草甘膦测定方法

【生活中的仪器分析】样 品：蔬菜、水果、茶叶、茶粉等食品检测项目：草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸参考标准：SN/T 1923-2007检测仪器：a.WATERS液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源（可用其他品牌作用等效的高效液相色谱质谱仪替代）b.Biotagevacmaster固相萃取仪c.IPRE Qclean PMG草甘膦专用固相萃取柱d.BiotageTurbovap LV 快速浓缩仪e.IKA MS3 涡旋混匀器g.TOMY-MX307离心机g.昆山超声波清洗器实验过程：1.提取及预处理称取2－5g（精确到0.001g）试样于50 mL聚丙烯离心管中，加入100μL内标液，加入20.0 mL水超声提取30min，于10000 r/min离心5min，取1.0 mL上清液于2mL子弹头离心管中，加入100μL酸度调节剂（注A），涡旋混匀，15000r/min离心5 min，待净化。注A：酸度调节剂配制方法：纯水+色谱纯甲醇+盐酸=160＋40＋13.4（V/V/V）2.固相萃取净化І将PMG－І柱（蓝柱）用2mL甲醇和2 mL 0.5%甲酸淋洗活化并自然滴干，将加入酸度调节剂处理的提取液（2）转移到小柱上，用5mL刻度试管收集流出液（1-2滴/秒），用1.0mL 0.5%甲酸洗柱并真空抽干，合并流出液，用移液枪吸取50%NaOH调pH7-9（用1－14pH试纸，根据样品不同约20－50μL），加水定容到3 mL刻度，混匀，待衍生。3.衍生步骤准确吸取600 μL净化液（3）于2mL子弹头离心管中，加入200 μL 5%硼砂溶液，边涡旋，边加入200 μL 25g/L FMOC-Cl乙腈溶液（注B），放置10min，加入50 μL甲酸，涡旋混匀，15000 r/min离心5min，吸取上清液准备过PMG－ІІ柱。注B：25 g/L FMOC-Cl乙腈溶液配制方法：称取0.25 gFMOC-Cl，溶解于10 mL色谱纯乙腈中。4.固相萃取净化ІІ 将PMG－ІІ柱（红柱）用2 mL甲醇和2 mL 0.5%甲酸淋洗并自然滴干，将上清液过PMG－ІІ柱，用3 mL水淋洗小柱，真空抽干5－10 min，再加入2 mL正己烷淋洗小柱，滴干后真空抽干5 min，最后用5 mL 5%氨水/甲醇洗脱小柱（1-2 mL/min）并用5 mL刻度试管收集流出液，45℃，氮气吹至近干，用20%乙腈定容1.0 mL，涡旋混匀，过0.2 μm PTFE膜后上机测试。5.测定5.1色谱条件a.色谱柱：Waters BEH-C18，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；b.流动相：5mmol/L乙酸铵:乙腈梯度洗脱，梯度表见表1； 表1 流动相及梯度 时间（min）流速（mL/min）5mmol/L乙酸铵（%）乙腈（%）00.3901020.362384.40.362384.50.35956.50.35956.60.390109.00.39010c.检测器：串联四极杆质谱仪；d.柱温：35℃；e.进样量：10 μL。5.2质谱分析条件a）电离源：电喷雾正离子模式；b）毛细管电压：3.50KV；c）源温度：120℃；d）脱溶剂气温度：400℃；e）脱溶剂气流量：700L/h；f）碰撞室压力：2.7í10-3mbar；g）特征离子及参数见表2。 表 2 草甘膦和氨甲基膦酸的主要特征离子 化合物保留时间（min）母离子+（m/z）锥孔电压（V）子离子（m/z）碰撞能量（eV）草甘膦1.32392.215*88.02515214.01

99%）；乙腈（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）；衍生剂：9－芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）（分析纯），十水硼酸盐（分析纯）；纯净水；武夷岩茶样品。1.3 样品制备称取2 g（精确到0.001g）的武夷岩茶粉碎混匀的试样于250 mL的具塞锥形瓶中，加入20mL水，恒温振荡45 min，提取液过滤至250ml的另一具塞锥形瓶中，待用。先以5 mL纯净水自然流经茶叶专用萃取柱，再取1 mL的提取液使其自然流经小柱，流出液收集在浓缩器的梨形瓶中，再用25 mL乙腈+水（1+3）混合液淋洗小柱，流出液并入上述梨形瓶中，经旋转蒸发仪浓缩至干，用乙腈：水（1：3）溶解并定容至l mL，加入0.2 mL 5%硼酸盐水溶液，振荡后再加入0.2 ml 1g/L FMOC-Cl丙酮溶液，静置隔夜后过微孔滤膜后于液质联用仪测定。1.4　质谱条件1.4.1液相色谱分析条件色谱柱：Z0RBAX Eclipse XDB-C18 (4.6×150mm, 5μm)；流动相A：1%乙酸铵水溶液，流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液；二元梯度洗脱程序见表1：流速：0.4ml/min；柱温：室温；进样量：30μl。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271246_520203_2173647_3.png2.1检测条件的选择通过查阅相关的文献可知草甘膦的极性较强，并具有难挥发、紫外光区无吸收等特点，为此，柱前或柱后衍生技术成为目前草甘膦残留分析的常用手段。以9－芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）为衍生试剂的衍生技术，其衍生介质与草甘膦的水提取液相容性好，过程简单，特别是衍生产物GLY-FMOC在质谱中均有良好的响应。而且有关衍生物GLY-FMOC 在正负离子模式下的测定均有报道 ，但通过实验对比，在正离子模式下，GLY-FMOC有更高的响应值，而且在流动相中加入1%的甲酸溶液后，可以有效加强正离子扫描的信号值，因此本方法采用正离子模式测定。2.2线性范围将100μg/mL的草甘膦标准溶液用纯净水稀释，配制成质量浓度为1、2、5、7和10ng/mL的标准工作溶液，分别取1mL上述标准溶液，加入0.2mL 5%硼酸盐水溶液，振荡后再加入0.2mL 1g/L FMOC-Cl丙酮溶液，静置隔夜后上机检测，结果发现：草甘膦衍生物的标准工作溶液呈线性关系，线性回归方程为Y=2.26X+0.310 (r2=0.998)，如图1所示。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271246_520204_2173647_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271247_520205_2173647_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271247_520206_2173647_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271247_520207_2173647_3.png http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410300924_520787_2166779_3.png综上所述，采用的高效液相－质谱联用仪检测武夷岩茶中草甘膦农药的残留量分析方法，操作较简单，添加标样

农药残留草甘膦的检测前言 草甘膦又叫镇草宁，是广谱除草剂，对哺乳动物有低毒性。除草剂的广泛使用使得草甘膦成为地下水甚至饮用水的重要污染物。简介 分析草甘膦的方法现在主要有气相色谱法或液相色谱法，通常都要衍生化处理，其中采用液相色谱法更多些。现主要介绍比较复杂的阳离子交换柱后衍生荧光检测器测定草甘膦的方法。本方法着重描述了分析草甘膦及其主要代谢物氨甲基磷酸（AMPA）的便利方法。 本方法参考了美国EPA方法、GBT 5750.9-2006方法、岛津、美瑞泰克、博纳艾杰尔等公司提供的参考方法及本实验室全体工作人员的集体智慧编制而成。阳离子交换柱后衍生荧光检测器法测定草甘膦色谱原理 柱后衍生与荧光检测器结合使得本方法具有很高的灵敏度和选择性。样品进样后，草甘膦和AMPA经流动相磷酸二氢钾缓冲液洗脱，在色谱柱中分离。分离后，分析物通过柱后衍生反应系统，生成的反应产物用荧光检测。由于每个厂家的仪器的灵敏度各不相同，所以每种方法的进样量也不相同，一般为10-200ul.此方法建议定量进样50uL，如图1所示，效果很好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309200103_465474_2369266_3.png图11.草甘膦 1.0mg/L 2.AMPA 1.0mg/L设备 L600高效液相色谱仪，包括：梯度泵1套，柱后衍生仪1台，衍生注射泵2台，荧光检测器1台，数据采集控制器1台，自动进样器1台，柱温箱1台，阳离子色谱柱及保护柱各1根，色谱工作站1套，超声波振动仪，溶剂过滤器，固相萃取装置，离心机。试剂 5 mM 磷酸二氢钾，磷酸调pH 2.0 ；5 mM 氢氧化钾 ；5%次氯酸钠溶液；硼酸钠缓冲稀释剂；OPA（二巯基乙醇），色谱级；甲醇，色谱级；硫醇试剂。试剂和标准品的准备氧化试剂(试剂1): 将一瓶次氯酸盐稀释剂倒入预先用甲醇清洗过的干净试剂瓶中。加入100uL5% 次氯酸盐溶液(家用漂白剂)，旋转，混匀，0.45um水系滤膜过滤，超声脱气。加入的剂量可能需要根据检测器的响应进行调整：色谱系统平衡后，草甘膦混合测试溶液进样10uL，如图2所示。如果AMPA和草甘膦的面积比例差别很大，则在氧化剂里面再加入5%次氯酸盐溶液，每次加入20uL，直至二者所占面积比例相当。 OPA试剂(试剂2): 将OPA稀释剂倒入预先用甲醇清洗过的干净试剂瓶中。鼓泡10min以除去其中的氧气。余下的步骤应在尽可能短的时间内完成，因为此试剂对氧气和光敏感：称取大约100 mg OPA于一小烧杯中，加入10 mL甲醇溶解，而后加入OPA稀释剂。用1～2 mL甲醇清洗烧杯，把清洗液倒入稀释剂中。加入2 g硫醇试剂于试剂瓶中。0.45um有机系滤膜过滤，超声脱气，备用。色谱条件分析柱：草甘膦分析柱，阳离子交换柱，4 mm x 150 mm x 8um保护柱：草甘膦保护柱，阳离子交换柱，3 mm x 20 mm x 8um柱温：55 °C 淋洗液：(A)磷酸二氢钾（5 mM，磷酸调pH 2.0）；(B)氢氧化钾（5 mM）流速：0.4 mL/min 柱后试剂1：氧化试剂，36 °C，流速为0.4 mL/min 柱后试剂2：OPA，室温，流速为0.4mL/min 荧光激发波长为330 nm，发射波长为460 nm 进样量：50ul剃度表：[fo

请问有老师做茶叶中草甘膦的检测吗？我做样品草甘膦的时候总是会出现响应很大的双峰，不知道是什么，但是会影响到我的回收率了，有哪位老师遇到这个问题吗？谢谢[img=,624,365]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209071634296253_4516_5290442_3.jpg!w624x365.jpg[/img]