不同盐浓度流动相

本文使用配备了示差折光、四毛细管桥粘度及双角度激光光散射三个检测器的 Agilent1260 Infinity 多检测器 GPC/SEC 系统，配合 PL Aquagel-OH 系列色谱柱，分别以两种不同盐浓度的缓冲液作为流动相，对羧甲基淀粉钠的分子量、分子量分布和分子构造进行了表征，并研究了流动相盐浓度对分子构象的影响。通过与仅配单一示差检测器的PC/SEC 系统对比得到，1260 多检测器 GPC/SEC 系统，无需建立标准曲线，即可得到更加准确的样品分子量及分子量分布检测结果，同时还可得到样品分子构造和分子构象信息。

本文使用配备了示差折光、四毛细管桥粘度及双角度激光光散射三个检测器的 Agilent 1260 Infinity 多检测器 GPC/SEC 系统，配合 PL Aquagel-OH 系列色谱柱，分别以两种不同盐浓度的缓冲液作为流动相，对羧甲基淀粉钠的分子量、分子量分布和分子构造进行了表征，并研究了流动相盐浓度对分子构象的影响。通过与仅配单一示差检测器的GPC/SEC 系统对比得到，1260 多检测器 GPC/SEC 系统，无需建立标准曲线，即可得到更加准确的样品分子量及分子量分布检测结果，同时还可得到样品分子构造和分子构象信息

本文使用配备了示差折光、四毛细管桥粘度及双角度激光光散射三个检测器的 Agilent1260 Infinity 多检测器 GPC/SEC 系统，配合PL Aquagel-OH 系列色谱柱，分别以两种不同盐浓度的缓冲液作为流动相，对羧甲基淀粉钠的分子量、分子量分布和分子构造进行了表征，并研究了流动相盐浓度对分子构象的影响。通过与仅配单一示差检测器的GPC/SEC 系统对比得到，1260 多检测器GPC/SEC 系统，无需建立标准曲线，即可得到更加准确的样品分子量及分子量分布检测果，同时还可得到样品分子构造和分子构象信息。

在使用磷酸盐等不挥发盐做流动相时，能有效解决杂质鉴定的难题。一维和二维同时使用亚2 μm的色谱柱，提高分析效率。借助软件快速对药品中所有杂质进行鉴定及解析。

本技术概述展示了如何使用 Agilent 1290 Infinity II 方法开发解决方案自动筛选固定相和流动相。该解决方案配备 Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱，可在最多八根色谱柱之间进行自动切换。Agilent 1290 Infinity II 全能泵配有两个溶剂选择阀，最多可连接 26 种不同的溶剂。Agilent OpenLAB CDS ChemStation 版软件的安捷伦方法筛选向导有利于轻松设置方法，在一个序列中采用色谱柱、流动相和温度的不同组合。

头孢唑肟钠（Ceftizoxime sodium）属第三代头孢菌素，具广谱抗菌作用。中国药典中使用磷酸盐缓冲液作为流动相。在本方案中采用二维ACQUITY UPLC系统，一维使用药典中规定的磷酸盐缓冲液，并采用亚2 μm小粒径的色谱柱进行分离，以提高分离效率、增加分离度、缩短分析时间。二维采用质谱兼容的甲酸体系，连接飞行时间质谱仪（Xevo G2-S QTof）进行检测鉴定。

固定相和流动相　　在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。本章着重讨论填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。

本文建立了一种使用离子交换色谱法结合生物惰性液相色谱分离不同序列长度寡核苷酸的分析方法，假定较短序列的寡核苷酸组分为合成过程中可能产生的短序列杂质，并考察了流动相pH变化对分析结果的影响。 岛津生物惰性超高效液相色谱仪“Nexera XS inert”可以出色地抑制含磷酸基团化合物的金属表面吸附，获得优异的峰型、良好的重现性和出色的灵敏度。

多数药品中含有碱性基团，在强阳离子交换模式下，选择性优异且能得到良好保留。保留能力可根据流动相的pH以及盐浓度进行调整，其中盐浓度是影响保留的重要因素，一般情况下为使保留时间缩短，故而必须采取高盐浓度的流动相进行洗脱，但是这种高盐的流动相很难直接使用于LC-MS联用。基于这种情况，我们在梯度条件下使用短色谱柱，在强阳离子交换模式中实现含有碱性基团的药品的LC-MS快速分析

疏水作用色谱是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白才随后被洗脱下来，本应用显示IgG分子不同的疏水性的基线分离。

本文介绍了使用TSKgel Super-Octyl色谱柱，并用2-丙醇作为流动相溶剂，同时检测尿液代谢物和肌酐的分析实例。

本文介绍了使用TSKgel Super-Octyl色谱柱，并用2-丙醇作为流动相溶剂，同时检测尿液中马尿酸的分析实例。

疏水作用色谱HIC是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白随后才被洗脱下来，BioCore HIC-Butyl对模拟单抗偶联药物中不同效价的分离具有很好的选择性。

疏水作用色谱（HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白才随后被洗脱下来，BioCore HIC-Butyl对半胱氨酸偶联单抗药物中不同效价的分离具有很好的选择性。

固定相和流动相筛选是分析型超临界流体色谱(SFC) 方法开发的一个重要方面。本文将介绍使用Agilent 1260 Infinity 分析型SFC 系统色谱柱筛选套件自动筛选色谱柱和改性剂。通过筛选六种固定相和两种改性剂来确定最佳组合。对于所选的样品，使用Agilent ZORBAX Rx-SIL 色谱柱并以甲醇作为改性剂得到了最佳的分析结果，所有化合物均实现基线分离。

本文采用双三元液相色谱系统(DGLC)，充分利用双泵的优势，将两个泵分别作为流动相的输液泵和柱后溶液的传输泵，实现与质谱的全自动连接。采用TFA-Fix 技术或者抑制器技术降低流动相中TFA 对MS 的离子产生的抑制作用，尤其是柱后抑制器技术大大提高了多肽样品在质谱上的灵敏度。

本文采用双三元液相色谱系统(DGLC)，充分利用双泵的优势，将两个泵分别作为流动相的输液泵和柱后溶液的传输泵，实现与质谱的全自动连接。采用TFA-Fix 技术或者抑制器技术降低流动相中TFA 对MS 的离子产生的抑制作用，尤其是柱后抑制器技术大大提高了多肽样品在质谱上的灵敏度。

本文介绍了使用TSKgel Super-Octyl色谱柱，并用2-丙醇作为流动相溶剂，同时检测尿液代谢物中扁桃酸的分析实例。

本文介绍了使用TSKgel Super-Octyl色谱柱，并用2-丙醇作为流动相溶剂，同时检测尿液代谢物甲基马尿酸的分析实例。

本文介绍了使用TSKgel Super-Octyl色谱柱，并用2-丙醇作为流动相溶剂，同时检测尿液代谢物和肌酐的分析实例。

柱后 TFA-Fix 技术和抑制器离子交换的方法，经过实验验证，表明两种方法都具有降低流动相中 TFA 对多肽的质谱抑制作用，提高样品在 MS 上的灵敏度。采用双三元液相色谱系统，充分利用双泵的功能，同时进行样品分析和柱后自动试剂添加，大大提高多肽样品在 MS 上的灵敏度。

使用了美国怀雅特技术公司的MALS（DAWN HELEOS）与Optilab rEX 检测器以及UV 检测器联，来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器，可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化，这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性

疏水作用色谱（HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质等生物大分子的常用方法，也是测定ADC中DAR的重要手段。在HIC模式下，高盐浓度将待分离的样品吸附在固定相上，然后线性或阶段降低流动相中盐浓度有选择性地将样品洗脱。分离过程中，随着流动相中盐浓度的降低，疏水性弱的蛋白先被洗脱下来，而疏水性强的蛋白才随后被洗脱下来

体积排阻色谱(SEC) 是监测生物治疗蛋白质样品（包括单克隆抗体及其衍生物）中单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的重要工具。由于聚集体被视为一项关键质量属性，因此需要对其进行定量分析。本应用简报介绍了一种利用Agilent AdvanceBio SEC 300Å , 7.8 × 300 mm, 2.7 μ m 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱对生物治疗mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 中的聚集体进行定量分析的简单而灵敏的方法。该方法采用相同的水相流动相，无需添加有机改性剂即可对mAb 和疏水性更强的ADC 进行分析。优化方法还可监测经 pH/温度处理形成的聚集体和降解物。该方法操作简单且具有良好重现性，与仪器的抗腐蚀性相结合后极其适用于生物制药行业中mAb 和ADC 的常规QA/QC 分析。

探讨不同有效氯浓度电生功能水冷激处理对香蕉耐冷性的影响,试验结果表明：有效氯浓度为8%的电生功能水冷激处理对香蕉耐冷性有一定诱导作用，进而延缓低温下香蕉冷害的发生。

在本应用色谱条件方法开发过程中，氯酸根保留和峰形都很好，但高氯酸根的保留与流动相 pH、有机相比例等有关。比如，调节流动相体系至中性时（10 mmol/L 甲酸铵，pH 6.7）时，调整有机相（乙腈）比例至 90%，高氯酸根依然在死时间附近出峰。因此，利用 HILIC 模式开发液相方法时，可以通过 pH、盐浓度（离子强度）和有机相等的的优化来调整选择性，以获得更好的保留和分离。

德国耶拿multiN/C系列TOC分析仪，采用专利高聚焦NDIR检测器，VITA信号处理技术，灵敏度高，准确性好。测定含有10mg/LTOC的不同盐溶液（硝酸盐，硫酸盐，磷酸盐，氯化物），回收率接近100%。

本文基于赛默飞TSQ Fortis Plus液相色谱串联三重四极杆质谱平台，建立了生活饮用水中高氯酸盐含量测定的方法。方法选用赛默飞特色的Acclaim Trinity P1柱，以乙腈-水（水相中含20mM甲酸铵）为流动相进行梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温35 ℃，对常见水样进行方法学验证评估。结果表明在0.5~100 ng/mL浓度范围内，高氯酸盐的线性相关系数为0.9996；在5、20.0、50.0 ng/mL三个不同浓度水平样品加标回收率在89.6%–100.3%之间，相对标准偏差在2.0% 以内。该方法前处理简单，检测结果稳定可靠，灵敏度高，能够满足生活饮用水、地表水、地下水、瓶装水等水质中高氯酸盐的检测。

本实验尝试使用资生堂手性分析色谱柱Chiral CD-Ph对客户提供的对羟基苯甘氨酸甲酯D、L型进行手性拆分。分别尝试使用甲醇及乙腈体系，并多方调整流动相盐浓度及有机相比例等条件，最终在乙腈体系下得到最佳结果，如图1、2。 综上所述，使用Chiral CD-Ph色谱柱能对对羟基苯甘氨酸甲酯D、L型得到良好拆分，分离度为1.68。

Auto• Blend™ Plus技术助力IEX方法开发和稳定性测试。离子交换色谱(IEX)被广泛用于蛋白质生物治疗药物电荷异构体分析。该技术能够区分带有不同表面电荷的异构体(包括等电点(pI)相同的物质)，还能收集馏分用于进一步分析，因此对生物制药行业来说实用性极强。优化每种蛋白治疗药物的IEX方法时，都需要考量各种参数。智能的方法设置可显著缩短方法开发和稳定性测试所需的时间。Waters™ Auto• Blend Plus技术可通过混合浓缩溶剂液制备特定pH的流动相，同时控制盐的浓度，优化分离效果。沃特世的四元溶剂输送系统(即ACQUITY ™ UPLC™ H-Class、ACQUITY UPLC H-Class Bio、ACQUITY Arc™ 和ACQUITY Arc Bio)均采用该技术混合流动相。如图1所示，只需四瓶溶剂(浓缩的酸、碱、盐和水)，系统就能根据pH或盐浓度提供所需的梯度。本应用纪要展示了Auto• Blend Plus技术对IEX方法开发和稳定性测试的益处。