变肾上腺素类化合物

复方盐酸阿替卡因注射液为复方制剂，是盐酸阿替卡因与肾上腺素的灭菌水溶液，作为口腔用局部麻醉剂，适用于涉及切骨术及粘膜切开的外科手术过程。[img=,144,61]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191545418661_4518_2222981_3.jpg!w144x61.jpg[/img][color=black] [/color][color=#3e3e3e]肾上腺素 L(-)-Epinephrine M.W. : 183.2 [/color][b]在国家药品标准（YBH17082004-2015Z）[/b]中，在对复方盐酸阿替卡因注射液中肾上腺素进行分析时，使用[b]甲醇-水[/b]进行梯度洗脱，但由于[b]肾上腺素极性较强[/b]，即使初始梯度为纯水相条件，肾上腺素仍紧邻死时间出峰，[b]保留不佳，易受到溶剂峰干扰，无法进行准确定量。[/b]我们分别尝试使用反相柱CAPCELL PAK C18 MGII加离子对试剂，以及直接使用离子交换色谱柱CAPCELL PAK SCX UG80两种方式，对复方盐酸阿替卡因注射液中肾上腺素和硫酸肾上腺素进行保留分析（复方盐酸阿替卡因注射液由客户提供）。CAPCELL PAK C18 MGII液相色谱柱，其采用高纯度硅胶作为基质，通过减少硅胶微细孔的数量来增大有效比表面积；并且采用新包被技术Ultimate Polymer Coating，实现了对硅醇基极大程度的封锁，兼具分离性能和普适性能，通用性非常好。CAPCELL PAK SCX UG80是强阳离子交换柱，使用高纯度硅胶，填料中金属杂质很少，使配位化合物的吸附得到了极大程度抑制，兼具聚合物和硅胶填料的优点。[b][color=#0070c0]实验方法[/color][color=#0070c0]方法一[/color][color=#0070c0]使用[/color][color=#0070c0]CAPCELL PAK C18MGII[/color][color=#0070c0]色谱柱[/color][color=#0070c0]+[/color][color=#0070c0]离子对试剂[/color][/b]如图1，对肾上腺素对照品溶液进行分析，肾上腺素主峰保留时间为5.69 min，拖尾因子为1.19，理论塔板数为12538。在相同色谱条件下，尝试对亚硫酸肾上腺素标准品及注射液中的亚硫酸肾上腺素进行分析。如图3，亚硫酸肾上腺素标准品溶液能够得到良好分析结果，注射液（客户提供的样品）中未明显见亚硫酸肾上腺素出峰，保留时间为3.55min，拖尾因子为1.14，理论塔板数为14955。[b][color=#0070c0]方法二[/color][color=#0070c0] CAPCELL PAK SCX UG80[/color][color=#0070c0]色谱柱[/color][/b][color=#000000]考虑到使用离子对试剂的流动相条件具有流动相配制麻烦、有损色谱柱寿命、平衡时间长等缺点，我们也尝试使用键合磺酸基团的强阳离子交换柱 ——CAPCELL PAK SCX UG80进行分析。[/color][color=#000000]如图4，在流动相中添加磷酸二氢铵，通过对盐浓度进行调整，在5 mmol/L磷酸二氢铵（磷酸调pH=2.5）条件下，亚硫酸肾上腺素保留时间为3.32 min，然而出现峰形拖尾现象，拖尾因子为2.0，不如CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱添加离子对试剂所得分析结果好。[/color][align=center][/align][align=left][img=,400,284]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191547381421_926_2222981_3.jpg!w584x416.jpg[/img] [img=,400,276]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191548310561_8067_2222981_3.jpg!w572x395.jpg[/img][/align][align=left][img=,400,166]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191547576748_522_2222981_3.jpg!w612x254.jpg[/img] [img=,400,167]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191548525761_4184_2222981_3.jpg!w624x262.jpg[/img][/align][align=left]图1 MGII分析肾上腺素对照品溶液结果（离子对条件） 图2 MGII分析注射液结果（离子对条件）[/align][align=center][/align][img=,400,258]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191550354951_2539_2222981_3.jpg!w644x416.jpg[/img] [img=,400,250]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191555486850_3396_2222981_3.jpg!w644x403.jpg[/img][img=,400,147]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191551260881_9828_2222981_3.jpg!w696x256.jpg[/img] [img=,400,164]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903191556163846_9739_2222981_3.jpg!w632x260.jpg[/img][align=left]图3 MGII分析亚硫酸肾上腺素标准品和注射液结果（离子对条件） 图4 SCX UG80分析亚硫酸肾上腺素对照品溶液和供试品溶液[/align][align=left][/align][align=left]综上实验结果，使用中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5 4.6 mm i.d. × 250 mm，在流动相中添加5 mM辛烷磺酸钠、30°C柱温条件下进行梯度洗脱，能够实现复方盐酸阿替卡因注射液中肾上腺素和亚硫酸肾上腺素的良好保留与分析。[/align][b][color=#0070c0][/color][/b][align=left][b][color=#0070c0] [/color][color=#0070c0] [/color][/b][/align]

请问一下我检测的都是标准品，为啥肾上腺素与多巴胺会出现两个锋，之前没换柱子走出来一个峰还有酪氨酸基线为什么呈波浪状这些都是标准品 自己现在刚接触[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url] 所以不知道怎么回事谢谢了[img=,149,198]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811092107209705_8638_3506169_3.png!w149x198.jpg[/img]

维权声明：本文为chuanxinlian原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。浅谈甾体类化合物的分离与结构鉴定 在植物环己烷或石油醚萃取部分，有很多小极性的化合物，并且这些化合物之间的极性差异也很小，分离时可能会遇到很多困难，即使分离得到了单体化合物，结构解析时也是一件很不容易的事，不管是氢谱还是碳谱中，都在高场区出来一堆信号，有时氢谱中的积分都不一定能积准，碳谱的高场区就像个小树林，密密麻麻的全是信号，看着就头疼。由于我曾从一植物的环己烷层中分离得到了多个甾体类化合物（主要为豆甾类），下面就我在实验过程中在分离和解析甾体类化合物的一点经验跟大家分享一下。1．甾体类化合物的分离纯化 由于我做的这一部分的成分极性很小，其中的甾体类化合物均不连糖，并且我所得到的化合物的结构很相似，有的只相差一个双键或只差一个羟基或羰基，总之，结构类似，极性也就相差不大，分离也就不容易了。由于极性小，我采用的分离手段只能局限在硅胶柱或板、凝胶柱（Sephadex LH-20）。首先把粗浸膏过一遍大的硅胶柱，已达到按照极性大致砍一下段的效果，由于环己烷萃取部分有很多色素，所以接下来采用过Sephadex LH-20柱将其中的色素除去，最后得到多种没有色素的流分，这里面的成分也是很杂的，有多种类型的化合物，如黄酮类、二萜内酯类、甾体类等，由于各类型化合物间的分子量有很大的差异，接下来就可以过一个又细又长的Sephadex LH-20柱，流速一定不能太快，并且流分要接的很细，我们一般用5ml的小瓶接，尽量避免不必要的交叉。这样就有可能将甾体类化合物与其他类型的化合物分开了，最后一步，在硅胶薄层板上看一下，如果成分简单，分离度良好，就采用制备薄层色谱，将单体化合物得到。 需要指出的是，制备薄层时，由于很多甾体类化合物在紫外灯下没有任何紫外吸收，这时千万不要认为没有紫外吸收的地方就没有化合物。比如这块板上的： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010220007_252894_1745326_3.jpg 此时，一定要在点小硅胶板时用通用显色剂显色，确定哪里有点，该流分总共有几个点，各个点之间的上下关系，有没有紫外吸收之类的，分析清楚了，最后再去做制备薄层，如果有没有紫外吸收的点，在刮板前可以先用玻璃或报纸将板的大部分挡住，在板的另一边显色，找到该点的具体位置，以免漏掉重要的点。2．豆甾类化合物的结构解析 因为我分到的甾体类化合物主要为豆甾类，所以我就只介绍此类化合物的结构解析了。下面是我在解析过程中总结的该类化合物的谱学上的特点：2.1 氢谱中最高场的信号为18-CH3，化学位移一般在0.7ppm左右。2.2 碳谱中最高场的信号同样为18-CH3，化学位移一般在12.0ppm左右。实例列举：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010220010_252897_1745326_3.jpg1H-NMRhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010220011_252898_1745326_3.jpg13C-NMRhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010220011_252899_1745326_3.jpg2.3 甾体母核上的羟基的取向不同，与其所连的碳的化学位移也会有所不同，一般情况下，α-OH连接的碳化学位移一般小于70.0ppm，而β-OH连接的碳化学位移一般大于70.0ppm。举例如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010220011_252900_1745326_3.jpg2.4 如果你拿到一套新的谱图，看到高场区有很多聚集在一起的碳氢信号，并且氢碳谱中最高场的化学位移值分别在12.0和0.7ppm左右，在你不确定它什么类型的化合物的时候，可以考虑一下是不是甾体类化合物（三萜类最高场的碳信号在18ppm左右，基本上没有12ppm左右的碳信号）。最后，希望我的原创能给某些人起到抛砖引玉的作用。

求助大神，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]测酚类化合物 2,4-二硝基酚、4-硝基酚、2-甲基-4,6-二硝基酚、五氯酚这几种物质在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]上一开始可以正常出峰，但是响应衰减的很快，标曲不成线性（下面图片中的四个峰是一条标曲五个点的色谱图，只有最高点明显，倒数第二个就衰减很多了）；后来再打干脆不出峰了；紧接着我换了新的隔垫、衬管，切了一段色谱柱，清洗了离子源，还是不行[img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em63.gif[/img]。参考HJ744用衍生化的方法，但是打出来的色谱图上根本提取不到衍生后的目标离子，一开始衍生溶液没有完全浸入水浴，后来换了顶空瓶，全部浸入水浴。难道是氮吹浓缩的时候流速太快吹飞了吗？还有个现象，酚类化合物的标准品放在室温时间长了会变黄，时间越久越黄，是标准品变质了吗（刚从冰箱取出来的时候没有颜色）？[img=,690,373]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/04/202004101650128460_4443_3471664_3.png!w690x373.jpg[/img]

[align=left]近期我们遇到了一种硼酸酯类的化合物1，采用实验室通用方法进行检测的时候发现会出现一个很大的杂质2，根据工艺分析不可能会出现这么大的杂质，定量核磁检测发现该物质含量比较高，并不存在这个大的杂质，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]去鉴定后发现该杂质为该化合物的水解杂质2（如图1）[/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211090922409286_9676_5310417_3.png[/img][/align][align=center]图 1：流动相A: 0.05%TFA 流动相B: ACN条件下的样品色谱图[/align]为此我们判定肯定是检测方法出现了问题，首先我们排除稀释剂的影响，稀释剂为乙腈，做了相应的稳定性实验，发现临用新配情况下该杂质仍旧很大。由此我们判断可能是流动相导致该化合物1不稳定会水解生成杂质2。考虑到硼酸酯类化合物可能对酸不稳定，在酸性条件下会被催化水解成硼酸类化合物和相应的醇，因此打算更换其他流动相。首先我们尝试了碱性体系（如图2），由于该化合物1为酸性化合物，在碱性条件下保留较弱，但是从图谱可以看出水解杂质仍旧比较大，由此可以判断在碱性条件下该化合物1也并不稳定。[align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211090922406680_5272_5310417_3.png[/img][/align][align=center]图 2：流动相A: 0.1%NH4OH 流动相B: ACN条件下的样品色谱图[/align][align=left]随后我们又尝试了中性体系，采用中性体系的流动相进行测试（如图3）。从图3（a）可以看出，水做流动相条件下，由于流动相的离子强度不够导致峰形丑，还可以看出水解杂质2仍旧存在，但从（b）中可以看出当用乙酸铵作为流动相时候，峰形对称，水解杂质2也比较小。[/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211090922412671_1242_5310417_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211090922413707_3568_5310417_3.png[/img][/align][align=center]图 3：（a）流动相A: 水 流动相B: 乙腈 （b）流动相A: 10mM 乙酸铵水溶液 流动相B: 乙腈条件下的样品色谱图[/align][align=left]根据以上结果我们猜测：该化合物对酸碱都不稳定，但中性条件下只在乙酸铵体系下稳定，为此我们从化合物1本身及水解杂质2的结构分析，该化合物1中的硼原子为sp2杂化，还存在一个空的p轨道，这个空轨道易于接受水和醇等带有未共用电子对的亲核试剂的进攻而使硼酸酯水解（[font='adobeheitistd-regular'][size=13px]其机理见方程式[/size][/font][font='dlf-32769-4-2073904376+zipdfa-8'][size=13px]（[/size][/font][font='dlf-3-0-25052658+zipdfa-84']1[/font][font='dlf-32769-4-2073904376+zipdfa-8'][size=13px]））。[/size][/font]继续与水作用，生成相应的醇和硼酸。[/align][align=left][/align][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]通过对此分析，似乎已经能够解释化合物1对碱不稳定的原因，即羟基中氧上的孤对电子会进攻硼的空轨道导致其水解，至于为什么在乙酸铵体系中是稳定的我们推测原因是乙酸铵的氮原子会与硼原子形成配对键，从而使该化合物1稳定。 虽然只是硼酸酯类化合物中的一种物质的检测，但是根据检测结果和分析可以为以后的该类化合物的方法开发提供思路，即通在对硼酸酯类的化合物进行方法开发时候，尽量不要采用酸碱体系的流动相，可以考虑用乙酸铵缓冲液作为流动相进行检测。[align=left] [/align]

维权声明：本文为环烯醚萜原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。环烯醚萜类化合物分离纯化心得体会基本介绍 环烯醚萜（iridoids）为臭蚁二醛（iridodial）的缩醛衍生物。臭蚁二醛是由伊蚊（Iridomyrmex detectus）的防收性分泌物中分得的物质。自1958年的Halpem和Schmid确定的环烯醚萜的基本骨架以来，各国学者对该类化合物作了大量深入的研究。环烯醚萜类化合物具有多种生物活性，近来受到极大关注，发展也很迅速。 环烯醚萜类主要分为：环烯醚萜类、裂环环烯醚萜类、3,4-位无取代的环烯醚萜类、聚合环烯醚萜类等等。本人做的是普通类的环烯醚萜类化合物，且以其苷居多，做的比较浅，下面斗胆一谈，各位看官莫要见笑。提取部分 环烯醚萜苷类化合物在醇（甲醇、乙醇）中溶解度较好，部分苷类在水中溶解度也很好。本人在对某植物进行提取的时候，实际上并非针对这类化合物，采用的是60%的乙醇/水，是为了兼顾各类成分。后来在实验过程中发现，60%的乙醇/水条件下，这类化合物的提取率是很高的。 注释：其实如果要针对性分离，可以将提取液简单处理后进行D101大孔柱色谱，对环烯醚萜类化合物进行富集。萃取部分 提取之后，将药液进行浓缩，至无醇味混悬于水中，然后进行萃取。萃取的过程为：等体积的环己烷、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取三次，合并各层提取液浓缩得各层浸膏。就目前实验进展情况来看，环烯醚萜苷类化合物主要集中在正丁醇层，水层也有一部分（我目前还没开始这部分工作）。 注释1：萃取的过程，涉及到溶剂的回收，由于这类化合物在高温下不太稳定，所以用旋转蒸发仪进行减压回收溶剂的时候，温度不能过高，我采用的温度是60度（其实60度已经很高了，但是没办法，不设60度，正丁醇回收不了）。 硅胶柱色谱 正丁醇层进行硅胶柱色谱分离，采用氯仿/甲醇梯度洗脱，样品500g，拌样硅胶1500g，柱床硅胶500g，洗脱梯度为50：1→20：1→10：1→5：1→2：1→1：1→0：1。实验的过程中发现，环烯醚萜类化合物，主要集中在氯仿：甲醇＝10：1和5：1部分。 注释1：选择硅胶柱色谱，也是人之常情，此处也可选择D101大孔柱色谱，对这类化合物进行富集； 注释2：选择氯仿/甲醇系统，是因为经过小试，此系统对样品分离较好，最重要的，样品在此系统中成点性很好； 注释3：拌样1500g，柱床500g，你没有看错，我没有写错。书上说，拌样：柱床在1：1-1：10甚至1：20或者1：50，而我这里却是3：1。我可以很负责任地告诉你，没有必要按书上的说法，柱床500g足够了，分离效果一点也不差。以前做另外一个植物，拌样用了3000g，柱床才600g，分离效果也不差，一点问题都没有； 注释4：梯度的选择，建议6-8个。梯度太少，各流分成分可能过于复杂；梯度太多，后续分离麻烦。这种大型硅胶柱色谱，属于平常所说的“粗分”，不宜太多，不宜太少，不然就是给自己找麻烦。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010061143_249374_1745326_3.jpgODS柱色谱 包括开放型ODS柱色谱和中低压型ODS柱色谱，其实原理一样，只是规模大小不同而已。 我将5：1洗脱的样品进行中低压ODS柱色谱，采用甲醇/水梯度洗脱，水→10%甲醇/水→20%甲醇/水→30%甲醇/水→50%甲醇/水→甲醇，实验结果表明，ODS柱色谱对此类化合物具有良好的分离效果。 注释1：环烯醚萜苷类化合物一般极性较大，一般集中在10%甲醇/水、20%甲醇/水、30%甲醇/水部分； 注释2：水洗下来的，一般为糖苷类化合物，我从此流分中分离得到几个糖类化合物（题外话）； 注释3：ODS柱色谱可以多次进行，反复纯化，利用ODS柱色谱可以得到部分单体化合物；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010061144_249375_1745326_3.jpg（注：此图为未合并相同流分前的点板情况）制备液相（反相） 从ODS柱色谱上洗脱的样品，经过分析，可以考虑进行制备液相，半制备液相等等。 事实上，一般而言，PHPLC也是获得环烯醚萜类单体化合物最重要的手段之一。 流动相可采用甲醇/水，若峰形不好，可加入少量乙酸改善（这一招屡试不爽）。 波长的选择，可以使用230nm、240nm都可以（我们有PAD检测器，验证过）。其它一些化合物，由于连上芥子酰基，对羟基香豆酰基，还可以选择320nm的吸收。 色谱柱一般是C18的居多（目前未使用过其它柱子），品牌好像都还行（我们主要使用YMC）。凝胶其它填料 由于分离原理的缘故，使用凝胶对环烯醚萜这一类化合物（分子量相差不大，且结构极为类似）进行分离，前景似乎并不明朗。但是，用凝胶将这一类化合物与其他类型的化合物分离，效果还是很不错的。 其它如大孔树脂，前面提过，用来富集是个不错的选择；聚酰胺，我没有使用过，不过从其分离原理来看，对这类化合物不会很敏感。显色剂的选择 部分环烯醚萜类在254nm紫外下有暗斑，这个很实用； 最常用的是浓硫酸-香草醛显色剂：母核上有羟基取代的显蓝色；母核上无羟基取代显紫红色（非绝对）； 其它显色剂如硫酸乙醇、碘等等都可以，我个人偏爱浓-香显色剂。结构测定与解析（简） 环烯醚萜类化合物进行NMR测试，首先氘代甲醇，这个没有任何疑问。 我在一些文献中，也看到一些特例，比如使用重水、氘代DMSO，这些基本可以忽略。 关于结构解析部分，此处不再赘述。