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  • 【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。药物及实验动物:盐酸芬戈莫德为本所研制,实验用大鼠为Wistar雄性大鼠,6-8周龄,体重范围约200-250g/只,本所实验中心提供;大鼠代谢笼为苏州动物实验仪器厂产品。色谱条件色谱柱:Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm,1.7μm)流动相:A:水(0.05%TFA)B:乙腈(0.05%TFA)质谱条件结果分析:通过比较大鼠灌胃盐酸芬戈莫德溶液后收集的尿液样品、空白尿液样品及分到的代谢产物的高分辨质谱和多级质谱数据,在给药后的尿液中共鉴定出了8个代谢产物(如下图)所有代谢产物的高分辨质谱数据的准确度均小于1PPm。通过比较大鼠灌胃盐酸芬戈莫德溶液后收集的胆汁样品、空白胆汁样品及分到的代谢产物的高分辨质谱和多级质谱数据,在给药后的胆汁中共推测出了4个代谢产物(如下图)。所有代谢产物的高分辨质谱数据的准确度均小于1PPm。结果与讨论:经过对于给药后大鼠尿液及胆汁样品分析,初步推测盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢产物有8种。

  • 【极限体验】Ultimate C18柱分析黄酮代谢产物在大鼠尿液中的降解(6月份)

    【极限体验】Ultimate C18柱分析黄酮代谢产物在大鼠尿液中的降解(6月份)

    前言 药物代谢(drug metabolism)是研究药物在生物体内的吸收、分布、生物转化和排泄等过程的特点和规律的一门科学,即药物分子被机体吸收后,在机体作用下发生的化学结构转化。也是药物研发产业链中的重要环节,贯穿药物研究过程的始终。本实验涉及黄酮类成分在大鼠体内代谢的研究,大鼠灌胃给予药物,累积24h尿液,尿液经处理,运用各种色谱手段,分离得到目标代谢产物。在此过程中有一关键的因素时刻威胁着我们,即代谢产物的降解,因此要设法保证代谢产物的稳定,如低温保存样品,调节尿液的酸碱性,等等。 本实验利用Ultimate XB-C18对两个重要的代谢产物在尿液中的稳定性进行简单的考察。1.Chemical and reagents 甲醇(色谱纯,天津大茂),水(哇哈哈纯净水,杭州),三氟乙酸(TFA, Dikma, USA),其它试剂均为分析纯。2.animals Wista大鼠(220-250g,SPF级,由本校动物实验中心提供)3.HPLC analysis of two important metabolites Waters 高效液相色谱系统,由Waters Model 600 controller液相色谱,Millennium 32 工作站,Model Delta 600 泵,以及Waters 996 DAD检测器组成。 色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm) 流动相:A通道:甲醇,B通道:水(0.05%TFA)=(20:80, v/v) 流 速:1mL/min 柱 温:35℃ 检测波长:190-400nm扫描 进样量:20μL3.Sample preparation 代谢产物M1和M2之前已制备分离得到,各取1mg,混合溶于2mL水中(M1和M2水溶性很强,也可溶于甲醇),取20μL进样分析;剩余部分置于250mL锥形瓶中,加入新鲜收集的大鼠尿液10mL,室温放置24h,之后该混合溶液,过ODS亲水柱,先用水洗脱,弃去,再用甲醇洗脱,收集甲醇洗脱溶液,45℃浓缩并定容至2mL。取20μL进样分析。4.Results and discussionhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/07/201107010000_302457_2160661_3.jpg图1. M1与M2纯品混合色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302433_2160661_3.jpg图2. M1与M2纯品混合色谱图(局部放大图10-20min)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302434_2160661_3.jpg图3. M1与M2在尿液中放置24h后色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106302310_302435_2160661_3.jpg图4. M1与M2在尿液中放置24h后色谱图(局部放大图20-30min)5.conclusion 1. M1与M2在尿液中放置24h后发生了降解,在保留时间为25分钟左右,出现2个降解产物,其紫外吸收与M1和M2分别对应相似,M1紫外吸收(~271nm, ~310nm), M2紫外吸收(~273nm, ~343nm)。 2. 降解产物可能为M1与M2水解产物,因为M1与M2为极性较大的代谢产物,推测可能为葡萄糖醛酸或硫酸结合产物,其降解过程可能为水解脱掉葡萄糖醛酸基或硫酸基。 3. 这样的结果提示我们,在研究黄酮类成分的代谢过程中要注意样品的保存,在收集到尿液后要快速处理,或者在收集的过程中就进行预防,所采用的方法文献报道有加入乙醇或加酸调pH至5左右,可以防止该类代谢产物的降解。Acknowledgement感谢月旭公司提供Ultimate XB-C18柱。

  • 【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    【原创大赛】盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析

    盐酸芬戈莫德在大鼠体内代谢的尿液及胆汁样品分析 芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。芬戈莫德是鞘氨醇的结构类似物,研究显示,该药具有与其他药物完全不同的免疫抑制机制,在体内磷酸化后与位于淋巴细胞上的鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)结合,通过改变淋巴细胞的趋化,促使淋巴细胞在淋巴组织内滞留,从而减少自身反应性淋巴细胞再次进入循环的几率,进而防止这些细胞浸润中枢神经系统(CNS)。进而达到免疫抑制效果。而且该过程是可逆的,停药后淋巴细胞水平即可以恢复正常。临床研究表明,口服制剂芬戈莫德针对复发-缓解型多发性硬化症疗效确切,优于目前的常用MS治疗药物干扰素β-1a注射剂(Avonex,已用于多发性硬化症的临床治疗药物)。芬戈莫德可靶向作用于对中枢神经系统(CNS)有潜在自身攻击性的淋巴细胞,促进神经保护与修复过程,降低MS的复发率,延缓损伤的进展过程,减少颅内核磁共振成像(MRI)病灶的数量,减轻病灶的严重程度。 药物及实验动物:盐酸芬戈莫德为本所研制,实验用大鼠为Wistar雄性大鼠,6-8周龄,体重范围约200-250g/只,本所实验中心提供;大鼠代谢笼为苏州动物实验仪器厂产品。色谱条件色谱柱:Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm, 1.7μm)流动相:A:水(0.05%TFA)B:乙腈(0.05%TFA)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412302201_530374_2217446_3.jpg质谱条件Waters LCT Premier XETM型飞行时间质谱仪,W-负离子模式;毛细管电压2200 V;锥孔电压35 V;离子源温度120℃;脱溶剂气温度350℃;脱溶剂气流量10L /h;锥孔气流量700 L /h;质量扫描范围m /z 50 ~ 1200[

  • 【原创大赛】人体服用盐酸芬戈莫德后的尿液分析

    【原创大赛】人体服用盐酸芬戈莫德后的尿液分析

    人体服用盐酸芬戈莫德后的尿液分析芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。芬戈莫德是鞘氨醇的结构类似物,研究显示,该药具有与其他药物完全不同的免疫抑制机制,在体内磷酸化后与位于淋巴细胞上的鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)结合,通过改变淋巴细胞的趋化,促使淋巴细胞在淋巴组织内滞留,从而减少自身反应性淋巴细胞再次进入循环的几率,进而防止这些细胞浸润中枢神经系统(CNS)。进而达到免疫抑制效果。而且该过程是可逆的,停药后淋巴细胞水平即可以恢复正常。临床研究表明,口服制剂芬戈莫德针对复发-缓解型多发性硬化症疗效确切,优于目前的常用MS治疗药物干扰素β-1a注射剂(Avonex,已用于多发性硬化症的临床治疗药物)。芬戈莫德可靶向作用于对中枢神经系统(CNS)有潜在自身攻击性的淋巴细胞,促进神经保护与修复过程,降低MS的复发率,延缓损伤的进展过程,减少颅内核磁共振成像(MRI)病灶的数量,减轻病灶的严重程度。药物及受试者:盐酸芬戈莫德为本所研制,十名男性健康受试者(年龄18~45周岁,体重65±10kg)。色谱条件色谱柱:Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm,1.7μm)流动相:A:水(0.05%TFA)B:乙腈(0.05%TFA)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412310815_530422_2217446_3.jpg质谱条件Waters LCT Premier XETM型飞行时间质谱仪,W-负离子模式;毛细管电压2200 V;锥孔电压35 V;离子源温度120℃;脱溶剂气温度350℃;脱溶剂气流量10L /h;锥孔气流量700 L /h;质量扫描范围m /z 50 ~ 1200;扫描时间0.2s。给药方案与样品的收集:人尿液样品的收集五名男性健康受试者(年龄18~45周岁,体重65±10kg),服药前一周内未服任何药物。服药7天,每天每人约服240mg盐酸芬戈莫德片,受试期间统一饮食,自服药时起收集尿液,收集8天尿液,共收集到120升尿液。尿液样品的预处理固相萃取柱(自制ODS小柱),用甲醇活化后待用。取尿样1mL,用酸调pH值至5.0,涡旋,3500prm离心10min,上清液上于固相萃取柱,用2mL水洗涤后,再用5mL甲醇洗脱,收集洗脱液,减压蒸干,残渣加50%甲醇200μL,涡旋,11000prm离心10min,取2μL进行分析。结果分析:通过比较人口服盐酸芬戈莫德片后收集的尿液样品、空白尿液样品及分到的代谢产物的高分辨质谱和多级质谱数据,在给药后的尿液中共推测出了8个代谢(如下图)所有代谢产物的高分辨质谱数据的准确度均小于1PPm。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412310816_530423_2217446_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412310817_530424_2217446_3.jpg结果与讨论:1、 经过对于给药人体尿液样品分析,初步推测盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢产物有8种,其结构进一步鉴定中。2、 流动相的选择方面进行了优化。流动相的选择主要从溶剂种类和梯度洗脱设置两方面进行优化。分析方法中采用了乙腈作为有机相,原因是乙腈比甲醇具有更大的洗脱强度,从而可以减少色谱峰的展宽,得到较好的峰型,此外,使用乙腈洗脱,其粘度较低,可以减小系统压力。在水相中加入TFA,可以进一步改善化合物的峰型,减少拖尾,此外,TFA的存在还可以提高样品在离子源中的离子化效率,因此,使用乙腈-0.05%TFA水溶液为流动相梯度洗脱,可以使样品分析在 9min之内完成。

  • 尿液分析技术及仪器

    4.1尿液分析仪1.尿液分析仪的分类(1)按工作方式分类 可分为湿式尿液分析仪和干式尿液分析仪。其中干式尿液分析仪主要用于自动评定干试纸法的测定结果,因其结构简单、使用方便,目前临床普遍应用。(2)按测试项目分类 可分为8项尿液分析仪、9项尿液分析仪、10项尿液分析仪、11项尿液分析仪和12项尿液分析仪。检测项目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮体、尿胆红质、尿胆原、尿潜血、亚硝酸盐、尿白细胞、尿比重、维生素C和浊度。(3)按自动化程度分类 可分为半自动尿液分析仪和全自动尿液分析仪。 2.尿液分析仪工作原理(1)尿液分析仪的试剂带①试剂带的结构 单项试剂带以滤纸为载体,将各种试剂成分浸渍后干燥,作为试剂层,再在其表面覆盖一层纤维素膜作为反射层。一般把这样一条上面附有试剂块的塑料条叫做试剂带。尿液浸入试剂带后,与试剂发生反应,可产生颜色变化。多联试剂带是将多种项目试剂块集成在一个试剂带上,使用多联试剂带,浸入一次尿液可同时测定多个项目。②试剂带的反应原理 pH测定:采用pH指示剂原理,常用甲基红和溴麝香草酚蓝组成的复合型指示剂,呈色范围从pH4.5~pH9颜色由橘黄色、绿色变为蓝色,由此反映尿液的pH值。 尿蛋白质测定:利用pH指示剂蛋白质误差的原理。 尿葡萄糖测定:当前有两种完全不同的检测尿糖的方法,一种是基于葡萄糖氧化酶法原理,能特异地检出尿中的葡萄糖;另一种是基于铜还原法的原理,能检测葡萄糖和其他还原性物质。 尿酮体测定:采用亚硝基铁氰化钠反应测量酮体。 尿隐血测定:利用游离血红蛋白、溶解红细胞或肌红蛋白中的血红素具有过氧化物酶样作用,能催化过氧化氢释放出新生态氧,使色原氧化而显色,其颜色深浅与血红蛋白含量有关。 尿胆红素测定:采用重氮反应法原理。 尿胆原测定:采用Ehrlich醛反应原理或重氮反应原理。 尿亚硝酸盐测定:尿亚硝酸盐试验的化学基础是利用某些细菌能将尿中硝酸盐还原成亚硝酸盐的特性。 尿白细胞测定:利用中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚生成吲哚酚和有机酸,吲哚酚可进一步氧化成靛蓝的原理;或吲哚酚和重氮盐反应成重氮色素而显色,颜色深浅与粒细胞量的多少有关。 尿比密测定:基于某种预处理的多聚电解质在一定离子浓度溶液中pKa变化来测量比密。 尿维生素C测定:采用磷钼酸缓冲液或甲基绿与尿中维生素C进行反应,形成钼蓝,颜色由蓝色变成紫色,颜色深浅与尿中维生素C含量有关。③试剂带的应用 不同型号的尿液分析仪一般使用自己配套的专用试剂带。试剂块要比测试项目多一个空白块,有些仪器还多一个位置参考块。各试剂块与尿液中被测定成分反应而呈现不同颜色。空白块是为了消除尿液本身的颜色及试剂块分布的状态不均等产生出测试误差,提高测量准确度而设置的。固定块是为了消除在测试过程中为免每次测定试剂块的位置不同产生测试误差设置的,每次测定前,检测头都会移到参考位置进行自检,必要时,自动调整发光二极管的亮度和灵敏度,以提高检测的信噪比。3.尿液分析仪的检测原理 把试剂带浸入尿液中后,除了空白块外,其余的试剂块都因和尿液发生了化学反应而产生了颜色的变化。试剂块的颜色深浅与光的吸收和反射程度有关,颜色越深,相应某种成分浓度越高,吸收光量值越大,反射光量值越小,反射率也越小;反之,反射率越大。因为颜色的深浅与光的反射率成比例关系,而颜色的深浅又与尿液中各种成分的浓度成比例关系,所以只要测得光的反射率即可以求得尿液中各种成分的浓度。 尿液分析仪一般采用双波长法测定试剂块的颜色变化。一种波长为测定波长,它是被测试剂块的敏感特征波长;另一种为参比波长,是被测试剂块不敏感的波长,用于消除背景光和其它杂散光的影响。各种试剂块都有相应的测定波长,其中亚硝酸盐、酮体、胆红素、尿胆素原的测定波长为550nm,pH、葡萄糖、蛋白质、维生素C、潜血的测定波长为620nm。各试剂块所选用的参考波长为720nm。 试纸块颜色的深浅除了随各被测成份的不同而变外,还与尿液本身的颜色有关。空白试纸块随着尿液的颜色而变化。试纸块的反射率R试纸由式13-1计算:R试纸= ×100% 空白块的反射率R空白由式13-2计算::R空白= ×100% 总的反射率R为试纸块的反射率与空白块的反射率之比:R= = ×100% 采用双波长测定法,抵消了尿液本身颜色引起的误差,可提高测量精度。4.仪器的结构与功能 尿液分析仪一般由机械系统、光学系统、电路系统三部分组成。其结构见图13-2。http://www.care100.com/yqxjpkc/images/131.jpg图13-2 尿液分析仪结构示意图

  • 尿液分析仪在临床应用中的质量控制简要概述

    尿液质量控制的一般情况在常规试验中,虽然尿液分析仪的使用一般不受人为因素的影响,但尿液分析准确与否却受许多因素的影响。这些影响因素可以出现在分析前、中、后三个环节。分析前的质量控制(简称质控)主要包括样品的标签、收集样吕使用的容器和样品收集的时间、尿标本新鲜程度等。一般均应在取样后2小时内完成检测,否则可影响模块上所有检查项目结果的准确性。分析后的质控主要包括参考值范围的认可,判定试验结果是否受药物的干扰和病理物质的影响,报告单结果的书写和报告单回报时间等方面。分格中的质控主要包括化妆品和试带条的准确度、试带条的效期、仪器的校正、仪器操作正确程度和尿液标本中影响因素及处理等方面。

  • 尿液三氯生配制基质标线

    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]小白,做尿液中三氯生检测,想用尿液加标然后按照前处理方法处理后做基质标曲 尿液需要选择低于检出限的尿液样本吗,还是选很多尿混合后加标

  • 尿液分析仪和手工镜检尿液中红细胞的结果分析

    尿干化学法分析仪和传统显微镜镜检是基于两种不同原理的检验手段,因此检测结果可能存在一定程度的差异。临床中两种诊断血尿方法常配合使用以达到检测效率与质量的统一,总结起来,对检测结果的影响因素主要有以下几方面。  3.1 假阳性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阳性,但镜检却呈阴性 。其原因包括:(1)尿液分析仪潜血实验可与完整红细胞阳性反应,也能够与血红细胞释放的血红蛋白(hemoglobin,Hb)进行反应,这与显微镜只能够观察到完整的红细胞存在差异。健康人群尿Hb水平极低,定为阴性;(2)肌红蛋白(myoglobin,Mb)分子中包含Hb基团,当骨骼肌、心肌严重受损,血MB浓度升高,经肾排泄,导致尿液MB水平升高,潜血反应因此呈阳性,而显微镜检查却呈阴性;(3)部分患者尿中存在对热不稳定的酶,也可导致试剂块发生颜色变化,发生潜血反应;氧化性物质的污染也是造成潜血反应假阳性因素;高温或标本存放时间过长导致潜血反应阳性率增高 ;(4)尿试纸条超过保质期,或没有妥善保存、操作不当、仪器故障等均可能造成假阳性。  3.2 假阴性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阴性,但镜检却呈阳性。其原因包括:(I)食物、药物影响:某些饮食、药物可引起尿液成份的改变如当尿液中存在大量的维生素时,维生素具有的强还原性使其竞争性结合反应产生的氧,导致尿试纸条无法出现潜血反应即出现假阴性反应;(2)高蛋白、高比重尿样削弱了试剂块潜血反应的敏感度,使能够发生反应的成分被包裹,反应试剂无法接触到,从而出现假阴性结果。  3.3 离心对检测结果的影响 离心中若速度过快,致使有形成分遭到破坏;但过慢时,沉渣中可能无法找到,以至于漏掉。因此对检验结果出现怀疑时,可实验潜血证实进行验证。总之,随着尿干化学分析仪普及,工作效率得到了极大提升,也使检测红细胞敏感度提高,但显微镜镜检也是无法替代的。对于疑似阳性反应的病例,应采用尿沉渣镜检进行复测,以求结论准确,提高检测可靠性。

  • 在尿液中可以检出甲醛?

    昨天碰到一客户,女性,肾不好,有点毛病,日前到新装修的房子去打扫,第二天人就不舒服了,医院检查,医生说在尿检中发现有甲醛和苯......我以前只是听说过血液中可以检出,没听说过尿液中也可以检出..你们遇到过类似情况吗?

  • 【第三届原创参赛】代谢产物分离与纯化的心得体会(大鼠篇)

    【第三届原创参赛】代谢产物分离与纯化的心得体会(大鼠篇)

    维权声明:本文为qweaxi原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。代谢产物的分离与纯化心得体会(大鼠篇)代谢的概念 什么叫代谢,在这就不解释啦,大家应该都知道,我们主要做两个方面:大鼠与人。这个原创里面,讨论的是大鼠代谢产物的分离与纯化。大鼠的介绍 大鼠我们用过的有两种(SPF级)SD大鼠和wistar大鼠,这两只大鼠的区别: SD大鼠: 生长快,繁育性能好,大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。 该品系对性激素敏感,对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。 Wistar大鼠 :其被毛呈白色,特征为头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。Wistar大鼠性情温顺,性周期稳定,早熟多产,平均每窝产自10只左右,生长发育快,乳腺癌发病率很低,对传染病抵抗力强。 个人觉得SD大鼠挺暴躁,很容易咬人的,Wistar大鼠比较好哦,乖乖鼠。大鼠喂养 这个问题很关键,饲料控制不好,大鼠会超重地:一天喂2次,水应该给足,要不然会发生惨案的,垫料要3天换一次,要不然,会被熏坏的,消毒必须的,要不然出血热就会光顾你们实验室的,记得去年就在我们这发生啦,封楼2周呢,当时,我们爽坏啦,有时间玩嘛。给药前准备 第一:大鼠禁食12小时,期间给以0.4%的盐水,为什么禁食呢,让其胃里的饲料代谢完,要不然对以后的分离工作有影响。 第二:给药剂量药换算好,要不然没有根据,发文章会有问题的。大鼠给药 这个比较讲究,我们常用的方法是灌胃和腹腔给药,腹腔给药简单,扎一针就好啦,灌胃挺有讲究的,本人不才,学了半天才会,牺牲在我手中的大鼠有5只多,那叫一个惨啊。警告大家,在不会灌胃的情况下,千万别自以为是,要不然。。。尿液富集 有些时候怕样品不稳定,发生变化(代谢产物在尿液中不稳定,个人经验),有三招来防止: 第一招:在收集瓶中加无水乙醇,个人觉得效果很好。 第二招:在收集瓶里加酸,PH=4为好。 第三招;冰水浴,个人觉得那个麻烦,但也有点效果。尿液储存 放在冰箱里,冷藏,不易降解滴。尿液处理 不同的样品处理不一样,我们这做过黄酮,生物碱之类的化合物,据我了解,这个生物碱不好做,黄酮挺好做的,我个人觉得有两种方法:大孔和萃取。大孔树脂,我们这用得D1O1比较多,本人首次用AB-8,觉得不错的,我热衷于大孔。萃取:必须加酸调节PH3,要不然萃不出来的。样品的分离与纯化 呵呵,代谢产物分离。个人经验:进行大孔柱色谱以后,可以考虑进行凝胶柱色谱,内源性物质一般可以除去,非常好的方法,我记得凝胶下来我就分到一个纯的,哈哈,真爽啊。 由于代谢物极性过大,最好不用硅胶来分,要不然,死吸附严重,样品就这样浪费啦,呵呵,用ODS分离,最好。 最后补充,做代谢的,最好有液质联用,盲分容易浪费时间,浪费经费。下图为凝胶分的纯品http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009252351_246992_2160429_3.jpg

  • 【原创大赛】气相色谱-质谱法检测尿液中氯丙醇代谢产物β-氯乳酸

    3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)为食品污染物,具有致癌性、肾脏毒性以及对男性生殖的不良作用。Lynch等进行了全面的综述,在酸水解植物蛋白调味液(HVP)、山羊乳、掺假西班牙烹饪等多种食物中均有检出,HVP、配制酱油污染尤其严重,因此近几年国际社会对氯丙醇的危害倍加关注,有关产生机理、来源、人群暴露、毒性作用成为研究的热点。3-MCPD膳食暴露估计值为为140~1100μg/人·天,均超过PMTDI值;目前尚无人群氯丙醇暴露的可靠资料,如能找到反应氯丙醇暴露的生物标志物,则能更好地评估人群氯丙醇暴露情况。Jones 等研究了3-MCPD的动物代谢情况,Lynch等认为3-MCPD在哺乳动物中部分转化为β-氯乳酸,进一步氧化为草酸,β-氯乳酸会引起大鼠睾丸、肾脏毒性,还会抑制呼吸作用和乳酸芽孢的代谢,从而抑制肾脏的代谢功能,引起肾脏持久性损伤,因此它对肾脏的毒性具有重要意义。大鼠尿中β-氯乳酸大约占摄入剂量的5%~25%,排泄时间在3~7天,有可能作为中、远期接触评价的指标之一,因此应首先建立生物材料中β-氯乳酸的检测方法。 β-氯乳酸在紫外、可见光区吸收弱,不能用HPLC常用的紫外或荧光检测器检测,一般是采用GC法分析;由于它带有羟基、羧基,极性大,沸点高,通常应将其衍生后再用GC检测。Jones等进行大剂量3-MCPD的药物代谢实验时,建立了β-氯乳酸的填充柱GC-FID方法,样品经过长时间的液-液萃取后用薄层层析进行分离、浓缩,甲酯化后用于GC分析,但检测限较高, 仅能测定尿液中高水平的量(mg/kg级),且样品量、溶剂使用量大,萃取时间长,不适于普通膳食暴露水平下的生物样品分析,因此需要建立生物样品中μg/kg级β-氯乳酸的测定方法并用来开展生物标志物的研究。

  • 尿液三氯生提取

    用正己烷提取三氯生感觉回收率不高,用什么提取尿液中的三氯生比较好

  • 尿液的生物分析难题

    各位老师,求助尿液的生物分析有什么需要注意的。液液萃取,回收率只有1%,如何能提高回收率呢。目前主要存在几个问题:1.基质效应,基质干扰太严重 2.回收率太低。求助

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  • 测尿液里的PAE 前处理

    测尿液里面的邻苯二甲酸酯代谢物 回收率和检出率很低是什么原因呀?前处理是0.5ml尿液加乙酸铵250ul 和葡萄糖醛酸酶50ul 以及内标 酶解12小时 然后就是加乙酸乙酯震荡40分钟 然后就去离心 4000转/分 重复三次都取上清 最后加1毫升的水 然后就是氮吹吹干完了0.5ml甲醇复溶 但是测MEOHP MEP 好多检不出来 有些也是浓度很低是什么原因呢

  • 【分享】液液萃取-气相色谱法测定尿液中的可卡因

    建立人体尿液中可卡因的快速提取及气相色谱-氢火焰离子化(GC-FID)检测方法。方法:用0.05 mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液调节尿液pH9.5,提取溶剂:氯仿∶异丙醇= 9∶1(体积比),液-液萃取10 min,气相色谱分析。 结果:方法的平均回收率为84%,检出限50 ng/mL,线性范围0.1~15 μg/mL,精密度小于5.47%。结论:该方法可快速、准确进行可卡因滥用者的尿液分析。

  • 尿液中新蝶呤和生物喋呤的检测

    尿液中新蝶呤和生物喋呤的检测

    [align=center][b]尿液中新蝶呤和生物喋呤的检测[/b][/align]蝶呤类化合物属于蝶啶衍生物,是一种碱性物质,包括新蝶呤、生物蝶呤、黄蝶呤等,主要存在于人体的体液中。其中,新蝶呤(neopterin,NP)和生物碟呤(biopterin,BP)是体内三磷酸鸟苷(GTP)的代谢产物,用于多种疾病的辅助诊断,还与体内的苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的代谢有关,BP缺乏会引起苯丙氨酸代谢紊乱和神经递质的改变,尤其在鉴别新生儿高苯丙氨酸血症分型时,尿液中的蝶呤含量起到关键作用。因此,有效分离分析尿液中的NP和BP具有很重要的临床意义。实验原理尿液中的NP和BP均以还原态和氧化态的形式混合存在,还原态的NP和BP没有荧光吸收,因此在测定前需先用碘氧化尿样,把还原态的NP和BP转化为氧化态再稀释上机测定。[b]色谱条件色谱柱:Kromasil Eternity XT C18(4.6×250mm,5μm)[/b]柱温箱温度:22℃波长:Ex=350nm,Em=460nm流动相:甲醇:水=10:90(V/V)流速:0.6 ml/min(其中4-11min时流速为1.0 ml/min)进样体积:20μL采集时间:20min[img=,554,241]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811051427358781_1429_2428063_3.jpg!w554x241.jpg[/img]图1:NP(1.0 μg/mL)与BP(1.08 μg/mL)标准品混合溶液色谱图[img=,554,240]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811051427543231_6823_2428063_3.jpg!w554x240.jpg[/img][b]总结[/b]尿液中的蝶啶衍生物较多,容易干扰NP和BP的检测。因此将NP和BP与其他蝶啶类衍生物分离至关重要。样本经前处理后,采用Kromasil Eternity XT C18色谱柱分离尿液中的NP和BP,具有很好的分离度(R1.5),可消除尿液中杂质对NP和BP的干扰,实现样品的精确分析。[b]Kromasil Eternity XT系列的色谱柱耐pH范围1-12,对复杂生物样品的分离分析具有重要意义。[/b]注:由深圳爱湾医学检验实验室验证

  • 尿液样品的前处理

    现在要开发一个检测尿液中的原型药和代谢产物液质方法,样品加8.5的醋酸铵缓冲液稀释10倍,基质效应几乎没有了,但是提取回收率的重复性很差。做一批样品,内标和待测化合物的峰面积什么样的都有。有遇到这样的吗?50ul样品用800ul氯仿液液萃取2次,吹干后加200复溶,是复溶的问题还是萃取的问题?或者是缓冲液的问题?

  • 【讨论】尿液中小肽或氨基酸的分离

    尿液中要分一些小分子的化合物,如小肽,氨基酸,多糖等,大家一般用什么做流动相啊?我最近用TBAOH做离子对,反相分离,效果不是很好,谁有更好的方法,讨论下吧。是不是最好把阴离子的反相离子对与阳离子的反相离子对混合使用效果会好些呢??

  • 测尿液样品时Rh内标极低,求大神帮忙

    测尿液样品时Rh内标极低,求大神帮忙

    我是一只仪器菜鸟,刚接手ICP-MS,型号是thermo icap Q ,做尿液里的重金属,我是取1mL 尿液加1mL HNO3 过夜,然后稀释10倍过滤做样。以前跟着师傅做的时候内标正常,但是我昨天洗了一下锥之后,发现内标只有30%左右,标曲呈线性,空白样正常,内标回收在90%以上,我想说是不是我把锥洗坏了?工程师的意见是尿液浓度还是太高。可是以前我们都是这样做的啊。不知道大神有没有遇到过的,请指教!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609141059_609625_3142117_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609141059_609626_3142117_3.jpg这是一些指标,是调谐没做好吗?

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