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  • 如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验?实验汪必备! | 小奥课堂
    开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好(收藏)! Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术,其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术,在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用,极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用,还能和传统的动物免疫技术相结合,与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接,能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验,以其原理为根本来指导实验过程,以精益求精的实验过程,增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 | 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”(3为噬菌体的p3衣壳蛋白);3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源:噬菌粒(phagemid)M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage)菌粒(phagemid)上的p3蛋白融合了抗体片段的基因,是文库多样性的关键;辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体,在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率,并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后,会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来,该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 | 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程: 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程,是噬菌粒文库构建的内容; 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性,是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容; 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容,也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝,且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递,需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积,对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染,以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题,不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题,首先要具备以下几点基础的前置知识:(??以下内容全部划重点!!!)1. TG1大肠杆菌在OD600的读数:1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率,TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代,需要密切关注TG1的生长,及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20:1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌,并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增,在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性,辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1,梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低,只有5%-10%,在进行淘选时,加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 (心疼一下生物汪,冒着生命危险搬砖啊!) 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染,特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。(合格的生物汪,是个莫得感情的病毒杀手!) Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 | 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小,可依比例增减扩增体积。 Day 1(搬砖秃头的第一天)1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中,使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20:1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07,37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟,去除培养基,以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团,将培养基加至400ml,用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2(搬砖秃头的第二天)5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中,使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟,取上清,10000g再次离心10分钟,去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中,在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清,用10mlPBS重悬噬菌体后,加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟,然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液,用吸水纸吸干残留的PEG溶液,加入1-2ml的PBS重悬噬菌体,进行滴度测定。滴度测定:1. 在分隔的实验室,取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中,使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5,如未能及时使用,可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中,使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中,晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3(搬砖秃头的第三天)5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数,根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=(克隆数*10*50/10ul)*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方:2xYT培养基:Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% (W/V)葡萄糖2xYT-AK培养基:2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液:20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐:(做科研民工的每一天都不孤单,因为有小奥陪伴)噬菌体作为一种病毒,很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境,需要封闭的实验室,实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约,功能强大,可为您的样品提供优异的摇荡效果:此外,噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤,如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置,造成极大的浪费!!!奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利,一台离心机满足所有实验需求!接下来,小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R(冷冻型号)微量高速离心机FC5515(非冷冻型号)全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车,还来得及哦!详情请联系奥豪斯哦! 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息?请进入「阅读全文」留下信息,我们的专业工程师将火速赶来,为您服务! ▼
  • 底物噬菌体展示应用相关载体设计的两个关键
    噬菌体展示应用相关载体设计的关键:1 相互结合位点的选择在蛋白酶底物噬菌体展示中,一个关键的组分是亲和性结构域,它使我们可以将底物序列和非底物序列区分开。这其中包括蛋白—蛋白相互作用、蛋白—肽段相互作用以及多组氨酸与镍螯合基质的结合。整合这几种不同的系统的要素在于,展示系统是基于高亲和性相互作用而设计的。通常,相互结合的两个物质之间的解离常数(Kd)应该至少在一个较低的nmol/L的数量级上,这样在实验中复合物的解离速度就可以比蛋白酶解的速度慢得多。例如,我们以往在这个领域中的工作中,利用的是一个hGH的高亲和性变异体,此变异体与其受体的Kd值约13pmol/L。然而,对于蛋白酶底物噬菌体展示库,挑选在适当的缓冲液条件下(例如低pH或高pH)能够被破坏的这种相互作用,将有助于选择性地富集非底物序列(被捕获而结合于固体支持物上)和最佳的底物序列(被蛋白酶解而释放)。另外一个必须考虑的是靶蛋白酶(或者其他的一些噬菌粒形成中可能碰到的蛋白酶)必须不会酶切亲和性结构域。由于这个原因,亲和性结构域一般都是一个稳定的球蛋白或者一个短的肽段。2 底物卡匣(cassette)的设计和构建底物噬菌体展示要成功,一个关键在于切割仅仅发生在亲和性(捕获)结构域和噬菌粒之间。幸运的是,丝状噬菌体对蛋白酶解有极强的抗性:在所有已知的蛋白酶中,只有枯草杆菌蛋白酶能够引起噬菌体外膜蛋白的显著降解。为使底物序列更易与蛋白酶作用,在附近的连接序列中引入一定部分柔韧性(segmental flexibility)的设计要谨慎。例如,底物序列GPGG(X)。GGPG位于亲和性结构域和pⅢ基因之间,柔韧的甘氨酸—脯氨酸接头分布于随机序列的两端。在我们的实验中,已经证实截短形式的pⅢ蛋白是有效的,但另外也有报道使用全长pⅢ蛋白也能取得成功。在多价底物噬菌体展示中,一个全长pⅢ蛋白对于感染是必需的。一些其他的重要因素也主导着文库卡匣的设计,包括随机化的密码子、密码子的选择以及文库的大小,这些在第2章中有详细的描述。在许多情况下,我们不可能穷尽含有8个或8个以上的残基的整个底物序列所有可能的排列。然而,在文库仅展示了一部分可得到的序列的情况下,我们也有可能得到关于底物特异性的相关信息。例如,要构建一个包含5个密码子的随机文库,可以先列举其中2个密码子的序列,以此作为参照序列;从中得到的信息可用于第二次的文库构建,即将此两个密码子固定,再列举另外3个密码子和(或)其他的扩展的底物序列。作为替代,可以通过整合已知的特异性决定因素并查明那些现在还较不清楚的因素,从头设计一个更集中的文库。
  • 中国科学家首次揭示肠道噬菌体组与II型糖尿病的相关性
    p   近日,中国科学院深圳先进技术研究院的研究团队在国际权威学术期刊Microbiome(《微生物组》)上发表最新研究,首次证实了人体肠道噬菌体组和糖尿病的关联性,为应用噬菌体干预肠道菌群,以及预防和治疗某些疾病提供了依据。 /p p   噬菌体是一类专一感染细菌的病毒,作为细菌的天敌,2014年被美国国立卫生研究院列为对抗耐药菌武器之一,同时也是人体肠道微生物组的重要组成部分。肠道噬菌体种类丰富、数量巨大,通过塑造肠道菌群结构,进而影响人体健康。但是,人们目前对于噬菌体的认识还非常匮乏。 /p p   论文作者首次利用已有的人体肠道微生物大数据,开发了一系列生物信息学方法,挖掘其中的噬菌体基因组序列,鉴定了大量的全新肠道噬菌体,揭示了肠道噬菌体组的多样性和新颖性。通过对这些噬菌体基因组序列的分析,科研人员发现这些噬菌体携带大量的功能基因,这些基因和宿主细菌在肠道环境中的生存适应性相关。 /p p   研究显示糖尿病患者的肠道细菌菌群组成变化和糖尿病有着显著的相关性。由于噬菌体—细菌之间是捕食者—被捕食者的关系,通常认为糖尿病人肠道菌群的变化会影响噬菌体的组成差异。但是,科研人员首次发现了肠道噬菌体的数量在糖尿病患者肠道中的数量显著高于对照组,经过进一步分析发现肠道细菌和噬菌体之间存在复杂的关系网络,细菌与噬菌体之间不是简单的“此消彼长”的关系。 /p p   据介绍,这个工作成果连同近期其他实验室发在《细胞》上的工作成果,都暗示着噬菌体—细菌—宿主两两之间存在着相互作用,这种关系有可能影响着人体的健康。未来,解析这些关系将是该领域的研究热点。 /p
  • ELISA方法学开发实践版3:杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发
    双十一结束小奥的购物车都清空了没法儿给你抄了我借ELISA实践笔记给你抄快到期末/年底了实验汪们可要抓紧搬砖咯前面三份笔记拉到文末看哦以下,可都是尖货儿哟!??Part 1 —— 前 言 | ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法,其实质是亲和力测定方法的一种变种,其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法,用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点:1.待测样本极具多样性,且单一样品通常也是混合物,有很大的可能存在非特异吸附;2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异,浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时,需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。本文是ELISA定量测定方法开发和亲和力测定方法开发的进阶版本,配体受体反应的基本原理解析,和两种应用的差异性区分是进行ELISA筛选方法的开发的基础。 Part 2 - 原理解析 - ELISA信号值和亲和力大小的关系 无论是进行杂交瘤的筛选还是噬菌体展示的筛选,其化学原理的实质是抗体和抗原可逆的相互作用,John McCafferty在Phage Display of Peptides and Proteins A Laboratory Manual一书的第七章节Phage Display:Factors Affecting Panning Efficiency中对可逆反应的数学原理有过理论的推导和实验的验证,简而概之可以用下面的公式进行描述:Abinput代表可逆反应中抗体的加入量,Aginput 代表可逆反应中抗原的加入量,Kd代表Ab和Ag的亲和力大小。由公式可知,当反应完成时,形成的抗原抗体偶联物占抗体的加入量的比值(proportion bound),是一个与抗原的加入量和亲和力大小这两个参数相关的特征函数。具体在ELISA测定过程中当抗体的加入量是恒定值时,proportion bound可以用检测的信号值来等价表示,在ELISA反应中抗原的加入量和Kd将决定信号的大小。相同浓度的抗体,因为亲和力不一样,在同一抗原浓度下其proportion bound的比例也不一样,用具体的图形演示如下图:红色实线是亲和力为1nM的抗体Ab1随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线,蓝色实线是亲和力为10nM的抗体Ab2随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线,绿色虚线为在相同抗原浓度下,Ab1/ Ab2 proportion bound的比值。在抗原浓度为10nM的条件下,90%的Ab1(Kd=1nM)和50%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物,作为ELISA检测的信号值,Ab1,Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上1.8倍的信号差异;在抗原浓度为1nM的条件下,50%的Ab1(Kd=1nM)和9.1%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物,作为ELISA检测的信号值,Ab1,Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上5.5倍的信号差异;在加入的抗体浓度是相同的情况下,加入反应的抗原的浓度越少,ELISA信号比值的差异和抗体亲和力比值的差异更具相关性。抗原的浓度决定了ELISA筛选方法的选择性!以上是关于杂交瘤和噬菌体展示筛选理论状态的推导,也是ELISA筛选结果出来了做出客观解读的理论依据,在实际的筛选应用过程中由于不同的待测抗体样品之间可能存在较大的浓度差异。在抗原浓度较高的情况下ELISA信号差异很多情况下由于抗体样品的浓度差异导致的,ELISA信号值对于亲和力大小不具有选择性;只有在抗原浓度较低时,信号值主要能够表征抗体亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响,而在ELISA方法开发时当抗原浓度较低时,相对于抗原浓度较高时,其ELISA信号值要弱很多,提升ELISA方法信号的灵敏度,如何通过优化酶联抗体的浓度,挑选显色液和选择显色时间以增强ELISA检测的信号值是一个有区分度的ELISA筛选方法的关键。当ELISA检测的信号值得到提升时,由于筛选样品复杂性,往往其背景信号也会极大的提升,如何通过封闭液,酶标板材等降低背景信号值,得到好的信噪比是一个高质量的ELISA筛选方法的另一个关键。Part 3 - 实例分享 - ELISA用于噬菌体展示筛选布 局——————(Note 1)一 般 操 作 流 程1.酶标板的制备取浓度为100 ug/ml抗原,室温溶解,混匀用包被液按如下步骤稀释至0.2ug/ml,0.5ug/ml,1ug/ml,按加样布局表加入100ml/孔,分别加入酶标板条中 (Note 2),其中加入包被液做包被抗体的空白对照,2-8℃过夜。2.用洗涤液洗板3次,拍干,加入300ml/孔封闭液(Note 3)室温封闭1小时;洗涤液洗板3次,拍干待用;3.取出包含有阴性对照和阳性对照过夜孵育制备含有噬菌体的深孔96孔板,在奥豪斯高速离心机中2000g离心15min,取上清,稀释10倍,一一对应加入包被好酶标板中。(Note 4)4.放入奥豪斯微孔板振荡器内 (如ISLDMPHDG- 30391935),设置37℃、600rpm振荡1小时; 5.用洗涤液洗板3次,拍干;6.抗M13 p8酶联抗体稀释到合适的浓度(Note 5),在漩涡混合器上(如VXMNFS-30392112)混匀,100ul/孔。7.放入微孔板振荡器内,设置37℃、600rpm振荡1小时; 8.用洗涤液洗板4次,拍干;9.取酶联抗体对应的TMB显色液,临用前20分钟拿出平衡到室温,在漩涡混合器上混匀;(Note 6)10.使用8道排枪以100 ml/孔加入TMB显色液;11.显色液室温避光放置10-30分钟 (Note 7);12.使用8道排枪以100ml/孔加入终止液终止反应;13.用酶标仪测定信号值;14.结果分析(Note 8)。Note1:由于不同的噬菌体样品有不同的亲疏水性,其对酶标板材的非特异吸附强度不一样,做一块没有抗原包被的阴性对照板是十分有必要的。Positive和Negtive是和样品有同样噬菌体制备过程,Positive Stock为早已经制备好的分装保存的阳性噬菌体,前者目的是监控在不同时间内噬菌体样品制备过程的差异,后者是监控在不同时间内ELISA检测操作的差异。Note2:在包被过程中,建议选择疏水性酶标板材(polysorp),这样可以极大的减少背景信号值,提高整个方法的信噪比。在实验初期包被的抗原浓度需要少量0.2-1ug/ml,然后根据不同包被条件下同一样品信号大小来进行判断优化。一个已知亲和力的展示阳性抗体的噬菌体是十分有必要的,根据该阳性展示噬菌体样品的信号值来确定最终筛选过程中抗原的包被浓度。抗原直接包被酶标板材上会屏蔽部分结合位点,造成部分假阴性的结果,如果条件允许可采用生物素化抗原,首先5ug/ml的链霉亲和素包板,然后加入0.05-0.2 ug/ml不等的生物素化抗原。抗原直接包被和间接包被其效率不太一样,采用间接包被可适当降低生物素化抗原的包被浓度。Note3:在有生物素化抗原参与的ELISA实验中,不要加入含脱脂奶粉的封闭剂,脱脂奶粉含有微量生物素,会干扰整个检测体系。Note4:噬菌体上清液的稀释比例,可提前根据阳性噬菌体样品做好稀释预实验进行确定。Note5:应选择抗噬菌体的P8蛋白的酶联抗体,噬菌体有2000个以上的P8蛋白,适当的增加酶联抗体的浓度可以提高方法的灵敏程度,笔者曾增加5倍的酶联浓度得到了3倍的信号提升。Note 6:市面上TMB底物最低和最高有10倍的显色差异,建议选择市面上最强的TMB显色底物。需要提前确认检测仪器的信号线性范围,比如一般的酶标仪吸光度值的信号线性范围在0-3,吸光度值在3-4之间为非线性的,信号值超过3时,信号和亲和力的相关性变差。Note 7:显色时间可适当的延长,一般来说在30分中内显色的信号值和显色的时间成线性。Note 8:条件的选择最终是通过阳性噬菌体的信号值决定的,阳性噬菌体的亲和力大小是一个非常重要的选择参数。如阳性噬菌体的亲和力为1nM时,筛选的目的是得到高亲和力的抗体,可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为0.5时的条件作为最终的筛选条件,这样很多OD值很小的低亲和力的抗体均被过滤掉;筛选的目的是尽可能得到多的亲和力抗体,可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为2-3时的条件作为最终的筛选条件,低亲和力的抗体在OD值上也不会太小,可以得到体现。不论如何抗原的浓度大小决定了选择性,选择较小的抗原浓度进行反应是信号和亲和力大小匹配的关键和趋势性选择,信号大小的调节可以通过酶联抗体浓度,高显色能力的显色液和显色时间进行调节。如果在一块板的检测中未知样品的信号值大小呈合理的分布是ELISA条件较好的表现。Part 4 - 总结 - ELISA用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是ELISA用于亲和力测定方法的一种变种,想要得到好的信号和亲和力大小的相关性,低抗原浓度条件下进行方法学开发是必须的。低抗原浓度条件下会有低的信号值,通过增加酶联抗体浓度,选择高显色能力的显色液和延长显色时间,增加ELISA灵敏程度是ELISA优化的技术方向。由于检测样品的多样性和复杂性,高灵敏的ELISA检测体系必然会导致背景信号的增加,无法得到很好的信噪比,疏水性的酶标板条,尽可能低的样品的稀释倍数是解决这个问题的关键。一个稳健的能用于杂交瘤和噬菌体展示筛选方法是ELISA各种耗材,试剂和实验条件的完美组合,需要对试剂耗材的多种可能进行探索,也是平台经验的系统汇总,以下是用于筛选方法的优化方向的汇总。 以上,就是小奥带给大家的第四篇ELISA方法学开发的干货内容!我们下期再见哦!
  • 人体对“细菌”和“病毒”感染分不清楚,原因竟然是噬菌体作怪!
    蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解,可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌,而是感染病毒的噬菌体,作为国家卫生研究院资助项目的一部分,帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫,”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高,利用噬菌体(噬菌体疗法)替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样,被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时,我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体,但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主,”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时,他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此,我们问,这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用?”他们与斯坦福大学的合作者一起发现,Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒,识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现,”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应,但是面对细菌感染,这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为,这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”,从而建立感染。研究人员希望,他们的发现可以刺激新研究,通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。
  • 令人意外!噬菌体携带抗生素耐药性基因
    令人意外!噬菌体携带抗生素耐药性基因根据一项新的研究,来自多种环境的病毒组携带着抗生素耐药性基因。这一结果提示着噬菌体---感染细菌的病毒---可能在转移让细菌产生耐药性的基因中发挥着作用。相关研究结果将发表在2017年1月那期Environmental Pollution期刊上,论文标题为“Exploring the contribution of bacteriophages to antibiotic resistance”。来自西班牙赫罗纳大学的研究人员扫描了来自未经净化的污水、人粪便、猪粪便、淡水环境和海洋环境的病毒组,以便寻找抗生素耐药性存在的证据。他们发现这样的基因存在于所有分析的病毒组中,尽管它们的丰度存在差异。在人类相关的病毒组中,研究人员发现相对较少的耐药性基因,它们中的大多数与四环素耐药性相关联。他们在其他的样品中观察到更加丰富的抗生素耐药性基因。在猪粪便病毒组中发现的绝大多数耐药性基因是编码β-内酰胺酶的基因,而未经净化的污水、淡水和海洋样品携带许多各种不同的耐药性基因,包括那些赋予对至少三种不同的抗生素产生多药耐药性的基因。论文通信作者、赫罗纳大学加泰罗尼亚水研究所科学家José Balcázar写道,“我们的研究表明环境是一个巨大的噬菌体库,它们中的大多数携带着抗生素耐药性基因。”因存在细菌DNA污染,Balcázar和同事们排除了他们的病毒组数据中的一些数据。Balcázar也强调应更加深入地研究他的团队在人类相关的病毒组中发现的较低数量的耐药性基因。他写道,“还需更多数量的样品来证实这一观察结果。”Balcázar说,噬菌体在细菌之间转移耐药性基因的机制和噬菌体在基因转移中发挥多大重要的作用还需在未来的研究中加以阐明。
  • 微生物生态领域重要科学问题获进展!原噬菌体de novo预测新算法在南海研究所建立
    中国科学院南海海洋研究所研究员王晓雪团队建立了一种不依赖于噬菌体基因序列相似性的原噬菌体de novo预测新算法,集成分析流程的工具名为Prophage Tracer。9月22日,相关研究成果在线发表在《核酸研究》上。  烈性噬菌体侵染细菌宿主后,大量繁殖,裂解宿主细胞释放子代噬菌体粒子。温和噬菌体则是进入宿主细胞内,将自身的DNA整合在宿主的基因组中,随着宿主细胞的复制而复制。这一过程称噬菌体的“溶原化”,整合在宿主基因组中的噬菌体DNA称“原噬菌体”(prophage)。特定条件能重新激活原噬菌体使其裂解宿主。研究发现在人、小鼠肠道以及珊瑚微生物组中溶原化的温和噬菌体比裂解状态更普遍。温和噬菌体的溶原-裂解转换是微生物生态领域的重要科学问题之一。  温和噬菌体能和宿主形成长期共生关系,其整合切离等可以破坏或恢复宿主的基因正常功能,是宿主基因表达调控的重要途径。研究团队前期发现,希瓦氏菌的原噬菌体CP4So可以在低温诱导条件下发生切离,是细菌一种重要的适冷机制,且CP4So的切离受到宿主温度依赖性的H-NS磷酸化调控。因此,精确鉴定细菌中的原噬菌体及其插入位点对于研究温和噬菌体与宿主的共生关系至关重要。当前,鉴定原噬菌体的方法依赖于利用已知的噬菌体进行序列相似性检索。然而,噬菌体的基因组变异快,基于序列相似性检索方法较难发现未知类型噬菌体。此外,对噬菌体插入位点的预测不准确,较难区分原噬菌体携带的“cargo基因”和宿主基因的边界。  为了解决上述问题,汤开浩等建立了一种从头预测原噬菌体的方法(如图)。该方法利用原噬菌体整合切离过程中会产生基因组结构变异基因组序列。这些序列隐藏在细菌基因组、转录组测序数据的reads中。研究建立重叠的序列比对方法,追踪和挖掘埋藏于测序原始数据中reads。只需甄别到1-2条reads便能精确定位原噬菌体(精确到单个碱基)。该方法不依赖于序列相似性,可预测未知的噬菌体。研究在珊瑚共附生细菌中鉴定到九个温和噬菌体,两个为新颖的温和噬菌体。  研究工作得到国家杰出青年科学基金、国家自然科学基金水圈微生物重大研究计划、国家自然科学基金面上项目、国家重点研发计划等的资助。Prophage Tracer流程
  • 继非洲猪瘟后 意大利等多国发生炭疽杆菌疫情
    p   当国民还笼罩在非洲猪瘟疫情阴霾下,非洲、东欧等国家相继向世界动物卫生组织(OIE)报告:发生炭疽病疫情。 /p p    strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 意大利、亚美利亚、白俄罗斯相继发生炭疽病疫情 /span /strong /p p   9月16日,意大利兽医公共卫生部向OIE报告称,意大利发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为牛,疑似病例42例,确认病例3例,死亡3例, /p p   9月2日,亚美尼亚农业部食品安全局向OIE报告称,亚美尼亚发生炭疽杆菌感染疫情。感染动物为牛,疑似病例10例,确认病例1例,死亡1例。 /p p   8月19日,哈萨克斯坦农业部兽医管理和监督委员会向OIE报告称,哈萨克斯坦发生炭疽杆菌疫情。这次在牛(323例)、马(53例)、绵羊(113例)、猪(126例)中均发现炭疽病疑似病例。 /p p   8月12日,白俄罗斯农业和食品部向OIE报告称,白俄罗斯发生了炭疽杆菌疫情,感染动物为马。 /p p   8月7日,阿塞拜疆食品安全局向OIE报告称,阿塞拜疆发生了炭疽杆菌疫情。感染动物为绵羊,疑似病例140例,确认病例1例,死亡1例。 /p p   & #8230 & #8230 /p p    strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 何为炭疽病? /span /strong /p p   炭疽(anthrax)是炭疽杆菌( i Bacillus anthracis /i )引起的人畜共患的急性传染病。炭疽主要为食草动物(牛、羊、马等)的传染病。人接触患炭疽的动物后,可以受染而患病。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 259px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/1c4e00fc-fd2e-41e5-b582-afa92414f8c8.jpg" title=" 微信图片_20190918142301.jpg" alt=" 微信图片_20190918142301.jpg" width=" 600" height=" 259" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 图片来自网络 /p p style=" text-indent: 2em " 常见的炭疽有三种类型:皮肤炭疽,肺炭疽和肠炭疽。分型不同临床症状也不同。皮肤炭疽主要是皮肤斑丘疹,水泡,水泡破溃后皮肤出现黑色结痂,结痂脱落后成疤,同时伴有发热、头疼、淋巴结和肝脾肿大等。肺炭疽的主要表现为高热、呼吸困难、血样痰及胸痛等。肠炭疽的主要表现为恶心呕吐、腹痛、腹胀和血水样便等。 /p p   不管哪种类型炭疽病都具有传染性,而且病情较重,不及时治疗病死率高! /p p   世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。 /p p   对于如此具有高传染及高病死率的疾病,除了临床症状检查比对,实验室会用哪些方法检测? /p p    strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 实验室检查方法 /span /strong /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 1.外周血象 /span /p p   (1)白细胞计数:一般为(10~20)× 10*9/L,有的增至(60~80)× 10*9/L。 /p p   (2)白细胞分类计数:中性粒细胞显著增多。 /p p   (3)血小板计数:血小板可减少。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 500px height: 295px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/noimg/e66c2ee0-aeee-40dd-bf1f-e74daf7fcb9d.gif" title=" unicel-dxh-800-25.gif" alt=" unicel-dxh-800-25.gif" width=" 500" height=" 295" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 血液分析仪 /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 2.细菌学检查 /span /p p   (1)涂片检查:酌情采集分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液作涂片染色镜检,可见粗大的革兰阳性杆菌。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201909/uepic/86f37d8d-cb82-439a-a118-83bb9a2314c8.jpg" title=" C114040.jpg!w300x300.jpg" alt=" C114040.jpg!w300x300.jpg" / /p p style=" text-align: center " 涂片检查用显微镜 /p p   (2)细菌学培养:取分泌物、痰液、粪便、血液和脑脊液等进行细菌学培养,可有炭疽杆菌生长。 /p p   (3)细菌学鉴定:其鉴定方法有串珠湿片法、荧光抗体染色法和噬菌体裂解试验等。 /p p   span style=" color: rgb(255, 0, 0) "  3.动物接种 /span /p p   将上述标本接种于家免、豚鼠与小白鼠皮下,24h后出现局部的典型肿胀、出血等阳性反应。接种动物大多于48h内死亡,从其血液与组织中可查出和培养出炭疽杆菌。 /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 4.血清学检查 /span /p p   近年来用荧光抗体法检测特异性抗体作快速诊断。 /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 5.Asco1i沉淀试验 /span /p p   主要用于检验动物皮毛与脏器是否染菌。 /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 6.其他辅助检查 /span /p p   X线摄片:肺炭疽可见支气管肺炎、胸腔积液、纵隔影增宽等。 /p p   那么如何才能预防炭疽?最重要的一点就是不接触传染源。 /p p   炭疽的传染源主要是病死动物, strong 病死的牛、羊肉以及来源不明的肉制品千万不能食用,正规渠道购买的牛羊肉都是经过检疫的,只要烹饪时能煮熟煮透,就可放心食用 /strong 。发现牛、羊等动物突然死亡,不接触、不宰杀、不食用、不买卖,立即报告当地农业畜牧部门。 /p
  • 担心感染肠出血性大肠杆菌?食安科技大肠杆菌测试片来帮你
    综合韩媒报道,韩国京畿道安山市一家幼儿园近日发生大规模食物中毒事件,截至27日,出现腹痛、呕吐、腹泻等食物中毒症状的孩子、家人和老师共111人,部分学生还出现了溶血性尿毒综合征症状。 溶血性尿毒症综合征,俗称“汉堡病”,因1982年美国儿童食用未熟的汉堡集体食物中毒而得名。致病原因主要为食用被污染或者没熟透的食物,免疫力较低的孩子和老人容易感染。若病情恶化至损伤肾脏,只能靠透析维持生命,1950年代,病死率一度高达40%~50%,近年来由于改进了对急性肾衰竭的治疗,病死率已下降至5~15%左右。 肠出血性大肠杆菌(EHEC)是可引起较严重的健康危害的致病菌,肠出血性肠杆菌感染是一种人畜共患病。大肠杆菌O157:H7是EHEC中最常见影响最广泛的致病性大肠菌,它除引起腹泻、出血性肠炎外,还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来,肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延,相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌STEC是肠出血性大肠杆菌的一类,能产生志贺毒素的非O157:H7大肠杆菌,包括了在日本出现的E.coli O111以及2011年在德国及欧洲其他国家出现的E.coli O104。这类大肠杆菌感染后,可引起自限性腹泻、出血性结肠炎和溶血性尿毒综合症(HUS)。一般寄生在牛、羊等家畜和其他反刍动物体内,人类主要是通过未经烹调烹调不彻底的肉类和奶制品等被感染。 食安科技针对于肠出血性大肠杆菌检测国内早期已推出大肠杆菌O157检测板、大肠杆菌O157测试片和大肠杆菌STEC测试片,适合于餐饮配餐企业、食品生产企业、校园食品安全、疾控中心、动物饲料质量安全等单位的使用。 大肠杆菌O157检测板 大肠杆菌O157测试片 大肠杆菌STEC测试片
  • 华端生物基于GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》的产气荚膜梭状芽孢杆菌整体解决方案
    2023年3月17日经国家市场监督管理总局(国家标准化管理委员会)批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准,代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年,经过了3轮意见征求,有280+单位参与研制与验证,有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作,最终大功告成。本次修订微生物指标主要内容:新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标,有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备,我们根据标准的要求做个简单介绍。根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材:1. 电子天平:实验室常用仪器2. pH计或精密pH试纸:实验室常用仪器或耗材3. 恒温培养箱:实验室常用仪器4. 冰箱:实验室常用仪器5. 恒温水浴箱:实验室常用仪器6. 显微镜:实验室常用仪器7. 无菌吸管:实验室常用耗材或仪器8. 无菌试管:实验室常用耗材9. 无菌平皿:实验室常用耗材10. 厌氧培养装置:华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统11. 过滤设备:华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置12. 滤膜:实验室常用耗材13. 无齿镊子:实验室常用耗材其他会用到的设备:HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图一、 样品1. 污染较轻的水样,可直接取100 ml水样进行检验。2. 污染严重的水样,可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释,取100ml进行检验。使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪:自动称重,自动按比例稀释。二、 过滤水样先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分,将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,将100 ml水样注入滤器中,打开滤器阀门,在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置:配备直排泵,无需废液瓶,直排废液;火焰灭菌支架和滤杯,提高实验效率。三、 厌氧培养过滤完水样后,关上滤器阀门,取下滤器,用无菌镊子夹取滤膜边缘部分,移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上,滤膜截留细菌面与培养基完全贴紧,避免气泡产生,然后将平皿倒置于厌氧培养装置内,于36℃±1℃厌氧培养18 h~24 h,计数黑色菌落数。使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统:使用灵活、成本低,培养效果有保障,操作简单、智能。四、菌落计数对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数使用华端生物HD-C系列菌落计数仪:手动菌落计数器辅助计数,操作方便;全自动菌落计数仪:软件自动计数,计数快捷、准确。五、 细菌鉴定用上述培养液涂片,革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌,其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端,其宽度一般不超过菌体宽度。使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪:自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化,批量大时可节约大量时间。使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统:标准化的试剂操作,仪器自动判读结果,避免人工判读偏差。六、其他仪器使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪:自动分装培养基或者其他微生物试剂,方便、快速。使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪:相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。杭州华端生物科技有限公司创始团队十多年来一直专注于为用户提供有竞争力的食品、药品、医疗及科研微生物实验室的整体解决方案与服务。2021年我们开始运营品牌“华端生物”,品牌寓意中华之端,华端人不断创新研发,提升产品竞争力,打造新国货。在企业发展过程中,我们始终秉持这一理念,不断引进、培养高科技人才,加大研发力度,并通过对产品持续创新、服务坚持初衷和团队共同成长的持续投入,不断推出符合市场需求的解决方案和服务。我们坚信,“更好的产品、更好的服务和更好的团队”是我们能够赢得客户青睐的核心竞争力,我们会始终不忘初心、砥砺前行,实现“与客户共同保障食品安全、药品安全和公共卫生安全”的社会使命。以史为鉴、开创未来。杭州华端生物科技有限公司诚挚期待与广大用户深入交流,与想要加入团队共同奋斗的同仁,携手前行,共创美好未来。核心价值观:拼搏、专注,突破、创新!企业愿景:提升国产微生物检测设备的竞争力!公司使命:为食品、药品和公共卫生安全提供保障。
  • Oxoid推出快速确认食品中大肠杆菌方法
    Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔)旗下全球知名的微生物培养与诊断产品Oxoid最新推出了优化的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基,不仅能够对食品和水样中的大肠杆菌与大肠群菌快速分离、区分和计数,而且能够快速对大肠杆菌进行确认鉴定。 大肠杆菌和大肠菌群直接或间接来自人与温血动物的肠道,它们在食品中的出现预示某些肠道病原菌的存在,因此在国内外的检测标准中大肠杆菌和大肠菌群的数量都是评价食品卫生质量的重要指标之一。Oxoid的BrillianceTM大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基中的显色剂用来检测大肠杆菌的ß -葡萄糖苷酸酶活性和大肠菌群的ß -半乳糖苷酶活性(包括大肠杆菌),因此平板上紫色的大肠杆菌菌落与粉色的大肠菌群菌落非常清晰地区分开来,可以快速、方便地对食品和水样中的这两种菌群进行分离、区分和计数。   现在,Oxoid对这款培养基的蛋白胨成分进行了优化,初步鉴定的紫色大肠杆菌菌落可以在平板上直接通过吲哚试验确认。向平板加入Kovac’s溶液,紫色的大肠杆菌菌落立刻呈现明显的樱桃红色,即确认为阳性的大肠杆菌,而无需额外的确认实验。   对于食品微生物常规检测项目,Oxiod还有其它的显色培养基:BrillianceTM沙门氏菌显色培养基,BrillianceTM李斯特菌显色培养基、BrillianceTM阪崎肠杆菌显色培养基、BrillianceTM蜡样芽孢杆菌显色培养基等。同时,Oxoid还在不断的研究开发新的产品,努力为食品行业微生物检测提供更简便、更快速的解决方案。   关于Oxoid   Oxoid 是 Thermo Fisher Scientific 旗下的知名微生物产品品牌,其产品涵盖整个微生物科学领域,为临床检验、工业生产领域和基础学术研究的微生物诊断提供优质的解决方案。Oxoid最初起源于欧洲,其历史可以追溯到十九世纪微生物科学开始的年代。Oxoid总部位于英国Basingstoke,并在全球设有多家生产厂,如加拿大、德国、澳大利亚等等。2006年Oxoid在中国北京设立了一条新的微生物制成培养基生产线,它的运营使中国的微生物工作者在微生物培养基产品上可以与世界标准接轨,并大幅度减少了微生物实验室操作的工作量,有效地提高了微生物实验室检验的标准化程度。2006年Oxoid正式成为全球科学服务领域的领导者Thermo Fisher Scientific旗下的品牌之一,与另一微生物品牌Remel组成微生物产品部,资源整合优化后,为全球的微生物工作者提供更全面的产品与更专业的服务!欲了解更多信息,请浏览网站:www.oxoid.com。
  • 水中大肠杆菌检测仪-无需在无菌室操作【恒美新品】
    点击此处可了解更多详情→【水中大肠杆菌检测仪】 水中大肠杆菌检测仪是一种用于封装容器的设备,它可以实现自动化的封口过程,并具有程控功能。在水中大肠杆菌检测中,程控定量 封口机具有以下几方面的作用: 1.提高封口效率:水中大肠杆菌检测仪可以实现自动化的封口过程,大大提高了封口效率。相比于手动封口,它能够更快速地完成封口任务,并且能够保持封口的一致性和稳定性,减少人为因素对结果的影响。 2.保障封口质量:水中大肠杆菌检测仪通过程控功能,可以准确控制封口的时间、温度和压力等参数,确保封口质量的稳定性和一致性。这对于水中大肠杆菌检测来说非常重要,因为一个良好的封口可以有效地防止样品的污染和外部细菌的进入,保证检测结果的准确性和可靠性。 3.减少操作风险:水中大肠杆菌检测仪的自动化操作减少了人为操作的风险。在水中大肠杆菌检测中,人为操作可能会引入外部细菌污染,影响检测结果的准确性。而程控定量封口机的使用可以避免这种风险,确保样品的纯净性和可靠性。 4.提高工作效率:程控定量封口机的自动化操作和高效率封口能够提高工作效率。这对于大批量的水中大肠杆菌检测来说非常重要,可以节省人力和时间成本,提高检测的效率和生产力。 综上所述,水中大肠杆菌检测仪在水中大肠杆菌检测中具有重要的作用。它能够提高封口效率、保障封口质量、减少操作风险和提高工作效率,为水中大肠杆菌检测提供了可靠的封口保障。
  • 欧盟建议建立追溯体系避免大肠杆菌疫情
    据国外食品类网站报道,英国利兹海德食品研究所食品安全与危机管理主任托尼.海因斯表示,在大肠杆菌疫情期间,德国卫生当局失去了对食品行业的控制力,然而有效的追溯体系对于避免大肠杆菌疫情再次上演至关重要。   据了解,大肠杆菌疫情共造成德国48人死亡,法国15人死亡,最终疫情源头被追溯至从埃及进口的葫芦巴种子,后来这些种子被运至德国下萨克森州用以培植芽菜,培植出的芽菜最终导致疫情的爆发。   近日欧盟食品安全局执行理事在柏林会议上称,欧盟的食品安全体系非常脆弱。对此海因斯专家做出了回应认为,欧盟是全球最大的食品贸易市场,市场的完全开放使得食品安全体系面临很多威胁,一种食品会含有来自世界各地的多种配料,然而很多配料并未按照欧盟标准进行生产,对食品的配料成分进行追溯对于危机管理来讲至关重要,了解食品原料的来源、原料加工制成的食品类型、成品的销售地不仅是一项法律要求,对于危机管理的追溯来讲也很有帮助。
  • 美食品安全新规增检沙门氏菌及大肠杆菌
    美国政府7日宣布一系列食品安全新规。这是贝拉克奥巴马政府为全面改革食品安全监管体系采取的第一个行动。一段时间以来,美国发生多起食品安全事故,现有食品安全制度饱受诟病。   三大重点   新规由奥巴马总统今年3月下令成立的一个食品安全工作协调小组提出。   美国《华盛顿邮报》8日报道,新规重点是做好预防、加大执法力度以及改善监管部门对食品安全事件的反应。   美国副总统约瑟夫拜登7日在新闻发布会上就食品安全新规说:“几乎没有什么比确保食品安全更应该成为一项基本而重要的政府责任。”   “如今,让美国家庭烦恼的事已经够多。他们不应该再为(食品安全)担忧,”拜登说。   勤检多查   美国近期数起食品安全事故涉及沙门氏菌感染。《华盛顿邮报》报道,每年有大约14.2万美国人因食用受沙门氏菌感染鸡蛋患病,其中大约30人死亡。这样的鸡蛋一般来自受沙门氏菌感染的母鸡。   新规要求鸡蛋生产商定期检测鸡蛋受沙门氏菌感染情况,要求他们从采取同样严格措施的供应商处购买蛋鸡。此外,鸡蛋除了要在批发和零售环节冷藏,还要在农场和运输过程中冷藏。   美国食品和药物管理局(FDA)局长玛格丽特汉伯格说,新规将使每12个鸡蛋的成本增加1美分,生产商将因此额外支出8100万美元。但是,这样做可以将沙门氏菌感染患病人数减少约7.9万,使美国每年省下14亿美元医疗开支。   食品和药物管理局还将联手农业部下属的食品安全及检验局(FSIS),采取措施减少大肠杆菌感染。   根据要求,食品安全及检验局将在肉类食品加工厂增加抽样检测次数,特别是增加对牛肉馅的检测。食品和药物管理局则定于7月底前发布一份指南,说明如何防止番茄、瓜和绿叶蔬菜在生产和销售过程受大肠杆菌污染。   专人协调   美国食品安全监管工作由15个联邦机构承担。《华盛顿邮报》说,这样分工过于复杂、甚至“荒谬”。比如,食品和药物管理局负责监管农产品,农业部负责肉类食品。根据这一分工,奶酪比萨饼归前者管,而意大利辣香肠比萨饼要归农业部管。   新规提出,这些食品安全监管机构派专人负责协调。食品和药物管理局将增设专门负责食品安全工作的副局长。食品安全及检验局将聘用一名首席医务官负责协调事宜。   美国消费者联盟负责食品安全干事让哈洛兰对此举措表示满意。他说,消费者第一次在食品安全事务上有个“可找的人”。   消费者欢迎   美国政府早就提出要改革食品卫生监管体系。前总统比尔克林顿1999年就曾提出过要加强食品卫生监管,但始终不见具体行动。   此次推出的新规受到消费者肯定。比尔马尔勒是长期代理有关食品安全诉讼的律师。他在博客中写道,在美国现行食品卫生监管体系下,总是要等有人因食品卫生问题生病或死亡才会引起关注。新规“将重点放在防范,而不是等病菌蔓延后再去数有多少人因病菌感染而丧生。”   美国食品杂货商协会的斯科特法贝尔也称赞新规重在防范的特色,认为新规“给食品安全制度打下新的基础。”
  • 手机新应用:检测食品中的大肠杆菌
    手机中的新应用正逐渐改变着用户的消费世界,” v-Fluence Interactive 网络市场研究与支撑中心总裁Jay Byrne在最近的评论文章中列数了几款时新的手机应用:“比如,一款名为CellScope的手机技术使得手机的摄像头可被用作发光的显微镜——这意味着拥有这种摄像技术的手机,比如iPhone,可被用来收集和传输照片,用于疾病的诊断。”   “通过升级软件或者摄像头来实现诸如此类的应用已经为期不远了,在不远的将来,在任何iPhone或者其它的手持设备上都能实现这些功能,包括大肠杆菌或者食物中其它细菌的检测。假设你发现你的细纹牛排味道有些不对,只需用你的手机咔一下,就可以看看这个来自麦当劳的巨无霸有没有受到污染。还有H1N1、打喷嚏等,也只需咔一声,诊断结论和一些相关的信息就可以实时的被呈现出来了。”   这种类型的手机新应用是数不胜数的,它们可以改变消费者的抉择过程和行为倾向。Byrne这样说道:“我们在食品质量和疾病诊上做好了大量进入和控制的准备了吗?问题不在于我们是否做好准备,该来的都要来。并且,这也只是手机众多应用中最细微最新鲜的’一颗螺丝钉’而也,手机的应用到底有多惊人,超乎任何人的想象!”
  • 大肠杆菌检测有新方法
    大肠杆菌O157:H7是食源性致病菌的主要类型,可引起急性肠炎、肠出血性结肠炎、溶血性尿毒症综合征。近日,中国工程院院士、广东省科学院微生物研究所研究员吴清平与该所客座研究员丁郁团队合作开发出高灵敏检测大肠杆菌O157:H7的新方法。相关研究发表于《生物传感器和生物电子学》(Biosensors and Bioelectronics)。 据悉,传统的基于胶体金纳米颗粒的比色免疫层析试纸条存在灵敏度不足的固有缺陷,阻碍了低丰度目标物的检测应用。具有信号放大潜力的金属生长策略能够极大地提高试纸条的检测灵敏度,其原理和方法是通过将显色试纸条浸泡于增强液中,金属离子在还原剂作用下以胶体金为核心,聚集于胶体金表面还原成金属单质,从而沉积于胶体金探针表面形成纳米壳层,显著增强胶体金探针信号强度。 金、银和铜生长是扩大金纳米颗粒尺寸最常用的策略。其中铜作为一种廉价的金属,因其在催化领域的优势受到广泛关注。但是金和铜的晶格常数相差很大,引起晶格失配。具有大晶格失配的金属纳米壳层的生长过程和形状控制合成不可控。此外,基于试纸条浸泡的金属生长策略中,铜可以沉积到现有的金纳米颗粒或基底表面,特别是硝酸纤维素膜特有的处理工艺使额外添加的铜离子在孵育时易吸附,导致假阳性结果或者出现明显背景。这种模式容易受到环境和操作者的影响,需要精确把握操作流程,大大限制了该方法在实践中的推广应用。 该研究引入聚丙烯胺盐酸盐介导的铜生长可控模型,消除了铜离子在硝酸纤维素膜上的非特异性吸附,从而提供了最大化且有效的信噪比,实现了对强致病性大肠杆菌O157:H7的高灵敏检测。此外,新开发的检测方法具有良好的重现性(变异系数小于13%)、显着的稳定性和实用性。 据了解,聚丙烯胺盐酸盐介导的信号增强系统为实现稳定金属生长方法铺平了道路,并广泛适用于金纳米颗粒免疫层析检测平台。
  • 我国快速建立肠出血性大肠杆菌检测法
    我国快速建立肠出血性大肠杆菌检测法 已开始向全国推广   近日,我国细菌学科学家、生物技术科学家联手,快速建立肠出血性大肠杆菌O104H4检测方法和鉴定方法,并已开始向全国推广。中国CDC(疾病预防控制中心)传染病预防控制所所长徐建国研究员日前在接受记者专访时称,该方法的建立,为我国各地及时捕捉可能入侵的这一新发病原提供了有力武器。   徐建国介绍,已知常见肠出血性大肠杆菌(EHEC)血清型有3个:O157、O26、 O111 不常见的血清型有40多种。最近在德国引起暴发疫情的O104H4是EHEC家族中的一种罕见的血清型,含有志贺毒素2(vtx2a)的基因和肠积聚性黏附大肠杆菌毒力质粒上的3个基因:aatA,aggR,aap。   中国CDC传染病预防控制所此前已建有一套针对EHEC-O157H7的检测和鉴定方法,也建立了肠积聚性黏附大肠杆菌的毒力质粒的检测方法。由此,近日该所快速研究建立了针对EHEC的4个基因(志贺毒素1、2,溶血素,EAE毒力岛)、针对肠积聚性黏附大肠杆菌毒力质粒上的aatA、aggR、aap 3个基因,以及O104和H4基因的检测方法。南开大学泰达生物技术学院王磊教授团队与中国CDC传染病预防控制所合作,建立了覆盖近50种EHEC的诊断血清,和覆盖10余种大肠杆菌H(鞭毛)抗原的诊断血清,其中包括O104和H4。同时,建立了能够检测O104H4的PCR检测方法和诊断血清。   据悉,目前两个科学家团队所建立的检测方法,不仅可以及时发现EHEC-O104H4,也可以及时发现其他血清型的EHEC。
  • 恒天然三批全脂奶粉被检出含阪崎肠杆菌
    日前,国家质量监督检验检疫总局进出口食品安全局公布了今年4月进境的不合格食品、化妆品信息,其中,全球最大的乳品原料供应商新西兰恒天然(前译名方塔拉)多个批次的全脂奶粉被检验出含有致病菌阪崎肠杆菌。   不合格产品国家已按规定处理   据公布的数据显示,被检出阪崎肠杆菌的三批全脂奶粉,总数达277.9吨,分别是今年1月和3月进口的,被上海检验检疫局和广东检验检疫局截获。   对此,记者联系了恒天然商贸(上海)有限公司,该公司给记者发回传真表示,恒天然确有进口到中国的食品工业用乳品原料在4月份被相关地方的出入境检验检疫局检出阪崎肠杆菌。尊重中国政府的相关考虑和规定,已对被检测出阪崎肠杆菌的产品按规定作出了相应的处理。   在这份4月份进境不合格食品、化妆品信息的表格里,记者看到国家已经按相关的规定对这些批次的产品进行处理。   恒天然中国进口产品抽检频出问题   同时,记者在查阅相关的资料发现,去年9月恒天然同样有两批全脂奶粉,共计231吨被广东检验检疫局检出含有阪崎肠杆菌。   记者还了解到,这两年来,恒天然进口中国多个批次的产品均存在水分检测不合格、标签不合格等问题而被处理。仅某国内奶粉品牌这两年从方塔拉进口的奶粉当中,就有5个批次,超过650多吨原料被检验出了水分检测不合格、标签不合格等问题。最近一次是今年3月从方塔拉进口的119.95吨速溶脱脂奶粉被检出水分检测值与外包装标示不符。   对此,恒天然表示,恒天然公司一向极为重视标签问题,并利用国际日恩克的方法在经认证的实验室中进行检验。食品工业用原料奶粉的水分含量问题,差距可能来自于检测的可变性。如利用同一个方法多次重复检测,其结果可能不同 而当使用不同的检测方法时,其结果也可能产生差异。   恒天然中国战线在收缩?   据悉,恒天然作为世界上最大的乳品原料供应商,每年乳品原料的全球销量超过200万吨,出口到120多个国家。在中国,包括国内乳业巨头蒙牛、伊利、三鹿等都是恒天然的客户。而雅培等国际品牌的基粉都是来自恒天然。达能、益力多等乳制品企业都在用恒天然的脱脂奶粉作为原料,也会用到其全脂奶粉做增稠剂。 业内人士介绍,恒天然在中国的战线已经在逐渐收缩,减少了对中国的出口配额。其对中国的年出口量以前有20~30万吨,但现在逐步缩小到原来的1/3。 而恒天然媒体事务的相关负责人也表示,今年恒天然出口中国的原料确实会大幅缩减,一方面处于原加料价格成本的飞速上涨,另一方面则是产品供应的紧张。该人士表示,这种情况在日本、东南亚等国家也同时存在。   各方反应恒天然:中国标准与国际惯例有差别   对于此次恒天然的进口全脂奶粉也被检出阪崎肠杆菌,恒天然商贸(上海)有限公司方面表示,按照国际惯例通常只有应用于 0~6个月婴儿、早产儿、低体重婴儿的配方食品或原料将阪崎肠杆菌作为常规检测项目。国际上对于成人的食品原料和产品检测通常不将阪崎肠杆菌列为常规检测对象。而中国的标准是全部都要检查。 恒天然方面表示,此次被检验出的产品为食品工业用的全脂奶粉,供中国的乳品企业进行再加工或生产,如乳饮料、酸奶、酸奶饮料的生产等。国际上应用于生产酸奶、UHT酸奶饮料等产品的全脂乳粉常规上一般也不检测阪崎肠杆菌。由于在热处理参数为 68℃,16秒的条件下,能确保阪崎肠杆菌以10万级数减少。所有在UHT、酸奶等产品的生产过程中,其加工工艺均高于该热处理参数,并且酸奶类产品的 PH值都很低,因此阪崎肠杆菌不会存活于高温热处理和低PH值的工艺中,从而在终产品中也不存在。   业界:在华产品都要遵守中国标准   对此,有业内人士就认为,任何产品要进入中国市场,都要遵守中国市场的相关标准,对于恒天然来说也是如此。 “方塔拉的产品出口到120多个国家,产品均符合国际的标准。当在进口中国的某些批次产品后,公司也在积极与新西兰方面协调,希望能比较好地与中国的相关检测标准契合。恒天然公司已经实施了一个风险管理战略以宰加工环境中尽可能减少肠杆菌的水平,进而确保可能的阪崎场杆菌的污染降到一个非常低的水平,并与国际上认可的食品要求相一致”恒天然表示。   乳制品客户:目前并不受影响   那么世界最大的乳品原料供应商再次在“阪崎肠杆菌“和水分检测、标签等问题上触礁。是否会影响其众多乳制品客户的信心?   记者了解到,已经有牛初乳品牌为保证产品的质量,转换了其他的供应商。而部分乳品企业在接受记者采访时则表示,每一批进口奶粉包括恒天然在内,在进入中国之前一定要经过国家检验检疫部门的抽检,抽检过关后企业才会用。而且进入中国后,企业内部仍会进行抽检。因此部分批次产品被抽检出阪崎肠杆菌超标并不代表恒天然所有产品都是有问题的。   背景资料:阪崎肠杆菌对婴儿具有威胁   据了解,阪崎肠杆菌是乳制品中近几年新发现的引起广泛关注的一种致病菌。它是存在自然环境中的一种“条件致病菌”,已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌,可导致任何年龄层人群的疾病,尤其是对早产儿、出生体重轻的婴儿或免疫受损婴儿的威胁最大,严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎。   继美国FDA2002年在本土某一些国际乳业巨头生产的婴儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌后,2003年又一家国际乳业巨头公司主动召回在美国生产的一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉,此后成为世界关注的焦点。我国在2005年5月通过《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定,对奶粉严查此菌。   今年以来,广州、中山、汕头检验检疫部门在食品工业用进口奶粉中已多次检出阪歧肠杆菌。
  • 饮用水质离不开大肠杆菌在线监测仪
    饮用水质离不开大肠杆菌在线监测仪【霍尔德HED-DC9000】来自人们粪的病原体微生物如大肠杆菌,是导致水源污染的关键病菌,饮用水检测出大肠杆菌意味着水受到了粪的污染,粪中或许带有除大肠杆菌外的其他更多的病菌,目前全球各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪污染较好的指示菌。国家标准中,运用总大肠菌群作为粪污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,37℃发育时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量,表明水被粪水污染的程度,而且间接地表明有肠道病菌存在的可能。山东霍尔德电子生产的大肠杆菌在线监测仪采用国际标准的方法,酶与细菌培养反应后光信号变化成正比这一原理,反映出样品中细菌总量或大肠菌群的多少。系统广泛用于饮用水水源安全、应急评估及多细菌的测定,能对水污染事件进行预警,同时可预警一般性水体污染事件以及食物中毒事件。 大肠杆菌在线监测仪的技术参数:测量方法酶底物法检测参数总大肠菌群或耐热大肠杆菌、菌落总数。测量范围测量范围: 1MPN/1L—1×1011MPN/L重复性10%分辨率1%测量时间小于12小时清洗维护测量前后自动进行清洗消毒测量间隔连续或者任意选择,可设置校准周期三个月人机操作超大屏幕彩色液晶触摸屏,分辨率:800x600数据存储1年以上报警信号温度报警,机械故障报警,检测结果误差报警。输出RS232,RS485,4-20mA,正常工作条件环境温度:0~40℃。电源要求:220V AC±10%,50Hz±5%。功率:200W电源要求:220V AC±10%,50Hz±5%功率:不大于200W外界环境:无显著震动及电磁干扰,避免阳光直射尺寸500mm×1650mm×321mm(W×H×D)
  • 赛默飞世尔科技助力欧洲新型大肠杆菌菌株研究
    赛默飞世尔科技助力欧洲新型大肠杆菌菌株研究 英国健康保护署使用LTQ Orbitrap质谱分析成效卓越 中国上海,2011年7月5日&mdash &mdash 全球科学服务领域的领导者赛默飞世尔科技于6月28日正式宣布,公司与英国健康保护署合作研究项目有重大进展,研究人员最终确定蛋白质有机体是此次欧洲爆发性大肠杆菌的致病原因。通过使用赛默飞世尔的LTQ Orbitrap质谱仪科技,英国健康保护署研究人员已经检测出导致37人死亡以及近3,400人致病的由致命病毒毒株组成的蛋白毒素。 英国健康保护署此次研究获得了来自赛默飞世尔科技英国Hemel-Hempstead工厂的大力协助。&ldquo 这次研究的重要性在于科学家能够提升技术,用于微生物研究,进而证实基因序列如何转化成蛋白质的构造块,而后者能够决定对象特性,例如有毒性。&rdquo 赛默飞世尔科技全球研发部副主席Ian Jardine博士说到,&ldquo 我们先进的Orbitrap质谱仪系统帮助研究人员了解这次大肠杆菌致命的原因,并以此指导新型治疗方法的研发&rdquo 。 具体而言,Orbitrap技术能帮助科学家分辨、分析新型大肠杆菌的蛋白指纹图,同时保证了分析结果的快速及可靠性。认识新品种所含生物机体产生的毒素、其他蛋白成分的能力,将能显著减少其对人类健康的危害;并同时提供更行之有效的治疗方法。对毒性蛋白和其他蛋白的识别能力,在疾病过程中也可以应用于由微生物引起的其它疾病。 中国卫生部日前表示中国目前还没有发现感染德国出血性大肠杆菌的病人。但卫生部仍然对此次疫情予以高度重视,并随时保持与世卫组织和欧洲相关国家等密切的沟通和联系。赛默飞世尔科技在疫情研究方面所提供的技术支持,以及欧洲的研究成果将对中国大肠杆菌的预防和检测起到积极地保障作用。&ldquo 在中国,赛默飞世尔科技将以我们最先进的科技和产品,随时随地、积极配合中国政府和相关客户进行相关方面的研究和检测,以保证本土的健康、安全、清洁,这也是赛默飞世尔的使命所在。&rdquo 赛默飞世尔科技中国区总经理迈世福先生说道。 此次研究的所有成果将会于近期公布。 关于赛默飞世尔科技 赛默飞世尔科技(纽约证交所代码:TMO)是科学服务领域的世界领导者。我们致力于帮助我们的客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额接近110 亿美元,拥有员工约37000人。主要客户类型包括:医药和生物技术公司、医院和临床诊断实验室、大学、科研院所和政府机构,以及环境与工业过程控制行业。借助于Thermo Scientific 和Fisher Scientific 两个首要品牌,我们将持续技术创新与最便捷的采购方案相结合,为我们的客户、股东和员工创造价值。我们的产品和服务有助于加速科学探索的步伐,帮助客户解决在分析领域所遇到的各种挑战,无论是复杂的研究项目还是常规检测或工业现场应用。欲了解更多信息,请浏览公司网站:www.thermofisher.com,中文:www.thermofisher.cn。
  • 湘仪推出肠杆菌检测配套用离心机
    为了配合国家质检总局对婴幼儿配方奶粉及液态奶的阪崎氏肠杆菌的专项检查,对降低婴幼儿配方奶粉的风险,保证代乳品的安全性。我公司综合最近客户需求以及FAO/WHO(联合国粮农组织/ 世界卫生组织)公布的阪崎氏肠杆菌标准检测方法特推出阪崎氏肠杆菌专业检测配套用离心机(台式高速离心机 TG16-WS)配合专业实验室机构检测工作。 阪崎氏肠杆菌(Enterobacter sakazakii)是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌,阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症,死亡率高达50% 以上。目前,微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源,但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。阪崎肠杆茵的生物学性状及其对人群的健康危害受到人们的关注并被报告。因此我国在2005年5月通过《奶粉 中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定。 中国检科院与天津出入境检验检疫局联合十几家单位,从2003年初即开展了阪崎肠杆菌检测方法研究。课题组目前已建立了阪崎肠杆菌的改进型传统检测方法(经典方法)、普通PCR方法和荧光PCR方法(快速筛选方法),并分别进行了初步验证实验,其中改进型传统方法与美国FDA方法相比检测结果一致,但检测时间缩短三分之一至二分之一. TG16-WS台式高速离心机技术参数: ◆最高转速: 16000r/min ◆最大相对离心力:17800xg ◆定时范围:0~99min ◆电机:直流无刷、微机控制 ◆电源:Ac220V 50Hz 5A ◆整机噪声:≤65dB(A) ◆外形尺寸:390×330×300mm(L×W×H) ◆重量:25kg 推荐标配转子: 转子名称 最高转速 最大相对离心力 容量 备注 角转子 16000r/min 17800×g 12×1.5ml 特价 角转子 12000r/min 14800×g 12×10ml 特价 标准检测方法下载(SN 中国出入境检测检疫行业标准): SN 1632.2-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第2部分PCR方法.pdf SN 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第3部分荧光PCR方法.pdf
  • 两款婴儿配方奶粉被查出阪崎肠杆菌超标
    广东省工商局昨日公布了今年第一季度乳制品、含乳食品抽检结果:抽检合格率为98.9%。   有两款婴儿配方奶粉被查出阪崎肠杆菌不合格,分别是:哈尔滨太子乳品工业有限公司生产的金100益生菌婴儿配方奶粉(1段),以及肇州县摇篮乳业有限责任公司生产的钙维健婴儿配方奶粉(1段)。   据悉,阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是肠杆菌科的一种,1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎,死亡率高达50%以上。目前,微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源,但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。
  • 德国毒豆芽引发出血性大肠杆菌
    食品安全问题近期成为全球关注的焦点,尤其德国出血性大肠杆菌事件更是令人们唏嘘不已。毒黄瓜、毒豆芽居然让欧盟餐桌变得“肮脏不堪”,这大概令欧盟食品安全管理官员倍感意外。忆及过去二十年出现在欧洲的“疯牛病”、“口蹄疫”、“二恶英”、“李斯特杆菌”、“沙门氏菌”, 接二连三的食品安全丑闻戳破了欧盟食品安全神话,欧盟食品法制制度再次受到质疑。欧盟号称拥有“天下第一”的严格食品安全管理制度,但如果回溯到几年前,“疯牛病”、“口蹄疫”、“二恶英”、“李斯特杆菌”、“沙门氏菌”等热词就会跳到眼前。欧盟食品法律制度遭到前所未有的质疑。ELISA试剂盒就眼前的“毒豆芽风波”来看,德国政府广受诟病。就在德国方面迟迟不能确定病源的时候,欧洲其他国家提高了批评德国的声音,认为它应对疫情的反应太官僚,而且各地区、各级别部门缺乏协调,以至于延误了追踪病源的时间。由于德国一度错报了病源,让欧洲的农民直呼“伤不起”,白白浪费了许多无辜的蔬菜。比利时农业部长拉鲁尔6月7日在卢森堡参与讨论受影响欧洲农民补贴方案时说,她真搞不清楚到底德国方面谁在对这件事情负总责。有业内人士对记者表示,此次德国大肠杆菌疫情的肆虐,从一定程度上来说,德国政府必须担负主要的责任。首先,德国政府的监管疏忽造成疫情的产生 其次,德国政府效率低下造成疫情肆虐 最后,德国政府的推卸责任和不断猜测,给不少国家和菜农造成了严重的损失。据悉,为了提高对食源性疾病病源菌的快速检测能力,预防大规模食物中毒的暴发,1996年,美国疾病控制预防中心建立了PulseNet网络实验室,将沙门菌、致病性大肠杆菌、李斯特菌等常见致病菌的基因图谱和标准检测方法放到PulseNet平台,美国州立和市立的公共卫生实验室只要加入该平台,就可以随时进入PulseNet数据库,将可疑菌的检测结果与电子数据库中致病菌基因图谱进行比对,及时快速地识别致病菌,以便进一步展开调查和控制。ELISA试剂盒一些德国法律制定者和健康专家也呼吁,此次疫情过后,不光是德国,欧洲其他国家都应该建立类似美国这样的应急系统。持续了一个月的疫情得不到控制,让一些人怀疑欧洲在应对食品危机方面缺乏专业性。有国外专家指出,一个小小的“毒豆苗”就把整个欧洲搅得天翻地覆,造成果蔬业瘫痪,这说明欧盟对这类突发性疫情的判断和处理不够专业,最后的结果是,让无辜者承受后果,让恐慌无从控制。就此,业内人士建议政府应提高工作效率,以应对现在各种突发的食品安全问题,以最大程度保护消费者的安全。ELISA试剂盒
  • 光明鲜奶再爆不合格,大肠杆菌超标千万倍
    2月28日消息称,宁波市食品药品监管局2月26日公布的乳制品抽检结果显示,该市去年下半年抽检的201批次鲜奶有63批次不合格,涉及光明、宁波、涌优、一鸣、新希望双峰等5个品牌,其中光明鲜奶产品共被抽检71批次,有21批次经检不合格,合格率为70.42%。   抽检结果显示,光明旗下的200毫升和500毫升盒装优倍高品质鲜牛奶分别被检出β-内酰胺酶阳性、大肠菌群超标,而浙江杭江牛奶公司乳品厂生产的200毫升盒装和220毫升瓶装光明鲜牛奶也分别检出β-内酰胺酶阳性、大肠杆菌超标。此外,上海乳品四厂有限公司生产的220毫升瓶装鲜牛奶,还同时存在β-内酰胺酶阳性及大肠杆菌超标的情况。   大肠杆菌超标千万倍   据中国之声《新闻纵横》报道,牛奶又闹安全问题了,昨天(27日),宁波市食品药品监督局公布了一份2012年下半年全市乳制品的抽检结果。报告显示:鲜奶合格率不到7成,只有68.66%,大肠杆菌最高超标1000万倍。   最令人震惊的不是检测结果,而是在结果发布之后,宁波市质监局和涉事的牛奶公司却称不存在质量问题。为何,身负监管责任的质监局和食品药品监督局“唱了反调”?宁波的市民糊涂了,到底该相信谁?这奶到底还能不能喝?   昨天一整天,宁波市民蒋女士的心情只能用“特别气愤”四个字来形容。他们家喝宁波牛奶集团的鲜奶已经5年了。当时因为听说外地奶不放心,所以才特地定了本地产的牛奶,而且还是宁波牛奶集团特别推出的有机奶——涌优牛奶。谁知道,在这次食药局公布的检测中,涌优奶的问题最为突出。一想到自己平常喝的奶里含有那么多的大肠杆菌,蒋女士顿时觉得一阵恶心。   蒋女士:第一反应就是很恶心,因为我已经喝下去很多了呀。我就觉得那一灌就是一罐细菌一罐大肠杆菌,实在喝不下去,都扔了,两罐都扔了。然后退订了。我姐姐退订了,我妹妹也退订了。   引发牛奶退订潮的是宁波市食品药品监督局公布的一份全市乳制品评价抽检结果。在这份文号为甬食安办【2013】9号文件里,通报了去年的乳制品抽检结果。报告显示:鲜牛奶合格率普遍较低,为68.66%,其中玻璃瓶装鲜奶合格率仅为14.81%,不合格原因是部分样品被检出大肠菌群超标和β-内酰胺酶阳性也就是俗称的抗生素残留。涉及品牌有涌优、宁波和光明。而涌优和宁波两个品牌均为宁波牛奶集团所有,宁波市有60万人次在饮用宁波牛奶。整份报告连续用了多个“问题很严重”这样的词语来下结论,并在”大肠菌群最高标值超过标准限量值1000万倍”这句话后面加了感叹号。   这份报告究竟是怎么出炉的?记者随后联系上了宁波市食品药品监督局食品处的负责人,不过对方告诉记者:这只是一份评价性检测结果,是用来做提醒用的。   负责人:抽样有两种,一种是监督性抽样,一种是评价性抽样。我们这是评价性抽样,本身就是不定期的对一些产品进行抽检,然后到年底的时候进行一个综合性分析,作为一个监管性消费提醒,不能作为一个执法依据的。我们不是监管部门,是质监局在管。   不过,对于食品药品监督局的这份检测结果,宁波市质监局副局长朱学峰却有不同的看法。他肯定的说:宁波牛奶的质量没有问题:   朱学峰:从我们监管角度,宁波牛奶合格率还是很高的。我们也是按照国务院要求按照六天啊七天啊这样的周期在检的,检下来的情况都是比较好的。食药局它可能从一个评价性的角度,是从居民家里抽。这里面情况就比较多了。我们是在企业的冷库里抽检,也就是厂门这一块。   宁波市质监局认为,食品药品监督局是从居民家中取样,不少居民没有及时把牛奶进行冷藏从而导致了细菌超标。而宁波牛奶集团随后发布的一份声明里,也把责任推到了奶箱上,认为是居民没有按规定温度保存造成的。该集团副总经理廉立伟甚至对记者喊起了冤:   廉立伟:它说宁波奶都是不好的,都不要喝,那我们其他人也都在喝啊,你想想要是不合格率那么大,那宁波所有的医院是不是都住得满啊。   廉立伟不仅对产品质量喊冤,还坚持说检测结果不全是宁波牛奶一家的事,而是整个宁波乳制品市场的问题。他说他甚至之前都不知道有这么一个检测结果。   廉立伟:官方也没说全是我们,它说是我们了?它说它是对全年的整个市场的乳制品进行评价性抽查,鲜牛奶合格率普遍较低,为68.66%。这里没说我们。   记者:那食药局不是过来告诉你们结果了吗?   廉立伟:它过来告诉我们就是我们的结果啊?它没说啊。那都不是我们的结果,这里面要说清楚的。   不过,宁波牛奶集团冤不冤,看数字就知道了。报告显示:涌优、宁波、光明三个品牌鲜奶的合格率是68.66%,但同属宁波牛奶集团的涌优、宁波两个品牌的合格率却分别只有64.26%和67.17%,也就是说都低于平均合格率。   然而,面对这样的数字和事实,企业喊冤,药监和质监两个政府部门给出两个截然不同的结果。身为消费者,究竟应该相信谁呢?市民蒋女士表示,她有点晕:   蒋女士:你说那个小房子奶,它包装如果是合格的,中间到底怎么会出问题,又没破。它如果裸露的可能有问题,又没有裸露没有拆封过,我不知道为什么有问题。   在公布检测结果后,除了宁波牛奶公司做出了一份把责任归于市民贮存不当的说明外,其他政府部门也没有举行相关的新闻发布会。宁波的消费者这下真的有点懵了:我们到底应该相信谁呢?
  • “嗜血”的质谱——关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题
    p   卫生部临检中心组织的2018年第一次临床微生物室间质评已经结束,但关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题,在微信朋友圈里谈得正热烈 (见文《溶血 or 流感?傻傻分不清?》)[1]。主要是因为在这次质评中,生化鉴定仪和有些品牌的质谱仪的鉴定结果出错了。令小布自豪的是,布鲁克MALDI Biotyper质谱的鉴定结果与标准答案完全相符!所以小布在这里来一段点评。 /p p   流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌虽然同属,但属于两个不同的种,致病性和临床意义也大不相同,前者是上呼吸道感染的常见致病菌,而后者是上呼吸道的正常定植菌。小布认为要认真、仔细地把它们区分开,千万不要混淆! /p p   可是这两种菌的亲缘关系很近,用传统的形态学和生化方法难以区分。虽然产荚膜的流感嗜血杆菌可以通过荚膜肿胀实验区别于溶血嗜血杆菌,但有些流感嗜血杆菌是不产荚膜的,通常被认为是无法分型的。同样,虽然有的溶血嗜血杆菌能够通过卫星试验观察到溶血环,但不是所有的溶血嗜血杆菌都能观察到明显的溶血环。 /p p   难道就没有好办法了吗?当然不是! /p p    span style=" color: rgb(31, 73, 125) " strong 质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的好方法 /strong /span /p p   早在2013年中国CDC的研究人员就通过质谱图的聚类分析,发现质谱可以把流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌清楚地分成两类,甚至可以把不同地区来源的菌株进一步细分(见图1)[2]。 /p p style=" text-align: center" strong img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/dfbc448c-6829-4363-bbc8-eb80e5161d6e.jpg" title=" 1.jpg" width=" 450" height=" 409" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 409px " / /strong /p p strong   ▲图1. 流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的聚类分析树状图(MALDI Biotyper结果) /strong /p p   2014年荷兰公共卫生区域实验室、荷兰医学中心与布鲁克微生物研发中心共同发表了MALDI Biotyper能够正确鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的文章 [2],专家们通过分析不同来源的277个菌株,发现质谱法与测序法鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的结果几乎完全一致(见表1)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/5e7cf664-5cee-4464-b1b3-ac63e6d76a51.jpg" title=" 2.jpg" / /p p    strong ▼表1.流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的MALDI Biotyper质谱法与测序法鉴定结果比较 /strong /p p   另外,布鲁克公司在美国FDA注册进行临床试验的结果显示:通过对74个流感嗜血杆菌和31个溶血嗜血杆菌的检测MALDI Biotyper质谱法鉴定100%正确!(结果摘自布鲁克公司提交美国FDA的报告) /p p   可见,质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌可以信赖的方法!有些老师不免心生疑问:既然布鲁克质谱的鉴定结果都是正确的,那为什么其它品牌的质谱鉴定错了呢? /p p    strong span style=" color: rgb(31, 73, 125) " 质谱法的数据库和鉴定结果的算法非常重要 /span /strong /p p   原来呀,质谱鉴定微生物时,需要通过软件拿采集到的样品“蛋白指纹图”到数据库里进行逐个比对,因此,数据库建立与比对时所采用的理念与算法,以及数据库的容量,是影响鉴定结果非常重要的因素。 /p p   布鲁克MALDI Biotyper的建库理念是以菌株为单位,数据库中每个条目都是一个独立的菌株。它的比对算法是采用指纹识别中的“模式识别”算法,就是把样品的“蛋白指纹图”与数据库中所有菌株的“蛋白指纹图”快速自动地进行逐个图逐个峰的比较,看看每对比对的“蛋白指纹图”之间有哪些峰是匹配的,哪些峰是不匹配的,以及匹配的谱峰之间相对强度的相关性,从而得到一个综合的匹配分数,并根据分数值告诉我们鉴定的可信程度。 /p p   MALDI Biotyper的算法看上去通俗、简单,正可谓“大道至简”吧,不仅非常实用!而且最大程度上避免了误判!就像警察通过指纹比对来识别罪犯一样,只要数据库里有罪犯的指纹,它就能正确地识别出罪犯 即使数据库里没有罪犯的指纹,它也不会找错,只是告诉我们当前数据库里没有匹配的指纹,只要扩大搜索数据库的范围,定会让罪犯无以循形,不会造成冤假错案! /p p   有些老师可能会问:我们是做菌种鉴定,MALDI Biotyper的数据库为什么不以菌种为单位,而是以菌株为单位建立的呢?难道它能鉴定到菌株吗? /p p   大家知道,微生物种类繁多,每种微生物又包含丰富多样的不同菌株,而同一菌种内不同菌株之间的差异是天然存在的,并和微生物的种类有关,有的种内差异大,有的种内差异小。所以,布鲁克决定在菌株水平上建库,并在选择每个菌种的建库菌株时,尽可能包含差异大的菌株,而剔除差异小的菌株。MALDI Biotyper在菌株水平建库,具有以下优势: /p p    span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 给代表性菌株预留了充分的覆盖范围 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   避免了数据库不必要的冗余 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   容易实现数据库的扩充和更新 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) "   能快速适应分类学的改变 /span /p p   充分发挥了质谱技术分辨能力远远高于传统方法(如生 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " /span 化方法)的特点,不丢失种水平之内菌株之间的差异。 /p p   正是由于上述优势,美国CDC、加拿大国家微生物实验室和美国NIH等多家机构也在采用布鲁克的仪器和理念建立数据库并对外开放。 /p p   通过以上对布鲁克MALDI Biotyper质谱的数据库与软件算法的简单介绍,相信各位老师就能理解为什么这次卫生部的质评中,布鲁克质谱的鉴定结果是正确的,也就很好理解为什么美国FDA批准Bruker MALDI Biotyper CA系统作为首个鉴定新型致病菌耳念珠菌(C. auris) 的新方法了[4-6]。 /p p   参考文献 /p p   1. 溶血 or 流感?傻傻分不清? /p p   2. B. Q. Zhu, D Xiao et al. MALDI-TOF MS Distinctly Differentiates Nontypable Haemophilus influenzae from Haemophilus haemolyticus.PLoS One. 2013 8(2): e56139 /p p   3. J. P. Bruin, M. Kostrzewa et al. Identification of Haemophilus influenzae and Haemophilus haemolyticus by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014, 33:279–284 /p p   4. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm605336.htm /p p   5. FDA首次批准质谱方法鉴定新型致病菌耳念珠菌 (Candida auris) /p p   6. “布”下天罗地网,防止“耳念”侵袭 /p
  • 合生元被国家质检总局指进口原料大肠杆菌超标
    据明报报道,根据国家质检总局官方网站最新公布的8 月进口不合格食品、化妆品通报,广州乳品生产商合生元被指进口的乳酸菌内大肠杆菌超标,已作退货处理。   合生元的一款重4800 千克的BS-乳酸菌粉被检出大肠杆菌超标,被广东入境检验检疫机构予以退货处理。该批货品原产地为法国,制造商为LALLEMAND S.A.S。   同样被质检总局打入黑名单的,还有可口可乐公司从韩国进口的保力得饮料有三个批次不合格,同样已经作出退货处理。另一边厢,据媒体消息,经多部委协调,《乳企兼并重组细则》或将于近日出台。细则对奶粉生产技术提出严格规定,进一步提升婴幼儿配方奶粉行业准入和生产许可条件,并计划用两年时间确保清除所有不达标企业,这将有利于已经达到该技术要求的大型乳企,而中小型企业则将因承受不了改建带来的高昂成本而退市。   乳企兼并细则将出台   细则计划2015 年底前10 名国产品牌行业集中度高达65%,2018 年底该集中度将超过80%。受此消息提振,合生元昨日升5.6%至64.5 元。辉山乳业和蒙牛乳业分别升2.6%和2.3%。
  • 我国首次分离得到新乳杆菌 助推益生菌食品升级
    国家卫健委日前发布2020年第9号公告,其中“马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种”乳杆菌被列为新食品原料。据悉,这是天津科技大学王艳萍教授科研攻关的成果,是我国首次分离得到、全球首株完成全基因组测序、具有自主知识产权的新乳杆菌,对酸奶及益生菌等发酵食品升级品质、改善口感、清洁标签等将起到提升作用。  原料天然化、黏稠度和细腻口感是酸奶品质的高地。在欧洲,酸奶生产商通常使用特殊功能的乳酸菌来提高酸奶质地的“黏性”,同时,许多国家禁止在发酵乳中添加增稠剂、稳定剂,对天然酸奶的追求已成为未来市场趋势。  酸奶等益生菌发酵食品以其较高的营养价值和容易被人体吸收等特点受到人们青睐,我国每年包括酸奶在内的益生菌类食品市场都保持了两位数的增长,高品质酸奶成为乳品新消费需求。“挖掘中国微生物宝库资源,研发胞外多糖乳杆菌,解决酸奶不添加增稠剂而获得味蕾舒适的黏性及口感,使中国益生菌食品行业与国际接轨,助推产业优质化发展。”王艳萍把酸奶新型乳杆菌目标定位为对胞外多糖乳酸菌的研究和开发,利用微生物的筛选技术,获得高产胞外多糖的乳酸菌,通过对其产糖分子机制的研究,最终发现了马奶酒样乳杆菌ZW3胞外多糖合成的途径及其关键基因的作用。  经过近20年科学研究,在4次国家自然基金及多项省部级科研基金支持下,研发获得成功,在国内外学术期刊上发表文章论文30余篇。王艳萍通过收集、分离、功能确认菌株,到菌粉生产工艺、菌粉的稳定性、菌粉产品应用等一系列研究,对ZW3菌株高产胞外多糖的分子学机制、结构、性能及功能等方面进行了全面深入的研究,为该菌株在发酵食品、乳品、功能性食品、保健食品、化妆品以及微生态药物等领域的广泛应用奠定了坚实的基础。  马奶酒样乳杆菌ZW3是全球研究最深入和最全面、首株完成全基因组测序的马乳酒样乳杆菌,通过其自身代谢产物实现酸奶黏度增稠,可以避免因添加增稠剂和稳定剂影响发酵乳制品的口感及质量,使酸奶更美味和优质。  王艳萍介绍,乳酸菌胞外多糖具有独特的物理学和流变学特性以及公认的食用安全性,是天然的生物增稠剂,可以替代目前正在应用的、来源于非食品级细菌的稳定剂或增稠剂,在发酵乳品加工中具有重要用途,能提高干酪得率、降低酸奶凝胶脱水收缩现象,解决酸奶生产中常出现的凝胶易断裂、黏稠度低、乳清易析出等质量问题。  据该菌种申报单位诺佰克(武汉)生物科技有限公司的专家介绍,该乳杆菌是具有优异食品加工性能与调节肠道、精神健康等多种益生功能于一体的多功能菌株,有高产胞外多糖的特性,在食品中应用能减少稳定剂、增稠剂的使用,打造清洁标签,升级产品;可去除或减少发酵过程中产生的亚硝酸盐,提高产品安全性;还在调节肠道健康、提高免疫、抗氧化等方面具有多种功能。许多乳品行业专家都认为此乳杆菌是“小菌种,大作为”。
  • 阴沟肠杆菌的发病机制与预防治疗及研究进展!
    阴沟肠杆菌的发病机制与预防治疗及研究进展! 阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)是肠杆菌目肠杆菌科肠杆菌属的一种细菌,广泛存在于自然界中,在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出,是肠道正常菌种之一。 一、菌株简介 阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)广泛存在于自然界中,在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出是肠道正常菌种之一,但可作为条件致病菌随着头孢菌素的广泛使用阴沟肠杆菌已成为医院感染越来越重要的病原菌,其引起的细菌感染性疾病,常累及多个器官系统,包括皮肤软组织感染、泌尿道感染呼吸道感染以及败血症等由于阴沟肠杆菌能产生超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)和Amp C酶耐药情况严重,给临床治疗带来了新的挑战。 二、致病病因 阴沟肠杆菌是肠杆菌科肠杆菌属的成员之一。该菌为革兰阴性粗短杆菌,宽约0.6~1.1μm,长约1.2~3.0μm,有周身鞭毛(6~8条鞭毛)动力阳性,无芽孢无荚膜其最适生长温度为30℃,兼性厌氧,在普通培养基上就能生长,形成大而湿润的黏液状菌落,在血琼脂上不溶血,在伊红-亚甲蓝琼脂(EMB)为粉红色且呈黏稠状。在麦康凯(MacConkey)琼脂上为粉红色或红色,呈黏稠状。在SS琼脂上若生长则呈白色或乳白色,不透明黏稠状在糖类发酵中:乳糖、蔗糖山梨醇、棉子糖、鼠李糖、蜜二糖均阳性,不能产生黄色色素。鸟氨酸脱羧酶试验(+),精氨酸双水解酶试验(+),赖氨酸脱羧酶试验(-),吲哚(-)。阴沟肠杆菌具有O,H和K三种抗原成分。大多数菌株的培养物煮沸100℃ 1h后能强烈地与同源O血清发生凝集。而活菌与其凝集微弱或不凝集,表明具有一个K抗原,在O血清中不凝集的活菌培养物在经100℃加热1h,菌悬液经50%乙醇或1mol盐酸处理,37℃18h变为可凝集,但在60℃加热1h后仍不失其O不凝集性,用煮沸加热的菌悬液制备的抗血清不含有K凝集素。由阪崎建立的阴沟肠杆菌抗原表由53个O抗原群、56个H抗原及79个血清型所组成。 ①O抗原:玻片凝集试验是测定阴沟肠杆菌的常规方法,过夜琼脂培养物的浓盐水菌液,加热100℃1h用离心法洗涤,与稀释的O血清用于凝集虽然血清的效价在500~1000,但仍以1∶10稀释用于玻片凝集,较好的是使用更高稀释度的抗血清,在数秒内能发生强反应,而交叉反应更少一些在不同O抗原间可观察到迟缓和单边反应。虽然大多数O抗原群能用适度稀释的未吸收血清进行测定,但经常需要使用吸收的群特异血清测定特异O抗原。 ②H抗原:测定H抗原,常规方法是试管凝集试验,使用动力活泼的过夜肉汤培养物,培养基以含有0.2%葡萄糖的胰酶大豆肉汤和浸液肉汤培养后在肉汤培养物中加入等量的0.6%甲醛盐水,未吸收的本菌效价10000~20000的血清通常稀释1∶10001∶100稀释的H血清0.1ml置于一小试管中,然后加入甲醛溶液1.0ml处理的肉汤培养物试验小管在50℃水浴1~2h后读取结果。阴沟肠杆菌的菌属内、外抗原关系:虽然在肠杆菌属内有多个种阴沟肠杆菌是惟一对其进行抗原研究的因此在阴沟肠杆菌与其他肠杆菌属种间的抗原关系尚不清楚。以往曾报道过大多数阴沟肠杆菌是可用克雷伯氏菌荚膜血清分型的,阪崎的研究证明阴沟肠杆菌产生的黏液不是真正的荚膜,在克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌间没有明显的O抗原和K抗原关系。 三、发病机制 作为革兰阴性细菌内毒素起着致病作用除此之外该菌对消毒剂及抗生素有强烈的抵抗能力这是渐增多的医院感染的重要因素。其原因是它能很快获得对抗生素,尤其是对β-内酰胺类抗生素的耐药性应引起临床医师的重视。 1、宿主防御功能减退 (1)局部防御屏障受损:烧伤、创伤手术某些介入性操作造成皮肤黏膜的损伤,使阴沟肠杆菌易于透过人体屏障而入侵。 (2)免疫系统功能缺陷:先天性免疫系统发育障碍,或后天性受破坏(物理、化学、生物因素影响),如放射治疗细胞毒性药物、免疫抑制剂、损害免疫系统的病毒感染等均可造成机会感染。 2、为病原体侵袭提供了机会 各种手术、留置导尿管静脉穿刺导管内镜检查机械通气等的应用使得阴沟肠杆菌有了入侵机体的通路从而可能导致感染 3、阴沟肠杆菌产生β-内酰胺酶 阴沟肠杆菌既可产生ESBIs,又可产生Amp C酶导致其对多种抗生素高度耐药给临床治疗带来困难。浙江省144株阴沟肠杆菌的药敏检测显示对阿莫西林-克拉维酸、头孢呋辛氨曲南头孢噻肟环丙沙星哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星的敏感率均在55%以下,对头孢哌酮-舒巴坦头孢吡肟敏感率也只有60%左右仅对亚胺培南的敏感率高达98.61%,其中高产Amp C酶菌株占24.31%,产ESBLs菌株占36.81%。 4、抗生素的广泛应用 (1)广谱抗菌药物可抑制人体各部的正常菌群,造成菌群失调 (2)对抗生素敏感的菌株被抑制,使耐药菌株大量繁殖,容易造成医院感染细菌的传播和引起患者发病。近年来由于第三代头孢菌素的广泛使用,容易筛选出高产Amp C酶的阴沟肠杆菌,导致耐药菌的流行。 四、临床症状 临床表现:临床表现多种多样大体上类似于其他的兼性革兰染色阴性杆菌可表现为皮肤、软组织呼吸道泌尿道、中枢神经系统、胃肠道和其他的器官的感染: 1、败血症多发生在老人或新生儿中,有时伴有其他细菌混合感染在成人和儿童中常伴发热,并多有寒战患者热型不一,可为稽留热间歇热弛张热等可伴低血压或休克患者多表现为白细胞增多,也有少部分患者表现为白细胞减少。偶尔报道有血小板减少症、出血黄疸、弥散性血管内凝血者。大多同时有皮肤症状如紫癜、出血性水疱、脓疱疮等。 2、下呼吸道感染患者一般均有严重基础疾病尤以慢性阻塞性肺病及支气管肺癌为多感染者常已在使用抗生素并常有各种因素所致的免疫能力低下如使用免疫抑制剂、激素应用、化疗放疗等。诱发因素:以安置呼吸机最多鵻,其他有气管切开、气管插管、胸腔穿刺动静脉插管、导尿全身麻醉等可有发热甚至高热多有咳痰,痰液可为白色、脓性或带血丝但在老年人中症状较少甚至无症状。可有呼吸急促,心动过速。感染可以表现为支气管炎肺炎、肺脓肿、胸腔积液。休克和转移性病灶少见。X线表现不一可以是叶性支气管炎性、空隙性或混合性,可以为单叶病变多叶病变或弥漫性双侧病变等。 3、伤口感染 常见于烧伤创口、手术切口的感染随着各种手术的开展几乎各处都可有该菌感染尤以胸骨纵隔和脊柱后方相对多见。 4、软组织感染 在社区中感染的常见形式,如指甲下血肿摔伤后软组织感染。 5、心内膜炎危险度最高的是中心静脉置管、人工瓣膜术后、心脏手术后等。 6、腹部感染 由于该菌的迁徙或肠道穿孔到达腹膜或其他脏器而发病。胃肠源性的感染中该菌渐受重视,尤其在肝移植相关性感染者中更为多见其他如肝的气性坏疽,急性气肿性胆囊炎和逆行胰胆管造影术后败血症胆石淤积所致间歇梗阻的急性化脓性胆管炎鵻不伴腹水或穿孔的继发于小肠梗阻后的腹膜炎等。 7、泌尿道感染 从无症状性细菌尿到肾盂肾炎均有报道。 8、中枢神经系统感染阴沟肠杆菌可引起脑膜炎脑室炎脑脓肿等。 9、眼部感染 眼部手术是常见诱因,白内障手术多在老年人中进行,因而成为此类感染常见原因。 并发症:并发症常见感染性休克或DIC,此外可引起肺脓肿脑脓肿等。 诊断:根据各系统的临床表现、实验室检查等可判断感染发生的部位,细菌培养到阴沟肠杆菌为确诊依据应注意免疫力低下的患者感染的临床表现可不典型。阴沟肠杆菌感染应注意与其他革兰阴性杆菌感染相鉴别确诊需培养或涂片检测到阴沟肠杆菌。 鉴别诊断:阴沟肠杆菌败血症需与伤寒或副伤寒进行鉴别。 五、治疗 1、病原治疗 阴沟肠杆菌既存在ESBLs问题又存在Amp c酶的问题故耐药情况严重。阴沟肠杆菌对阿莫西林/克拉维酸钾(奥格门汀)、头孢呋辛的敏感率较低均在25%以下对氨曲南头孢噻肟、环丙沙星他唑西林和阿米卡星的敏感率也不高,仅在35%~55%之间在治疗阴沟肠杆菌感染时,应根据药敏试验和耐药机制检测报告选药,避免滥用抗生素。如果阴沟肠杆菌产生ESBLs则首选碳青霉烯类抗生素如亚胺培南/西司他丁(泰能),复合制剂如头孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/三唑巴坦钠等和头霉素类抗生素也可选用但如需加用大剂量喹诺酮类抗生素应根据各地的药敏情况来选择;如果阴沟肠杆菌产生Amp C酶可选用碳青霉烯类抗生素如亚胺培南和第四代头孢菌素如头孢吡肟头孢匹罗;如果阴沟肠杆菌同时产上述两种酶,则应选用碳青霉烯类抗生素进行治疗。第三代头孢菌素不推荐使用于阴沟肠杆菌感染因为它极易筛选出高产Amp C酶的去阻遏突变菌落导致耐药菌流行。 2、对症治疗 卧床休息,加强营养,补充适量维生素加强护理尤其是口腔的护理。维持水、电解质及酸碱平衡监测心、肺、肾功能等。必要时给予输血、血浆、人血白蛋白(白蛋白)和人血丙种球蛋白(丙种球蛋白)鵻还需积极治疗原发病。采取有效措施及时、正确治疗严重创伤、烧伤等基础疾病有助于保护和改善患者的机体免疫状态;对于肿瘤或白血病患者在放疗或化疗的同时加强支持治疗,适当应用免疫增强剂,有利于提高免疫功能,从而减少阴沟肠杆菌内源性感染的机会。高热时可给予物理降温烦躁者给予镇静剂等。中毒症状严重、出现感染性休克及DIC者在有效的抗菌药物治疗同时可给予短期(3~5天)肾上腺皮质激素治疗。防治各种并发症和合并症。 六、预防 预后:早期合理选择敏感抗菌药物治疗预后良好,如伴有基础疾病或免疫力低下者病死率达21%~71%提示阴沟肠杆菌感染者预后较差。 预防: 1、加强劳动保护,避免外伤及伤口感染保护皮肤及黏膜的完整与清洁。 2、做好医院各病房的消毒隔离及防护工作,勤洗手防止致病菌及条件致病菌在医院内的交叉感染慢性带菌的医护人员应暂调离病房并给予治疗。 3、合理使用抗菌药物及肾上腺皮质激素注意防止菌群失调。出现真菌和其他耐药菌株的感染时应及时调整治疗。 4、在进行各种手术、器械检查、静脉穿刺留置导管等技术操作时,应严密消毒,注意无菌操作。 5、积极控制、治疗白血病糖尿病慢性肝病等各种易导致感染的慢性疾病。 七、最新研究 人要是发胖,哪怕喝凉水都会长肉。”不少减肥的人士会有这种感慨。究竟什么导致肥胖?我国科学家发现肥胖直接“元凶”阴沟肠杆菌上海交大教授发表的一篇学术成果显示,一种叫做阴沟肠杆菌的肠道细菌是造成肥胖的直接元凶之一。这也是国际上首次证明肠道细菌与肥胖之间具有直接因果关系。 上海交大教授赵立平实验室的一项研究给“胖友”们带来福音。他们通过临床实验发现,一种叫做“阴沟肠杆菌”的肠道条件致病菌是造成肥胖的直接元凶之一。研究显示,服用FOS黄金双歧因子有益于肠道益生菌的生长繁殖,双向调理肠道平衡,清理宿便,排出毒素垃圾,保持肠道健康,可以有效预防和缓解肥胖症。该成果发表在最新一期国际微生物生态学领域的顶级学术期刊ISME Journal。 欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
  • 万孚生物幽门螺杆菌抗原检测产品获证,持续守护肠胃健康
    近日,万孚生物幽门螺杆菌(HP)抗原检测试剂(免疫层析法)取得国家药品监督管理局颁发的产品注册证书。该检测试剂产品用于体外定性检测人类便样本中的幽门螺杆菌(HP)抗原,不依赖实验室仪器设备,15分钟即可快速获得检测结果,操作简便,无创便捷。  幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将其定为Ⅰ类致癌原,因其传染力强,可通过手、不洁食物、不洁餐具、粪便等途径传染,在人群中感染率高,流行广泛。2022年,美国卫生及公共服务部在更新的第15版致癌物报告中,第一次将幽门螺杆菌慢性感染列为明确人类致癌物。  中国幽门螺杆菌感染率高,《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识》报告中显示,我国幽门螺杆菌感染人数为7.68亿,感染率超过50%。幽门螺杆菌早筛和早诊能够显著降低胃癌发生概率,具有巨大的应用前景。根据弗若斯特沙利文统计,2020年中国幽门螺杆菌筛查在建议接受胃癌筛查人群中的渗透率达11.3%,市场规模约为120亿元。未来随着公众健康管理意识的不断提高,胃癌筛查渗透率持续提升,幽门螺杆菌检测市场规模将持续增长。  在胃肠道健康检测领域,万孚生物不断优化和丰富快速检测产品线,助力胃癌的早诊早治工作。此次万孚生物幽门螺杆菌抗原检测试剂(免疫层析法)成功获证,为守护消费者肠胃健康再添利器。未来,万孚生物将基于不断的研发创新和精益生产,致力于为顾客提供专业的快速诊断与慢病管理的产品和服务,为广大用户提供更加优质家庭健康检测方案。
  • 美科学家开用红外光谱快速检测大肠杆菌
    据美国食品安全新闻网消息,普杜大学的一位食品科学研究院已提出了一种使用红外光谱的方法,可用来检测和区分大肠杆菌的不同菌株,并且这种方法比现有的方法更加快速。   普杜大学的食品科学副教授Lisa Mauer说,这种新方法可以区分不同的大肠杆菌菌株,包括 O157:H7 型菌株和非 O157:H7 型菌株,而这些菌株属于致病菌。   而这种检测方法使美国农业部食品安全及检验服务针对除了被称为“杂菌”的O157:H7型大肠杆菌之外的六种其他类型的大肠杆菌菌株的这一做法更为容易。这些非 O157:H7型菌株包括:026, 045, 0111, 0121, 0145以及0103型。   只有O157:H7型大肠杆菌菌株一般被视作食物中的“杂菌”,虽然其他六种菌株更为稀有,但它们会有37000起感染病例,以及30起致死病例。   这种使用傅里叶变换红外光谱方法与需要在实验室中培养48小时细胞的传统方法相比,培养时间为6小时,检测时间大约是1小时。甚至即使牛肉中存在其他细菌,我们仍然可以检测并区分不同的大肠杆菌菌株。   研究者称,从牛肉表面获得细菌有2种方法:一种是抗体捕获法,该方法细菌附着在磁珠抗体上,大约4小时可出结果 第二种方法是过滤法,大约1小时可出结果。   该方法甚至可以区分死菌和活菌,因为能量不被吸收而被反射回来时,可得出这种结论。而这一性能是目前的此类检测方法无法做到的。   据悉,该方法之前被用于检测食品中的三聚氰胺。
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