关实验和临床研究后，方能应用于临床。 杨代常透露，未来，其团队研发重心将着重原创性技术研究，建立单克隆抗体的表达平台，使我国的单克隆抗体药物的价格降到5万元左右，重组血清白蛋白进入临床应用。（记者 马爱平） 《科技日报》（2012-09-01 三版）

  • 膳食纤维提取后蛋白的测定

    请教下做过膳食纤维的老师，我按照国标提取总膳食纤维，提取完毕烘干后膳食纤维和硅藻土是混合的，我要测里面的蛋白要怎么测定？？？？能将硅藻土和膳食纤维分开吗》？？？？

  • 乳清蛋白分离提取

    我今年研一，做的乳清蛋白方面的研究，分离是利用凝胶层析柱，分离得到的蛋白用高效液相还是走电泳测定蛋白纯度精确，求大神支招

  • 植物提取液检测|37种脂肪酸检测|植物总多酚检测

    [color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-16249.html[/url]植物提取液检测项目[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]总黄酮、总多酚、多酚、叶绿素a、类胡萝卜素、藻红蛋白、藻蓝蛋白、37种脂肪酸、总碳、总氮、总碳氮比、苯酚、氨基酸、微量元素等[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]菲优特检测服务形式：[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]委托检测：药品检测、食品/医药/保健品检测、环境检测、化工检测、水产养殖检测、微生物检测、毒理测试等[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]科研服务：分子生物学、代谢组学、蛋白质组学、基因组学、细胞服务、细菌服务、新药研发筛选模型构建、疾病动物模型构建及其他开放类服务项目[/size][/font]

  • 蛋白质提取前处理

    蛋白质提取前处理

    [img=,690,373]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/06/202306071418137700_4011_5655394_3.png!w690x373.jpg[/img]这两篇文献都是对蛋白进行提取优化实验的，第一篇是对茶叶中的硒蛋白进行提取优化，第二篇是对鲟鱼肝脏中的铁蛋白进行提取优化。但是第一个是分别采用了水提。盐提、醇提和碱提，料液比为1:20 而第二篇中是直接加入缓冲液与组织仪器绞碎，然后离心就得到了含蛋白的清液，且样品于加入缓冲液的比仅为1：1~1:5，为什么料液比相差这么大呢？

  • 【分享】蛋白质提取

    介绍了不同几种来源蛋白质的提取方法以及在提取过程中的注意事项.对做蛋白研究的很有用..1.植物组织蛋白质提取方法2.植物组织蛋白质提取方法 3.组织：肠黏膜 4.lysis solution5.植物材料：水稻苗，叶鞘，根6.蛋白质样品制备7.植物根中蛋白质的抽取8.SDS extraction followed by acetone precipitation9.材料：细菌蛋白10.线粒体蛋白的提取 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=120198]蛋白质提取[/url]

  • 【求助】(已应助)求助几篇双缩脲测定蛋白的论文，非常感谢

    1 双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的比较研究 张厚锋 张淑萍 中国饲料 2008-04-05 期刊 2 双缩脲法与凯氏法测定饲料蛋白质的比较实验 张厚锋 张淑 饲料与畜牧 2008-03-15 期刊 3 一种蛋白质含量测定方法的改进研究 周东凯 富雪菲 吴刚 马学良 杨翔华 崔金久 赵海峰 刘志刚 饲料工业 2005-09-20 期刊 4 三氯乙酸沉淀法结合双缩脲比色法测定水蛭提取液中总蛋白含量 余兰 于香安 中国药物与临床 2004-09-30 期刊 5 双缩脲光度法快速测定乳品中的蛋白质 杨柳桦 孙成均 现代预防医学 2005-08-30 期刊 6 考马斯亮蓝G-250法快速测定牛乳中的蛋白质 南亚 李宏高 饮料工业 2007-12-28 期刊 7 蛋白质定量分析的进展 陈鸿琪 理化检验.化学分册 2000-07-28 期刊 8 双缩脲比色法测定面粉、肉类食品中的蛋白质 潘能斌 浙江预防医学 2001-03-01 期刊 5 9 测定含乳固体饮料蛋白质含量的双缩脲比色法 闫铁炜 内蒙古质量技术监督 2002-01-30 期刊 10 双缩脲比色法快速测定含乳固体饮料中蛋白质含量的探讨 高素虹 广东卫生防疫 1999-09-30 期刊 2 11 分光光度法测定人血清中微量蛋白质的研究 张威 杨胜科 西安科技学院学报 2004-06-30 期刊 1

  • 【转帖】蛋白质提取与纯化技术

    [size=3]选择材料及预处理 　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的，如电泳，超速离心，超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性，防止酸、硷、高温，剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。 　　微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量，以微生物为材料时有两种情况：（1）得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等；（2）利用菌体含有的生化物质，如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳，脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同，其中所含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。对动物组织，必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料，先进行绞碎、脱脂等处理。另外，对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻保存，对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。 蛋白质的分离纯化 一，蛋白质（包括酶）的提取 　　大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 （一）水溶液提取法 　　稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。[/size]

  • 【分享】蛋白质的分离纯化操作使用

    一，蛋白质（包括酶）的提取　　大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法　　稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。1、pH值　　蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH范围内。用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。2、盐浓度　　稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护蛋白质不易变性的优点，因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐，一般以0.15摩尔。升浓度为宜。缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。（二）有机溶剂提取法　　一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶，不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂，它们具的一定的亲水性，还有较强的亲脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必须在低温下操作。丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越，一是因为丁醇亲脂性强，特别是溶解磷脂的能力强；二是丁醇兼具亲水性，在溶解度范围内（度为10%，40度为6.6%）不会引起酶的变性失活。另外，丁醇提取法的pH及温度选择范围较广，也适用于动植物及微生物材料。

  • 【原创大赛】黄芩提取液物性参数的测定

    【原创大赛】黄芩提取液物性参数的测定

    前言 黄芩是唇形科植物黄芩(Scutellariabaicalensis Georgi.)的干燥根，首载于《神农本草经》。味苦性寒，入肺、胆、胃、大肠诸经，能清热燥湿，泻火解毒，凉血止血，安胎。临床常用来治疗肺热咳嗽、目赤肿痛、血热吐衄、湿热泻痢、黄疸、痈疮肿毒、胎动不安等。黄芩的主要有效成分为：黄芩苷(baicalin)、汉黄芩苷(wogonoside)、黄芩素(baicalein)、汉黄芩素(wogonin)。现代药理研究发现，黄芩具有抗氧化、抗炎抗病毒、抗肿瘤、阻止钙离子通道、抑制醛糖还原酶、抗过敏等作用，对免疫、心脑血管、消化、神经等系统均有保护作用。黄芩及其提取物在中药制剂中应用广泛，如固体制剂木香理气片、牛黄上清片、清热止咳颗粒等，液体制剂柴黄口服液、银黄口服液、双黄芩口服液等。 黄芩常用的提取方法有煎煮法、回流提取法、超声提取法、微波提取法、酶提取法、半仿生提取法等。本实验采用回流提取的方法进行黄芩提取液的制备，用旋转蒸发仪进行减压浓缩。1实验部分1.1仪器及试药1.1.1仪器RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；密度计（燕河仪器仪表有限公司）；NDJ-5S旋转黏度计（上海伦捷机电仪表有限公司）；DRE-2A导热系数测试仪（湘潭市仪器仪表有限公司）。1.1.2试药黄芩片（北京同仁堂健康药业股份有限公司），经北京中医药大学刘春生教授鉴定符合2010版《中国药典》的要求；乙醇（95%），分析纯，北京化工厂；去离子水，自制。1.2样品的制备1.2.1不同浓度黄芩水提液的制备 分别称取30、60、90、120、150 g黄芩片，加入8倍量的水，加热回流提取3次，每次1 h，过滤，合并滤液。将滤液分别浓缩至150 mL，得到含生药质量浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/mL的黄芩水提液。（黄芩中的黄芩苷酶在冷水中可使黄芩苷分解，故第一次提取需将水煮沸后再加入黄芩片以杀酶保苷。）1.2.2不同浓度黄芩醇提液的制备 分别称取30、60、90、120、150 g黄芩片，加入10倍量体积分数为60%的乙醇，加热回流提取3次，每次1 h，过滤，合并滤液。将滤液分别减压浓缩至稠膏状，用60%乙醇少量多次溶解洗出，再加60%乙醇至150 mL，得到含生药质量浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/mL的黄芩醇提液。1.3物性参数的测定方法 用浮子式密度计在20°C下测量各浓缩液的密度；在20～75°C下，用NDJ-5S型数显旋转黏度计分别测定不同浓度黄芩水提液和醇提液的黏度；采用DRE-2A型导热系数测试仪在20～70°C下分别测定不同浓度黄芩水提液和醇提液的导热系数。1.4分析方法 采用Excel对实验数据进行一元线性回归分析（ρ-C、η-C、η-T、λ-C、λ-T）；采用1stOpt数据分析软件进行二元非线性拟合（η-C-T）；采用SPSS数据分析软件进行二元线性回归（λ-C-T）。2结果与讨论2.1密度与浓度的关系 测定不同浓度的黄芩水提液和黄芩醇提液密度（表1），以线性回归分别考察其密度与浓度的关系（图1）。黄芩水提液密度与浓度关系的回归方程为ρ = 0.1582C + 1.0043，线性相关系数r = 0.9970；醇提液密度与浓度关系的回归方程为ρ = 0.1839C + 0.9072，线性相关系数r = 0.9995。结果表明，提取液的浓度与密度呈正相关，提取液浓度越高，提取液密度越大，二者具有良好的直线回归关系。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509272154_568164_1255490_3.jpg 表1-1 不同浓度黄芩提取液的密度(20°C) (g/cm3)Table 1-1 The density of Scutellariae Radix extracts(20°C) (g/cm3) 浓度C / g·mL-1 黄芩水提液 黄芩醇提液 0 0.9982 0.9094 0.2 1.0415 0.9405 0.4 1.0695 0.9815 0.6 1.0990 1.0170 0.8 1.1345 1.0560 1.0 1.1580 1.0905 2.2黏度与浓度、温度的关系不同温度下，测定不同浓度黄芩水提液的黏度，结果见表2；不同温度下，测定不同浓度黄芩醇提液的黏度，结果见表3。 表2不同温度下不同浓度黄芩水提液的黏度(mPa·s)Table 2 The viscosity of Scutellariae Radix water extracts(mPa·s) 温度T /°C 浓度C / g·mL-1 水 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 20 1.01 2.96 7.39 20.1 56.0 124.7 25 0.89 2.

  • 【分享】高效液相色谱检测乳制品中的乳铁蛋白含量

    借助高效液相色谱法测定乳制品中乳铁蛋白。方法：先通过额外加入的二价铁离子使乳铁蛋白的构型更利于沉淀。然后用体积分数60% 乙醇溶液沉淀蛋白除去糖分，再用醋酸盐缓冲液提取乳铁蛋白并分离掉酪蛋白，最后用高效液相色谱检测，采用LiChrosorb RP-C18 色谱柱，在质量浓度0.1g/100mL 的三氟乙酸溶液协助下，甲醇与水线性梯度洗脱。结果：乳铁蛋白的线性范围是0.4～2mg/mL(R2=0.9980)，平均回收率95.4%。结论：此方法可以用于乳制品中乳铁蛋白的测定。

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