蛋白膜

[font=宋体]跨膜蛋白是生物体内广泛存在的一类蛋白质，它们在细胞膜上以不同的方式与其相互作用，从而发挥各种生物学功能。根据不同的结构和功能，[/font][b][font=宋体]跨膜蛋白可以分为三种类型：通道型跨膜蛋白、受体型跨膜蛋白和泵型跨膜蛋白。[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通道型跨膜蛋白是跨膜蛋白中最为简单的类型，它们主要的功能是在细胞膜上形成一些具有选择性通透性的孔道，使得离子和小分子物质能够通过。通道型跨膜蛋白具有多个跨膜域，通常由[/font] [font=宋体]α 螺旋和 β 折叠两种二级结构组成。α 螺旋通道如 [/font][font=Calibri]K+ [/font][font=宋体]通道能够容纳阳离子，β 折叠如离子泵[/font][font=Calibri]Na+/K+-ATPase [/font][font=宋体]能够承载各种离子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]受体型跨膜蛋白是一类比较复杂的蛋白质，它们能够接受信号分子的结合，从而调节细胞内的生物学路径。受体型跨膜蛋白通常由单个跨膜域和两个不同构的端基组成，其中一个端基是细胞外的受体结构域，能够特异性地与信号分子结合；另外一个端基是细胞内的调节结构域，能够将受体活性传递到细胞内部。受体型跨膜蛋白具有多种作用方式，如酪氨酸激酶受体，转录因子受体等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]泵型跨膜蛋白是一类能够通过能量输入来驱动物质运输的蛋白质。它们能够将离子或者小分子物质从低浓度区域转运到高浓度区域，从而维持细胞内的化学平衡和稳态。泵型跨膜蛋白一般由多个跨膜域组成，并能借助外源性能量如[/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]进行运输。常见的泵型跨膜蛋白有[/font][font=Calibri]Na+/K+-ATPase, H+/K+-ATPase[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供跨膜蛋白制备平台，包括：[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]去垢剂技术平台[/font][font=Calibri]/Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]正确折叠的膜蛋白在细胞膜上表达，类病毒颗粒[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]通过出芽的方式包裹上携带有靶标蛋白的细胞膜，形成包膜的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]。它是由病毒的衣壳蛋白通过自组装而形成的纳米级颗粒（直径约[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]300[/font][font=宋体]纳米），不含病毒核酸，不能进行自主复制，生产操作过程中较为安全。产生的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]蛋白可直接像可溶蛋白一样进行包被进行[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州已成功开发[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台，它可以将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，这种方法不仅可以保留膜蛋白的完整结构，同时也能够真实地模拟其在细胞膜上的位置和构象。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]利用[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台制备跨膜蛋白具有以下优势：[/font][/font][font=宋体]? 全长跨膜蛋白，保持完整的天然构象[/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测、抗体筛选等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州搭建了基于[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]表达系统的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]virus-like particle[/font][font=宋体]）技术平台，能够将目的膜蛋白完整展示在[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]表面，使其能够像普通蛋白一样进行检测，义翘神州目前可以为客户提供膜蛋白定制服务，助力药物研发进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]去垢剂技术平台[/font][/b][font=宋体][font=宋体]由于存在疏水结构域，跨膜蛋白与膜的结合非常紧密，需要用去垢剂（[/font][font=Calibri]detergent[/font][font=宋体]）才能从膜上洗涤下来，[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]作为一种两亲性分子，疏水尾部包裹目的蛋白的疏水区域，亲水头部位于与溶液接触的界面。微团的形成是膜蛋白增溶的基础，当去垢剂浓度高于[/font][font=Calibri]CMC[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Critical micelle concentration[/font][font=宋体]，临界胶束浓度）时会形成微团，增溶后，去垢剂将蛋白周围的磷脂置换，从而实现收集目标膜蛋白的目的，后续再进行蛋白纯化，最终蛋白呈现在含有[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]的溶液中。义翘神州成功搭建了去垢剂技术平台，利用该平台可有效提高跨膜蛋白的产量和纯度。[/font][/font][font=宋体]去垢剂技术平台的优势：[/font][font=宋体]? 可精确定量[/font][font=宋体]? 胶束为膜蛋白疏水基团提供保护并稳定构象[/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]检测等[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]结构稳定，与天然的生物膜非常相似，使得[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]能够很好地应用于膜蛋白的研究。目前[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台有[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]种方式，一种是基于苯乙烯马来酸酐共聚物（[/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]）组装的[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台，如下图（左）所示，它可以直接从细胞膜上提取膜蛋白，使其变为可溶性蛋白，组装完成的蛋白样品很稳定，更能维持蛋白的天然构象。另一种是基于膜骨架蛋白（[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]）的[/font][font=Calibri]MSP-Nanodisc[/font][font=宋体]平台（下图右），它需要先将膜蛋白利用去垢剂制备出来，然后再加入磷脂分子和[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]进行组装。通过调整磷脂、[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]和待组装膜蛋白三者的比例，可以使得待组装膜蛋白在[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]中呈不同聚集状态。义翘神州已成功搭建了[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，满足动物免疫、抗体筛选、[/font][font=Calibri]cell-based assays[/font][font=宋体]等场景。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台的优势：[/font][/font][font=宋体]? 可精确定量[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]共聚物包裹的膜蛋白稳定性更好，有助于更好地研究膜蛋白的结构和功能[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测及细胞实验等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[b][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白定义：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白是两类重要的蛋白质，它们在细胞分子水平上起着重要的作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]整合蛋白，也称为内在蛋白或跨膜蛋白，部分或全部镶嵌在细胞膜中或内外两侧，以非极性氨基酸与脂双分子层的非极性疏水区相互作用而结合在质膜上。它们是生物膜的基本结构成分，许多具重要生理功能的膜蛋白均属整合蛋白，如膜结合的酶类、载体蛋白、通道蛋白、膜受体等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]跨膜蛋白，是可以跨越细胞膜的蛋白，它在细胞的信号传递系统中担当着重要的角色。跨膜蛋白在结构上可以分为单次跨膜、多次跨膜、多亚基跨膜等，它们具有能够跨越细胞膜的能力。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]整合蛋白和跨膜蛋白在位置、结构和功能上存在显著的差异[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①位置：整合蛋白主要存在于细胞质内，细胞核或其他非细胞膜结构中，它们容易在细胞中自由移动。而跨膜蛋白则嵌入细胞膜中，一部分位于细胞膜的胞外侧，另一部分位于细胞膜的胞内侧，形成了一个穿过细胞膜的通道。[/font][font=宋体][font=宋体]②结构：整合蛋白的结构通常由两个独立的部分组成，一个是靠近细胞膜的膜结合区域（[/font][font=Calibri]TM[/font][font=宋体]），另一个是靠近细胞骨架的非膜结合区域（[/font][font=Calibri]N-TM[/font][font=宋体]）。当接受到外界的信号时，整合蛋白的[/font][font=Calibri]TM[/font][font=宋体]区域会被激活，把来自外界的信号转化为细胞内可以识别的信号，直接参与细胞信号传导系统中。[/font][/font][font=宋体]③功能：整合蛋白主要是用来从外界传达信号到细胞内，充当细胞与外界信号的桥梁。而跨膜蛋白则在细胞的信号传递系统中担当着重要的角色。[/font][font=宋体]总的来说，整合蛋白和跨膜蛋白在位置、结构和功能上存在显著的差异，这些差异使得它们在生物体中扮演着不同的角色。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白表达与制备服务[/b][/url]，制备流程图：基因合成[/font][font=宋体]→载体构建→细胞转化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]转染→蛋白表达→细胞收集→细胞破碎→膜脂提取→膜脂增溶→蛋白纯化→质量检测，同时义翘拥有[/font][/font][b][font=宋体]三大跨膜蛋白制备平台[/font][/b][font=宋体]，可以为客户提供全面的多次跨膜蛋白产品和服务。同时，为基础研究和药物研发提供更加优质的原材料。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]正确折叠的膜蛋白在细胞膜上表达，类病毒颗粒[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]通过出芽的方式包裹上携带有靶标蛋白的细胞膜，形成包膜的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]。它是由病毒的衣壳蛋白通过自组装而形成的纳米级颗粒（直径约[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]300[/font][font=宋体]纳米），不含病毒核酸，不能进行自主复制，生产操作过程中较为安全。产生的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]蛋白可直接像可溶蛋白一样进行包被进行[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州已成功开发[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台，它可以将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，这种方法不仅可以保留膜蛋白的完整结构，同时也能够真实地模拟其在细胞膜上的位置和构象。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]去垢剂技术平台[/font][/b][font=宋体][font=宋体]由于存在疏水结构域，跨膜蛋白与膜的结合非常紧密，需要用去垢剂（[/font][font=Calibri]detergent[/font][font=宋体]）才能从膜上洗涤下来，[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]作为一种两亲性分子，疏水尾部包裹目的蛋白的疏水区域，亲水头部位于与溶液接触的界面。微团的形成是膜蛋白增溶的基础，当去垢剂浓度高于[/font][font=Calibri]CMC[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Critical micelle concentration[/font][font=宋体]，临界胶束浓度）时会形成微团，增溶后，去垢剂将蛋白周围的磷脂置换，从而实现收集目标膜蛋白的目的，后续再进行蛋白纯化，最终蛋白呈现在含有[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]的溶液中。义翘神州成功搭建了去垢剂技术平台，利用该平台可有效提高跨膜蛋白的产量和纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]结构稳定，与天然的生物膜非常相似，使得[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]能够很好地应用于膜蛋白的研究。目前[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台有[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]种方式，一种是基于苯乙烯马来酸酐共聚物（[/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]）组装的[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台，如下图（左）所示，它可以直接从细胞膜上提取膜蛋白，使其变为可溶性蛋白，组装完成的蛋白样品很稳定，更能维持蛋白的天然构象。另一种是基于膜骨架蛋白（[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]）的[/font][font=Calibri]MSP-Nanodisc[/font][font=宋体]平台（下图右），它需要先将膜蛋白利用去垢剂制备出来，然后再加入磷脂分子和[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]进行组装。通过调整磷脂、[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]和待组装膜蛋白三者的比例，可以使得待组装膜蛋白在[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]中呈不同聚集状态。义翘神州已成功搭建了[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，满足动物免疫、抗体筛选、[/font][font=Calibri]cell-based assays[/font][font=宋体]等场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]跨膜蛋白（[/font][font=Calibri]TMEM[/font][font=宋体]）是一种跨越细胞质膜的蛋白家族，允许细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]细胞和细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]环境之间的联系。结构决定性质，性质决定功能，一般单次跨膜主要起锚定作用，多次跨膜能形成疏水孔道，发挥运输的功能。这里我们将讨论膜蛋白的结构，并说明它们与脂质双分子层的不同关联方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]对膜成分而言，脂质分子数多，但膜蛋白质量较大[/font][/font][font=宋体][font=宋体]我们知道，脂质双分子层提供了细胞膜的基本结构，并作为膜两侧分子的渗透屏障，但是大多数膜的功能其实是由膜蛋白完成的。在动物中，蛋白质约占大多数质膜质量的[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]，其余是脂质加上糖脂和糖基化蛋白中相对较少的碳水化合物。然而，由于脂质分子比蛋白质小得多，细胞膜通常含有的脂质分子大约是蛋白质分子的[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]倍。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]不同类型的膜蛋白发挥诸多功能[/font][/font][font=宋体]膜蛋白不仅通过脂质双分子层运输特定的营养物质、代谢产物和离子；它们还有许多其他功能：有些将膜固定在两侧的大分子上；有些能作为受体，检测细胞环境中的化学信号，并将其传递到细胞内部；还有一些作为酶发挥功能，催化特定反应。每种类型的细胞膜都含有不同的蛋白质，反映了特定细胞膜的特殊功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]蛋白质可以通过多种方式与膜的脂双层相关联[/font][/font][font=宋体][font=宋体]直接附着在脂质双分子层上的蛋白质（如图[/font][font=Calibri]3-A,B,C[/font][font=宋体]）只有用洗涤剂破坏双分子层才能被去除，这种蛋白质被称为膜内在蛋白，其余的膜蛋白称为膜外周蛋白（如图[/font][font=Calibri]3-D[/font][font=宋体]），它们可以通过更温和的提取过程从膜中释放出来，这一过程会干扰蛋白质与蛋白质之间的相互作用，但会使脂质双层结构保持完整。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]许多膜蛋白穿过脂双层，部分区域位于双层膜的两侧[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]。这些跨膜蛋白具有疏水性和亲水性区域。它们的疏水区域位于双层膜的内部，紧靠着脂质分子的疏水尾部。它们的亲水性区域暴露在膜的两侧的水环境中。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]有的膜蛋白几乎完全位于胞质，与脂质双分子层相互作用的是蛋白表面的[/font][font=宋体]α螺旋结构[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]有些蛋白质完全位于双层膜外（内侧或外层），仅通过一个或多个共价附着的脂类基团与膜相关联[/font][font=Calibri](C)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]还有些蛋白质通过与膜蛋白的相互作用，间接地与膜表面相结合[/font][font=Calibri](D)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]多肽通常以α螺旋的形式穿过脂双层[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于许多跨膜蛋白，多肽链只穿过膜一次，这些蛋白质中有许多是细胞外信号的受体。形成[/font][font=Calibri]a[/font][font=宋体]螺旋的氨基酸的疏水侧链与磷脂分子的疏水烃尾相接触，多肽主链的亲水部分在螺旋内部相互形成氢键。一个完全穿过膜的α螺旋结构需要包含[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]个氨基酸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]膜蛋白[/font][font=Calibri]x[/font][font=宋体]射线结晶学的进展使许多膜蛋白的三维结构得以确定。根据这些主要特征构建模型（片段包含约[/font][font=Calibri]20-30[/font][font=宋体]个氨基酸、具有高度疏水性），通常可以从蛋白质的氨基酸序列预测多肽链的哪些部分延伸到脂双层。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]跨膜α螺旋常和其他α螺旋互作或组合形成孔道[/font][/font][font=宋体][font=宋体]有的跨膜蛋白形成水通道，允许水溶性分子穿过膜，这样的孔道不能由具有单一的、均匀疏水的、跨膜螺旋结构的蛋白质形成。形成孔隙的蛋白质更为复杂，通常具有一系列的[/font][font=宋体]α螺旋多次穿过双层膜。许多单通道膜蛋白形成同源或异源二聚体，这些二聚体由两个跨膜螺旋之间的非共价、但强而特异的相互作用结合在一起，这些螺旋的疏水氨基酸序列包含指导蛋白质[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质相互作用的信息。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在有些包含多个跨膜结构的蛋白质中，跨膜区域是由包含疏水性和亲水性氨基酸侧链的螺旋形成的。这些氨基酸的排列使得疏水侧链落在螺旋的一侧，而亲水侧链则集中在螺旋的另一侧。在脂双层疏水环境中，这类[/font][font=宋体]α螺旋呈环状并排排列，疏水侧链暴露于膜的脂质上，亲水侧链通过脂质双层形成亲水孔的内衬。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6. [/font][font=宋体]一些β折叠片多次跨膜形成大的离子通道[/font][/font][font=宋体][font=宋体]虽然到目前为止，[/font][font=宋体]α螺旋是多肽链穿过脂双层的最常见的形式，某些多肽链却是以β折叠穿过脂双层。膜蛋白以β折叠片的形式穿过脂质双分子层，被弯曲成圆柱形，形成一个开放式的桶状结构，称为β折叠桶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]β片层的数目变化较大，少的可以有[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个，多的可以多达[/font][font=Calibri]22[/font][font=宋体]个。面朝桶内的氨基酸侧链主要是亲水的，而桶外的那些接触脂双层疏水核心的侧链则完全是疏水的。与α螺旋不同，β折叠桶只能形成宽的通道，因为β折叠片弯曲成桶的紧密程度是有限制的，不如α螺旋灵活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]综上，膜的功能主要体现在膜蛋白的多样性上，膜蛋白的结构决定其功能。不同功能的膜蛋白其结构基础存在差异，因此其与膜骨架的关联方式也有不同。像膜偶联受体、膜偶联酶这些膜蛋白可能通过单次跨膜或者共价修饰，就能锚定在膜上实现其功能。而作用于底物转运的膜蛋白必须提供一个较大的亲水孔道，才能使水溶性的带电离子等底物通过，因此不同的[/font][font=宋体]α螺旋之间倾向于互作，或者同一个蛋白具有多个互作的α螺旋，或者通过β折叠形成桶状孔隙发挥功能。根据跨膜蛋白的疏水特性及跨膜区域的结构特点，可以对跨膜蛋白及其跨膜区段进行预测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]义翘神州提供三大[/b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url][b]制备平台，有[/b][/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台、去垢剂技术平台、[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[b][font=宋体]什么是膜蛋白？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白是一类广泛存在于生物体细胞膜上的蛋白质分子。它们在维持细胞结构完整性、调控物质运输和信号传导等方面起着重要作用。根据蛋白分离的难易及在膜中分布的位置，膜蛋白基本可分为三大类：外在膜蛋白或称外周膜蛋白、内在膜蛋白或称整合膜蛋白和脂锚定蛋白。膜蛋白包括糖蛋白，载体蛋白和酶等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通常在膜蛋白外会连接着一些糖类，这些糖相当于会通过糖本身分子结构变化将信号传到细胞内。研究膜蛋白结构的技术包括[/font][font=Calibri]X[/font][font=宋体]射线衍射等，常用于重组膜蛋白的表达系统有真核表达系统。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的类型：[/font][/b][font=宋体]目前存在不同类型的膜蛋白，例如：[/font][font=宋体]①整合膜蛋白[/font][font=宋体]②外周膜蛋白[/font][font=宋体]③脂质结合蛋白[/font][font=宋体]④两性蛋白[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的特点：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白有多种形状和大小，执行多种任务，但它们总是依赖于一些关键特征。[/font] [font=宋体]膜蛋白的一些区别特征如下。[/font][/font][font=宋体]①跨膜域： 跨膜结构域是延伸到脂质双层全长的蛋白质片段。 疏水性氨基酸残基是这些结构域的共同特征，它们介导与膜磷脂疏水性尾部的相互作用。[/font][font=宋体]②疏水和亲水区域： 膜蛋白包含疏水和亲水结构域，使它们能够与脂质双层和两侧的水环境进行交流。[/font][font=宋体]③选择性：膜蛋白的一个共同特征是它们能够调节某些分子或离子的通过。 通常是蛋白质的独特结构和电荷决定了它的选择性。[/font][font=宋体]④受体位点： 当膜蛋白上的受体区域与各自的目标分子或离子结合时，这些区域就会被激活。 大多数时候， 分子 或由受体检测到的离子在受体上具有与该位点结构或化学相容的结合位点。[/font][font=宋体]⑤构象变化： 当膜蛋白结合特定分子或离子时，它通常会发生构象变化，从而引发生物反应或允许蛋白质将结合的分子转运穿过膜。[/font][font=宋体]⑥锚固：多种机制，包括与其他蛋白质的相互作用和与膜中脂质分子的结合，可用于将膜蛋白锚定到细胞膜。[/font][font=宋体]⑦糖基化：碳水化合物链通过称为糖基化的过程与几种膜蛋白结合。 这种改变可以作为防止蛋白水解的保护措施，并作为细胞中下游蛋白质的信号。[/font][font=宋体][font=宋体]跨膜结构域、疏水和亲水区域、选择性、受体位点、构象变化、锚定和糖基化都是膜蛋白的特性，对它们在细胞膜中的功能至关重要。[/font] [font=宋体]由于这些特性，膜中的蛋白质能够运输分子、发送信号、提供结构支持和催化反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的功能：[/font][/b][font=宋体]①运输功能[/font][font=宋体]膜转运蛋白分为载体蛋白和通道蛋白两种。主动运输和协助扩散都需要载体蛋白。水分子进去细胞时需要水通道蛋白，还有一种离子通道蛋白，需要注意的是通过通道蛋白进出细胞因为不需要能量所以属于协助扩散。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②识别功能[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]两个不相邻细胞间信息交流是通过信号分子（如激素、神经递质、淋巴因子等）来完成的，而细胞膜上能与信息分子结合的便是细胞膜上的特异性受体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞与细胞之间可以通过相互接触而相互识别，例如精子与卵细胞的相互识别，效应[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞与靶细胞之间的相互识别就是依靠糖蛋白来完成的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③催化功能[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]膜蛋白可能是某些反应所需要的酶。例如[/font][font=Calibri]Na+-K+[/font][font=宋体]泵中存在[/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]水解酶；光反应、有氧呼吸之所以在膜上发生的原因之一就是膜上存在反应所需的相关酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④抗原功能[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]表面抗原能和特异的抗体结合，如人细胞表面有一种蛋白质抗原[/font][font=Calibri]HLA[/font][font=宋体]，是一种变化极多的二聚体。不同的人有不同的[/font][font=Calibri]HLA[/font][font=宋体]分子，器官移植时，被植入的器官常常被排斥，这就是因为植入细胞的[/font][font=Calibri]HLA[/font][font=宋体]分子不为受体所接受之故。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白制备[/b][/url]平台及跨膜蛋白详解：详情可查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体]跨膜蛋白具有多种生理功能，包括蛋白连接、识别、转运、锚定和转导等，其功能的异常与诸多疾病相关。膜蛋白是重要的药物靶点，据统计，约[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]药物的靶向分子为膜蛋白。然而，由于表达量低、体外不溶、纯化不稳定、难保持天然构象等问题的存在，限制了跨膜蛋白在药物开发方面的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州聚焦于多次跨膜蛋白产品的开发，成功搭建了三大技术平台，为药物早期研发提供重要的原材料。目前产品包括四次跨膜蛋白[/font][font=Calibri]Claudin-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-18.1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-18.2[/font][font=宋体]，七次跨膜蛋白[/font][font=Calibri]GPRC5D[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CXCR4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SSTR2[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三大跨膜蛋白研发技术平台一览：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台：[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台能够将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，产生非常适合免疫和抗体筛选的全长跨膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]去垢剂技术平台：去垢剂技术平台利用传统的膜蛋白提取方法[/font][font=宋体]——去垢剂制备较纯的膜蛋白产品，满足药物早期筛选的需求。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台：[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，用于免疫和抗体筛选等场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]下面是关于跨膜蛋白开发常见问题解答（[/font][font=Calibri]FAQs[/font][font=宋体]）：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①如何选择膜蛋白开发平台？[/font][font=宋体]不同膜蛋白平台具有不同的优势和劣势，应根据下游应用、成本、周期等因素进行考量。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]分析是否可以表征[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]形式膜蛋白的纯度？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]方法可用于检测产品溶液中[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]颗粒的大小和均一程度，而[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台产生的蛋白除目标蛋白外还包括其他内源性的蛋白，故无法表征目标蛋白的纯度；由于[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品为混合物，目前对[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品的检测主要以活性检测为主，纯度仅作为一项参考指标。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③我想购买膜蛋白产品做免疫和抗体筛选，应该怎么挑选？[/font][font=宋体][font=宋体]目前，我们的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个平台的产品各有特点，客户可以按照实际情况进行选择。[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台产品是一个混合物，与细胞免疫相比靶标蛋白的丰度有所提高，在没有其他平台的产品时可以用于免疫和抗体筛选。由于[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]平台的产品存在去垢剂，因此，需要考虑去垢剂对于免疫动物的毒害和免疫过程中蛋白变性的风险。比较而言，[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台的产品既拥有较高的靶蛋白丰度，又能维持好的天然构象，特别推荐用于动物免疫和抗体筛选实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein]跨膜蛋白[/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]在生物细胞的世界里，膜蛋白是一个不可或缺的角色。它们不仅参与细胞的识别、信号转导和物质运输等重要功能，还成为了药物研发的重要靶点。动物细胞的膜脂主要有[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]种，而膜蛋白的种类繁多，虽然多数膜蛋白分子数量较少，但它们赋予了细胞膜至关重要的生物学功能。[/font][/font][font=宋体]根据与脂分子的结合方式和分离难易程度，膜蛋白主要分为外在膜蛋白和内在膜蛋白两大类。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）外在膜蛋白为水溶性蛋白，通过离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合。因此，通过改变溶液的离子强度或提高温度，就可以轻松地从膜上分离出来，而不会破坏膜的结构。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂[/font][font=Calibri](detergent)[/font][font=宋体]使其膜解后才可分离出来。[/font][/font][b][font=宋体]膜蛋白提取方法：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1)[/font][font=宋体]膜蛋白色谱[/font][font=Calibri](Chromatography of Membrane Protein,CMP)[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]CMP[/font][font=宋体]分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]）溶解膜蛋白后形成[/font][font=Calibri]SDS-[/font][font=宋体]融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（[/font][font=Calibri]P-[/font][font=宋体]端），又具有阳离子钙（[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]结合量。利用原子散射法研究[/font][font=Calibri]cAMP[/font][font=宋体]的分离机制发现，样品与[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]结合后在离子交换柱上存在[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2)[/font][font=宋体]顺序抽提法：根据细胞蛋白溶解性的差异，用具有不同溶解能力的蛋白溶解液进行抽提的方法。用[/font][font=Calibri]Tris[/font][font=宋体]碱溶液裂解细胞提取高溶解性蛋白；把未溶解的沉淀用标准液溶解提取高疏水性蛋白；最后用含复合表面活性剂的蛋白溶解液，可以再次抽提前两次抽提后不能溶解的膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3)[/font][font=宋体]离心蛋白提取法（[/font][font=Calibri]centrifugal protein extraction[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体]原理：高渗的蛋白裂解液让细胞溶胀破裂后，超高速离心[/font][font=宋体][font=Calibri]4)detergent-based[/font][font=宋体]：提取时先用裂解液裂解胞膜（选用不同的去污试剂是关键），梯度离心分离细胞器[/font][font=Calibri](ER)[/font][font=宋体]，然后分级抽提方法。例如，去掉细胞器之后的[/font][font=Calibri]DEBRIS[/font][font=宋体]就是核膜，再裂解得到核膜蛋白。而膜蛋白是裂胞膜时不溶的部分。[/font][/font][font=宋体]总的感受：细胞的量要很充足。之后的定性鉴定常用的方法有双向免疫扩散、免疫电泳及聚丙稀酰胺凝胶电泳等。纯化蛋白质浓度的定量测定可用双缩脲法、酚试剂法或紫外光吸收法定量鉴定膜蛋白，方便迅速。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]除了上述的提取方法，还有其他一些方法可以用于提取膜蛋白。例如，可以采用超声波破碎法或反复冻融法来破坏生物膜的结构，从而使膜蛋白释放出来。此外，还可以使用一些特殊的分离技术，如超离心或凝胶电泳，来分离和纯化膜蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]值得注意的是，不同的膜蛋白具有不同的性质和稳定性，因此需要采用不同的提取方法。在选择提取方法时，需要考虑的因素包括目标膜蛋白的分子量、溶解度、稳定性以及生物膜的组成和性质等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，提取和纯化膜蛋白是一项具有挑战性的任务，需要综合考虑多种因素。通过对不同方法的了解和比较，我们可以根据实际需求选择合适的方法来提取和纯化目标膜蛋白，为进一步的研究和应用奠定基础。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein][b]多次跨膜蛋白开发技术平台[/b][/url]，详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体]跨膜蛋白按功能可以分为多种类型，其中包括[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体（[/font][font=Calibri]G[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]）、离子通道、转运蛋白以及其他类型受体等。这些蛋白在细胞内发挥着不同的作用，例如在信号传递、物质转运和细胞通讯等方面。[/font][font=Calibri]G[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]是一类广泛存在于生物体中的跨膜蛋白，它们可以识别并与外界分子相互作用，从而引发各种细胞内信号，因此它们被用作药物筛选的靶标。离子通道则可以调节细胞内外的离子浓度，如钠离子、钾离子、钙离子等，这对于细胞的正常运作至关重要。转运蛋白则可以协助物质的跨膜运输，对生物体代谢进行调控。这些跨膜蛋白虽然功能不同，但是在生物体中发挥着各自独特和不可或缺的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一型跨膜蛋白和二型跨膜蛋白是两种常见的膜蛋白类型，它们在结构和功能上存在差异。下面是它们的简要对比图解：[/font][font=宋体]一型跨膜蛋白：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]膜外 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]区域 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]跨膜 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]螺旋 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]膜内 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]区域 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一型跨膜蛋白具有一个跨越细胞膜的[/font] [font=宋体]α 螺旋结构。它包括一个在细胞外区域的 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端、一个跨膜螺旋结构和一个在细胞内区域的 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端。这种结构使得一型跨膜蛋白在跨越细胞膜时保持稳定，并具有信号传递和细胞识别等重要功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二型跨膜蛋白：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]膜外 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]区域 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]跨膜 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]区域 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]膜内 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]区域 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]胞质 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=Calibri]| [/font][font=宋体]尾部 [/font][font=Calibri]|[/font][/font][font=宋体] [font=宋体]———————[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二型跨膜蛋白同样具有跨越细胞膜的结构，但它包括一个在细胞内区域的[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端和一个在胞质尾部的结构。二型跨膜蛋白通常通过细胞内区域与一些信号转导途径进行相互作用，并发挥重要的调节和调控功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一型跨膜蛋白通过单一的跨膜螺旋结构连接细胞内外区域，而二型跨膜蛋白则包含额外的胞质尾部。这些结构差异导致两种跨膜蛋白在细胞中的功能和相互作用方式上存在差异。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白表达和制备平台[/b][/url]，包含[/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台：它可以将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，这种方法不仅可以保留膜蛋白的完整结构，同时也能够真实地模拟其在细胞膜上的位置和构象；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②去垢剂技术平台：由于存在疏水结构域，跨膜蛋白与膜的结合非常紧密，需要用去垢剂（[/font][font=Calibri]detergent[/font][font=宋体]）才能从膜上洗涤下来，[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]作为一种两亲性分子，疏水尾部包裹目的蛋白的疏水区域，亲水头部位于与溶液接触的界面。微团的形成是膜蛋白增溶的基础，当去垢剂浓度高于[/font][font=Calibri]CMC[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Critical micelle concentration[/font][font=宋体]，临界胶束浓度）时会形成微团，增溶后，去垢剂将蛋白周围的磷脂置换，从而实现收集目标膜蛋白的目的，后续再进行蛋白纯化，最终蛋白呈现在含有[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]的溶液中。义翘神州成功搭建了去垢剂技术平台，利用该平台可有效提高跨膜蛋白的产量和纯度。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台：义翘神州已成功搭建了[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，满足动物免疫、抗体筛选、[/font][font=Calibri]cell-based assays[/font][font=宋体]等场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]膜联蛋白（[/font][font=Calibri]Annexin[/font][font=宋体]）是一类分布广泛的钙依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸（[/font][font=Calibri]PS[/font][font=宋体]）能特异性结合，参与一系列[/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体]依赖型的膜相关的过程，包括细胞的胞吐和内吞作用、囊泡运输、调节血液凝固以及炎症反应等多种生物学事件，在许多人类疾病的发病机制或进展中起着非常重要的作用。膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Annexin V[/font][font=宋体]）染色是检测细胞凋亡的常用方法。[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色原理及应用[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色原理[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色，也称为[/font][font=Calibri]Annexin V[/font][font=宋体]染色，是一种用于检测细胞凋亡的方法。其核心原理基于细胞凋亡过程中的一种生物化学变化。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（[/font][font=Calibri]PS[/font][font=宋体]）只分布在细胞膜脂质双层的内侧。然而，当细胞开始凋亡时，这一分布会发生改变，磷脂酰丝氨酸会从细胞膜内侧翻到外侧。膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]是一种能够与这种外翻的磷脂酰丝氨酸特异性结合的蛋白。通过结合荧光物质，这种结合可以被检测和观察，从而确定哪些细胞正在经历凋亡。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色的应用[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①流式细胞术：膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色常用于流式细胞术中，以检测和分类正常细胞和凋亡细胞。通过流式细胞仪，可以快速分析大量细胞，并准确地识别出凋亡细胞。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②光学显微镜成像：膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色也可用于光学显微镜成像技术，这使得研究者能够在显微镜下直接观察细胞的形态变化，从而对凋亡过程有更深入的理解。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③与其他染色方法的结合：膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色可以与其他染色方法如碘化丙啶[/font][font=Calibri](PI)[/font][font=宋体]染色结合使用。[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]是一种能够进入凋亡晚期细胞核的染料，因此可以用于区分凋亡早期和晚期细胞。这种联合使用的方法能提供更全面的细胞凋亡信息。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④临床应用：膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色在许多临床领域中都有应用，例如肿瘤学、血液学和药理学等。它可以帮助研究者深入理解疾病的发展过程，评估新药物对细胞凋亡的影响，以及监测疾病的进展和治疗的效果。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]总的来说，膜联蛋白[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]染色是一种强大的工具，可以帮助科学家们更好地理解细胞凋亡的过程，从而为疾病的治疗和药物研发提供有价值的信息。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多关于膜联蛋白详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/][b]义翘神州[/b][/url]！[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体]膜蛋白是细胞膜上的重要组成部分，参与了多种生物功能的实现。然而，在膜蛋白的研究和应用中，我们经常遇到一些问题。本文将对膜蛋白常见问题进行解析，旨在帮助读者更好地理解和应用膜蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是膜蛋白？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白是嵌入或附着在细胞膜上的蛋白质。[/font] [font=宋体]它们在细胞膜的功能中起着至关重要的作用，例如细胞信号传导、分子运输和细胞间通讯。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的结构是怎样的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白具有多种结构，但它们通常由疏水区和亲水区组成。[/font] [font=宋体]疏水区域与膜的脂质双层相互作用，而亲水区域面向细胞外或细胞内环境。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白是如何分类的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白根据它们在细胞膜内的位置及其功能进行分类。[/font] [font=宋体]它们可分为整合膜蛋白、外周膜蛋白、跨膜蛋白或脂质锚定蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]整合膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]整合膜蛋白嵌入细胞膜内，在分子运输、细胞信号传导和细胞粘附中起着至关重要的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]外周膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]外周膜蛋白位于细胞膜表面，参与细胞信号传导、细胞粘附和酶活性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是跨膜蛋白？[/font][/b][font=宋体]跨膜蛋白跨越细胞膜的整个厚度，参与分子运输、细胞信号传导和细胞粘附。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白如何将分子转运穿过细胞膜？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白使用多种机制将分子转运穿过细胞膜，包括被动转运、主动转运、促进扩散和渗透。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]膜蛋白在疾病中的意义是什么？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白参与许多疾病过程，包括癌症、囊性纤维化和阿尔茨海默病。[/font] [font=宋体]了解膜蛋白的结构和功能有助于开发针对这些疾病的新疗法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的提取方法[/font][font=宋体]有哪些[/font][font=宋体]？[/font][/b][font=宋体]①冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法，使细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。[/font][font=宋体][font=宋体]②先分离膜，然后提取。如选用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。收集[/font][font=Calibri]37%[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]41%[/font][font=宋体]间的成分，即为质膜部分。裂解即可收集膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中，于室温与液氮罐中反复冻融[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]次。[/font][font=Calibri]5000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心，驱除核及未裂解的细胞。取上清[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中。[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]中提取后测蛋白浓度，[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]电泳，分装后[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]度保存备用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]以上方法仅供参考，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。提取膜蛋白时，需要注意保持其生物活性，尽量减少对其结构和功能的破坏。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白有哪些？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，具有重要的生物功能。根据其结构和功能，可以将膜蛋白分为不同的类型，包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①外周膜蛋白：也称为外在膜蛋白，主要分布在细胞膜的内外表面上，多为水溶性，以非共价（氢键或离子键）的形式与膜的极性端结合在一起。[/font][font=宋体][font=宋体]②内在膜蛋白：也称为整合膜蛋白，在膜蛋白中占比最高，约为[/font][font=Calibri]70%-80%[/font][font=宋体]。一般穿过整个细胞膜，分为跨膜部分和膜外部分，跨膜部分可以为β桶状结构，或者由几个α螺旋围成的亲水性孔道，有利于物质的传输。[/font][/font][font=宋体]③脂锚定蛋白：一类以共价键形式与磷脂连接的蛋白，由于磷脂可以插入细胞膜中，带着蛋白质一起镶嵌到膜上。[/font][font=宋体]此外，还有一些特殊类型的膜蛋白，如糖蛋白、转运蛋白和酶等。这些蛋白在细胞的生命活动中起到了至关重要的作用。例如，转运蛋白可以参与物质的跨膜运输，而酶则可以催化特定的化学反应。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在研究膜蛋白时，可以采用不同的技术手段，如[/font][font=Calibri]X[/font][font=宋体]射线晶体学、核磁共振和冷冻电镜等。这些技术可以帮助科学家们了解膜蛋白的三维结构，从而更好地理解其功能机制。同时，由于膜蛋白在药物设计和细胞治疗等领域具有广泛应用价值，因此对其结构和功能的深入研究具有重要的实际意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]页面：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b][font=Calibri]SUMO [/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]small ubiquitin-like modifier[/font][/b][/url][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]）标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素样修饰蛋白，研究发现[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白最早于[/font][font=Calibri]1996[/font][font=宋体]年在酵母中发现其修饰的蛋白，后来发现从酵母到真核细胞都有泛素化修饰的蛋白。泛素化修饰作为一种很常见的蛋白翻译后修饰，也是目前一个研究热点。目前研究发现真核细胞中有多种[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白， [/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化主要修饰蛋白质的赖氨酸残基，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]化修饰是一个动态可逆的过程，通过修饰解离动态调节蛋白结构以维持不同的生理功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]作为融合标签蛋白的优势[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与[/font][font=Calibri]MBP,GST,GFP,TrX[/font][font=宋体]等标签比较具有更大优势：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]促进靶蛋白可溶性表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]作为伴侣蛋白，促进蛋白质正确折叠；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]对热和蛋白酶有很强的耐受性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]有配套的特异性蛋白酶可以切除标签，精准结构性识别，相比较于以来蛋白氨基酸序列的酶切位点具有更好的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]标签的分子量较小，相对于目标蛋白占比性较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]在蛋白质表达中的应用[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Sumo[/font][font=宋体]融合标签被广泛的应用于原核表达系统，除了用于常规蛋白的表达外还用于毒性蛋白，抗菌肽，蛋白二聚体的表达；但是其不能用于真核表达系统，原因是真核细胞内有[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]蛋白酶。但是道高一尺，魔高一丈，目前已经有公司开发出既可用于真核又可用于原核系统的[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签，以及配套的蛋白酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification[/font][/font]

[align=left][font='times new roman'][size=16px]动植物膜脂和膜蛋白提取方法[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜脂提取物的制备[/size][/font][/align]对于大豆卵磷脂样品，首先去除胶囊，将100 mg大豆卵磷脂样品用10 mL正己烷/异丙醇（1:1，v/v）稀释溶解，样品在4℃下超声10 min，样品再经0.45 μm微孔膜过滤，以备后续使用。肺腺癌细胞膜脂的提取方法参照Folch法。首先裂解肺腺癌细胞，向细胞液中加入18 mL已经配好的氯仿-甲醇（2:1，v/v）混合溶剂，摇匀后置于高速低温离心机4℃，3000 r/min离心10 min（摇匀过程中时刻注意溶液的温度，尽量避免温度过高）。然后向该体系中加入约2 mL的超纯水，摇匀后离心。上清液移除后用少量的甲醇-水（1:1，v/v）小心清洗上表面，得到肺腺癌磷脂提取物，过0.45 μm滤膜后，N[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]吹干，备用。冰箱-20℃保存，临用时现配溶液。[align=left][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肝脏膜蛋白质的制备[/size][/font][/align]参考试剂盒提取小鼠肝脏膜蛋白质的步骤如下：，试剂准备和组织预处理：取148 mg小鼠肝脏组织，用手术剪刀剪碎，移入4 mL离心管中，加入1 mL的膜蛋白提取剂A，冰浴15 min，之后将离心管中液体移入冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆70次。去除未破碎的细胞：在4℃下将样品于900 g离心10 min，为了确保上清液的纯度应尽量避免接触沉淀。收集肝脏浆蛋白和细胞膜碎片：将上清液继续在4℃下1400 g离心40 min，获得细胞膜碎片。上清液（肝脏浆蛋白）应置于-70℃下保存备用。提取肝脏膜蛋白质：尽量将上一步骤中上清液吸取干净，避免肝脏浆蛋白的干扰。加入300 μL膜蛋白提取剂B，高速涡旋10 s后立即进行冰浴10 min，重复上述步骤三次。随后立即4℃下14,000 g离心15 min，吸取上清肝脏膜蛋白溶液，-70℃下保存备用。

0.21微米和0.45微米的滤膜，所对应的截住蛋白的大小分别是多少？

请问，我在做蛋白质谱的过程中，酶切膜蛋白时，总有一些序列cover不到（哪怕胶内酶解PSM很高时，也没有改善）。请教有没有大佬传授一些经验，谢谢

新技术可揭示蛋白间相互作用 为膜蛋白研究提供了有力工具 科技日报多伦多3月28日电 （记者冯卫东）据最新一期《自然·方法学》杂志网络版报道，加拿大多伦多大学研究人员开发出一种研究人体蛋白质的新技术。该技术可追踪膜蛋白与其他蛋白之间的相互作用。 膜蛋白占人体所有蛋白的约三分之一，有500多种疾病与其失能相关。膜蛋白的研究难点在于，要了解其作用，必须基于对其与其他蛋白相互作用的观察。 多伦多大学细胞与生物分子研究中心教授伊戈尔·斯坦戈利亚称，新技术为检视人体细胞自然环境中的膜蛋白提供了新工具。其灵敏度足以检测到引入药物的微量变化，因此对癌症及神经疾病治疗方法的研发具有重要意义。 研究人员采用了一种被称为MaMTH（哺乳动物膜双杂交法）的新技术，来确定CRKII蛋白在最常见肺癌——非小细胞肺癌中的作用。CRKII蛋白可与表皮生长因子受体蛋白相互作用，而表皮生长因子受体的基因突变可导致癌细胞的增殖。 研究报告的主要作者、多伦多大学博士后研究员茱莉亚·佩斯奇尼格称，CRKII最有可能调控突变表皮生长因子受体的稳定性，并通过促进癌细胞间的信令传递或通信来推动肿瘤生长。研究发现，可抑制这些突变受体和CRKII的一种组合化疗法或对肺癌治疗大有助益。 此项研究汇聚了多伦多和波士顿地区的5个实验室的研究人员及癌症临床医师、生物信息学家。佩斯奇尼格及其实验室历时4年对适用于酵母的蛋白—蛋白相互作用的类似技术进行了改进，从而开发出新的MaMTH技术。研究人员下一步将对其他人体疾病中的突变蛋白进行研究。来源：中国科技网-科技日报 2014年03月31日

[font=宋体]膜蛋白表达是生物学和医学领域中一个重要的研究课题，但很多人对此并不十分了解。本文将为大家解答关于膜蛋白表达的常见问题，帮助大家更好地理解这一领域的基本概念、研究方法和应用前景。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q1:[/font][font=宋体]义翘神州膜蛋白[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台是利用什么系统表达的？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A1:VLP[/font][font=宋体]平台我们采用的是[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞表达的，获得的蛋白更接近天然构象，更有利于客户进行后续的研究和应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q2:[/font][font=宋体]膜蛋白[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品可以做体内生物素标记吗？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A2:[/font][font=宋体]可以的，可以选择在蛋白上加[/font][font=Calibri]AVI[/font][font=宋体]标签或者选择对[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]本身生物素化，体内定点生物素标记，具体根据您的需求选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q3:[/font][font=宋体]抗体与抗原结合在胞外，全长的多次跨膜蛋白意义大吗？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A3:[/font][font=宋体]多次跨膜蛋白在细胞膜上多次跨越，在胞外形成多个胞外区，比如[/font][font=Calibri]Claudin18.2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD20[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD133[/font][font=宋体]都有两个[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]extracellular loops[/font][font=宋体]），每个[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]都有特定功能甚至会相互影响。全长可以保证蛋白构象天然完整，而且[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]展现完全，帮助筛选靶向多次跨膜蛋白抗原的理想抗体。给大家看下面两张图，全长的意义就显而易见了，结构完整，功能上也有保证。这么看，全长也不是我们[/font][font=Calibri]ACRO[/font][font=宋体]一直在强调全长，而是客户需要全长的多次跨膜蛋白，满足客户需要的产品是[/font][font=Calibri]ACRO[/font][font=宋体]的初衷。我们也比较过，单独的胞外[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]区蛋白活性确实比全长蛋白差。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q4:[/font][font=宋体]相比其他非[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]产品，[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]有什么好处吗？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A4:Nanodisc-[/font][font=宋体]膜蛋白与去垢剂[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]膜蛋白相比，的确有不同。首先，原理上，[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]膜蛋白是将膜蛋白除去去垢剂之后组装在类细胞膜的[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]上。其次，应用上，我们都知道，去垢剂会溶膜从而对细胞产生损伤，[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]版本的膜蛋白因不含去垢剂，可以进一步扩展到用于细胞试验、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测，应用范围是更广的。另外，我们[/font][font=Calibri]ACRO[/font][font=宋体]使用的[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术已经获得专利持有方的授权，在研发过程中是可以放心使用的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q5:VLP[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台下的多次跨膜蛋白怎么去除非特异抗体？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A5:[/font][font=宋体]非特异抗体的影响不容忽视，使用[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台下的膜蛋白的确可能产生非特异抗体，我们这两个平台均有对应的用于反筛去除非特异抗体的空白对照：[/font][font=Calibri]VLP-[/font][font=宋体]膜蛋白有同型对照产品空白[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]；[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]有两款[/font][font=Calibri]MSP1D1[/font][font=宋体]空白产品，其中一款[/font][font=Calibri]MSP1D1[/font][font=宋体]作为[/font][font=Calibri]tag free [/font][font=宋体]膜蛋白的同型对照，如果使用生物素化的[/font][font=Calibri]Nanodisc-[/font][font=宋体]膜蛋白，另一款[/font][font=Calibri]MSP1D1[/font][font=宋体]可以作为同型对照。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q6:VLP[/font][font=宋体]相关蛋白能适合冻干保存吗？[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]的用于免疫有什么注意事项？比如能否乳化，对佐剂类型有没有要求？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A6:[/font][font=宋体]包膜[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品我们目前都是液体[/font][font=Calibri]-70[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]保存，干冰发货；非包膜[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]我们是冻干保存的。[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]免疫主要是需要注意佐剂量的选择，因为[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]本身是可以增强免疫原性的，跟常规蛋白不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q7:VLP[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]产品稳定性如何。冷冻长时间保存可以吗？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A7:VLP[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]本身的稳定性是很好的，是可以在[/font][font=Calibri]-70[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]长期保存的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q8:[/font][font=宋体]如何确认[/font][font=Calibri]VLP-Claudin18.2[/font][font=宋体]表达的是该目标蛋白，纯度如何评估？产品上的电镜图片，怎么确认颗粒上有该蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A8:Claudin18.2-VLP [/font][font=宋体]我们会通过[/font][font=Calibri]anti-Claudin18.2[/font][font=宋体]特异性的抗体进行检测验证。纯度我们通过电泳[/font][font=Calibri]/HPLC/DLS[/font][font=宋体]电镜进行评估。常规负染电镜因分辨率低是没办法看到[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]上是否有[/font][font=Calibri]Claudin18.2[/font][font=宋体]的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州搭建了基于[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]表达系统的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]virus-like particle[/font][font=宋体]）技术平台，能够将目的膜蛋白完整展示在[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]表面，使其能够像普通蛋白一样进行检测，已上线的[/font][font=Calibri]Claudin 18.2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GPRC5D[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin 6[/font][font=宋体]等产品均展示出良好活性。义翘神州目前可以为客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/membrane-protein-expression-service][b]膜蛋白定制服务[/b][/url]，助力药物研发进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]多次跨膜蛋白开发技术平台：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]形式的膜蛋白表达服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/membrane-protein-expression-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]跨膜蛋白按功能可以分为多种类型，其中包括[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体（[/font][font=Calibri]G[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]）、离子通道、转运蛋白以及其他类型受体等。这些蛋白在细胞内发挥着不同的作用，例如在信号传递、物质转运和细胞通讯等方面。[/font][font=Calibri]G[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]是一类广泛存在于生物体中的跨膜蛋白，它们可以识别并与外界分子相互作用，从而引发各种细胞内信号，因此它们被用作药物筛选的靶标。离子通道则可以调节细胞内外的离子浓度，如钠离子、钾离子、钙离子等，这对于细胞的正常运作至关重要。转运蛋白则可以协助物质的跨膜运输，对生物体代谢进行调控。这些跨膜蛋白虽然功能不同，但是在生物体中发挥着各自独特和不可或缺的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]跨膜蛋白表达与制备[/b][/font][font=宋体][font=宋体]多次跨膜蛋白由于其复杂的结构、具有多个疏水跨膜区以及在宿主细胞中表达水平极低等特点，使得其制备具有一定难度。需要采用合适的表达载体、宿主细胞、培养条件和纯化工艺等方法，来优化表达和纯化过程，如添加辅助蛋白，利用[/font][font=Calibri]Flag[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Strep[/font][font=宋体]等填料进行纯化等方法，最大程度地减少水解和构象异常等问题的发生，从而获得高效、高纯度、正确构象的跨膜蛋白产物。[/font][/font][font=宋体][b]跨膜蛋白制备流程：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]基因合成[/font][font=宋体]→载体构建→细胞转化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]转染→蛋白表达→细胞收集→细胞破碎→膜纸提取→膜纸增溶→蛋白纯化→质量检测[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]随着现代药物研究的发展，对于跨膜蛋白的需求越来越高，传统的跨膜蛋白制备方法已不能满足现代药物研发的需求。义翘神州致力于跨膜蛋白的产品开发，成功实现了多次跨膜蛋白的高效表达、纯化。与此同时，配备完备的技术流程和专业的技术人员，搭建了三大技术平台，可以为客户提供全面的多次跨膜蛋白产品和服务。同时，为基础研究和药物研发提供更加优质的原材料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]①[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]正确折叠的膜蛋白在细胞膜上表达，类病毒颗粒[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]通过出芽的方式包裹上携带有靶标蛋白的细胞膜，形成包膜的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]。它是由病毒的衣壳蛋白通过自组装而形成的纳米级颗粒（直径约[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]300[/font][font=宋体]纳米），不含病毒核酸，不能进行自主复制，生产操作过程中较为安全。产生的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]蛋白可直接像可溶蛋白一样进行包被进行[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州已成功开发[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]技术平台，它可以将完整天然构象的膜蛋白展示在类病毒颗粒表面，这种方法不仅可以保留膜蛋白的完整结构，同时也能够真实地模拟其在细胞膜上的位置和构象。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台制备跨膜蛋白具有以下优势：[/font][/font][font=宋体]? 全长跨膜蛋白，保持完整的天然构象[/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测、抗体筛选等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]义翘神州提供：[url=https://cn.sinobiological.com/services/membrane-protein-expression-service][b]VLP[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/membrane-protein-expression-service][b]形式的膜蛋白表达服务[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州搭建了基于[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]表达系统的[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]virus-like particle[/font][font=宋体]）技术平台，能够将目的膜蛋白完整展示在[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]表面，使其能够像普通蛋白一样进行检测，义翘神州目前可以为客户提供膜蛋白定制服务，助力药物研发进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、去垢剂技术平台[/b][/font][font=宋体][font=宋体]由于存在疏水结构域，跨膜蛋白与膜的结合非常紧密，需要用去垢剂（[/font][font=Calibri]detergent[/font][font=宋体]）才能从膜上洗涤下来，[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]作为一种两亲性分子，疏水尾部包裹目的蛋白的疏水区域，亲水头部位于与溶液接触的界面。微团的形成是膜蛋白增溶的基础，当去垢剂浓度高于[/font][font=Calibri]CMC[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Critical micelle concentration[/font][font=宋体]，临界胶束浓度）时会形成微团，增溶后，去垢剂将蛋白周围的磷脂置换，从而实现收集目标膜蛋白的目的，后续再进行蛋白纯化，最终蛋白呈现在含有[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]的溶液中。义翘神州成功搭建了去垢剂技术平台，利用该平台可有效提高跨膜蛋白的产量和纯度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]去垢剂技术平台的优势：[/font][font=宋体]? 可精确定量[/font][font=宋体]? 胶束为膜蛋白疏水基团提供保护并稳定构象[/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]检测等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]结构稳定，与天然的生物膜非常相似，使得[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]能够很好地应用于膜蛋白的研究。目前[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]平台有[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]种方式，一种是基于苯乙烯马来酸酐共聚物（[/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]）组装的[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台，如下图（左）所示，它可以直接从细胞膜上提取膜蛋白，使其变为可溶性蛋白，组装完成的蛋白样品很稳定，更能维持蛋白的天然构象。另一种是基于膜骨架蛋白（[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]）的[/font][font=Calibri]MSP-Nanodisc[/font][font=宋体]平台（下图右），它需要先将膜蛋白利用去垢剂制备出来，然后再加入磷脂分子和[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]进行组装。通过调整磷脂、[/font][font=Calibri]MSP[/font][font=宋体]和待组装膜蛋白三者的比例，可以使得待组装膜蛋白在[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]中呈不同聚集状态。义翘神州已成功搭建了[/font][font=Calibri]Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台，利用跨膜蛋白与磷脂结合能够维持其良好活性的特性，制备出稳定的产品，满足动物免疫、抗体筛选、[/font][font=Calibri]cell-based assays[/font][font=宋体]等场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]技术平台的优势：[/font][/font][font=宋体]? 可精确定量[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]SMA[/font][font=宋体]共聚物包裹的膜蛋白稳定性更好，有助于更好地研究膜蛋白的结构和功能[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 适用于动物免疫、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测及细胞实验等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font]

现在，在实验研究基础上，借助多方面的生物信息学方法，可以快速高通量的预测和进行蛋白质鉴定蛋白翻译后修饰。分泌蛋白和膜相关蛋白附着于细胞膜上的或将被排泄出去的蛋白质是由细胞内质网膜上附着的核糖体合成。附着有核糖体的内质网被称为糙面型内质网。这类蛋白质都含有一个N-末端（或氨基端），我们称之为信号序列或信号肽。这个信号肽通常情况下含有13-36个主要疏水性残基，同时它含有多蛋白复合物，我们称之为信号识别粒子(SRP)。这种信号肽在通过内质网膜之后会被去除。信号肽的去除过程是在信号肽酶催化作用下完成的。含有一个信号肽的蛋白质被称为前蛋白，有别于原蛋白。然而，某些用于分泌的蛋白在分泌之后会进一步被蛋白水解，因此包含有原蛋白的序列。这类蛋白质被称为前原蛋白。蛋白水解性裂解许多蛋白质在翻译之后会经历水解性裂解过程。其中最为简单的形式是去除起始蛋氨酸。许多蛋白质合成了不活跃的前体细胞，这些细胞只能在合适的生理条件下通过限制性蛋白水解过程产生活性。在凝血过程中使用到的胰腺酶和酶类就是后者的例证。多肽去除时产生活性的不活跃的前体蛋白，我们称之为原蛋白。前原蛋白的翻译后加工过程的一个复杂的例子就是脑垂体分泌合成的前阿黑皮素原的裂解过程（有关前阿黑皮素原的讨论，见肽类激素页）。这类前原蛋白经过复杂的裂解，根据合成的前阿黑皮素原的细胞定位而不同，其路径也有所不同。另一个前原蛋白的例子就是胰岛素。由于胰岛素是由胰腺分泌的，因此它有一个前肽。随着含24个氨基酸的信号肽的裂解，这类蛋白也折叠成了胰岛素原。胰岛素原进一步分裂，产生活跃的胰岛素，它包含两个肽链，由二硫键进行连接。但仍有其他的蛋白（酶类）被合成为非活跃的前体细胞，被称为酶原。酶原在蛋白水解性裂解时会产生活性，在凝血串联蛋白质链的若干蛋白质中都会发生这种现象。甲基化作用蛋白翻译后的甲基化过程主要发生在氮原子和氧原子上。活性甲基供体是活性腺苷甲硫胺酸(SAM)。最常见的甲基化作用发生在赖氨酸残基的ε-amine上。脱氧核糖核酸组蛋白中赖氨酸残基的甲基化作用可调节核染色质结构，因此可调节其转录活性。赖氨酸原本被认为是一种常设共价标记，可提供长期信号，甚至包括转录记忆时的组蛋白依赖机制。然而，最近的临床研究表明赖氨酸甲基化作用与其他共价修饰体相似，作用时间短，并能通过反脱甲基化活动进行动态调节。最近的组学研究发现表明，赖氨酸残基的甲基化作用不仅发生在核染色质层面，而且还通过修订转录因子影响基因表达。组氨酸的咪唑环，精氨酸的胍基部分以及谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组酰胺（R-group amides ）上，都发现了额外的氮甲基化作用。谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组羧化物也会发生氧甲基化作用并形成甲基酯。蛋白可能在半胱氨酸的R[

刚测了一个样品，测金膜表面蛋白的N和S。原则上，蛋白中N的含量远远大于S，可是为何可测到S却测不到N？

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]具有多种生理功能，包括蛋白连接、识别、转运、锚定和转导等，其功能的异常与诸多疾病相关。膜蛋白是重要的药物靶点，据统计，约[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]药物的靶向分子为膜蛋白。然而，由于表达量低、体外不溶、纯化不稳定、难保持天然构象等问题的存在，限制了跨膜蛋白在药物开发方面的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州聚焦于多次跨膜蛋白产品的开发，成功搭建了三大技术平台，为药物早期研发提供重要的原材料。目前产品包括四次跨膜蛋白[/font][font=Calibri]Claudin-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-18.1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Claudin-18.2[/font][font=宋体]，七次跨膜蛋白[/font][font=Calibri]GPRC5D[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CXCR4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SSTR2[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]跨膜蛋白开发常见问题解答：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①如何选择膜蛋白开发平台？[/font][font=宋体]不同膜蛋白平台具有不同的优势和劣势，应根据下游应用、成本、周期等因素进行考量。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]包被：可直接包[/font][/font][font=宋体]活性：较好[/font][font=宋体]稳定性：较稳定[/font][font=宋体]纯度：混合物[/font][font=宋体][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]：可检测[/font][/font][font=宋体]需考虑因素：浓度为总蛋白浓度；制备周期相对较短。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]平台：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]包被：不可直接包[/font][/font][font=宋体]活性：最好[/font][font=宋体]稳定性：不稳定[/font][font=宋体]纯度：较纯（只有目标蛋白）[/font][font=宋体][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]：可检测，溶液需调整[/font][/font][font=宋体]需考虑因素：制备周期相对较长，成本较高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]包被：可直接包[/font][/font][font=宋体]活性：较好[/font][font=宋体]稳定性：较稳定[/font][font=宋体]纯度：较纯（只有目标蛋白）[/font][font=宋体][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]：适合检测[/font][/font][font=宋体]需考虑因素：制备周期相对较长，成本较高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]②HPLC[/font][font=宋体]分析是否可以表征[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]形式膜蛋白的纯度？[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]HPLC[/font][font=宋体]方法可用于检测产品溶液中[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]颗粒的大小和均一程度，而[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台产生的蛋白除目标蛋白外还包括其他内源性的蛋白，故无法表征目标蛋白的纯度；由于[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品为混合物，目前对[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]产品的检测主要以活性检测为主，纯度仅作为一项参考指标。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③我想购买膜蛋白产品做免疫和抗体筛选，应该怎么挑选？[/b][/font][font=宋体][font=宋体]目前，我们的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个平台的产品各有特点，客户可以按照实际情况进行选择。[/font][font=Calibri]VLP[/font][font=宋体]平台产品是一个混合物，与细胞免疫相比靶标蛋白的丰度有所提高，在没有其他平台的产品时可以用于免疫和抗体筛选。由于[/font][font=Calibri]Detergent[/font][font=宋体]平台的产品存在去垢剂，因此，需要考虑去垢剂对于免疫动物的毒害和免疫过程中蛋白变性的风险。比较而言，[/font][font=Calibri]SMA-Nanodisc[/font][font=宋体]平台的产品既拥有较高的靶蛋白丰度，又能维持好的天然构象，特别推荐用于动物免疫和抗体筛选实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可关注[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein][b]膜蛋白开发平台[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/multi-pass-transmembrane-protein[/font][/font]

[font=宋体][b]什么是重组蛋白？[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核蛋白表达，哺乳动物细胞蛋白表达，酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连，这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念，融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略，融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点，现已被广泛采用。融合蛋白又称标签（[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]），常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结：在生物制药领域，重组蛋白具有较高的活性和纯度，更易吸收，安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白，基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素：[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易，应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说，重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务，例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息，详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]

层析柱过滤蛋白的 它的过滤膜怎么选择？

本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此，蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 　　不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein），是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。在国际市场上，胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 　　胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准： 　　常规各项理化指标： 　　1. 澄清度（磷酸盐、碱性沉淀）：无沉淀、澄清 　　2. 2%水溶液：透明 　　3. 酸碱度：6－7 　　4. 氨基氮：≥3% 　　5. 色氨酸：≥0.8% 　　6. 胨含量：≥80% 　　7. 总氮：≥13% 　　8. 水份：≤5% 　　9. 灰份：≤6% 　　10. 氯化钠：≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物，与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上，属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。

通过二维相关红外光谱，研究了再生蚕丝蛋白膜的构象及其转变与温度之间的关系。

[font=宋体][font=宋体]蛋白标签（[/font][font=Calibri]Protein Tag[/font][font=宋体]）又称为标签蛋白，是利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]体外重组技术，将目的蛋白与其融合表达形成的一种多肽或蛋白。这种标签有助于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等操作。随着技术的不断进步，研究人员已经成功开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。然而，由于不同的蛋白标签具有各自的特性，因此在质粒构建过程中常常会遇到多种问题。今天，我们将深入探讨蛋白标签的各个方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白标签类型[/b][/font][font=宋体]蛋白标签主要分为三类，适用于不同的应用场景：表位标签、亲和标签和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。最常用的表位标签有[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②亲和标签一般较长，可增加蛋白溶解度，广泛应用于重组蛋白的纯化，如[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）、橙色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体]）、红色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]RFP[/font][font=宋体]）和黄色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体]）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]蛋白标签在重组蛋白生产中有什么作用[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、识别：给蛋白加标签使其易于识别，进而快速鉴定感兴趣的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、纯化：利用标签蛋白对目的蛋白进行纯化。例如，[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是一种由六个组氨酸残基组成的融合标签，可以插入目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，这使得[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]标签可用于固定化金属螯合层析[/font][font=Calibri](IMAC)[/font][font=宋体]，从而对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定量：通过量化标签来确定目的蛋白的存在量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、定位：通过定位标签蛋白定位到目标蛋白在细胞中的特定位置，进而研究其生理功能、信号通路等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、跟踪：在细胞、组织和生物体中，通过追踪标签蛋白质追踪目的蛋白，以研究它们的表达、分布、代谢等生物学过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，蛋白标签在重组蛋白生产中扮演着重要的角色，它们不仅提高了生产效率，还为蛋白的检测、纯化和示踪提供了便利。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]有：[/font][font=Calibri]His-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HA-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production][b]Myc-Tag[/b][/url][/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SUMO-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Trx-Tag[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]……义翘神州不仅可提供重组蛋白表达定制服务，也可提供对应标签抗体产品及融合蛋白标签切除常用工具酶，如[/font][font=Calibri]EK[/font][font=宋体]蛋白酶、[/font][font=Calibri]3C[/font][font=宋体]蛋白酶等。下图是具体蛋白标签的序列和大小介绍，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]

将在药物开发进程中发挥重要作用2011年03月26日 来源： 科技日报 作者： 常丽君　　本报讯 据每日科学网近日报道，美国范德堡大学研究人员开发出一种新型激光技术，可检测细胞膜上的蛋白质和其它多种生物分子之间的相互反应。这种检测将在药物开发进程中发挥重要作用。 　　人类细胞中约有7000种蛋白质，其中30%在细胞膜上，控制细胞分子运作机制的信号有60%—70%由这些膜蛋白产生，因此当前市场上约一半的药物都是瞄准细胞膜蛋白。但因为膜蛋白很难提纯，科学家在研究它们的结构时面临很多困难。现有的检测膜手段大多是将膜蛋白从其所处环境中分离，或用不同方式如荧光标签加以修改，以分析它们的活性。这些方法不仅昂贵耗时，还可能会影响目标膜蛋白的功能。　　范德堡大学化学生物研究院化学教授达里尔·波恩霍普领导的研究小组和斯克里普斯研究院合作，开发了一种名为“后向散射干涉仪”（BSI）的新型激光技术，能精确检测出膜蛋白和自然界中各种分子之间的结合力。　　BSI操作起来很简单，只要把两种分子混合装入一个充满液体的显微镜小盒中，用一束类似于条形码扫描仪的红色激光照射，就能测出它们之间的结合力。小盒的几何形状调整合适后，激光就会产生干涉图案，而这种干涉图案对分子之间的反应非常敏感。如果分子开始互相作用，图案就开始变换。　　为了检验BSI的准确性，研究人员制造了一种含有GM1小蛋白质的合成膜，霍乱毒素要进入细胞，主要结合对象就是这种小蛋白质。他们把霍乱毒素B和这些膜混合，检测出的结合力结果与用其他方法所得到的结果一致。为了进一步确认，他们还用了一种和胸腺癌相关的天然分离膜和3种分别与疼痛、发炎和神经传导素GABA（用于放松、睡眠和调节紧张）相关的蛋白质膜进行检验，把包含这些蛋白质的膜和对应结合分子相混合，用BSI技术测得的值也和用其他方法得到的结果一样。　　此外，该技术进入商业化也前景广阔，范德堡大学对新型激光检测技术已申请了专利，并已获得3项批准。他们还专门成立了一家分子传感公司对新技术进行独家开发。

β-乳球蛋白属于乳白蛋白还是属于乳球蛋白里面的一种成分？最近看到有两种版本，其一，说是属于乳白蛋白里面的一种成分，乳白蛋白包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和血清白蛋白。乳球蛋白即免疫球蛋白。其二，乳白蛋白包括α-乳白蛋白和血清白蛋白，乳球蛋白包括β-乳球蛋白和免疫球蛋白。现在不知道哪种说法对，请各位指教！！！谢谢！！！

尿微量蛋白（尿微量白蛋白/蛋白尿）试验（也称“白蛋白试验”，“尿微量白蛋白”和“蛋白尿”试验）何为尿微量白蛋白（白蛋白）试验？尿微量白蛋白试验是对尿液中的蛋白质进行测定的筛选试验。人体血液中有一种蛋白质称为白蛋白。在正常情况下，几乎无法在尿液中检测到。只有在肾脏受损，尤其是损伤早期，它可以优先于其他肾损伤标志物在尿液中被检测出，因此，尿微量白蛋白在诊断肾脏疾病、早期肾损伤等方面具有重要意义。此项试验有何目的？蛋白质是人体的基本构成“材料”，具备一些重要的功能和作用，可结合营养物质将其运输至各个组织，，并将人体中循环的体液量维持在适当水平。肾脏功能正常时，蛋白质几乎无法通过肾脏进入尿液（仅会排出血液循环产生的废料）。然而，如果人的肾功能受损或衰竭，该肾脏对蛋白质的过滤能力将有所下降，因而一些蛋白质将会透过肾脏而出现在尿液中，称为尿微量蛋白。尿微量白蛋白与蛋白尿有何不同？白蛋白是一种大量存在于血液中的典型蛋白质。因其分子个头小，当肾脏功能出现问题时，白蛋白是能够率先通过肾脏进入尿液的几种蛋白质之一。尿液中出现少量白蛋白的情况称为尿微量白蛋白。若肾脏功能受损严重，尿液中的白蛋白数量呈现出增长趋势，这种症状被改称为蛋白尿。尿微量白蛋白/蛋白尿有何症状？病症早期，并无明显症状或征兆显现。随着肾功能衰竭的加重，大量蛋白质出现在尿液中，手脚、腹部和面部可能出现肿胀。如果蛋白尿的情况加重，可能会造成永久性肾功能损伤，有些病人可能需要做透析或肾移植。不论上述症状是否存在，尿蛋白测定是确定有多少蛋白质进入尿液的唯一办法。蛋白尿还可能引发心血管疾病。血管受损除了会引发肾脏疾病外，还可能会造成窒息和心力衰竭。患蛋白尿（症）的高危人群有哪些？患有糖尿病、高血压、心血管疾病和其他类型肾脏疾病等慢性病的病人易出现蛋白尿。老年人、肥胖人群以及有肾脏疾病家族史的人群。其

[size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]什么是大豆分离蛋白？[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上，氨基酸种类有近20种，并含有人体必需氨基酸。其营养丰富，不含胆固醇，是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。[/font][/size][b][size=12pt][font=微软雅黑]喷雾干燥在大豆分离蛋白中的应用-生产工艺[/font][/size][/b][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白（Soy Protein Isolate，简称 SPI）是指干基蛋白质含量≥90%的粉状大豆制品，大豆分离蛋白的制取工艺有多种，如碱溶酸沉法、膜分离法等，其中碱溶酸沉法生产大豆分离蛋白是目前世界上最常用的工艺，它以低温脱脂脱溶豆粕为原料，通过碱溶及等电点沉淀将脱脂豆粕中的可溶性和不溶性碳水化合物除去。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]工艺流程：低温豆粕-碱液提取-离心分离-酸沉-离心分离-中和-杀菌-喷雾干燥-大豆分离蛋白。[/font][/size]

[font=宋体][font=宋体]蛋白质的检测在生物科学研究中占据着至关重要的地位。其中，免疫分析方法被广泛应用，包括[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）和免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）等。这些方法依赖于抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体间的特异性反应，通过注射目标蛋白作为抗原至动物体内，产生免疫反应后分离抗体，进而进行检测。尽管应用广泛，但这种方法的缺点在于每次更换目标蛋白时都需要制备对应的抗体，操作繁琐且成本高昂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签技术的出现为蛋白质免疫分析带来了通用化和便利化。通过将特定的标签与目标蛋白融合，两者实现共同表达。通过对融合标签的检测，我们可以了解目标蛋白的表达情况。这种蛋白标签技术利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽、蛋白质结构域甚至完整蛋白质与目标蛋白结合，广泛应用于目标蛋白的表达、纯化、检测和跟踪等方面。经过长期研究，已经发展出一些成熟的检测标签技术。这些标签不仅简化了实验操作，降低了成本，而且为蛋白质研究提供了强有力的工具。下面就挑几个来介绍一下：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体][font=Calibri]His[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]-tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]His[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]标签[/b][/url]是当前最为热门的标签蛋白之一。[/font][font=Calibri]His6[/font][font=宋体]是指六个组氨酸残基组成的融合标签（[/font][font=Calibri]HHHHHH[/font][font=宋体]），可插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析（[/font][font=Calibri]IMAC[/font][font=宋体]），对重组蛋白进行分离纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体][font=Calibri]Flag-tag[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]Flag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/flag-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]为编码[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]个氨基酸的亲水性多肽（[/font][font=Calibri]DYKDDDDK[/font][font=宋体]），同时载体中构建的[/font][font=Calibri]Kozak[/font][font=宋体]序列使得带有[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体][font=Calibri]AviTag[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是一个[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]是从人的[/font][font=Calibri]O6[/font][font=宋体]－甲基鸟嘌呤[/font][font=Calibri]-DNA[/font][font=宋体]甲基转移（[/font][font=Calibri]O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase[/font][font=宋体]）获得。[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使[/font][font=Calibri]SNAP[/font][font=宋体]所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内[/font][font=Calibri]SNAP-Tag[/font][font=宋体]融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的[/font][font=Calibri]SNAP-tag[/font][font=宋体]融合蛋白。 [/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑤[/font][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶）[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用[/font][font=Calibri]10mM[/font][font=宋体]还原型谷胱甘肽洗脱。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]纯化：该表达系统表达的[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和树脂进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]⑥[/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]（绿色萤光蛋白）是由下村修等人在水母中发现的。它在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签可位于蛋白质的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]标签抗体也被广泛应用。[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中，起到了重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]该如何选择表达克隆的标签[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、首先，需要确定融合标签的目的[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化[/font] [font=宋体]：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]常被用于细胞内源蛋白的纯化。[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用[/font][font=Calibri]6XHis Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测：若需要做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]实验中常用的[/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀反应：[/font][font=Calibri]FLAG Tag[/font][font=宋体]其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中最常用的[/font][font=Calibri]Tag. [/font][font=宋体]其他常用的标签有：[/font][font=Calibri]HA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]cMyc.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白[/font] [font=Calibri]A [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]G [/font][font=宋体]偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞成像：荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Fluorescent Proteins, FPs[/font][font=宋体]）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中最常用的是绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）和它的衍生物（[/font][font=Calibri]CFP, YFP, etc.[/font][font=宋体]），以及一些红色变体，如[/font][font=Calibri]dTomato[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]mCherry.[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、考虑融合标签的影响[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、考虑是在[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]端标记和[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]