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大鼠血浆

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  • 33.5 胡黄连苦苷Ⅱ在大鼠体内药动学研究及其血浆蛋白结合率的测定

    33.5 胡黄连苦苷Ⅱ在大鼠体内药动学研究及其血浆蛋白结合率的测定

    【作者】 阎雪莹； 高宏伟； 唐晓飞； 刁磊； 匡海学；【机构】 黑龙江中医药大学； 黑龙江省哈尔滨市香坊区疾病预防控制中心； 吉林农业科技学院；【摘要】 目的:建立大鼠血浆中胡黄连苦苷Ⅱ的HPLC-UV测定方法,研究在大鼠体内的药代动力学特征,同时测定其血浆蛋白结合率。方法:血浆样品经简单的甲醇沉淀蛋白后,上清液直接进样测定。采用Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)流动相为甲醇-水-醋酸(38:62:0.2),检测波长267nm,流速1mL.min-1,采用3p97药动学软件对药时数据进行拟合。结果:大鼠尾静脉注射胡黄连苦苷Ⅱ符合二室开放模型。结论:胡黄连苦苷Ⅱ在大鼠体内分布代谢很快,消除较快。 更多还原【关键词】 胡黄连苦苷Ⅱ； 药代动力学； 血浆蛋白结合率； 【基金】 国家自然科学基金项目资助(30600804)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208071031_382128_2352694_3.jpg

  • 16.1 高效液相色谱法测定大鼠血浆和全血中核黄素的含量

    16.1 高效液相色谱法测定大鼠血浆和全血中核黄素的含量

    高效液相色谱法测定大鼠血浆和全血中核黄素的含量韦京豫， 郭长江， 杨继军， 蒋与刚， 李云峰， 徐琪寿（军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津）摘要：为了直接反映核黄素营养状况对血中核黄素水平的影响，建立了高效液相色谱测定大鼠血浆及全血中核黄素含量的方法。采用Diamonsil C18色谱柱250mmx4.6mm i.d.5um）分离，以甲醇5mol/l乙酸铵（体积比为1.2ml/min）为流动相，流速1.2ml/min，荧光检测器检测（激发波长450nm，发射波长：520nm）。样品经乙腈、三氯甲烷处理后进样分析。核黄素测定的线性范围5-200nmol/l，最低检测限为2.5nmol/l(s/n=2),日内测定的峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.2%,日间测定的RSD=4.3%。核黄素在血浆样品中的加标回收率为97.0%-104%，在全血样品中的加标回收率为97.4%-104.4%.关键词：高效液相色谱法；核黄素；血浆；全血；大鼠http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241234_379356_2355529_3.jpg

  • 给大鼠灌胃黄芪甲苷，为何血浆处理后没有出峰？

    给大鼠灌胃黄芪甲苷，为何血浆处理后没有出峰？

    液相质谱方法优化了很长时间，样品处理办法由开始的沉淀蛋白换成了液液萃取，还是在血浆中没有检测到。该化合物分子量为785.6，我的MRM是+,即807.6-627.5我看到文献有做成功的，可含量也很低Cmax=16ng，请问是黄芪甲苷在大鼠胃内被酸化了吗？还是有别的原因？灌胃液中含黄芪甲苷大于1mg/mL。[img=,555,239]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903211951256531_6859_3255306_3.jpg!w555x239.jpg[/img]

  • 70.3 大鼠血浆佐米曲普坦的HPLC测定方法学研究

    70.3 大鼠血浆佐米曲普坦的HPLC测定方法学研究

    【作者】 蔡佳； 蒋新国； 陈钧； 熊志刚； 金樑； 【Author】 CAI Jia,JIANG Xin-guo~*,CHEN Jun,XIONG Zhi-gang,JIN Liang(Department of Pharmaceutics,School of Pharmacy,Fudan University,Shanghai 200032,China) 【机构】 复旦大学药学院药剂学教研室； 复旦大学药学院药剂学教研室 上海200032； 上海200032； 【摘要】 目的建立大鼠血浆中佐米曲普坦的高效液相测定方法,并研究大鼠不同途径给药后的药动学。方法采用甲基叔丁基醚为溶剂,提取药物。以0.05%三乙胺(用磷酸调至pH 2.70)-乙腈(92∶8)为流动相,色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流速1.2 mL.min-1,荧光检测的激发波长225 nm,发射波长360 nm。结果佐米曲普坦在2.5~1 000μg.L-1内线性关系良好(r=0.999 7)。高、中、低3种浓度的提取回收率分别为90.10%,91.75%,86.79%,方法回收率分别为103.55%,94.49%,98.79%,日内和日间RSD均小于4%,最低检测限为1μg.L-1。计算出灌胃、静注、鼻腔给药途径主要药动学参数分别为:t1/2(2.03±0.88)h,ρmax(144±28)μg.L-1,tmax(0.85±0.14)h,AUC0~t(442±110)μg.h.L-1;t1/2(1.40±0.12)h,ρmax(567±55)μg.L-1,AUC0~t(1 075±128)μg.h.L-1;t1/2(1.48±0.23)h,ρmax(304±34)μg.L-1,tmax(0.65±0.14)h,AUC0~t(685±43)μg.h.L-1。结论该方法操作简单、快速、准确、重现性好,适用于大鼠血浆中佐米曲普坦浓度的检测及其药动学研究。 【关键词】 佐米曲普坦； 高效液相色谱法； 药动学；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209022115_388005_1838299_3.jpg

  • 69.4 大鼠口服菊花提取物后血浆中木犀草素及芹菜素测定方法的研究

    69.4 大鼠口服菊花提取物后血浆中木犀草素及芹菜素测定方法的研究

    【作者中文名】潘兰英; 李丽萍; 蒋惠娣;【作者英文名】PAN Lan-ying; LI Li-ping; JIANG Hui-di*（Department of Pharmaceutical Analysis and Drug Metabolism; College of Pharmaceutical Sciences; Zhejiang University; Hangzhou 310031; China）;【作者单位】浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室; 浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室 杭州;【摘要】目的建立大鼠血浆中木犀草素和芹菜素总浓度的HPLC测定方法,并研究大鼠口服菊花提取物(CME)后其效应成分——木犀草素、芹菜素的药动学参数。方法大鼠血浆在2 mol.L-1盐酸酸性条件下于80℃水浴水解1.5 h,水解液经乙酸乙酯萃取,萃取液减压抽干后溶解,经HPLC分析。采用Diamonsil ODS C18色谱柱,以甲醇-0.2%磷酸(55∶45)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长350 nm,柱温30℃。应用建立的方法测定大鼠口服200 mg.kg-1菊花提取物后血浆中木犀草素及芹菜素质量浓度,并以3P87软件计算其药动学参数。结果本法木犀草素和芹菜素的定量下限(LOQ)分别为0.045 5和0.145 mg.L-1;两者分别在0.045 5~8.09和0.145~25.7 mg.L-1内呈良好线性关系,r分别为0.995 7及0.997 4;两者低、中、高质量浓度的绝对回收率及方法回收率均在89%~107%内。日间及日内精密度RSD均小于11%。大鼠口服CME后木犀草素与芹菜素的Ka分别为1.72和0.237 h;t1/2(Ka)分别为0.440和3.21 h;t1/2α分别为0.77...http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271745_386602_2379123_3.jpg

  • 【原创大赛】LC-MS对盐酸芬戈莫德大鼠血浆的代谢分析

    【原创大赛】LC-MS对盐酸芬戈莫德大鼠血浆的代谢分析

    LC-MS对盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢分析 芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。芬戈莫德是鞘氨醇的结构类似物，研究显示，该药具有与其他药物完全不同的免疫抑制机制，在体内磷酸化后与位于淋巴细胞上的鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)结合，通过改变淋巴细胞的趋化，促使淋巴细胞在淋巴组织内滞留，从而减少自身反应性淋巴细胞再次进入循环的几率，进而防止这些细胞浸润中枢神经系统(CNS)。进而达到免疫抑制效果。而且该过程是可逆的，停药后淋巴细胞水平即可以恢复正常。临床研究表明，口服制剂芬戈莫德针对复发-缓解型多发性硬化症疗效确切，优于目前的常用MS治疗药物干扰素β-1a注射剂(Avonex，已用于多发性硬化症的临床治疗药物)。芬戈莫德可靶向作用于对中枢神经系统(CNS)有潜在自身攻击性的淋巴细胞，促进神经保护与修复过程，降低MS的复发率，延缓损伤的进展过程，减少颅内核磁共振成像(MRI)病灶的数量，减轻病灶的严重程度。 药物及实验动物： 盐酸芬戈莫德为本所研制，实验用大鼠为Wistar雄性大鼠，6-8周龄，体重范围约200-250g/只，本所实验中心提供；大鼠代谢笼为苏州动物实验仪器厂产品。 色谱条件色谱柱：Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm,1.7μm)流动相：A：水（0.05%TFA）B：乙腈（0.05%TFA）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281531_525077_2217446_3.jpg 质谱条件 Waters LCT Premier XETM型飞行时间质谱仪，W-负离子模式；毛细管电压2200 V；锥孔电压35 V；离子源温度120℃；脱溶剂气温度350℃；脱溶剂气流量10L /h；锥孔气流量700 L /h；质量扫描范围m /z 50 ~ 1200；扫描时间0.2s。 给药方案与样品的收集： 血浆样品的收集健康雄性wistar大鼠3只，体重180-220g，1只为空白对照组，2只为给药组（取血时间30min和120min），给药前禁食12h，期间自由饮水。灌胃给药剂量为35 mg/kg，给药体积为1.5mL/只，给药30min和120min后，分别于颈动脉取全血，置于涂有肝素的离心试管中，3500prm离心10min，分离血浆，于-20℃冰箱中保存，直至分析。 血浆样品的预处理 取0.5ml血浆，置于离心管中，加入5倍的乙腈，3500prm离心10min，除去蛋白，取上清液，在40℃，旋转蒸干，用50%甲醇溶解，涡旋，11000prm离心10min，取2μL进行分析。 结果分析 对大鼠灌胃盐酸芬戈莫德溶液后收集的血浆样品用乙腈沉淀蛋白前处理方法处理之后，进行TOF-MS/MS分析，将所得HR-MS，MS2等数据与空白血浆和对照品比较后，在血浆样品中共推测出7个代谢产物。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281532_525078_2217446_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411281532_525079_2217446_3.jpg结果与讨论：1、经过对于给药后大鼠血浆样品分析，初步推测盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢产物有7种，其结构进一步鉴定中。2、流动相的选择方面进行了优化。流动相的选择主要从溶剂种类和梯度洗脱设置两方面进行优化。分析方法中采用了乙腈作为有机相，原因是乙腈比甲醇具有更大的洗脱强度，从而可以减少色谱峰的展宽，得到较好的峰型，此外，使用乙腈洗脱，其粘度较低，可以减小系统压力。在水相中加入TFA，可以进一步改善化合物的峰型，减少拖尾，此外，TFA的存在还可以提高样品在离子源中的离子化效率，因此，使用乙腈-0.05%TFA水溶液为流动相梯度洗脱，可以使样品分析在 9min之内完成。3、 生物样品中含有许多内源性物质，血浆中含量较高的内源性物质主要是蛋白类成分。蛋白质在测定过程中会形成泡沫，浑浊或沉淀，有时还会与加入的试剂发生反应，从而干扰测定。蛋白还会污染仪器。如果直接进样用液相色谱分析含蛋白的体液样品，蛋白质会逐渐变性沉结在色谱柱上，导致柱效降低，柱压上升，甚至堵塞色谱柱；含有蛋白的样品如果进入离子源，会造成离子源的严重污染和损坏，降低检测的灵敏度，所以血浆样品需进行合理的前处理。常用的生物样品前处理方法有蛋白沉淀法、固相萃取法和液液萃取法。由于待测的代谢产物的极性都比较大，采用液液萃取法(溶剂用乙酸乙酯)对化合物的提取效率差，因此不宜使用。主要比较了蛋白沉淀法和固相萃取法，两种方法均能有效提取待测化合物，经过实验发现，蛋白沉淀法比较好，并且考虑到血浆样品量较少，因此选择蛋白沉淀法。

  • 31.1 HPLC法测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的方法学建立

    31.1 HPLC法测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的方法学建立

    【作者】 李秋红； 张丹丹； 李纯； 韩华；【Author】 Li Qiuhong Zhang Dandan Li Chun Han Hua (Pharmaceutical School Clinical Department,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040)【机构】 黑龙江中医药大学药学院临床药学教研室；【摘要】 目的:建立测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的HPLC分析方法。方法:采用色谱柱:Diamonsil(R)C18柱150mm×4.6mm,流动相:甲醇-0.1‰三乙胺水溶液(60:40,v:v),检测波长:220nm,柱温:30℃,流速:0.8ml/min。结果:槐果碱血浆和唾液的相对回收率分别为92.7%～96.6%和94.8%～113.0%,日内、日间精密度RSD10%,血浆和唾液中槐果碱浓度在8～160μg/mL和2～40μg/mL范围内相关系数分别为0.9994和0.9995,线性关系良好。结论:首次建立槐果碱唾液样品检测方法以及用HPLC法同时测定大鼠体内血浆和唾液中的含量方法,为槐果碱的临床药动学研究提供了新的方法学基础。 更多还原【Abstract】 This is a study to determine sophocarpine in rats’ plasma and saliva using HPLC approach.We made the study under the following parameters:Diamonsil(R)C 18 Column at 150mm×4.6mm,methanol-water containing 0.1‰triethy- lamine (60:40,v:v) for mobile phase,a detection wave length at 220 nm,a temperature at 30℃,and a flow-rate of 0.8 mL/min.The study has produced the following results:a relative recovery of sophocarpine in plasma and saliva at 92.7%～96.6%,and 94.8%～113.0% respectively;the RSD of intra... 更多还原【关键词】 HPLC； 槐果碱； 血浆； 唾液； 【Key words】 HPLC； Sophocarpine； Plasma； Saliva； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061030_381710_2352694_3.jpg

  • 富血小板血浆预防大鼠宫腔粘连的实验研究

    【序号】：3【作者】：张文敏【题名】：富血小板血浆预防大鼠宫腔粘连的实验研究【期刊】：南华大学【年、卷、期、起止页码】：2022【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=zcLOVLBHd2whYmLQRvMOTt3FyY-DyfvXqTamElZZZHFCZSyUOAzom7ottavQGHJEJYblAftWABI5ITESN7xV9LPOPBH0dBGKCUh3_WyECyNmWJHlIw6YlmKIaz3eyJM6M7jazcpNQHv0LWiZk9TI5g==&uniplatform=NZKPT&language=CHS

  • 20.4 HPLC测定丹红注射液中迷迭香酸在大鼠血浆中的浓度

    20.4 HPLC测定丹红注射液中迷迭香酸在大鼠血浆中的浓度

    【作者】 王小平； 刘峰； 杨东华； 屠鹏飞； 马存德；【Author】 WANG Xiao-ping1,2,LIU Feng2,YANG Dong-hua1,TU Peng-fei3,MA Cun-de2(1.Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine,Xianyang 712046,China;2.Shaanxi BuchangPharmaceuyical Co.Ltd,Xianyang 712000,China;3.Beijing University,Beijing100191,China)【机构】 陕西中医学院； 陕西步长制药有限公司； 北京大学；【摘要】 目的:建立丹红注射液中迷迭香酸在大鼠血浆中浓度的测定方法。方法:雄性SD大鼠6只,静脉注射丹红注射液(10 mL.kg-1)后,分别于不同时间取血,以肉桂酸为内标,液液萃取处理后,HPLC测定浓度。Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.4%的磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 min.mL-1,检测波长286 nm。结果:迷迭香酸在4.0～100.0 mg.L-1呈良好线性关系(R2=0.996 5);回收率在85.0%～101.4%,方法的日内、日间精密度(RSD)分别为4.00%～6.76%,4.50%～7.81%。不同时间点血浆中迷迭香酸的质量浓度分别为85.44,75.09,61.13,54.73,43.02,20.92,10.12,7.18,4.28 mg.L-1。结论:建立的方法灵敏度好、准确率高,可用于丹红注射液中迷迭香酸的药代动力学研究。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207231612_379232_2379123_3.jpg

  • 负载富血小板血浆的水凝胶促进糖尿病大鼠创面愈合

    【序号】：3【作者】：张娅1牟秋菊2王自林【题名】：负载富血小板血浆的水凝胶促进糖尿病大鼠创面愈合【期刊】：中国组织工程研究 .【年、卷、期、起止页码】： 2024 ,28 (05)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=hyVvMdIOuYBBhdIaifoIOarvYZNkpOT9W5r069icw77RZK2T3IFv8cI6205k1T9HIY2uZ-rZRoP9ZqsJaj2XizNkaje-wie0Ihw4HeY4BQk_U_lsF0VwED_R1PDUr8LKlNwL-Gkxs34wVY2EOlKBMNObqdXWvr8KQQF1-zXwK3HaIU9MJ2CmWALOpFFzAnzAKAHsZK-WQ_k=&uniplatform=NZKPT&language=CHS

  • 【原创大赛】大鼠血浆中氨甲环酸的测定

    【原创大赛】大鼠血浆中氨甲环酸的测定

    [font=Cambria][size=10.5pt]背景：[color=#000099]在一次建[/color][/size][/font][color=#000099][font='Times New Roman'][size=10.5pt]立[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]检测血浆样品中氨甲环酸含量的分析方法[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]过程中，原先采[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]用实验室[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]现有Thermo [/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5pt]Hypersil GOLD[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt] C18柱[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]分离效果不好，峰型不美观, 依据氨甲环酸的理化性质，氨甲环酸为小分子极性化合物，尝试使用[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]纳谱分析[/size][/font][font=Cambria][size=12pt]ChromCore HILIC-Amide[/size][/font][font=Cambria][size=10.5pt]柱测定，取得了非常完美的成效。[/size][/font][/color][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]2019[font=Cambria]年下半年，本人忙于建立[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]检测血浆样品中氨甲环酸含量的分析方法，在这过程中尝试了很多摸索工作，调整了很多条件，包括流动相、色谱条件、质谱各个参数，分离效果依旧不理想，检测方法始终建立不起来。在此之前，课题组做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]实验常年使用的均为赛默飞厂家的色谱柱，因此当我将其他能改变的因素都尝试过以后，方法仍旧建不起来的时候，我最终终于考虑到打破实验室[/font][font=Times New Roman]“[/font][font=Cambria]传统[/font][font=Times New Roman]”[/font][font=Cambria]，我要寻找其他色谱柱。就在这个时候，我经常订购试剂的试剂商向我推荐了纳谱色谱柱，当时我被纳谱吸引的只有一点，就是可以免费试用。[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]在此之前，我们课题组没人了解过色谱柱可以试用，赛默飞的销售也没办法提供试用，因此我第一反应就是纳谱牛逼，看来他们对柱子是有信心的。于是我申请了试用，收到柱子按说明书进行相关操作，战战兢兢的配好样品溶液，马不停蹄的将色谱柱测试安排起来，走起[/font]~~[font=Cambria]我的目的很简单，就是要和赛默飞的对比，我要知道我方法建不起来的原因到底和柱子有没有关系。[/font][/size][/font][b][font=Cambria][size=10.5pt]1. 实验步骤：[/size][/font][/b][font=Cambria][size=12.0000pt]1[font=Cambria]、[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=12.0000pt][font=Cambria]样品制备[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]1) [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]混合对照品（定性）[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]精准称取[/font] TA [font=Cambria]标准品[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mg[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]于[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]100[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mL [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度线，此储备液的质量浓度为[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]100[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt] μ[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g/mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]。称取[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mg [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]顺式[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]-4-[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]氨基环己烷羧酸对照品于[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]0 [/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，得内标储备溶液。分别精确吸取[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]0.[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]2[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]的[/font] TA [font=Cambria]储备液与[/font][font=Times New Roman]I.S. [/font][font=Cambria]储备液于[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]0 [/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]容量瓶中，加入流动相定容至刻度，得[/font]200 n[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g/mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt] [font=Cambria]混合对照品溶液。[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]2) [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]血浆质控样品[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]精密吸取[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]100[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]μL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]空白血浆，向其加[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]μL [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]TA [font=Cambria]标准溶液[/font][font=Times New Roman]5 μ[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g/mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]，配制成相当于氨甲环酸血浆浓度为[/font]0.5 μ[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g/mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]浓度样品，按[/font]“血浆样品的处理”方法操作得质控样品。[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]3) [/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]血浆样品处理[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]精密吸取[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]100[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt] μL[font=Cambria]加标血浆样品于[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]1.5[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]mL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt][font=Cambria]离心管中，加入质量浓度为[/font]5 μ[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g/mL [font=Cambria]的[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]内标溶液[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]10[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]μL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]，[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]3500[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]r[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]涡旋[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]30[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]s[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]，再加入[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]500[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]μL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]甲醇，[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]3500[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]r[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]涡旋[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]1min[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]，[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]13000[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]g[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]离心[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]15[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]min[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]，取上清液[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]2[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]μL[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]于装有洁净内衬管的进样瓶中分析测试。[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]2. [/size][/font][b][font=Cambria][size=10.5pt]液相色谱仪器条件[/size][/font][/b][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]色谱柱[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]ChromCore HILIC-Amide,(3um, 2.1*150mm)[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]流动相[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]10 mM[font=Cambria]甲酸铵（[/font][font=Arial]pH 3.8[/font][font=Cambria]）[/font][font=Arial]-[/font][font=Cambria]乙腈[/font][font=Arial]=95 : 5[/font][font=Cambria]（[/font][font=Arial]v / v[/font][font=Cambria]）[/font][/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]流速[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]0.2[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] mL/min[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]柱温[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]30 ℃[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]进样量[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]2[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt] μL[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]检测器[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt]Thermo-Q-Exactive [font=Cambria]四级杆[/font][font=Arial]-[/font][font=Cambria]静电场轨道阱高分辨质谱[/font][/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]样品[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]大鼠血浆中氨甲环酸[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]质谱[/size][/font][font=Arial][size=10.5000pt][font=Cambria]仪器条件[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]ESI[/size][/font][sup][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]+[/size][/font][/sup][font='Times New Roman'][size=10.5000pt] [font=Cambria]离子源，扫描模式为[/font] Targeted - MS [/size][/font][sup][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]2[/size][/font][/sup][font='Times New Roman'][size=10.5000pt] - [font=Cambria]正离子[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]；[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]峰名称：[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]检测离子对分别为[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]：[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt]TA m/z 158.1174 → 95.0859[font=Cambria]，[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]内标物（[/font]I.S.[font=Cambria]）[/font][font=Times New Roman]m/z 144.1019 → 81.0704[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt].[/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]3. [/size][/font][b][font=Cambria][size=10.5pt]图谱[/size][/font][/b][font=Cambria][size=12.0000pt]本试验以比较实验室现有[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]Thermo[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]Hypersil GOLD[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt] C18柱([/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]100 mm × 2.1 mm, 3 μ m[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt])与[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]纳谱分析[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]ChromCore HILIC-Amide,[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]([/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]3um[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt],[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt] 2.1*1[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]50mm[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt])两种色谱柱对同一样品的分离效果，以期寻求一款最佳可应用于氨甲环酸血样检测的分析柱，实验结果以表1形式呈现。[/size][/font][align=center][font=Cambria][size=12.0000pt][font=Cambria]表[/font] [/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt]1[/size][/font][font=Cambria][size=12.0000pt] [font=Cambria]两种色谱柱对氨甲环酸分离效果比对[/font][/size][/font][/align][align=center][font=Cambria][size=12.0000pt][font=Cambria][img=,690,442]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006231048215327_6858_3527267_3.png!w690x442.jpg[/img][/font][/size][/font][/align][font=Cambria][size=12.0000pt][color=#0000ff]结论： 对于小分子的极性氨甲环酸来讲，Hilic柱相比较C18 柱的分离效果更具优势：首先同一浓度样品在相同的色谱、质谱条件下，Hilic色谱柱对氨甲环酸灵敏度更高（高出一个数量级）；其次对于血浆样品来说，Hilic色谱柱的氨甲环酸图谱曲线更加美观，没有分叉峰、裂峰的出现。[/color][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]实验结果很出乎意料，纳谱[/font]HILIC –Aimde[font=Cambria]真的把样品跑出来了！我真的是瞬间感受有一种[/font][font=Times New Roman]“[/font][font=Cambria]背叛感[/font][font=Times New Roman]”[/font][font=Cambria]，大牌没做到的，纳谱做到了，我认真的汇报了这次实验结果，老板开完组会直接对我说：买它。于是我成为了我们实验室第一个使用其他品牌[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]色谱柱的人物，在我的推荐下，我博二师姐成为了第二位，我想，以后我的师弟师妹们会陆陆续续成为第三位、第四位等。[/font][/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]其实我说了这么多，无外乎就是把我激动的心情再重述一遍，我是[/font]2020[font=Cambria]年[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=Cambria]月份的毕业生，药代实验是我课题的最后一部分，我的工作安排是[/font][font=Times New Roman]2019[/font][font=Cambria]年年底要把所有实验结束。那个时候方法一直建不起来，你们应该可以体会到我这个应届毕业生焦急的内心，所[/font][/size][/font][font=Cambria][size=10.5000pt]以[/size][/font][font='Times New Roman'][size=10.5000pt][font=Cambria]纳谱的出现，真的是一场及时雨，我真的非常激动，激动到我停下毕业论文的撰写，转战到这里来讲述我的兴奋与感谢。感谢我的销售，对我实验的跟进，感谢帮我联系技术人员，指导我，纳谱的产品到人员的服务，是我用过那么多柱子厂家中最满意的一家（做液相的时候用过迪马、[/font]YMC[font=Cambria]、赛默飞、岛津等），希望货真价实的国货之光[/font][font=Times New Roman]——[/font][font=Cambria]纳谱越来越好，记住，你不输给大牌。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品，原作者信息：[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]单位：中国科学院理化技术研究所[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]姓名：王[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]*[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]谱柱信息：[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]纳谱分析[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]ChromCore HILIC-Amide,[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]([/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff]3um[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff],[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff] 2.1*150mm[/color][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][color=#3333ff])[/color][/size][/font]

  • 62.2 奥扎格雷在大鼠体内的药代动力学研究

    62.2 奥扎格雷在大鼠体内的药代动力学研究

    作者：颜琳琦; 金瓯; 郭兴杰;（浙江省食品药品检验所; 沈阳药科大学药学院;）摘要：目的建立测定血浆中奥扎格雷浓度的高效液相色谱(H PLC)法,并用于大鼠体内的药代动力学研究。方法采用Diam onsil-C18柱(200m m×4.6m m,5μm),以甲醇-1%冰醋酸(8∶92)为流动相,测定6只W istar大鼠单剂量灌胃给予奥扎格雷后不同时刻血浆中奥扎格雷的质量浓度,并由此计算药代动力学参数。结果大鼠灌胃给予奥扎格雷后,血浆中的达峰时间(tmax)为(42.5±6.1)m in,峰浓度(Cmax)为(6.02±0.97)μg/m L,半衰期(t1/2)为(42.9±11.5)m in,0～t药-时曲线下面积(AUC0-t)为(473.8±88.5)μg.m in/m L,0～∞药-时曲线下面积(AUC0-∞)为(495.1±96.3)μg.m in/m L。结论H PLC法简便、可靠,可用于奥扎格雷的药代动力学研究。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271027_386302_1606903_3.jpg

  • 69.8 β-榄香烯脂质体在大鼠体内的组织分布

    69.8 β-榄香烯脂质体在大鼠体内的组织分布

    作者：http://vpn.library.shmtu.edu.cn:2308/Images/head_pic.gif宋笑丹 http://vpn.library.shmtu.edu.cn:2308/Images/head_pic.gif刘红梅 http://vpn.library.shmtu.edu.cn:2308/Images/head_pic.gif魏华 http://vpn.library.shmtu.edu.cn:2308/Images/head_pic.gif董迪 http://vpn.library.shmtu.edu.cn:2308/Images/head_pic.gif吴琳华 Author：SONG Xiao-dan LIU Hong-mei WEI Hua DONG Di WU Lin-hua 作者单位：哈尔滨医科大学附属第二医院药学部,黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨,摘要： 目的 考察β-榄香烯脂质体在大鼠体内的组织分布.方法 建立了大鼠体内β-榄香烯测定的HPLC.色谱条件为:Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-水(40:57:3);检测波长:210 nm;柱温:30℃.并测定大鼠尾静脉注射β-榄香烯脂质体和榄香烯注射液后血浆及组织中的药物浓度.结果 此色谱条件下血浆与组织的标准曲线、精密度等实验结果表明,该方法适于分析生物样品中β-榄香烯含量.与榄香烯注射液相比,β-榄香烯脂质体在大鼠体内的分布特性有不同程度的改变,其中β-榄香烯脂质体在肝、脾、肾组织中分布相对较多.结论 β-榄香烯脂质体及榄香烯注射液在大鼠的心、脾、肾组织中分布具有显著性差异http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208271803_386611_2379123_3.jpg

  • 液质测定血浆尼古丁含量

    液质测定血浆尼古丁含量

    各位老师好，我最近在做用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测定血浆尼古丁含量，人，大鼠，牛空白血浆怎么处理都有峰，定性定量都在同一个位置，而且不稳定，忽高忽低。排除了试剂，质谱污染。等度和梯度洗脱都会出现这个问题。加了内标尼古丁d4空白血浆也还是有。急求各位老师指点，谢谢。用hilic色谱柱，C18色谱柱空白血浆都会出峰。下图是参考文献处理方法。也试过二氯甲烷萃取，也会有同样问题。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008051848362442_4888_3557119_3.png[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/08/202008051850033509_9165_3557119_3.png[/img]

  • 如何利用LC-MS测定血浆中的5-羟色胺？

    最近要用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]来检测大鼠血浆中的5-HT，请问有哪位高手已经做过这方面的实验，求借鉴。据说5-HT配成溶液后极不稳定，且响应值不高，该如何解决？

  • 生物血浆样品进GC-MS分析前，一般要经过哪些步骤处理？

    在药动学分析的时候，里面有个成分是需要用到GC-MS检测的，大鼠的血浆， 一般要经过哪些处理才能进[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]呢？ 常见的液液萃取后可以不用氮气吹干，就直接进仪器分析呢？ 因为既要保证血浆样品相对干净，又要保证里面的成分能大部分的萃取出来，查了下文献，暂时没找到这个成分的生物样品分析，乙酸龙脑酯， 有版友做过这方面的分析吗？ 求助

  • 70.5 对香豆酸在大鼠体内的药动学研究

    70.5 对香豆酸在大鼠体内的药动学研究

    【作者】 冉桂梅； 何彬； 杨凌； 郭云珍； 郭兴杰； 【Author】 RAN Gui-mei, HE Bin, YANG Ling,GUO Yun-zhen, GUO Xing-jie Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China 【机构】 沈阳药科大学； 沈阳药科大学 辽宁 沈阳 110016； 辽宁 沈阳 110016； 【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱法对对香豆酸的药动学进行研究。方法 血浆样品用甲醇沉淀蛋白,采用Diamonsil C18色 谱柱(4．6 mm×200 mm,5μm),流动相为乙腈-1％冰醋酸(体积比为21:79),流速1．0 mL·min_-1,检测波长为322 nm,内标为橙皮 苷。结果 对香豆酸在0．085～10．6 mg·L-1(r=0．999 3)时其浓度与对香豆酸和橙皮苷峰面积比呈良好的线性关系,定量限 为0．085 mg·L-1。大鼠腹腔注射对香豆酸溶液后,对香豆酸的药动学行为符合二室模型,Ka为(0．38±0．09)min-1,t1／2(Ka)为 (1．85±0．20)min,t1／2(a)为(8．9±0．9)min,t1／2(β)为(34±3)min,k21为(0．045±0．008)min-1,k10为(0．040±0．009)min-1,k12为 (0．024±0．003)min-1,AUC为(130±14)mg·min·L-1,tmax和ρmax实测值分别为(6．[/fo

  • 【金秋计划】基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS的升麻素苷在正常大鼠和牙周炎模型大鼠体内外代谢研究

    防风Saposhnikoviae Radix为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.的干燥根，具有祛风解表、胜湿止痛、止痉的功效[1]。防风含有多种化学成分，主要包括色原酮类、香豆素类、多糖类、挥发油类等[2]，这些成分具有解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用[3-6]。升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷为主的色原酮类成分是防风的主要活性物质，具有解热、镇痛、抗炎等多种药理活性[7-10]，其中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷已作为《中国药典》2020年版中防风质量控制的标志物。课题组前期已对5-O-甲基维斯阿米醇苷体内外的代谢进行了全面的研究[11]，但尚未见对升麻素苷的研究报道。有研究表明升麻素苷是防风抗炎作用的主要成分[12]，而防风为《中国药典》2020年版收录的中成药齿痛消炎灵颗粒的君药，齿痛消炎灵颗粒具有治疗牙周炎的作用[13-14]，故本研究采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-四极杆-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）与MetabolitePilot 2.0、PeakView 2.0软件，对升麻素苷在牙周炎模型大鼠和正常大鼠的体内外代谢进行研究，并比较代谢差异，为防风的药效物质基础提供依据。 1 材料 1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠，体质量（220±20）g，由河北石家庄伊维沃生物技术有限公司提供，动物生产许可证号SYXK（冀）2020-002。动物于温度（22±2）℃、相对湿度（50±3）%、12 h光照/12 h黑暗循环环境下饲养。动物实验通过河北医科大学动物伦理委员会的伦理审查（批准号DW2019003）。 1.2 药品与试剂 升麻素苷对照品（批号BD121316，质量分数≥98%），购自上海毕得医药科技股份有限公司；升麻素对照品（批号HR1638W2）购自宝鸡市辰光生物科技有限公司；右美沙芬对照品（批号Y03S11W120802，质量分数＞98%）购自上海源叶生物科技股份有限公司；甲醇、乙腈（色谱纯）购自美国Tedia公司；甲酸（色谱纯）购自美国Diamond公司；纯净水购自娃哈哈有限公司。 1.3 仪器 Triple TOF 5600+型高分辨质谱仪（美国AB Sciex公司）；超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统包括CBM20A型控制器、DGU-20A5R型在线脱气模块、LC-30AD型二元梯度高压泵系统、SIL-30AC型自动进样器和CTO-30A型柱温箱（日本岛津公司）；D3024R型高速冷冻离心机（美国SCILOGEX公司）；KQ-5200E型台式超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；十万分之一分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；MTN-2800D型氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；MX-S型涡旋混匀器[大龙兴创实验仪器（北京）有限公司]；SkyScan 1176型小动物Micro-CT扫描影像系统、NRecon软件、3D重建软件CTvox（德国Bruker公司）。 1.4 数据处理软件 Analyst® TF 1.7软件、MetabolitePilot 2.0软件、PeakView 2.0软件（美国AB Sciex公司）。 2 方法 2.1 溶液的制备 2.1.1对照品溶液的制备 精密称取升麻素苷、升麻素对照品适量，甲醇溶解制成质量浓度为1 mg/mL的贮备液，并用甲醇稀释成质量浓度为100 μg/mL的对照品溶液。 2.1.2内标（IS）溶液的配制 精密称取右美沙芬对照品适量，甲醇溶解制成质量浓度为1 mg/mL的贮备液，临用前用甲醇稀释成质量浓度为2.0 μg/mL的IS溶液。 2.1.3大鼠ig溶液的配制 精密称取升麻素苷对照品600 mg，加入60 mL纯净水，配成质量浓度为10 mg/mL的ig溶液。 2.2 牙周炎模型的建立 大鼠适应性喂养1周，采用吸入式2%～3%异氟烷实施麻醉，麻醉成功后采用0.2 mm正畸结扎丝结扎大鼠上颌左侧第一磨牙牙颈部，诱导实验性牙周炎[15-17]，对侧同名牙作为对照不结扎。手术后，待大鼠全部苏醒，喂其常规鼠粮及水，并定期检查结扎丝牢固程度，整个实验持续8周。 在整个实验过程，注意大鼠精神状态，定期检查牙龈炎症、颜色、水肿、探针是否出血及牙周袋是否形成等。造摸8周后随机抽取牙周炎模型大鼠，处死，取上颌左侧第一磨牙及牙龈组织，同时取其对侧对比，置于4%多聚甲醛固定，常规脱钙，脱水透明，浸蜡包埋，制作切片，常规苏木素-伊红（HE）染色后，于显微镜下观察病理变化。同时采用微型计算机断层成像技术（micro computed tomography，Micro-CT）重建大鼠牙槽骨三维图像，观察牙槽骨吸收情况。 2.3 动物给药及生物样品采集 实验前，将正常大鼠随机分为4组，每组3只，第1组为空白正常胆汁组，第2组为给药正常胆汁组，第3组为空白正常血浆、尿液及粪便组，第4组为给药正常血浆、尿液及粪便组。模型组按与正常组相同的方法随机分为4组。给药前大鼠禁食12 h，自由饮水。根据大鼠体质量，以100 mg/kg的剂量进行ig给药。空白组ig等体积的纯净水溶液。 分别于ig给药后0.167、0.333、0.5、0.75、1、2、4、6、8、12、24 h自眼内眦取血0.3 mL，置肝素化的离心管中，4 ℃、3 500 r/min离心10 min，取上清液获得血浆样品，并将各组不同时间点获得的血浆样品合并，即得空白血浆和含药血浆。ig给药后，收集大鼠0～72 h每4个小时的尿液和粪便样本，并将来自同组大鼠的所有尿液和粪便分别进行混合，即得空白和给药尿液、粪便。ig给药后，通过ip 20%乌拉坦生理盐水溶液（1.5～2.0 g/kg）麻醉，实施胆汁插管引流手术收集0～24 h的胆汁样品，将来自同组大鼠的所有胆汁进行混合，即得空白和给药胆汁。所有样品置于?80 ℃冰箱备用。 分别取正常大鼠及牙周炎模型大鼠新鲜粪便3 g，加入30 mL厌氧培养液[18]，用玻璃棒研碎并搅拌均匀，经医用纱布滤过，即得肠道菌培养液。取肠道菌培养液1 mL，加入100 μL（1.0 mg/mL）升麻素苷溶液，通入氮气置于无氧并充满氮气的厌氧袋中，在提前预热至37 ℃的摇床中孵育12 h，即得肠道菌孵育样品。空白组用100 μL超纯水代替升麻素苷溶液。 2.4 样品前处理 取血浆、尿液、胆汁样品各1 mL，分别加入100 μL的IS溶液（2 μg/mL），混合均匀，加入3倍量甲醇，涡旋5 min，4 ℃、15 000 r/min离心10 min，取上清液。取肠道菌孵育液1 mL、粪便样品0.5 g（加1 mL蒸馏水超声30 min制备成匀浆），分别加入100 μL的IS溶液（2 μg/mL），加入3倍量的醋酸乙酯，涡旋5 min，4 ℃、15 000 r/min离心10 min，收集上层萃取液，重复萃取3次，合并萃取液。将离心后所得的各生物样品上清液置另一清洁离心管中，N2流吹干，200 μL 50%甲醇复溶，涡旋5 min，15 000 r/min离心10 min，取上清液即得。 2.5 检测条件 2.5.1 色谱条件 COSMOCORE C18柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；流动相为0.1%甲酸水溶液（A）- 甲醇（B），梯度洗脱：1～3 min，5%～20% B；3～25 min，20%～95% B；25～30 min，95% B。预平衡5 min，柱温40 ℃，体积流量0.3 mL/min，进样量5 μL。 2.5.2 质谱条件 电喷雾离子源（electro-spray ionization，ESI），正离子模式下进行全扫描，参数设置如下：离子源喷雾电压5 500 V；源温度550 ℃；气帘气压力241.325 kPa；雾化气（Gas1）压力379.225 kPa；加热气（Gas2）压力379.225 kPa；解簇电压70 V；碰撞能量40 eV；碰撞能量扩展15 eV。TOF-MS扫描的扫描范围为m/z 100～1 200，积累时间设置为250 ms。每个扫描周期选择8个响应最高的离子进行MS/MS扫描。产物离子扫描范围为m/z 50～1 200，积累时间为100 ms。 2.6 数据处理 正常大鼠和牙周炎模型大鼠ig升麻素苷后，各生物样本的总离子流图见图1。采用以下5个步骤来鉴定和分析升麻素苷在正常大鼠及牙周炎模型大鼠体内外的代谢物：①基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术，在线进行全扫描数据采集，并利用多重质量亏损（MMDF）和动态背景扣除（DBS）设置获得准确的MS/MS质谱信息。②利用Peak View、Metabolite Pilot软件中的多种数据挖掘工具，自动过滤出升麻素苷的可能代谢物。③从准确的质谱数据、母体药物的裂解模式以及相关文献描述代谢物的推断过程。④ClogP值用作区分具有相同分子式和相似质谱数据的代谢物异构体的参数。ClogP值越大，在反相色谱系统中的洗脱时间就越长。⑤根据Peak View软件提供的代谢物的峰面积，用峰面积相对定量法比较代谢物在正常大鼠及牙周炎模型大鼠各生物样品中的含量差异。3 结果 3.1 CT成像 应用Micro-CT扫描、三维图像重建显示，与对照组（图2-B、D）相比，模型组（图2-A、C）牙槽骨吸收明显，同时有水平和垂直向吸收。对大鼠上颌第一、第二磨牙兴趣区域[19]（本实验选取的兴趣区域（region of interest，ROI）为第一、第二磨牙近中牙槽嵴吸收情况）进行测量，对照组牙近中釉牙骨质界（cemento-enamel juction，CEJ）到牙槽嵴顶（alveolar bone crest，ABC）的平均距离为0.394 mm（图2-D），与对照组相比，模型组CEJ到ABC的距离平均增至0.813 mm。分析大鼠CEJ至ABC的垂直距离（图2-A、B），即分别取对照组与模型组样本牙齿颊侧的近中、中央及远中共3个位点的CEJ至ABC的距离，测量统计分析结果显示，与对照组相比，模型组CEJ-ABC距离明显增加（P＜0.05，图2-E）。 图片 3.2 升麻素苷质谱裂解规律分析 升麻素苷（M0，C22H28O11）的保留时间为8.80 min，M0通过重排生成准分子离子峰[M＋H]+m/z469.170 2。母离子m/z 469.170 2失去18（-H2O）、72（-C4H8O）分别形成特征碎片离子m/z 451.173 2、397.125 0。M0通过丢失162（-glu）、234（-glu-C4H8O）分别产生特征碎片离子m/z307.128 6、235.068 0，其中特征碎片离子m/z 235.068 0是特征碎片离子m/z307.128 6通过二氢吡喃环失去C4H8O发生RDA裂解反应产生。通过连续丢失O和C3H6O后，m/z 235.068 0产生碎片离子m/z 219.072 5、161.065 4。苷元离子m/z307.126 8有2种脱水方式（-H2O），分别产生m/z289.116 6的2种结构不同碎片离子，苷元离子在失去水的基础上连续失去2个CH3分别产生m/z274.092 3、259.068 8。通过连续丢失C3H6、CH2、C2H2、CO和O后，m/z 289.116 6产生了一系列碎片离子m/z247.068 1、233.052 3、221.051 7、219.072 5、205.056 3、193.056 0、189.061 1、177.060 6。升麻素苷可能的裂解途径见图3。 3.3 升麻素苷在大鼠体内外代谢物的分析鉴定 采用上述分析策略，共鉴定出30个升麻素苷的代谢物（其中I相代谢物25个、II相代谢物5个）。在健康大鼠中，共发现25个代谢产物（血浆中8个、尿液中17个、粪便中11个、胆汁中19个、体外肠道菌群3个）。在牙周炎模型大鼠中，共发现27个代谢产物（血浆中8个、尿液中18个、粪便中12个、胆汁中22个、体外肠道菌中2个）。升麻素苷原型及30种代谢物的详细信息见表1。 3.3.1 I相代谢物的鉴定 （1）水解（M1）：M1的保留时间为10.14 min，准分子离子为m/z 307.118 0，推测其分子式为C16H18O6。M1的相对分子质量比M0少162（C6H10O5），此外，M1的特征碎片离子m/z 307.118 0、289.107 4、274.085 0、259.059 5、247.061 9、235.059 4、233.044 1、221.043 9、217.050 3、205.049 6、189.055 0、177.054 3、161.059 2均与M0相同，这表明M1在M0基础上发生了糖基化反应。且经过对照品比对，确认M1是M0脱糖产生的水解产物升麻素。 （2）水解-羟基化：M2～M5的保留时间分别为5.98、7.12、7.92、8.65 min，准分子离子峰分别为m/z323.113 4、323.111 2、323.112 8、323.113 0，均比M1多16，表明M2～M5可能为M1的单羟基化产物，推测其是分子式C16H18O7的同分异构体。M2的特征碎片离子m/z323.113 4、305.101 9、275.085 0、263.064 4均比M1的特征碎片离子m/z307.118 0、289.107 4、259.059 5、247.061 9多16，此外M2的特征碎片离子m/z 247.060 2、235.059 4、233.046 2、221.044 1、177.054 9均与M1的特征碎片离子保持一致，尤其特征碎片m/z263.064 4的存在，说明该羟基化反应发生在C-2′位。M3的特征碎片离子m/z 323.111 2、305.109 0、275.055 4均比M1的特征碎片离子m/z 307.118 0、289.107 4、274.085 0、259.0595多16，且其特征碎片离子m/z 235.031 5、233.035 6、205.072 2、193.050 1均与M1的特征碎片保持一致，说明该羟基化反应可能发生在C-5′位或者C-2′位。M4的特征碎片离子m/z259.060 0、247.060 0、235.060 2、233.044 6、221.044 8、205.048 5、189.054 3、177.054 9、161.060 1与M1具有相同的裂解途径，且根据其特征碎片m/z 305.1015的存在，推测羟基化的位置可能在C-3′位。M5的碎片离子m/z323.113 0、305.102 6与M1相比增加了16，其特征碎片离子m/z 259.061 1、247.060 1、235.060 3、233.043 9、221.044 7、205.050 2、189.054 9、177.054 5均与M1具有相同的裂解途径，尤其特征碎片离子275.054 8的存在，推测M5的羟基化反应可能发生在C-8位上。通过计算ClogP值发现，M2～M5的ClogP值分别为?0.859 1、?0.756 5、?0.364 7、?0.018 9，与保留时间的大小具有一致性，证明了推测的合理性。 （3）水解后失去CH2：M6保留时间为12.85 min，准分子离子峰为m/z293.102 3，推测其分子式为C15H16O6，是在M1的基础上丢失1个CH2。M6主要的二级碎片离子m/z 293.102 3、275.091 6、245.043 7、221.044 8均比M1的碎片离子m/z307.118 0、289.107 4、274.085 0、259.059 5、235.059 4少14，且由于特征碎片m/z 275.091 6、233.044 7的存在，提示反应位点可能在C-5。 （4）水解后失去CH2＋O：M7、M8的保留时间分别为7.19、9.67 min，准分子离子峰分别为m/z 309.096 6、309.097 7，推测其分子式为C15H16O7。与M6相比多了16。因此，代谢物M7、M8被初步鉴定为M6的羟基化产物。M7的特征碎片离子m/z233.026 8、221.029 1、205.031 9均与M6保持一致，且其特征碎片离子m/z309.096 6、291.099 1与M6相比增加了16，提示羟基化的位置发生在侧链上，推测反应位点在C-5′位。M8的特征碎片m/z 233.050 8、221.045 6、177.083 7均与M6的特征碎片离子保持一致，说明M8与M6具有相同的裂解途径，且有特征碎片m/z 249.164 1的存在，说明羟基化的位置在环上，推测反应位点可能在C-8位。此外，根据上述所推结构，计算M7、M8的ClogP值分别为?0.320 8、0.337 1，与出峰时间保持一致，证明了推测的合理性。 （5）水解后去甲基化成羧酸：M9、M10的保留时间分别为7.78、9.30 min，准分子离子峰分别为m/z337.092 9、337.091 9，推测其分子式为C16H16O8。与M1相比多了30，推测M9、M10是M1结构中的1个甲基被氧化成羧酸后得到的代谢产物。根据M1的结构特征推测发生反应的位点可能是与C-5连接的甲氧基及C-5′位的甲基上。M9的特征碎片离子m/z 337.092 9、319.082 3、304.060 0、289.032 9、277.071 1、265.032 2、263.056 3、235.024 3、219.029 1、207.043 8均比M1的特征碎片离子离子m/z 307.118 0、289.107 4、274.085 0、259.059 5、247.061 9、235.059 4、233.044 1、205.049 6、189.055 0、177.054 3多30，因此证明M9氧化位点发生在C-5位连接的甲氧基上。M10在正离子模式下形成的准分子离子峰为m/z 337.091 9，与M1相比多30，其特征碎片离子m/z274.130 1、259.063 0、247.060 7、235.061 7、233.045 8、205.051 7、161.061 8均与M1的特征碎片离子保持一致，说明其氧化位点发生在M1的侧链上而不在环上，故推测反应位点发生在C-5′位。根据以上推测的结构，计算两者的ClogP值分别为?1.233 0、?0.585 6。计算结果与出峰时间顺序保持一致，进一步确证了推测的合理性。 （6）水解后去甲基化成酮：M11保留时间为10.96 min，准分子离子峰为m/z 291.086 3，推测其分子式为C15H14O6。与M1相比少了16，推测在M1的基础上失去了1个甲基进一步将连接在中心碳原子上的羟基氧化成酮。M11的特征碎片离子m/z 291.086 3、273.076 7、258.058 0与M1相比均少16，特征碎片离子m/z 259.062 8、235.096 5、233.044 7、221.041 4、177.052 1与M1保持一致，说明反应发生在侧链上，因此推测反应发生在C-4′位。 （7）水解脱羟基：M12的保留时间为9.83 min，其准分子离子峰m/z 291.122 6，推测其分子式为C16H18O5。与M1相比少了16（O），推测M12在M1的基础上发生了脱羟基反应，M12的特征碎片离子m/z 273.076 0、263.092 2、219.025 6、217.159 5均比M1的特征碎片离子m/z 289.107 4、247.061 9、235.059 4、233.044 1少16，说明脱羟基位发生在C-9位。 （8）水解后失去CH2O：M13的保留时间为8.24 min，其准分子离子峰为m/z277.106 7，推测其分子式为C15H16O5。与M1相比少了30（CH2O），推测M13可能是在M1的基础上丢失甲氧基产生的代谢物。M13的特征碎片离子m/z 259.101 8、217.054 2、205.052 8、181.089 7可能是M1的特征碎片离子m/z289.107 4、247.061 9、235.059 4、221.043 9丢失1个甲氧基产生的，根据M1的结构特点推测丢失位点在C-5位。 （9）水解后脱羟基失去CH2O：M14的保留时间6.48 min，其准分子离子峰为m/z261.112 5，推测其分子式为C15H16O4。与M12相比少了16，与M1相比少了46（M1－O－CH2O），推测M14可能是在M1的基础上先失去羟基又失去甲氧基产生的。M14的特征碎片离子m/z 243.215 1、228.206 8、189.090 3与M1的特征碎片离子m/z 289.107 4、274.085 0、235.059 4相比均少46，且M14的特征碎片离子m/z243.215 1正好比M12的特征碎片离子少16，证明推测合理。 （10）水解脱羟基后被氧化成醛：M15的保留时间为8.23 min，其准分子离子峰为m/z 305.102 4，推测其分子式为C16H16O6。M15的特征碎片离子m/z 287.132 8比M12的特征碎片离子m/z 273.076 0多14，水解后脱羟基位点与M12保持一致。且其特征碎片离子m/z290.071 9、275.054 4、247.058 3、233.044 4可能是在M15的准分子离子m/z 305.102 4的基础上通过连续丢失2个甲基、CO和亚甲基产生的。因此，推测M15是代谢物M12中的1个甲基被氧化成醛产生的。根据母药结构特点，结合π-π共轭体系可能使结构更加稳定的规律，推测氧化反应位点最可能发生在2位的CH3上。 （11）失去C4H8O：M16的保留时间为8.80 min，其准分子离子峰为m/z397.113 6，推测其分子式为C18H20O10。与M0相比少了72，根据其结构特点推测M16可能是M0失去C4H8O所得到的代谢产物，其特征碎片m/z 235.05 51、205.136 9与M0保持一致，且特征碎片m/z72.086 6（-C4H8O）的存在，初步认为推测M16的结构合理。 （12）水解脱羟基后去甲基成羧酸：M17的保留时间为11.08 min，其准分子离子峰为m/z 321.097 4，推测其分子式为C16H16O7。与M9相比少了16，与M1相比多了14，推测M17可能是M1脱羟基后的1个甲基被氧化成羧酸的产物。其特征碎片离子m/z 321.097 4、303.085 9正好比M1的特征碎片离子m/z289.107 4多14，比M9的特征碎片离子m/z 319.082 3少16，特征碎片离子m/z273.039 5比M9的特征碎片离子m/z 289.032 9少16，且其含有特征碎片离子m/z 235.022 7、205.049 6，与M1和M9一致。说明M17与M9结构相似，氧化位点与M9一致。 （13）单羟基化反应：M18～M20的保留时间分别为6.24、6.93、9.00 min，其准分子离子峰分别为m/z 485.166 2、485.166 5、485.164 7，推测其分子式为C22H28O12。与M0相比多了16（O），因此推测他们可能是M0的单羟基化产物。根据母药的结构特点可以看出羟基化反应发生在C-3′、C-5′和C-8位时相对稳定。M18的特征碎片离子m/z247.060 0、235.058 3、233.043 8、205.048 4均与M1的特征碎片离子保持一致，且其特征碎片

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    血浆中多肽类生物药物LC-MS/MS高灵敏度定量分析方法

    10），满足法规对于定量下限的要求，并且在目标物色谱峰附近基本无基质干扰（见图2）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511181028_574054_1947624_3.jpg1.2 线性范围与重现性考察 采用大鼠空白血浆将艾塞那肽标准溶液逐级稀释成浓度为1000、500、100、50、20、10、 5、2、1、0.5和0.1 ng/mL系列浓度血浆样品，加入1.5倍乙腈混匀后离心分别上样分析，以峰面积响应与浓度作标准曲线，考察方法的线性范围与线性相关性。结果表明线性关系良好，线性范围宽，为0.1-1000ng/mL（见图3），从而能够解决生物样品分析时药物浓度差异大的问题。同时，该法重现性好，配制 0.3ng/mL的艾塞那肽血浆样品，连续进样 5次，峰面积RSD为4.81%。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511181029_574055_1947624_3.jpg小结 用TSQ Endura三重四极杆质谱，建立了复杂血浆基质样品中多肽类药物艾塞那肽的检测方法。该法前处理简单，并具有灵敏度高，线性范围宽，重现性好等优点。（转帖）

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  • 血浆气质联用仪

    想问一下做血浆脂肪酸检测，血浆质控样品要经过怎样的处理才能混匀做成质控呀？先前涡旋三分钟定量分析有些脂肪酸RSD相差比较大？所以想问问大家是怎样做的？

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    血浆速冻技术的新进展血浆是抗凝全血经物理方法分离制备的一种血液成分，其临床应用是现代成分输血的重要组成部分，尤其是新鲜冰冻血浆（PPT），在临床治疗中更有其重要的作用。血浆是多种血浆蛋白质的混合物，其中包含白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子类蛋白。为了有效的保护血浆内的有效成分，特别是凝血因子，并随着我国成分输血技术的发展，新鲜冰冻血浆及冷沉淀的制备技术及应用随之也越来越广泛。目前我国《血站基本标准》实施细则中第92条规定：制备新鲜冰冻血浆时，抗凝剂为CPD、CP2D、CPDA-1的血液应在8小时内分离并速冻；抗凝剂为ACD的血液应在6小时内分离并速冻。其质量要求： 含有全部凝血因子。血浆蛋白为6~8g/%;纤维蛋白原0.2~0.4g%;Ⅷ因子含量：≥0.7 IU/ml 规格。可以看出，时间和温度是制备出质量合格的新鲜冰冻血浆两个关键点，尤其是对于活性很高的凝血因子VIII和V，时间和温度是影响其活性的重要因素。中国医学检验杂志1995年3月第18卷第2期《血浆凝血因子测定的影响因素探讨》，作者通过对比经过不同温度和时间后FVIII含量发现：32℃条件下6小时活性只有48%，24小时5%4℃条件下6小时活性有95%，24小时剩29%。由于在血浆结冰过程中，凝血因子VIII含量与时间呈指数下降关系，所以速冻时间越短，凝血因子VIII和V的损失也就越小。国际上通用的标准是1个小时内速冻完成，如果能在30分钟内完成速冻，那么效果将会更好。因此要保证新鲜冰冻血浆及冷沉淀等成分的疗效，必需在采供血过程中控制好冷链和时间链，其中血浆速冻技术是其中一个重要环节，速冻的时间和效果将直接关系到血浆及冷沉淀产品的质量和疗效。 随着《中华人民共和国献血法》的实施和无偿献血的深入开展，血站的采血方式已由有偿献血时代的站内采血为主转向站外无偿流动采血。要达到采血后6h（或8 h）内分离血浆并冻结有时存在一定的困难。因此为保证临床使用新鲜冰冻血浆、血浆冷沉淀的质量尽可能的缩短血浆速冻的时间就显的尤为重要了。我国血站采用的血浆速冻技术主要经过了以下几个发展阶段：1、用超低温冰箱来进行血浆速冻。此种方法的主要不足在于：冰箱内空间有限，将血浆叠加在一起，上下接触不均匀。冰箱制冷效率有限，速冻时间较长（通常需要6-8h）。显然是达不到要求的。2、强制对流型速冻机。最初的血浆速冻设备我们称为强制对流型速冻机（blast freezer）。该类设备的设计思路来源于普通冰箱，也是使用空气作为冷媒。通过更强的制冷功率来得到低温空气，并且使冷空气快速的流动，加快冷空气与溶液的热交换来实现快速冻结的目的，因此，也称之为“冷风制冷”。由于这类设备内冷空气流动速度比冰箱内空气流动速度有了很大提高，使得制冷效果得到提高，缩短了血浆冻结的时间。对于超低温冰箱来说，这种方式使得速冻的时间已经得到了大大的缩短，但由于关键技术的不足，其速冻时间通常都需要2h。3、平板接触式速冻机。这类设备是根据最新的平板接触制冷技术制造而成。它通过改变传统的“空气”冷媒，用特制不锈钢作为冷媒，加快血浆热交换实现速冻，从而达到缩短速冻时间的目的。今天，我们来讲讲血浆速冻技术的新进展：平板接触式血浆速冻技术。平板接触式速冻（contact plate freezing）。该技术通过高效压缩机使金属板稳定在-50℃的温度，血浆袋通过与-50℃的低温金属板直接接触进行热传递，由于空气的热传导率仅为0.28 w/m•k，而金属的热传导率为58.02w/m•k是空气的上百倍。因此使得降温效率得到极大的提高，降温过程所需时间更少，因此可以得到更多的凝血因子，得到更好质量的新鲜冰冻血浆。平板接触式速冻技术，虽然出现的时间不长，但是它已经以其强大的技术优势已经在国际上占据了血浆速冻市场40%的份额。

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    名位专家： 你们好！ 我现在正在模索血浆中盐酸多西环素（强力霉素）的含量测定，采用HPLC法，色谱条件如下：紫外检测，色谱柱：安捷伦C8。流动相：0.01M oxalic acid（草酸）–methanol（甲醇）–acetonitrile（乙腈）(60:25:15, v/v/v)。流速为：1ml/min。检测波长为：365。 上述条件出峰太早，保留时间大约在2.5min。出峰太早往往跟血浆中蛋白质等杂质峰混在一起。上述情况下如何将出峰保留时间延长呢？（血浆中蛋白质等杂质的出峰保留时间一般在6min以前）。 感谢指导，静候佳音。

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    最近做血浆样品遇到了这样的情况：做方法学的时候，空白血浆添加药物出的峰形很好，与杂质峰的分离度等都很好，所有方法学考察的数据都很好。到做实际样品的时候问题出现了，在进样后1min的时候以及目标峰刚结束的时候出了两个很大的杂峰（不成峰形，就是一大坨），后面那个杂峰干扰目标峰。刚开始以为是进样时间长了导致柱子脏（实际上柱压没变化），就用常规冲洗方法反复冲洗色谱柱，再进样还是这个情况，而且很有规律：每次序列进样前5个样品没问题，从第6个样品开始那两个大杂峰就出现了。百思不得其解，后来查药物手册才知道这个药物与血浆蛋白的结合率达99%。 我的前处理方法是：200uL血浆+2mL正己烷/异丙醇（95：5，V/V）涡旋2min后10000r/min离心10min,取上层40度N2吹干，流动相复溶，12000r/min离心10min,取上清HPLC检测。 尝试过加酸（1mol/L盐酸）或者乙腈等沉淀蛋白方法，杂峰多、干扰严重且回收率低。用我上述方法回收率等方法学数据很好，峰形也很好，就是做实际样品时出现了那样的情况。 想请群里的朋友帮忙想想办法，解决这个问题！谢谢！

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    大肠埃希菌也产生血浆凝固酶，可是通常做大肠埃希菌鉴定时没有做血浆凝固酶试验。而金黄色葡萄球菌要做。是什么原因？

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