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蛋白磷酸化

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蛋白磷酸化相关的方案

  • 人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒
    人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗原、生物素化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 内标掺入SILAC法用于小量组织的蛋白质组及磷酸化蛋白质组定量
    在这篇工作中,我们采用内标掺入 SILAC 的定量方法对大鼠胰岛进行了蛋白质组以及磷酸化蛋白质组的定量研究。通过对 SILAC 培养基的成分比例调整,我们优化了 INS-1E 细胞的标记方法。胰岛内包含多种细胞类型,如α 细胞,β 细胞,δ 细胞等,我们发现采用 INS-1E 细胞系(一种β 细胞系)已经可以较好的覆盖胰岛的全蛋白质组和磷酸化蛋白质组。若关心胰岛中的α 细胞的话,则可以标记α 细胞系来作为内标掺入胰岛。此外,我们还可以采用多种细胞系作为内标,这种称为“Super SILAC”的方法来完成对复杂组织蛋白质的全覆盖。 在磷酸化蛋白质组学流程中,我们采用了自制的基于StageTip 的TiO2萃取小柱来灵活的实现小量样品的磷酸化肽段富集。样品量始终是磷酸化以及其他一些翻译后修饰研究绕不过去的话题,一般来说只有增加样品量,并采取适当的预分级手段才能更深度的去覆盖这些翻译后修饰蛋白质组。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒(Cat # 88300),鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性,这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在这部分工作中,我们采用了高 pH 反相色谱结合二氧化钛富集以及二氧化钛富集结合强阳离子交换分级两条技术路线来对实现对 Hela 细胞的磷酸化蛋白质组的深度覆盖。最终我们的实验一共鉴定到了 8,696 个蛋白质上的近 40,000 个磷酸化位点。 在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中,SCX 分级的梯度还值得进一步优化,对于这种组分较少的预分级方法,阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高,如果样品较少的话,建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略,一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher也提供了商业化的 IMAC 试剂盒(Cat # 88300),鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性,这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类 磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中,SCX 分级的梯度还值得进一步优化,对于这种组分较少的预分级方法,阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高,如果样品较少的话,建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略,一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒(Cat # 88300),鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性,这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite在磷酸化蛋白质组学中的应用
    从上述结果可以得出,LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite检测结果可靠性高,系统稳定性高,质谱质量轴稳定性高,在短时间内可以鉴定到大量高可信的磷酸化修饰肽段以及磷酸化位点,可以很好的应用于磷酸化蛋白质组学研究,同时本次实验还说明对样本使用TiO2进行多次重复富集可以显著提高样本中磷酸化肽段的比例,提高磷酸化肽段与位点的鉴定数目。
  • 通过磷酸化技术提高纳米级抗VEGFR2结合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性
    为了克服Adnectin存在的问题,本文设计了一种新型的Adnectin C,将其融合到含有Pro/Ala/Ser(PAS)重复残基的可生物降解多肽中。用标准方法比较大肠杆菌表达的重组融合蛋白和未融合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性。使用Linseis STA PT1600热分析仪器进行DSC和TG实验。动态光散射(DLS)分析表明,磷酸化Adnectin C的粒径增加了约2倍,净电荷略有变化。此外,PAS序列的融合提高了其抗热诱导聚集形式生长的稳定性。酶联免疫吸附试验(ELISA)和表面等离子体共振实验分别证实了酶联蛋白C的高受体结合和改进的结合动力学参数。药代动力学研究显示,单次静脉注射给雌性BALB/C小鼠后,Adnectin C-PAS#1(200)的最终半衰期显著增加了4.57倍。结果表明,磷酸化可以作为开发Adnectin衍生药物的一种更好的给药策略,提高患者的依从性。
  • 磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉改性的研究
    试验研究磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉物理性质的影响。比较三聚磷酸钠浓度、超声功率、超声时间、温度4个影响因素对淀粉的交联度、透明度、凝胶强度、糊化特性的影响。试验结果表明:磷酸化协同超声波处理可有效改玉米淀粉交联度、透明度,凝胶强度和淀粉糊化特性。磷酸化协同超声波可以有效对玉米淀粉进行改性。
  • 精确修饰位点谱图库的建立与磷酸化蛋白质组的 DIA 解析
    PTM位点鉴定错误的概率较高,将位点错误的鉴定结果作为谱图库,会导致DIA解析结果的不可靠。实验使用Thermo ScientificTM Orbitrap Fusion三合一质谱仪,基于ptmRS/phosphoRS建立可靠的翻译后修饰DIA流程,突破了PTM DIA解析的瓶颈。使用phosphoRS/ptmRS筛选PTM定位准确的谱图,作为谱图库用于DIA,结果显示,具有精确PTM定位的谱图库中98.4%的磷酸化肽都获得了可靠的DIA解析(Q0.01),峰面积CV值20%的肽段占86.9%,实现了准确可靠的大规模PTM DIA定量。
  • 人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒
    人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗原、生物素化的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒
    人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶M(PYGM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 一种用于磷酸肽鉴定和磷酸化位点定位的新型自动化、高选择性磷酸肽富集方法
    针对 HUPO 磷酸肽挑战赛,使用 AgilentAssayMAP Bravo 平台和 LC/Q-TOF 系统进行自动化磷酸肽富集以实现定性和定量分析。执行 CID 肽鉴定实验,在“磷酸肽”样品中鉴定出 437 种特有肽段,其中包括94 种磷酸肽。鉴定出 HUPO 序列表中的所有 89 种非磷酸肽。ECD 实验基于 89个非磷酸肽序列确定了 96 种磷酸肽的磷酸化位点。还将序列表中未列出的其余肽返回给 HUPO。在富集的“磷酸肽-酵母”样品中,鉴定出 287 中特有肽段,其中包括 264 种特有磷酸肽。富集的总体选择性约为 92.0%。此外,从富集的“磷酸肽-酵母”样品中仍鉴定出加入酵母中 96 种磷酸肽中的95 种。与开展本研究中的其他实验室相比,安捷伦从富集样品中回收的磷酸肽数量最多。
  • 人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒
    人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗原、生物素化的人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • Molecular Devices CatchPoint cAMP荧光检测试剂盒应用方案解析
    G蛋白偶联受体(GPCRs)是重要的跨膜蛋白,能将胞外信号传导入胞内,引起信号逐级放大的级联反应,导致胞内某些蛋白活性或表达的改变[1]。3’, 5’-单磷酸化环腺苷(cAMP)作为第二信使参与GPCR活化后的下游反应。当胞外配体作用于GPCR时,GPCR构象发生改变,激活胞内连接的G蛋白。接下来的信号传导路径与被激的G蛋白类型有关。其中当Gs蛋白被激活时,会导致腺苷酸环化酶活化引起的胞内cAMP浓度上调,进一步激活蛋白激酶A,最终促进一些目标蛋白的磷酸化,这些目标蛋白可能参与了例如多巴胺神经信号传导、葡萄糖再生反应、血管扩张、细胞有丝分裂、卵子成熟等重要生理生化过程[2-6]。
  • 使用高通量RNA干扰技术筛选DNA损伤- Molecular Devices ImageXpress Micro XLS
    MD公司开发了一款非常强力的筛选平台—ImageXpress系统。该系统拥有完整的图像获取及分析模块,可以快速生成想要的数据。本文列举了如何通过对磷酸化的组蛋白H2AX和DNA进行免疫荧光双色分析方法来检测DNA损伤。组蛋白H2AX在丝氨酸139位点的磷酸化被认为是药物或辐射造成的DNA损伤的敏感标记。文中也阐明了我们利用RNAi对双色标定DNA损伤分析是一个敏感和快速的自动化过程,而且这种方法被证明可以有效发现新的目标。
  • 细胞转染实验解决方案
    要通过克隆化基因生产名副其实的真核生物活性蛋白,往往需要进行翻译后加工,像二硫键的形成、糖基化、磷酸化等等。受到自然界原核生物经常分享遗传物质的启发,人们开始将一些外源分子如DNA、RNA、蛋白等分子导入真核细胞中,细胞转染技术应运而生,尤其在研究基因功能、基因治疗、基因表达调控的时候会经常使用此技术。
  • Empore™ C18固相萃取膜片应用于自来水中微囊藻毒素的检测
    微囊藻毒素(Microcystin,MC)是一类具有生物活性的,自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用,与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准(GB/T 5749-2006),将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0μ g/L,该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求[1]。实验中,采用1升水样通过47mm的Empore™ C18固相萃取膜片(货号:98-0604-0217-3)处理,并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过HPLC对提取物进行定量[2]。
  • 人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)ELISA试剂盒操作步骤
    检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被样本抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
  • 使用格哈特系列营养分析仪器进行添加磷酸钙的特殊医学用途配方食品中总脂肪、总膳食纤维、蛋白质的测定
    补充磷酸钙对人体胆固醇代谢的影响Cholesterol Metabolism Is Affected by Calcium Phosphate Supplementation in Humans食品总脂肪使用格哈特全自动索氏提取仪soxtherm在酸水解后进行索氏提取测定食品中总膳食纤维使用酶重量法测定 食品蛋白质含量使用蛋白质转换系数6.25计算
  • 利用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 和 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对单克隆抗体进行高分离度快速肽谱分析
    肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离,然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据,从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式,可以轻松鉴定出共流出的多肽,同时也可以大幅缩短梯度时长。此外,串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段,并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析,肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率,可确保实现可靠灵敏的肽鉴定,而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度,而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外,本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化,实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。
  • 电位滴定法测定腺苷含量
    腺苷是用于合成三磷酸腺苷(ATP)、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中间体,分子式为C10H13N5O4。它可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸,参与心肌能量代谢,还会参与扩张冠脉血管,增加血流量。其对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。本次实验测定某厂家生产的腺苷含量是否达标,采用T960全自动电位滴定仪测按照其电位突跃点确定终点,测定其含量。
  • 4种蛋白质沉淀剂测定乳粉中非蛋白氮含量的效果
    目的:测定乳粉中非蛋白氮含量,比较4种蛋白质沉淀剂分离蛋白质和非蛋白含氮物质的效果。 方法:样品加水溶解后分别用15%三氯乙酸溶液、丙酮、20%乙酸铅溶液+3%草酸钾+7%磷酸氢二钠溶液、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质,过滤后取滤液进行消化定氮,同时在样品中加标三聚氰胺,检测计算回收率。结果:三氯乙酸沉淀法的非蛋白氮含量为0.2036±0.0002%,丙酮沉淀法的非蛋白氮含量为0.0981%±0.0050%,乙酸铅沉淀法的非蛋白氮含量为0.1372%±0.0012%,乙酸锌沉淀法的非蛋白氮含量为0.3466%±0.0100%。当 10 g 样品中加标量高于2 mg 低于20 mg 三聚氰胺时,三氯乙酸沉淀法的加标回收率最好。结论:三氯乙酸沉淀法结果准确度和稳定性较其他3种方法更好,但受到加标量的影响,当10 g 样品加标79.2 mg时,三氯乙酸沉淀法加标回收率低且相对标准偏差较大,此时乙酸铅沉淀法的加标回收率优于三氯乙酸沉淀法。
  • 【仪电分析】工作场所空气有毒物质五氯酚和五氯酚钠的测定 -高效液相色谱法
    五氯酚(简称PCP)是一种酚类化合物,常用于消毒,杀灭血吸虫中间宿主钉螺,除莠,防腐及防霉。在我国,主要用其钠盐五氯酚钠杀灭钉螺,在灭螺药物中,算是一张皇牌,因而应用甚广。国外则多用于防腐。五氯酚钠进入人体后分解成五氯酚,五氯酚具有有机氯和酚的毒性,能抑制生物代谢过程中氧化磷酸化作用,可对人体的肝、肾及中枢神经系统造成损害。
  • 人血白蛋白及其聚体在BioCore SEC-300上的分离
    Column:BioCore SEC-300, 5 μ mDimension:7.8× 300mm+7.8× 300mm串联Mobile phase:150mM 磷酸盐缓冲液pH 6.8Flow rate:1 mL/minTemperature:30 ℃Injection:10 μ LDetection:UV 210 nmSample: 人血白蛋白水溶液Peaks:1. 人血白蛋白2. 人血白蛋白二聚体3. 人血白蛋白多聚体
  • 使用Innova? S44i 摇床和4 x 1.5 L 离心收获套装生产重组人磷酸丝氨酸磷酸酶
    重组蛋白质生产的目标是产生高产量的功能性蛋白质。实验成功的重要基础是细胞的培养以及离心(离心是蛋白质分离和纯化的基本技术)。本应用指南描述了用作概念系统验证的重组人磷酸丝氨酸磷酸酶(hPSP)的生产流程。从Innova? S44i 摇床中细菌培养物的生长开始,使用装载6 L转子的高速离心机(CR30NX 或CR22N),搭配1.5 L 三角离心瓶收获这些培养物。该离心收获套装可辅以“ 锥底管高速沉淀离心套件”(转子含配套的50 mL 锥底管),用于裂解后续的分离操作。结果表明,这种产品组合高效灵活,可为重组蛋白大规模生产工作流程奠定基础。
  • 应用 HPLC-ICP-MS 进行富硒酵母中含硒蛋白的鉴定
    本文建立了有效的 ICP-MS 辅助蛋白质组学方法,用于鉴定市售富硒酵母样品不溶性硒组分中的含硒蛋白。采用双向凝胶电泳分离含硒蛋白,并用胰蛋白酶进行裂解。采用LA-ICP-MS、毛细管 HPLC-ICP-MS 和 ESI MS/MS 组合方法对裂解产物进行鉴定、分析和表征。由于胰酶裂解产物量非常少,所以需要使用毛细管色谱。采用本方法鉴定出了甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶-3,这是富硒酵母中的主要含硒蛋白。证明由于蛋白链中的硫-硒取代途径而引入硒,存在于蛋氨酸 (M) 和半胱氨酸 (C) 残基中,后者在酵母样品中首次发现。
  • 应用一种新的毛细管 HPLC-ICP-MS 接口进行富硒酵母中含硒蛋白的鉴定
    本研究提出了一个 ICP-MS 辅助的蛋白质组学方法,用于鉴定富硒酵母中的含硒蛋白。采用双向凝胶电泳分离不溶性含硒蛋白。使用 LA-ICP-MS 找出分离后的含硒蛋白斑点,经切割后,用胰蛋白酶消化;所得多肽通过毛细管HPLC-ICP-MS 进行分析,然后用电喷雾离子化 (ESI-)MS/MS进行表征,鉴定出富硒酵母中主要的含硒蛋白——甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶-3。由于胰蛋白酶裂解产物量非常少,所以需要使用毛细管色谱。
  • 应用一种新的毛细管 HPLC-ICP-MS 接口进行富硒酵母中含硒蛋白的鉴定
    饮食是人体硒 (Se) 的主要来源,该必需元素的摄入主要取决于食品中的硒含量和所消耗的食物量。由于许多国家农产品中硒的含量很低,所以硒缺乏成为了一个值得注意的问题。人们已经开发了许多提高人体硒摄入的食品添加策略;富硒酵母就是人和动物添加剂最常用的硒来源之一。本研究提出了一个 ICP-MS 辅助的蛋白质组学方法,用于鉴定富硒酵母中的含硒蛋白。采用双向凝胶电泳分离不溶性含硒蛋白。使用 LA-ICP-MS 找出分离后的含硒蛋白斑点,经切割后,用胰蛋白酶消化;所得多肽通过毛细管 HPLC-ICP-MS 进行分析,然后用电喷雾离子化 (ESI-) MS/MS进行表征,鉴定出富硒酵母中主要的含硒蛋白——甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶-3。由于胰蛋白酶裂解产物量非常少,所以需要使用毛细管色谱。
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