操作步骤详解

细胞分子生物技术方法与步骤详解[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=39452]细胞分子生物技术方法与步骤详解[/url]

分子细胞生物学\细胞分子生物技术方法与步骤详解－中文

高效液相色谱原理和操作详解，和大家共同进步[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=85945]高效液相色谱原理和操作详解[/url]

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高效液相色谱原理和操作详解个人觉得很好资料，简单易懂，并且各方面都很全，目录大家看一下就知道了好不好自己决定I．概论 2一、液相色谱理论发展简况 2二、HPLC的特点和优点 2三、色谱法分类 3四、色谱分离原理 3II．基本概念和理论 5一、基本概念和术语 5二、塔板理论 8三、速率理论（又称随机模型理论） 9III．HPLC系统 10一、输液泵 11二、进样器 13三、色谱柱 14四、检测器 17五、数据处理和计算机控制系统 20六、恒温装置 20IV．固定相和流动相 20一、基质（担体） 20二、化学键合固定相 22三、流动相 231．流动相的性质要求 232．流动相的选择 243．流动相的pH值 244．流动相的脱气 255．流动相的滤过 256．流动相的贮存 267．卤代有机溶剂应特别注意的问题 268．HPLC用水 26V．HPLC应用 27一、样品测定 27二、方法研究 27附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 28高效液相色谱原理和操作详解.doc http://www.fs2you.com/files/33e26d02-0f53-11dd-be9f-0014221f4662/

分散机操作规程详解：一、分散机-开车前的准备工作1、检查分散机油位是否加注到规定位置，低应加至规定油位，高应放至规定位置。2、检查三角皮带松紧是否适当。3、用手盘动叶轮应转动灵活，无磨擦声。4、检查各紧固件是否松动及各密封部位有无渗漏现象。5、开启分散机主电机，检查搅拌的旋向是否与设备所规定的方向相同。6、确认以上检查工作无误后方可开车。二、分散机-开车1、将叶轮放在分散机容器的中心位置，揿下降按钮，下降到最低位置或要求的位置。2、两只手柄必须锁紧后才能开车。3、开主电机，按操作需要转速按下按钮。4、操作过程中应经常注意电流，如发现超载运转，应停车检查原因，采取措施后再继续运转分散机。三、分散机-停车1、先停主电动机，使叶轮全部停止转动。2、开分散机上升按钮，使主轴叶轮上升至容器之上，清洗叶轮。莱州市沙河镇明冠化工机械厂主营分散机、混合机等机械设备。

介绍滤油式滤油机的操作步骤及注意事项是什么? (1)松开滤油机的摇轮，取下滤板及滤框并将它们擦净后，在滑动和转动部分加机械油，再检查清扫油管、油泵、滤油网及油槽。各管接头要注意装紧，不能漏气，以免吸入潮气(空气)。 (2)滤油纸要放在烘箱内在70-80温度下烘24小时后使用。烘箱上要开孔，以便空气流通，使水分尽快蒸发。供干后的滤油纸要立即安放于变压器油中，以免返潮。 (3)各部分准备工作都完成后打开油门，开动电动机滤油。正常滤油时，油压为3-5kgf/cm2,如果压力过低，应检查油泵是否有毛病，油门是否全开或滤油网是否被堵。 (4)如油过滤一定时间后，发现滤纸上有很多杂质和水分时，应更换新滤纸，油质愈坏滤纸更换就得愈勤。 (5)如从滤框问漏出的油过多时，要打开底部阀门把油送至油泵，但开放时间不宜过长，以免空气浸入破坏滤油质量。 (6)滤油时要选择干燥的地方和好天气时进行。如果地点潮湿，滤好的油会吸取水分，这样不仅滤油效率低，而且时间会拖得很长。滤油温度最好在50-60℃之问，温度太低，粘度增加不易滤过，油温过高，滤纸吸收性反而降低。

高效液相色谱原理和操作详解.doc 个人觉得很好资料，简单易懂，并且各方面都很全，目录大家看一下就知道了好不好自己决定I．概论 2一、液相色谱理论发展简况 2二、HPLC的特点和优点 2三、色谱法分类 3四、色谱分离原理 3II．基本概念和理论 5一、基本概念和术语 5二、塔板理论 8三、速率理论（又称随机模型理论） 9III．HPLC系统 10一、输液泵 11二、进样器 13三、色谱柱 14四、检测器 17五、数据处理和计算机控制系统 20六、恒温装置 20IV．固定相和流动相 20一、基质（担体） 20二、化学键合固定相 22三、流动相 231．流动相的性质要求 232．流动相的选择 243．流动相的pH值 244．流动相的脱气 255．流动相的滤过 256．流动相的贮存 267．卤代有机溶剂应特别注意的问题 268．HPLC用水 26V．HPLC应用 27一、样品测定 27二、方法研究 27附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 28[~90810~]

Eppendorf自动[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]介绍及操作详解

[size=10px][b]一、琼脂糖凝胶电泳原理[/b] 琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分子生物学研究方法，?它利用琼脂糖凝胶的网络结构，?通过电场作用使带电颗粒（?如DNA或RNA）?在凝胶中移动，?根据分子大小和电荷性质的不同实现分离。?这种技术不仅操作简单迅速，?而且具有高分辨率，?因此在基因操作中扮演着关键角色，[font='PingFang SC']其[b]原理主要基于DNA分子的两大特性：电荷效应和分子筛效应。[/b][/font] ?琼脂糖是一种天然的长链状聚合分子，它在沸水中溶解，当温度降至45℃时开始凝固并形成多孔刚性立体网状结构，其孔径的大小取决于琼脂糖的浓度。 [b]分子筛效应[/b]指的是琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构，其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时，会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙，而较大的DNA片段则会被阻挡，导致迁移速率降低。?? [/size][align=center][size=10px] [/size][/align][size=10px][b]电荷效应[/b]指的是DNA分子在碱性条件下（pH7）会电离，带负电荷。当DNA样品置于电场中时，在外加电场的作用下受到电场力的作用，向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比，而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此，在相同电场条件下，较长的DNA片段迁移速率较慢，而较短的DNA片段迁移速率较快。不同DNA的分子量大小及构型各不相同，因此它们在电泳中的迁移率也会有所不同，从而可分离出不同的区带。[b]为什么核酸条带显示荧光？[/b]主要便于观察，对核酸进行了染色。溴化乙锭EB是一种扁平状分子，在紫外光照射下能发射荧光。当EB与DNA分子形成EB-DNA复合物后，其发射的荧光强度比游离状态的EB提高10倍以上，且荧光强度与DNA的含量呈正比。 [b]二、?琼脂糖凝胶电泳的详细操作步骤（1%琼脂糖凝胶电泳为例） [font='Times New Roman', 'serif']1.安装制胶模具[/font][font='Times New Roman','serif']：[/font][/b]利用电泳托盘，安装制胶模具，水平放置于试验桌上。 [b][font='Times New Roman', 'serif']2.[/font]制备琼脂糖凝胶：[/b]将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中，加热煮沸，冷却后凝固成凝胶。（根据电泳所需要的分辨率准备琼脂糖-电泳缓冲液凝胶溶液）[font='Times New Roman','serif'](1)[/font]称取[font='Times New Roman','serif']1g[/font]琼脂糖，放入盛有[font='Times New Roman','serif']100mL 0.5×TBE[/font]缓冲液的[font='Times New Roman','serif']500mL[/font]三角瓶中，摇匀用天平称量其重量，摇匀。在微波炉中，使琼脂糖完全溶解，放回天平上，加入蒸馏水补齐至初始重量。冷却至不烫手([font='Times New Roman','serif']55℃[/font]左右)，加入[font='Times New Roman','serif']100μL[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mg/mL EB[/font]溶液(终浓度为[font='Times New Roman','serif']0.5 μg/mL[/font])，或加入[font='Times New Roman','serif']5-10μL[/font][font='Times New Roman','serif']StarGreen DNA Dye(GenStar)[/font]，摇匀。 [font='Times New Roman','serif'](2) [/font]将凝胶溶液倒入安装好的制胶模具中，凝胶厚度应在[font='Times New Roman','serif']3-5mm[/font]。 [font='Times New Roman','serif'](3) [/font]选择合适的梳子，梳子的插入深度应使齿的底部和板的表面距离在[font='Times New Roman','serif']0.5[/font]到[font='Times New Roman','serif']1.0mm[/font]。要检查梳子齿下方或之间是否有气泡，在室温下冷却凝固。 [font='Times New Roman','serif'](4) [/font]待凝胶充分凝固后，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。 [font='Times New Roman','serif'](5)[/font]将凝胶置入电泳槽中，加入[font='Times New Roman','serif']0.5×TBE[/font]缓冲液[font='Times New Roman','serif']，以浸没凝胶约1mm为合适。[/font] [/size] [size=10px][b][font='Times New Roman','serif']3[/font][font='Times New Roman','serif'].[/font]制备DNA样品：[/b]将DNA样品与上样缓冲液混合。[/size] [size=10px]把DNA样品和上样缓冲液混合，利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]把电泳样品加到没入缓冲液中凝胶槽中，在凝胶的两侧样品槽内加入合适的分子量标准品。[/size] [size=10px]上样量的多少根据样品中DNA片断的多少和大小而定，已知浓度的DNA用于估测样品质粒DNA的浓度。 [b][font='Times New Roman','serif']4.[/font]电泳：[/b]将DNA样品加载到凝胶上的样品孔中，在电场的作用下进行电泳。[/size] [size=10px]盖上电泳槽的盖子，正确连结电泳槽上的导线。电泳电压以正负电极的距离的一到五倍为合适（1到5V/cm）。如果电泳线连接正确，那么在进行电泳时可以看到有气泡从电泳槽内电极导线处产生，同时，在几分钟后，可见溴酚蓝条带从负极向正极移动，从上样槽内移入胶体。[/size] [size=10px][b]5.观察：[/b]当核酸样品移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。电泳结束后，利用紫外灯观察DNA片段的迁移情况。当DNA样品在凝胶内移动到合适的距离时，关闭电源，去除电泳导线和电泳槽盖子。在室温下，用电泳缓冲液或水配制的EB溶液(0.5 μg/ml)对凝胶进行染色[b][font=-apple-system, helvetica, sans-serif]。[/font] 三、琼脂糖凝胶电泳的主要应用[/b] [/size] [size=10px][b]1.DNA片段的鉴定：[/b]通过比较DNA片段的迁移距离，与标准品进行对照，可以判断DNA片段的大小。[/size] [size=10px][b]2.DNA片段的分离：[/b]利用不同大小DNA片段的迁移速率差异，可以将DNA片段进行分离。[/size] [size=10px][b]3.DNA的纯化：[/b]通过电泳将目的DNA片段与其他杂质分离，得到纯化的DNA片段。（割胶回收）[/size] [size=10px][b]四、操作技巧和注意事项[/b][/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]1.EB毒性[/size][/font][/b] [size=10px]EB是一种很强的诱变剂。在接触含有EB溶液时，应该全程戴手套和口罩。[/size] [size=10px]电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作，戴一次性手套，并及时更换。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]2. 加热熔化琼脂糖[/size][/font][/b] [size=10px]用微波炉加热熔化琼脂糖时，溶液体积不能超过三角瓶容量的1/3，以免煮沸时溶液溢出。同时，琼脂糖必须完全熔化，否则可能导致电泳图像模糊不清。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]3.凝胶厚度[/size][/font][/b] [size=10px]凝胶的厚度一般为4-6nm，若太厚可能会影响检测的灵敏度。待凝胶充分凝固后才能拔出梳子，以保证点样孔形状完好，防止漏样。[b][font='Times New Roman','serif']4.上样[/font][/b][/size] [size=10px]上样时，须先除去点样孔中的气泡，并且加样操作需小心谨慎，以免漏样或损坏胶孔。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]5.电泳电压[/size][/font][/b] [size=10px]选择适当的电泳运行条件很重要，包括电压和距离。推荐的电压范围是4-6V/cm，电压太低会降低迁移率，电压太高会降低分辨率。[/size]

自7月一个简单的小视频介绍自动[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]后，很多同事、老师对这款仪器非常感兴趣，希望有一个详解，那么，今天来了！Eppendorf Multipette E3X使用详解及操作注意事项

[font=宋体]抗体纯化是生物医药领域的一项关键技术，它涉及到从复杂的混合物中提取出高纯度的抗体。纯化后的抗体具有更高的特异性和灵敏度，能够提高实验的准确性和重复性。本文将详细介绍抗体纯化的方法和步骤，包括亲和色谱、离子交换色谱、凝胶过滤色谱等常用技术，并探讨纯化过程中的注意事项和应用实例。通过了解和掌握这些知识，研究人员可以更好地进行抗体相关的实验和研究。[/font][b][font=宋体]抗体纯化方法及步骤详解：[/font][/b][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、凝胶过滤层析法[/font][/b][font=宋体]凝胶过滤层析法的原理是基于抗体分子的不同大小，利用不同孔径的凝胶过滤介质将目标分子（抗体）与较大分子（如蛋白质等杂质）分离开来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的凝胶柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，较大分子无法通过凝胶柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体分子大小适中，可通过凝胶柱并被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从凝胶柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶过滤层析法在医药研发外包服务中应用广泛，例如美迪西提供从小试到规模生产全程的蛋白分离纯化服务，并根据工艺的要求结合产品特点给客户定制适用的工艺和系统。此外，凝胶过滤层析法还被广泛应用于蛋白质等大分子物质非分离纯化、分子质量测定、脱盐等试验中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在使用凝胶过滤层析法时，需要注意以下几点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]正确选择凝胶类型和粒度：不同类型和粒度的凝胶具有不同的分离效果和分辨率，需要根据实验需求进行选择。[/font][font=宋体][font=宋体]优化层析条件：包括流速、缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度等，这些因素都会影响分离效果和分辨率。[/font][/font][font=宋体]防止柱床干涸：在分离过程中，要保持层析柱的湿润，避免柱床干涸，影响分离效果。[/font][font=宋体]注意样品性质：凝胶过滤层析法适用于相对分子质量较大的物质，对于小分子物质可能无法有效分离。同时，需要注意样品的溶解性、电荷等性质，以选择合适的凝胶和实验条件。[/font][font=宋体]检测和分析：在分离结束后，需要对分离得到的成分进行检测和分析，以确定分离效果和纯度。[/font][font=宋体]总之，凝胶过滤层析法是一种有效的分离和分析方法，需要注意实验条件的选择和操作方法的正确性，以保证实验结果的准确性和可靠性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、亲和层析法[/b][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析法[/b][/url]的原理是利用抗体分子与抗原之间的特异性结合来实现目标抗体的纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先包含特异性结合配体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的亲和层析柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]目标抗体与配体之间发生特异性结合。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]使用洗脱缓冲液将非特异结合的组分洗脱掉。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从亲和层析柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析法的应用范围广泛，例如在免疫分析中，可以利用抗体与抗原的特异性结合，通过亲和层析法分离和纯化抗体；在蛋白质组学研究中，可以利用蛋白质与配基之间的相互作用，分离和纯化特定的蛋白质；在药物筛选中，可以利用药物与靶点之间的相互作用，筛选出潜在的药物分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在使用亲和层析法时，需要注意以下几点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]正确选择配基：配基的选择对于亲和层析的效果至关重要，需要根据目标分子的特性和需要纯化的样品类型选择合适的配基。[/font][font=宋体][font=宋体]优化层析条件：包括流速、缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度等，这些因素都会影响分离效果和分辨率。[/font][/font][font=宋体]注意配基的结合力和选择性：亲和层析中配基与目标分子的结合力决定了分离效果和纯度，而选择性则决定了能否有效区分不同的目标分子。[/font][font=宋体]检测和分析：在分离结束后，需要对分离得到的成分进行检测和分析，以确定分离效果和纯度。[/font][font=宋体]注意层析过程中的稳定性：亲和层析过程中需要保持层析柱的稳定性，以避免层析柱的塌陷或堵塞等问题。[/font][font=宋体]总之，亲和层析法是一种非常有效的分离和分析方法，需要注意实验条件的选择和操作方法的正确性，以保证实验结果的准确性和可靠性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、离子交换层析法[/b][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析法[/b][/url]的原理是利用目标抗体分子与离子交换柱中固定的离子之间的相互作用来实现纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的离子交换柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，使与固定离子相同电荷的分子无法通过离子交换柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体由于表面电荷不同，能够通过离子交换柱被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]或盐浓度等条件，将目标抗体从离子交换柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法的应用范围非常广泛，例如在蛋白质分离中，可以利用蛋白质所带电荷的不同，通过离子交换层析法将其分离；在核酸分离中，可以利用核酸所带电荷的不同，通过离子交换层析法将其分离；在多糖分离中，可以利用多糖所带电荷的不同，通过离子交换层析法将其分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在使用离子交换层析法时，需要注意以下几点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]正确选择离子交换剂：根据待分离的生物分子的电荷性质和所需分离的离子的性质，选择合适的离子交换剂。[/font][font=宋体][font=宋体]优化层析条件：包括流速、缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度等，这些因素都会影响分离效果和分辨率。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]注意控制洗脱液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度：洗脱液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度可以影响生物分子与离子交换剂的结合和解离，进而影响分离效果和纯度。[/font][/font][font=宋体]检测和分析：在分离结束后，需要对分离得到的成分进行检测和分析，以确定分离效果和纯度。[/font][font=宋体]注意层析过程中的稳定性：离子交换层析过程中需要保持层析柱的稳定性，以避免层析柱的塌陷或堵塞等问题。[/font][font=宋体]注意保护层析柱：离子交换层析过程中需要避免过度冲洗和压力过大等问题，以保护层析柱的结构和使用寿命。[/font][font=宋体]总之，离子交换层析法是一种非常有效的生物分子分离和纯化技术，需要注意实验条件的选择和操作方法的正确性，以保证实验结果的准确性和可靠性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、逆向相色谱法[/b][/font][font=宋体]逆向相色谱法的原理是利用目标抗体分子与逆向相色谱柱中固定的疏水基团之间的相互作用来实现纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体操作步骤如下：[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的逆向相色谱柱中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]使用缓冲液进行洗脱，使疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱而流出。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]目标抗体由于表面疏水性不同，能够通过逆向相色谱柱被保留下来。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]最后使用洗脱缓冲液改变溶剂极性等条件，将目标抗体从逆向相色谱柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]逆向色谱法的应用范围广泛，例如在蛋白质分离中，可以利用蛋白质在色谱柱上的吸附和洗脱过程，通过逆向色谱法将其分离；在多肽分离中，可以利用多肽在色谱柱上的吸附和洗脱过程，通过逆向色谱法将其分离；在核酸分离中，可以利用核酸在色谱柱上的吸附和洗脱过程，通过逆向色谱法将其分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在使用逆向色谱法时，需要注意以下几点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]正确选择色谱柱：根据待分离的生物分子的性质和所需分离的离子的性质，选择合适的色谱柱。[/font][font=宋体][font=宋体]优化层析条件：包括流速、缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度等，这些因素都会影响分离效果和分辨率。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]注意控制洗脱液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度：洗脱液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和离子强度可以影响生物分子与色谱柱的吸附和解离，进而影响分离效果和纯度。[/font][/font][font=宋体]检测和分析：在分离结束后，需要对分离得到的成分进行检测和分析，以确定分离效果和纯度。[/font][font=宋体]注意层析过程中的稳定性：逆向色谱过程中需要保持层析柱的稳定性，以避免层析柱的塌陷或堵塞等问题。[/font][font=宋体]注意保护色谱柱：逆向色谱过程中需要避免过度冲洗和压力过大等问题，以保护色谱柱的结构和使用寿命。[/font][font=宋体]注意样品性质：逆向色谱法适用于相对分子质量较大的物质，对于小分子物质可能无法有效分离。同时，需要注意样品的溶解性、电荷等性质，以选择合适的色谱柱和实验条件。[/font][font=宋体]总之，逆向色谱法是一种非常有效的生物分子分离和纯化技术，需要注意实验条件的选择和操作方法的正确性，以保证实验结果的准确性和可靠性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体纯化是一项关键技术，在抗体制备过程中十分重要。每种方法都有其特点和适用性，义翘神州可根据您的具体需求选择合适的抗体纯化方法，保证交付高质量、高纯度的纯化抗体。详情可以关注[/font][font=Calibri]:https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-purification[/font][/font]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=171592]电子捕获检测器详解[/url]电子捕获检测器详解内容包括ECD的概述、发展、工作机理、分类和操作参数的选择，还包括了该检测器的日常维护和常见问题。其内容之详尽可以说是：一份在手，ECD不愁。

才到公司，什么都不会，很多东西要考自学，有没有哪位高人精通液相操作啊？求液相安捷伦1260版的详细操作步骤，越详细越好 谢谢了

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-protocol][b]蛋白纯化[/b][/url]是生物实验室和制药工业中至关重要的技术。它涉及从复杂的混合物中分离出目标蛋白质，同时保持蛋白质的结构和功能。了解蛋白纯化的原理和步骤不仅有助于提高实验效率，还可以降低实验失败的风险。在本篇文章中，我们将详细介绍蛋白纯化的定义、原理和步骤。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化定义及原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白纯化是生物研究常用的一种技术，是指从蛋白混合物中得到纯度较高的某种蛋白的过程。根据样本和杂质的特性选择适合的纯化方法，纯化技术的选择要简单化，并且要产生最佳的纯化效果。如果纯度的要求很高，再增加一个离子交换或疏水作用色谱的额外中间步骤。不过尽量尝试使用尽可能少的步骤，因为步骤增多会降低总蛋白产出量。亲和步骤常用重力柱，有时其他色谱步骤中会使用恒压泵，然而蛋白纯化系统将提供更多的控制，可获得更详细的目标蛋白和杂质信息，并为色谱柱提供更好的保护。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]可溶性蛋白纯化的步骤[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]用于分离可溶性重组或非重组蛋白的分离方法取决于蛋白的内在生理化学特性（被标记蛋白除外）。典型的纯化方案如下所示（使用离子交换色谱法）。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、细胞裂解液[/font][/font][font=宋体]澄清裂解液[/font][font=宋体][font=宋体]离心（[/font][font=Calibri]60000[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]g[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]90 [/font][font=宋体]分钟）过滤或脱盐和交换缓冲液[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、澄清裂解液[/font][/font][font=宋体]①用亲和法[/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）进行[/font][font=Calibri]DEAE-Sepharose[/font][font=宋体]离子交换[/font][/font][font=宋体]交换缓冲液[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）进行离子交换[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 弱阳离子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]羧甲基[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 强阳离子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]甲基磺酸盐[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 强阴离子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]季铵盐[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 弱阴离子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]二乙氨基乙基[/font][/font][font=宋体]? 磷酸纤维素[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）用其他色谱方法[/font][/font][font=宋体]? 染料基质[/font][font=宋体]? 疏水[/font][font=宋体]? 羟磷灰石[/font][font=宋体]? 层析聚焦[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②浓缩[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③进行凝胶过滤[/font][font=宋体]④无菌过滤[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、经纯化的蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]包涵体蛋白的折叠与纯化[/b][/font][font=宋体]在大肠杆菌中表达的重组蛋白位于细胞裂解后低速颗粒部分，它们高度聚集。包涵体通常来自于细胞质（或细胞周质，如使用了分泌载体）中的蛋白聚集。如前所述，由于与细菌核酸的相互作用，蛋白也可以位于低速或高速颗粒部分中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]采用蛋白变性剂提取蛋白，如盐酸胍[/font][font=Calibri](Gu[/font][font=宋体][/font][font=Calibri]HCl)[/font][font=宋体]、尿素或有机酸。使用还原剂二硫苏糖醇[/font][font=Calibri](DTT)[/font][font=宋体]防止人工二硫键形成（尤其是分子间键）。变性后的蛋白可以通过各种方法纯化后再折叠，也可以直接折叠。通常建议在折叠前进行一些纯化（如[/font][font=Calibri]Gu[/font][font=宋体][/font][font=Calibri]HCl[/font][font=宋体]中的凝胶过滤），因为这往往会带来更高的折叠产率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原文转载：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-protocol[/font][/font]

讲座题目：离子色谱技术详解及在环境监测中的应用 　　主讲老师：王永文　　高级应用工程师 南京航空航天大学硕士研究生。在青岛盛瀚色谱技术有限公司市场应用开发部门3年以上的工作经理，有丰富的市场和应用研发经验，并具有丰富的仪器使用操作经验和技能离子色谱技术详解及在环境监测中的应用　　主要内容：本次会议针对离子色谱技术做一个详解，解决很多客户的技术症结并结合实际案例，对目前离子色谱应用广泛的环境监测领域做深入的应用讲解，离子色谱应用越来越广泛，掌握娴熟的操作技能和仪器的基本应用技术是做好相关检测工作的重中之重。 举行时间：2016-12-08 14:00　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2219http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

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紧急求助:agilent6820化学工作站的详细操作步骤,由于较长时间未使用,具体操作不记得了,求求各位大侠帮帮忙,或直接发邮件给我jack_yg@126.com[em45] [em45] [em45] [em45]

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