蛋白多聚体

《中国药典》2020版第四部规定，使用高效液相色谱法分析人血白蛋白多聚体，指定的色谱柱要求为：亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300 kD，粒度10 μm），柱直径7.5 mm, 长60 cm（注1）。药典中要求，人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95〜1.40。使用PROTEIN KW-803色谱柱进行分析，可以满足药典的各种要求。

静态光散射与尺寸排阻色谱的联用，在单克隆抗体（mAbs）的纯度检验或下游纯化的快速检测方面来说是一项重要手段。光散射也是在荧光检测之外蛋白多聚体的最敏感检测方法之一。

采用岛津生物液相系统Nexera Bio以体积排阻色谱法建立了Fc融合蛋白多聚体的分析方法。在建立的液相色谱条件下，待测样品中的多聚体与单体分离效果良好。另外，样品经6次重复测定，Fc融合蛋白单体保留时间RSD为0.021%，单体和多聚体含量的RSD分别为0.019%和1.908%，重复性良好。

人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)检测试剂盒人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)抗原、生物素化的人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

使用了美国怀雅特技术公司的MALS（DAWN HELEOS）与Optilab rEX 检测器以及UV 检测器联，来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器，可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化，这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性

人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体检测试剂盒人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体抗原、生物素化的人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

聚血红蛋白，是一种人造血液。目前，其研究方兴未艾。postnova的AF2000AT/MT仪器，可以很好地分离-分析聚血红蛋白，测试其分子量分布、尺寸分布。如果结合激光散射检测器MALS，还可以测试其绝对分子量。由于聚血红蛋白分子量分布可能比较宽、高分子部分的分子量可能非常大，超过了GPC的分离上限，因此，GPC无法完整、全面、真实地测试其分子量分布，那么，AF2000AT/MT就是更好的选择。样品无需过滤，即可直接进样分析。

基于治疗的蛋白质溶液聚集可能产生有害的免疫原性。对于较大尺寸的团聚体，可以测量这些团聚体，但在0.15至2微米范围内的较小团聚体很难量化。动态光散射(DLS)技术可以证明聚集体的存在，但不能提供任何关于聚集体的绝对浓度的信息。单粒光写传感器技术(SPOS)现在可以测量聚集蛋白的大小和浓度，并成为这一应用的首选技术。

《中国药典》2020版第四部规定，使用高效液相色谱法分析人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体，指定的色谱柱要求为：亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300 kDa，粒度10 μm) ，柱直径7.5 mm, 长60 cm（注1）。药典中要求，人免疫球蛋白对照品单体峰与裂解体峰的分离度应大于1.5（注2），人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95〜1.40。使用PROTEIN KW-803色谱柱进行分析，可以满足药典的各种要求。

动态光散射 （DLS） 是确定蛋白质粒径的标准工具，但该方法不提供浓度信息。AccuSizer® 单颗粒光学计数（SPOS） 系统是测定大于 150 nm 的聚集蛋白大小和浓度（以颗粒/mL 为单位）的理想技术。图 1 显示了对单克隆抗体进行热应激前后的 Nicomp® DLS 结果。蓝色的谱图为应力后结果，显示了高分辨率的多峰结果，包括从~150 nm开始的较大聚集峰。AccuSizer 无法检测低至 10 nm 的单体尺寸，但可以提供指示聚集程度的 150 nm颗粒计数的定量数据。在这项研究中，AccuSizer FX Nano 用于研究各种制剂配方稳定剂如何影响 NIST 标准蛋白的最终聚集状态。同时，AccuSizer 粒子计数器也可用于 USP 亚可见颗粒物测试。1

人正五聚蛋白3（PTX3）检测试剂盒人正五聚蛋白3（PTX3）检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人正五聚蛋白3（PTX3）含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人正五聚蛋白3（PTX3）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人正五聚蛋白3（PTX3）抗原、生物素化的人正五聚蛋白3（PTX3）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人正五聚蛋白3（PTX3）呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

Column:BioCore SEC-300, 5 μ mDimension:7.8× 300mm+7.8× 300mm串联Mobile phase:150mM 磷酸盐缓冲液pH 6.8Flow rate:1 mL/minTemperature:30 ℃Injection:10 μ LDetection:UV 210 nmSample: 人血白蛋白水溶液Peaks:1. 人血白蛋白2. 人血白蛋白二聚体3. 人血白蛋白多聚体

蛋白质药物中聚集体的数量、类型和大小对药物的安全性和有效性有很重要的影响。蛋白质聚集体的形成涉及多种机理，包括疏水基团之间的非共价键相互作用以及二硫键的形成等。蛋白质药物中任何一种聚集体的存在都是有害应当避免的，这是因为聚集体可能导致免疫原性反应（小的聚集体）或者可能影响给药（微粒）。不可逆的聚集体对蛋白质药物潜在的影响最大，尤其是在长期储存和运输过程中产生的不可逆聚集体。常用于聚集体分析的方法有高速离心、体积排阻色谱（光散射检测），以及非变性凝胶电泳。中性pH 条件下的非变性凝胶电泳可用于研究蛋白质的构像、自结合或聚集体。SDS-PAGE（SDS 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳）也可用于分离聚集体，但该技术非常耗时且不能很好地分离分子量接近的聚集体或潜在杂质。安捷伦2100 生物分析仪和高灵敏度Protein 250 Assay 可以快速分离完整蛋白质、聚集体和低分子量的杂质，如非糖基化的完整单克隆抗体和游离的轻链和重链。这个分析方法具有很高的重现性 (%CV 6%)，并很容易用于开发和生产过程中的质量控制。

蛋白锌硒咀嚼片是一种保健食品，以葡萄糖酸锌、硒化卡拉胶、蛋白粉、牛磺酸、乳糖为主要原料的一种高科技生物制品，是具有生物活性的蛋白质复合物，极易于人体吸收，是无机锌、硒吸收率的数十倍，是良好的微量元素补充剂，可以提高人体的免疫力。通过微波消解方法对蛋白锌硒咀嚼片进行前处理，有利于后续样品中锌元素含量的快速准确测定。

蛋白锌硒咀嚼片是一种保健食品，以葡萄糖酸锌、硒化卡拉胶、蛋白粉、牛磺酸、乳糖为主要原料的一种高科技生物制品，是具有生物活性的蛋白质复合物，极易于人体吸收，是无机锌、硒吸收率的数十倍，是良好的微量元素补充剂，可以提高人体的免疫力。通过微波消解方法对蛋白锌硒咀嚼片进行前处理，有利于后续样品中锌元素含量的快速准确测定。

CEM 提出并研发了以特殊氨基酸作为蛋白质表征的iTAGTM的标签技术，iTAGTM的标签技术的核心，是基于用特殊氨基酸作为蛋白质的表征的原理。 iTAGTM的标签技术，直接检测真蛋白质含量，而非总氮含量传统的蛋白测定方法，通过iTAGTM标签技术实现了对真蛋白含量的测定，避免了非蛋白氮添 加物、残留物对于测试结果的影响。使得蛋白测定结果更为科学可信。例如三聚氰胺、尿素、皮革水解蛋白等非法添加物不会造成测定结果虚高。 iTAGTM标签技术是直接测量法，用氨基酸表征蛋白质，根据氨基酸含量反推蛋白质含量，与传统方法有本质的区别。目前凯氏定氮法和杜马斯燃烧定氮法都无法排除非蛋白氮的干扰，无法直接测定真实蛋白质 含量。iTAGTM标签技术彻底超越了用无机氮或单质氮表征蛋白质含量，即凯式定氮法所出现的问题。

在生产和纯化过程中，蛋白质能表现出多种电荷异质性改变。这些变化不仅影响 稳药物的定性，也影响活性，而且还可能导致有害的免疫反应。所以，开发和生产过程中蛋白药物的电荷异构体分析非常关键。电荷变异体的表征通常是用等电聚焦或离子交换色谱进行的。等电聚焦 (IEF) 通过等电点 (PI) 进行蛋白质的分离，常规用于重组蛋白电荷异构体的指纹图分析。与传统的平板凝胶等电聚焦电泳相比，毛细管等电聚焦电泳 (cIEF) 具有更高的分离度、分析速度，定量能力和自动化性能。

2018年12月 - 新英格兰大学和新罕布什尔大学的研究人员最近的一项研究表明，与标准方法相比，流动成像显微镜是一种准确，更有效，信息更丰富的弹性蛋白样聚合物（ELP）凝聚分析方法。 ELP凝聚层在作为药物递送的载体，组织工程，环境修复等方面具有广阔的应用前景。 ELP凝聚层结构具有刺激响应性和高度可调性，使其成为上述应用的理想选择。

人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）检测试剂盒人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）抗原、生物素化的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)检测试剂盒人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))抗原、生物素化的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3))呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)检测试剂盒人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)抗原、生物素化的人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

血清蛋白在纸或醋酸纤维薄膜电泳中，只能分离出5~6条区带，而聚丙烯酰胺电泳却可分离出数十条区带，因而，目前PAGE已广泛用于科研、农、医及临床诊断的分析、制备，如蛋白质、酶、核酸、血清蛋白、脂蛋白的分离及病毒、细菌提取液的分离等。

采用纳谱分析BioCore SEC-300色谱柱对人血白蛋白进行分离，人血白蛋白和其聚体可以达到良好分离，为该药物的质量保证提供检测依据，BioCore SEC适用于于生物制药中单抗和相关聚体检测。

人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

豌豆蛋白聚集状态对其界面性质的影响Role of the pea protein aggregation state on their interfacial properties蛋白质含量使用格哈特全自动杜马斯定氮仪DUMATHERM测定，蛋白质系数5.7

通过PEG 化蛋白的一次15min 的色谱实验，得到了大量信息。它完美地阐明了miniDAWN与HPLC 系统联用的强大之处。

人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)检测试剂盒人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)抗原、生物素化的人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)检测试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)抗原、生物素化的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)检测试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗原、生物素化的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

膜蛋白和脂质体组成生物膜，生物膜对生命起着重要的作用。为了弄清膜蛋白在组成生物膜中所起的作用及功能，了解膜蛋白的结构非常重要。 膜蛋白通常只溶解在胶束溶液中，因此表征脂质体溶剂中低聚态的膜蛋白相当困难。本文利用多角度激光光散射仪（MALS）、紫外检测器（UV）与示差折光检测器（DRI）联用技术测定蛋白核、脂质体胶束、蛋白-脂质体复合物分子量以及各组分的含量。