不同盐浓度流动相

做液相时，流动相中盐浓度的大小会影响出峰时间吗？

请教各位： 流动相缓冲盐浓度限度是多大呢？通常，固体缓冲盐我们都用5-50mmol/L，表面活性剂5-10mmol。可是最近遇到一个方法含66mmol磷酸盐、22mmol的辛烷磺酸钠，有同事用完没有进行适当维护，最近一月频繁出问题，现在柱压波动很大，按照安捷伦建议进行故障解决，未果。各位有什么好方法分享分享！ 除开上面遇到的高浓度缓冲盐，还遇到一个更高浓度的31.5g甲酸铵置1L水，约500mmol/L，不知如何是好？各位高人是否有类似经历？

流动相中缓冲盐浓度是否影响产品的最大吸收波长？

[color=#444444]最近分析一个化合物，在文献中看到 使用的水相是40 mM乙酸铵，pH 5.2。以前流动相最多就是10 mM乙酸铵，这个高浓度的缓冲盐 能进质谱吗？对仪器影响大不呢？求高手指点[/color]

最近开发一个产品方法，在酸性条件下不稳定，加缓冲盐也不能改善，配制0.005M的PH8.0磷酸缓冲盐作为流动相时，峰形改善，但是峰很宽，PH继续上升至9.0时，峰宽变小，也就是PH升高能够改善，但是有一个杂质，在超过缓冲盐PH8.0的条件下不稳定。三乙胺，氯化铵，氨水，NAOH都不行。是否还有其他方式可以改善峰宽？增加缓冲盐浓度不可行，已经试过了，从0.1M-0.005M，不同浓度，峰形无变化。加0.005M的庚烷磺酸钠是否能有效果？求经验。

有3种方法可用于配制具有精确pH的缓冲盐流动相，例如需要配置1 L的20 mM醋酸铵缓冲液，pH为4.0，可按照下述3种方式配制。（1）精确地称取一定量的醋酸铵以及醋酸，定容与1000 mL纯化水中。（2）分别配置20 mM的醋酸铵溶液以及20 mM的醋酸溶液，以醋酸溶液调节醋酸铵溶液pH到4.0。（3）配制20 mM的醋酸铵溶液，使用冰醋酸调节pH到4.0，该种方法由于使用了醋酸调节pH，醋酸铵缓冲盐的浓度要略微大于20 mM。在反相HPLC中，分析方法对缓冲盐浓度的轻微变化并不是那么敏感。但是，对于离子交换色谱，亲水相互作用色谱以及Mixed-Mode色谱来说，由于分析方法对离子浓度比较敏感，该种配制方法需要尽可能避免。此外，如果缓冲盐溶液的pH需要调整到缓冲pH范围以下时，此时需要避免该种配置方式，因为此时需要添加的醋酸量已经会使得缓冲盐的浓度发生很大改变，足以影响分析方法的重现性。在配置缓冲盐流动相时，一般只对水相部分调节pH而不对有机相调节pH。此外，需要避免预先将水相与有机相混合之后再调节pH。此时pH计测出的结果并不能够反应真实情况，pH计所测定的结果也受到温度的严重影响。但有时，不可避免地需要使用该配置方法，如在使用Mixed-Mode色谱柱分析多元酸的时候，需要预先对流动相混合之后调节pH，此时需要注意在调节pH的时候，对pH计所处的环境温度进行严格控制。

样品是羟乙基淀粉，客户提供的方法是用醋酸钠水溶液做流动相；我们的流动相是硝酸钠水溶液，柱子是A6000，之前经常测多糖的样品，现在测出来的数据跟客户再其他地方测的数据差很多，是因为缓冲盐不同的缘故么？

有时向流动相水中加一定比例的盐，请问盐的作用是什么，盐的种类都有什么，浓度常见是多少

[table][tr][td] [align=center] [/align] [size=18px]在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响，缓冲盐使用不当对色谱柱的影响及解决办法。 缓冲盐是指对pH有缓冲能力的盐，能够让pH维持在一个恒定的数值。 何时应用缓冲盐 样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向，其他特定少数情况另行叙述。存在较强离子化倾向的组分，其中一部分是分子状态，与反相色谱固定相结合的更好；另一部分是离子状态，更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态，即分子状态和离子状态的比例，很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相，应选用缓冲盐/有机相系统。 常见的缓冲盐有哪些 缓冲盐类型的选择，主要取决于所需要的缓冲能力，在反向色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。对于离子型化合物，典型的样品的保留随pH改变而明显变化。通常在pH2到4条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高。因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内。 比起单纯的酸碱，盐类，特别是具有缓冲能力的盐类可以很好的控制流动相的pH值，根据不同缓冲盐中两种盐的配比，可以很容易的配置出一定pH的缓冲溶液。 1、甲酸盐通常在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中常用的甲酸盐都是甲酸铵，这类盐的溶解度好，完全兼容[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的方法，对色谱柱的伤害也比较小，但是缺点是离子强度比较低，另外就是甲酸盐比较容易吸潮，称量的时候比较困难，在流动相里还可能挥发。与甲酸配合，可以得到甲酸-甲酸铵缓冲体系，大概缓冲能力在pH3～4.5的范围之内，只要调节两者浓度的比例即可。 2、乙酸盐常见为乙酸铵，在使用上，和甲酸盐十分类似，离子强度也不高，与乙酸配合的乙酸-乙酸铵缓冲体系pH的控制能力在pH4～5.5左右。 3、磷酸盐常用的是磷酸的钠盐和钾盐，二者对pH的控制能力十分接近，只是离子强度稍有差异，绝大多数情况下是可以互换使用的，磷酸由于是多元酸，能够形成一氢盐和二氢盐，所以使用磷酸缓冲体系调节pH也是组合比较多，跨度比较大的，并且可以提供较高的离子强度，可惜，磷酸盐流动相体系无法兼容质谱，并且对色谱柱损伤较大。以磷酸钠盐为例，可以有以下两种组合的缓冲体系：磷酸-磷酸二氢钠：pH可以达到1.2～3.1左右的范围磷酸二氢钠-磷酸氢二钠：pH可以达到6.5～8左右的范围 上述的缓冲对能调节的pH范围指的都是在保持缓冲能力的范围之内，如果仅仅是调节pH的话，范围还可以再扩展一些。 缓冲盐使用不对产生的影响 1、柱压升高原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高 2、相同化合物的保留时间发生变化原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化 3、柱效下降原因：有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降 ii)凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。 缓冲盐的正确使用方法 1、使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。 理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。 2、使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动 相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。 用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳. 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。 使用缓冲液要注意几点 1、避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2、缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。 3、实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。 4、使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。 5、清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。 6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。 7、选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。 如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。 但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。 流动相流速的选择 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： a.由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。 b.对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。 c.含水流动相最*在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。d.流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤，除去微粒杂质。e.使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。 小结 正确使用缓冲盐很有必要，既可以防止缓冲盐析出，也可以达到提高色谱柱使用寿命的目的。我们不妨用一句话来总结它的使用方法：用前要过滤，用后需冲洗。[/size][/td][/tr][/table]

缓冲盐的浓度多少才能避免析出而又不影响分析。前几天在论坛上向大家求助过，就是流动相用缓冲盐的时候，因为缓冲盐析出使得实验无法进行。超声清洗后才得以继续。老师说我的缓冲盐浓度是40mM，浓度太高了，5-6mM会比较合适。我看大部分的文献上缓冲盐的浓度和我用的差不多，可是我的为什么会非常容易的析出堵住单向阀呢。是以为浓度太高了还是其它的原因呢？大家帮我分析一下吧！老是有问题我修机器都快崩溃了呵呵

[color=#444444]高效液相色谱；首次用Hypersil SAX色谱柱，流动相是0.01M磷酸盐，PH2.2，基线总是跑不好，到底是什么原因？[/color][color=#444444] 盐浓度太大，还是ph过低？请各位帮助！！！[/color]

大侠们好！ 我用的柱子是阴离子交换柱，流动相是磷酸盐。目前我在探索最合适的流动相浓度。我想问一下诸位大侠，对阴离子交换柱来讲，是不是浓度越低对柱子就越好？多谢指教！

我衍生的是马杜霉素，他有几种不同的衍生方法，如用丹黄酰肼衍生，荧光检测；若用香草醛衍生，则用紫外检测器，它们的流动相可以通用吗？

亚硝酸盐浓度监测试剂盒　亚硝酸盐是强致癌物，国标中严格规定了矿泉水、纯净水中亚硝酸盐含量，亚硝酸盐含量已成为必检卫生指标，然而按照国标方法检测亚硝酸盐指标，步骤繁琐，而且有些试剂必需现配现用，费时又费力。我公司针对这种情况，参照国标方法，研制生产出的亚硝酸盐浓度监测试剂盒，具有使用方便、快捷、结果准确、保存时间长等特点。针对矿泉水及纯净水中规定亚硝盐浓度检出限不同：矿泉水中亚硝酸盐检出浓度不得大于0.005mg/L纯净水中亚硝酸盐检出浓度不得大于0.002mg/L。我公司研制了两种试剂盒：矿泉水中亚硝酸盐浓度监测试剂盒；纯净水中亚硝酸盐浓度监测试剂盒．可分别监测矿泉水及纯净水中亚硝盐浓度是否超标。 　包装、配置说明：铝箔片剂包装，每盒可测50次，附有亚硝酸盐浓度溶液标准管。　 亚硝酸盐浓度监测试剂盒比色卡法说明：1、 将标准管内小塑料管中的溶液全部转移到标准管，用蒸馏水稀释至刻度线，保留管内溶液至此试剂盒的试剂用完为止；2、用待测水样冲洗样品管；3、将待测水样加至样品管的刻度线，撕开一小包(矿泉水10010)(纯净水10030)粉末，把包内粉末倒入水样中，盖上盖子摇匀，5分钟后再加入一小包(矿泉水10020)(纯净水10040)粉末，摇匀。10分钟后将标准管和样品管放在说明卡白色背面由上而下目视比色，若样品管溶液颜色比标准管溶液颜色浅，则待测水样中亚硝酸盐含量合格（矿泉水小于0.005mg/L）（纯净水小于0.002mg/L），反之则不合格

一、流动相pH调节 加入有机溶剂，测量的pH会升高，有两个原因：1、在有机溶剂存在下，由于氢离子浓度变化而应起的pH值升高；2、是测量本身的问题。因为pH计是在水溶液中校正得到精确的结果的，在大量有机溶液存在下，测量值会与真实之发生较大偏离。但是这与缓冲体系组成和缓冲能力是不相关的。在缓冲溶液中，无论是有机溶剂混合液还是水溶液，缓冲盐的两种电离形式（酸式和碱式）组分的比率是不变的。 举例如下：配制pH值4.75的醋酸盐缓冲液。先在水中配好适当浓度的醋酸盐溶液，然后调节pH值至4.75，这时溶液缓冲能力最大，而这与pH计在有机溶液混合液中测量得到的pH值无关。最后加入有机溶剂。对于其他的常用缓冲液都可以按照这样配制，只要知道他的pKa。 在100%水和50% 甲醇-水溶液之间，酸的pKa大约可以上升1个单位；碱大约可以上升0.5个单位。如果分析物是不完全电离或是不电离的，那么这个差异就会对出峰时间造成较大影响。二、缓冲盐的选择 一般来说，通过利用一个好的缓冲盐体系来控制流动相的pH，对检测方法的重现性和分析物的峰形非常重要，而流动相pH的少许变动对峰形影响不大，除非你的分析物是离子化合物，那么pH会影响出峰顺序。 缓冲体系的缓冲能力是一个关于缓冲盐浓度和体系pH值与缓冲盐的pKa之间差异的函数，与缓冲盐浓度以及缓冲盐的pKa有关，当体系pH值=缓冲盐的pKa时，缓冲能力最大。缓冲盐的pH要在水溶液中测定。因为pKa值会随着有机溶剂的加入而升高，不过缓冲体系中所有组分包括分析物的pKa都会同等幅度的增加。 缓冲体系的pH值应该在缓冲盐pKa的上下1.5个单位内；如果盐浓度很低（低于5mM），则应该在缓冲盐pKa的上下1.0个单位内。举例如下：如果你使用磷酸盐溶液在pH4.5，那么它不是缓冲体系，而是一个盐溶液，不具有缓冲能力。因为磷酸盐的pKa大约为2和7，4.5不能再允许范围内，因此可以用醋酸盐缓冲液替代。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/09/200709261422_65091_1640949_3.gif[/img]

[b]我们经常讨论流动相的[size=15px]pH[/size][size=15px]调节，最简单和最可靠的方法是在加入有机溶剂后的流动相再调节[/size][size=15px]pH[/size][size=15px]。[/size][size=15px]还有测定[/size][size=15px]pH[/size][size=15px]是在流动相的盐相里面，这两种调节方式有何区别？[/size][/b][size=15px]pH值的调整是通过缓冲溶液完成的，缓冲盐能够维持pH在某一范围内，这个叫做缓冲能力，缓冲能力因缓冲盐的pH和pka以及其浓度不同而变化，举个例子，乙酸的pKa是4.74(在水中)，因此，醋酸盐缓冲能力最好也是在这个pH,液相中常见的典型的缓冲盐浓度一遍是20-50 mM，因此在缓冲液pKa周围的+/-1pH单位内可以获得良好的缓冲能力，为了达到合理的缓冲能力，缓冲液的pH值与pKa之间的距离不应超过1.5个pH单位。[/size][size=15px]如果有机溶剂加入到缓冲盐中，那pH将比原来测得更高，这是由于两个单独的影响。一个是由于有机溶剂存在时氢离子浓度的变化而导致的pH值的真正变化。第二个原因与测量pH的仪器自身有关，因为pH计在使用之前已经校准了，如果在存在高浓度有机溶剂的情况下进行测量，它将显示出与真实值的偏差。然而，这两种效果都与实际的的缓冲盐组成以及其缓冲能力无关，在有机溶剂存在的情况下，由酸性形式和缓冲成分的基本形式的给定比例制备的缓冲溶液仍然具有相同的比例，因此缓冲能力与在纯水中相同。因此，如果我们测量水中的缓冲液组成及其pH值，我们就有了一个固定不变的参考点，以及无可置疑的工具来测量pH值。例如，醋酸盐缓冲液的最大缓冲能力为pH4.75。当有有机溶剂存在时，当pH计读数为pH值时，可以将水中的pH值调节到此值的醋酸缓冲液达到最大缓冲能力。对于所有常用的缓冲区，我可以在表中查找水的pKa值。然后，我可以用pKa作为参考点来调整缓冲液在水中的pH值。然后，作为最后一步，我加入有机溶剂。[/size][size=15px]然而，这个规则也有例外的时候，如果你用有关很老的方法开发一个相对较老的方法，它可以指定一种长链胺作为缓冲区的组成部分，有时候，胺在水里面的溶解度是有限的，配制流动相溶液最简单的方式就是在加有机相溶液前调节pH值，这个过程没有什么问题，只要你知道滴定曲线和你使用的缓冲盐在有机溶剂存在下的缓冲能力，获取这些信息的最佳方法是在有机溶剂目标浓度下获得滴定曲线，并从该滴定曲线构造缓冲能力的线性。滴定曲线是当酸或者碱加到溶液时溶液中不同pH变化的点连接起来的一种曲线，缓冲能力曲线是每添加的碱量与pH的（负）变化的曲线。这个曲线在有机溶剂存在的条件下，在缓冲盐的pKa处达到最大值，因此，缓冲盐的缓冲能力最大处是在其pKa处，然后，你可以使用此信息为具有最佳容量的分析准备一个缓冲区。[/size][size=15px]该行业的首选做法是在水中配制缓冲液，然后将pH调整后的缓冲液与有机溶剂混合。这给出了明确的结果，并允许对缓冲盐的缓冲能力作出良好的和普遍的判断。应当指出，在起草流动相等方案时候写清楚其配制过程，应该包括缓冲盐类型及其pH值与有机溶剂等的比例。下面是一个例子：50mMKH2PO4/K2HPO4缓冲盐，pH 7.0/甲醇 40/60，或者40% 50mMKH2PO4/K2HPO4缓冲盐，pH 7.0和60%甲醇，这种反过来的描述（methanol /KH2PO4/K2HPO4buffer, pH 7.0, 60/40”）有时候很模糊，这个绝对不能采用，[/size][size=15px]你的建议不同于我最初的想法，但它是有道理的。[/size][size=15px]具有溶剂组成的pH的典型变化是什么？[/size][size=15px]如果缓冲液在添加有机溶剂之前或之后制备，则会引起可测量的保留变化。在参考文献中，酸的pKa 在100%水中与50%甲醇水中相差1个单位，碱的pKa 在100%水中与50%甲醇水中相差接近0.5个单位，如果分析物质不完全离子化或者非离子化，那么这点差异将会造成保留时间的漂移，甚至改变出峰顺序也是有可能的。[/size]

同样的样品，采用不同的流动相，C18的色谱柱相同，样品配制相同，前者使用梯度洗脱，后者不使用梯度洗脱，流动相均为缓冲盐的有机相流动相，反相体系。这两者如果出峰，色谱峰位置是否会有顺序上的差别呢？主峰和杂质峰是否会颠倒顺序？还是会相同顺序流出呢？谢谢！[em61]

[align=left][/align][align=left]在使用含盐流动相，尤其是高盐浓度或梯度条件进行液相分析时，稍不留神就会出现盐析的现象，会导致压力升高以及色谱峰裂峰等问题，不仅影响实验进度，还会影响色谱柱的使用寿命；如果处理不好，柱效下降甚至色谱柱报废都是有可能的。[/align][align=left]为了防止色谱柱被破坏，为了维护实验室的和平，今天YoYo就来介绍一下含盐流动相的使用攻略，快跟我往下看吧[/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center] [/align][align=left][b][color=#0070c0]盐析的危害[/color][/b][/align][align=left]对于仪器的危害：系统堵塞，系统压力升高，泵压力波动增大，基线不平……[/align][align=left]对于色谱柱：柱压上升，峰形变差、裂峰，无法正常进行样品分析……[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left]因此，在使用含盐流动相时必须要特别注意以下几方面：[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][b][color=#0070c0]1[/color][color=#0070c0]、色谱柱保存液[/color][/b][/align][align=left][b]1）未开封的新色谱柱[/b][/align][align=left] [/align][align=left]大阪曹達的新色谱柱，出厂保存液大多为100%乙腈（具体保存液种类请务必通过色谱柱盒内所附柱效报告单进行确认）。[/align][align=left]因此，为避免盐析，YoYo建议您按照以下步骤处理新色谱柱：[/align][align=left]①先使用与流动相组成比例相同但不含盐的溶液进行冲洗置换（避免使用纯水），时间建议1h以上[/align][align=left]②使用含盐流动相进行平衡[/align][align=left]③正常分析[/align][align=left][b] [/b][/align][align=left][b]2）已使用过的色谱柱[/b][/align][align=left] [/align][align=left]对于已开封使用过的色谱柱，需要了解使用履历，知晓前一次实验的条件、用完柱子后的最终保存液，判断是否需要再次进行保存液置换和过渡。[/align][align=left]建议用户建立实验室色谱柱管理表格，将色谱柱的使用履历（分析项目、流动相条件）、使用情况（柱压、用后柱效）进行记录，按照流程进行色谱柱的冲洗、保养和储存，方便对色谱柱进行管理。[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][b][color=#0070c0]2、[/color][color=#0070c0]流动相的置换[/color][/b][/align][align=left][b] [/b][/align][align=left]在方法开发过程中，多数情况会涉及不同缓冲盐体系和不同有机相体系的各种尝试，那么在调整、更换流动相组成的过程中，请务必充分考虑到不同种类缓冲盐的溶解情况。[/align][align=left]一般情况下，盐的溶解能力：有机酸盐＞无机酸盐[/align][align=left]最常用的磷酸缓冲盐中，溶解能力：铵盐＞钾盐＞钠盐[/align][align=left] [/align][align=left]若不确定所使用的缓冲盐和有机相之间的互溶情况，可按照不同比例将二者混合，静置30min，观察底部是否有沉淀或絮状物产生。[/align][align=left][b] [/b][/align][align=left][b][/b][/align][align=left][b][/b][/align][align=left][b][color=#0070c0]3[/color][color=#0070c0]、梯度条件[/color][/b][/align][align=left] [/align][align=left]当涉及缓冲盐-有机相梯度条件时，请确认缓冲盐在梯度条件中有机相最高点是否能够充分溶解。[/align][align=left]当然，不确定的时候也可以和上述方法一样，将缓冲盐和有机相按照梯度最高比例混合后静置，观察是否有沉淀产生。[/align][align=left][color=#0070c0] [/color][/align][align=left][color=#0070c0][/color][/align][align=left][color=#0070c0][/color][/align][align=left][b][color=#0070c0]4、[/color][color=#0070c0]色谱柱的保存[/color][/b][/align][align=left][b] [/b][/align][align=left]对于色谱柱使用时隔夜以及使用完后的保存，同样不能掉以轻心。[/align][align=left]当实验环境昼夜温差较大时，建议在夜间也要保持柱温（尽量使用柱温箱），并进行持续的小流速通液，以防止盐析；实验完毕后，使用不含盐的流动相（将缓冲盐相更换为纯水）对色谱柱和仪器进行冲洗置换，同样，在冲洗置换过程中不能使用纯水。[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left]希望今天的帖子能够帮到您，如果您有任何疑问欢迎留言！[/align][align=center] [/align][align=center] [/align]

问题: 请教一下各位大神，有没有遇到过缓冲盐流动相到有机相比例高了就压力波动很大的情况，之前把有机相比例从90%改成80%就可以了，后来别的方法盐浓度更高一点，到80%走了两个样品，第三个有机相比例高了又开始压力波动很大，这怎么回事呢回复1: 有没有可能，你的缓冲盐遇到高比例的有机相，导致盐析出？回复2: 盐析出的可能性很大，个人意见：换缓冲盐或是调整有机相比例[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707081344_01_3114888_3.jpg[/img]

[align=left][/align][align=left]在使用含盐流动相，尤其是高盐浓度或梯度条件进行液相分析时，稍不留神就会出现盐析的现象，会导致压力升高以及色谱峰裂峰等问题，不仅影响实验进度，还会影响色谱柱的使用寿命；如果处理不好，柱效下降甚至色谱柱报废都是有可能的。[/align][align=left]为了防止色谱柱被破坏，为了维护实验室的和平，今天YoYo就来介绍一下含盐流动相的使用攻略，快跟我往下看吧[/align][align=center][/align][align=center] [/align][align=left][b][color=#0070c0]盐析的危害[/color][/b][/align][align=left]对于仪器的危害：系统堵塞，系统压力升高，泵压力波动增大，基线不平……[/align][align=left]对于色谱柱：柱压上升，峰形变差、裂峰，无法正常进行样品分析……[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left]因此，在使用含盐流动相时必须要特别注意以下几方面：[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][b][color=#0070c0]1[/color][color=#0070c0]、色谱柱保存液[/color][/b][/align][align=left][b]1）未开封的新色谱柱[/b][/align][align=left] [/align][align=left]大阪曹達的新色谱柱，出厂保存液大多为100%乙腈（具体保存液种类请务必通过色谱柱盒内所附柱效报告单进行确认）。[/align][align=left]因此，为避免盐析，YoYo建议您按照以下步骤处理新色谱柱：[/align][align=left]①先使用与流动相组成比例相同但不含盐的溶液进行冲洗置换（避免使用纯水），时间建议1h以上[/align][align=left]②使用含盐流动相进行平衡[/align][align=left]③正常分析[/align][align=left][b] [/b][/align][align=left][b]2）已使用过的色谱柱[/b][/align][align=left] [/align][align=left]对于已开封使用过的色谱柱，需要了解使用履历，知晓前一次实验的条件、用完柱子后的最终保存液，判断是否需要再次进行保存液置换和过渡。[/align][align=left]建议用户建立实验室色谱柱管理表格，将色谱柱的使用履历（分析项目、流动相条件）、使用情况（柱压、用后柱效）进行记录，按照流程进行色谱柱的冲洗、保养和储存，方便对色谱柱进行管理。[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][b][color=#0070c0]2、[/color][color=#0070c0]流动相的置换[/color][/b][/align][align=left][b] [/b][/align][align=left]在方法开发过程中，多数情况会涉及不同缓冲盐体系和不同有机相体系的各种尝试，那么在调整、更换流动相组成的过程中，请务必充分考虑到不同种类缓冲盐的溶解情况。[/align][align=left]一般情况下，盐的溶解能力：有机酸盐＞无机酸盐[/align][align=left]最常用的磷酸缓冲盐中，溶解能力：铵盐＞钾盐＞钠盐[/align][align=left] [/align][align=left]若不确定所使用的缓冲盐和有机相之间的互溶情况，可按照不同比例将二者混合，静置30min，观察底部是否有沉淀或絮状物产生。[/align][align=left][b] [/b][/align][align=left][b][/b][/align][align=left][b][/b][/align][align=left][b][color=#0070c0]3[/color][color=#0070c0]、梯度条件[/color][/b][/align][align=left] [/align][align=left]当涉及缓冲盐-有机相梯度条件时，请确认缓冲盐在梯度条件中有机相最高点是否能够充分溶解。[/align][align=left]当然，不确定的时候也可以和上述方法一样，将缓冲盐和有机相按照梯度最高比例混合后静置，观察是否有沉淀产生。[/align][align=left][color=#0070c0] [/color][/align][align=left][color=#0070c0][/color][/align][align=left][color=#0070c0][/color][/align][align=left][b][color=#0070c0]4、[/color][color=#0070c0]色谱柱的保存[/color][/b][/align][align=left][b] [/b][/align][align=left]对于色谱柱使用时隔夜以及使用完后的保存，同样不能掉以轻心。[/align][align=left]当实验环境昼夜温差较大时，建议在夜间也要保持柱温（尽量使用柱温箱），并进行持续的小流速通液，以防止盐析；实验完毕后，使用不含盐的流动相（将缓冲盐相更换为纯水）对色谱柱和仪器进行冲洗置换，同样，在冲洗置换过程中不能使用纯水。[/align][align=left] [/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left]希望今天的帖子能够帮到您，如果您有任何疑问欢迎留言！[/align][align=center] [/align][align=center] [/align][color=#000000] [/color][color=#000000] [/color][color=#000000] [/color][align=left] [/align]

可以用低浓度的盐酸和甲醇混合作C18柱的流动相吗？

可以用低浓度的盐酸和甲醇混合做C18柱的流动相吗？

可以用低浓度的盐酸和甲醇混合作C18柱的流动相吗？

流动相单独进样会有峰出现，如果流动相浓度过大，会使样品中原本含量就很低的峰消失吗？

低浓度的盐酸和甲醇混合可以做C18的流动相吗？

想问一下，怎么测量酱油中的盐浓度，麻烦各位解答的大神了！！！

各位老师： 我做实验过程中遇到这样的问题： 我用的是PH1.9磷酸盐缓冲液和乙腈的流动相体系。不同时间配制的流动相，会导致保留时间的不同。但同一批次的流动相，保留时间基本一样。而且过个一两天后，保留时间也会改变（这个可能是溶剂挥发）。 请大家指点！谢谢 例如：2008.3.12配的流动相 RT：17min左右 同一批次的流动相，保留时间基本一样。 3.15配的， RT：18min左右 3.20 RT： 20min左右 再说明另外一个问题：柱温是55度。我比较怀疑是这个原因。正如3楼所说，反相一般流动相有细微改变影响都不大的啊。 以下，我具体说一下我做的东西的条件吧： 柱：Sepax GP-C4(4.6*150mm,5um,120A) 流速1.0 PB：KH2PO4 11.58g +H3PO4(85%) 10.9g ,加水定容至1000mL 流动相：A:PB 468g +乙腈 26g 混匀 ----------测得PH2.3左右 B：PB536g +乙腈 338g-------------PH3点几 仪器：安捷伦1100，有柱温箱。其他1100上也试过哦。同志们，我的问题还是没解决啊。急需大家帮忙啊！----帖子很有讨论意义，特置顶几天，欢迎大家积极讨论！ （03yx2）

不同比例流动相对成分含量的分析，应从那些方面着手，如现已知保留时间，峰面积，半峰宽，含量，分离度，从哪些方面处理数据能更好的反映不同比例流动相的影响效果，希望得到不同比例流动相数据处理分析的文献，不胜感激!