苯基丙氨基酸

[font=&][size=16px][color=#333333]点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-39905.html[/url]服务背景[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]氨基酸是饲料营养成分检测项目必检项目之一。作为动物生长发育过程必须营养元素之一，部分必需氨基酸只能从饲料中摄取。当然非必需氨基酸可以通过动物自身的氨基酸转换或细胞代谢合成。[font=&][size=16px][color=#333333]检测内容[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]苏氨酸(Thr)、蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)、胱氨酸(Cys)、异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯基丙氨酸(Phe)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)等。[font=&][size=16px][color=#333333]检测标准[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font][table][tr][td]产品名称[/td][td]检测项目[/td][td]检测标准[/td][/tr][tr][td]饲料[/td][td]苏氨酸(Thr)、蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)、胱氨酸(Cys)、异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯基丙氨酸(Phe)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)等。[/td][td]实验室方法[/td][/tr][/table][font=&][size=16px][color=#333333]我们的优势[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]菲优特检测服务形式委托检测：环境检测、食品/医药/保健品检测、化工检测、水产养殖检测、微生物检测等。科研服务：高校科研服务(氨基酸类、维生素类、脂肪类、糖代谢类、有机酸类、动/植物激素类、核苷酸类、生物胺类、花青素类、黄酮酚酸类、皂苷类、氮代谢类、植物提取物类、神经递质类等。生物项目研发(毒理测试、动物饲养、动物模型构建、保健食品功能性评价服务、动物实验技术服务等)。仪器共享：HPLC检测平台、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]检测平台、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]检测平台、动物实验服务平台。方法开发及咨询：实验室检测方法开发和应用、实验室管理咨询和培训、质量控制咨询与培训、实验仪器配置和选型等

如何分析多胺(2,2-二氨基二苯基甲烷,2,4-二氨基二苯基甲烷,4,4-二氨基二苯基甲烷,N-甲基二氨基二苯基甲烷)中水分的含量(应该是几十个PPM)??如果用KF滴定法怎么消除其碱性太强的现象??如果用水杨酸酸中和的话是不是生成水???我们现用的分析方法是加水杨酸然后滴空白再加样品测定水含量.这种方法有问题吗???

在做氨基酸测定时，用异硫氰酸苯酯做衍生试剂，多余的衍生试剂要除去，现请教各位氨基酸与异硫氰酸苯酯反应方程式是什么样的，在衍生1umol/ml氨基酸单标时应用的100mmol/l异硫氰酸苯酯衍生试剂的量是多少?三乙胺在反应中起什么作用，在反应中应用的1mol/l的三乙胺的量是多少？另外在反应中用正己烷进行萃取，那么加入正己烷的量又是多少呢?

1.1概述1.1.1氨基酸基本的理化性质 一、基本物理学性质 包括基本组成和结构、溶解性、酸碱性质、立体化学、熔点、沸点、光学行为、旋光性、疏水性等。 (一）溶解性质根据氨基酸侧链与水相互作用的程度可将氨基酸分作几类。含有脂肪族和芳香族侧链的氨基酸，如Ala、Ile、Leu、Met、Pro、Val及Phe、Tyr，由于侧链的疏水性，这些氨基酸在水中的溶解度均较小；侧链带有电荷或极性集团的氨基酸，如Arg、Asp、Glu、His、Lys和Ser、Thr、Asn在水中均有比较大的溶解度；但根据电荷及极性分析也有一些例外，如脯氨酸属于带疏水基团的氨基酸，但在水中却有异常高的溶解度。 （二）氨基酸的疏水性 氨基酸的疏水性，是影响氨基酸溶解行为的重要因素，也是影响蛋白质和肽的物理化学性质（如结构、溶解度、结合脂肪的能力等）的重要因素。 按照物理化学的原理，疏水性可被定义为：在相同的条件下，一种溶于水中的溶质的自由能与溶于有机溶剂的相同溶质的自由能相比所超过的数值。估计氨基酸侧链的相对疏水性的最直接、最简单的方法就是实验测定氨基酸溶于水和溶于一种有机溶剂的自由能变化。 一般用水和乙醇之间自由能变化表示氨基酸侧链的疏水性，将此变化值标作△G′。 不同氨基酸的△G′值如下表所示。当氨基酸的△G′值为正时，其侧链具有疏水性，倾向于处在蛋白分子的内部； △G′为负时，其侧链是亲水的，倾向于处在蛋白分子的表面。需要注意的是，赖氨酸通常是蛋白质分子中亲水性的氨基酸残基，但它的△G′是正值，这是由于它的侧链含有优先选择有机环境的4个-CH2-基。 （三）氨基酸的光学性质 氨基酸中的苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸分子中由于有共轭体系，因此可以吸收近紫外光。它们的最大吸收波长（λmax)分别为260nm、275nm、278nm；在吸收最大波长光线的时候还会发出荧光。

请教各位，在用异硫氰酸苯酯及三乙胺处理氨基酸标样，再用正己烷处理多余的衍生试剂后，衍生后的氨基酸标样的颜色是亮黄色且是在下层，这样是正确的吗？另外，PITC的乙腈溶液及三乙胺的乙腈溶液的放在冰箱保存吗？

请问老师:如何分析盐水溶液中的苯胺和多胺(2,2-二氨基二苯基甲烷,2,4-二氨基二苯基甲烷,4,4-二氨基二苯基甲烷,N-甲基二氨基二苯基甲烷)含量??含量在几个到几十个PPM

请问老师,如果用光谱的方法进行盐水溶液中的苯胺和多胺(2,2-二氨基二苯基甲烷,2,4-二氨基二苯基甲烷,4,4-二氨基二苯基甲烷,N-甲基二氨基二苯基甲烷)含量的测定,它们的吸收峰是多少???

急！最近在做18氨基酸查了一些资料，最后选择了异硫氰酸苯酯（PITC）衍生测18氨基酸但遇到不少问题，希望得到大家帮助！主要体现在丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸。。。。到脯氨酸不能很好的分离开，且峰形不好看理论板数不高，后面9个氨基酸又能很好的分离峰形好不知道是那里出了问题？流动相还是衍生过程？不知道你们能否提供一份成熟的方法，我好做下对比找到问题所在在此感谢！可发邮箱：liujian132008@yahoo.com.cn也可以提供意见！大家一起讨论讨论。

用打油诗记住所有氨基酸六伴穷光蛋，酸谷天出门，死猪肝色脸，只携一两钱。一本落色书，拣来精读之。芳香老本色，不抢甘肃来。六伴穷光蛋：硫、半、光、蛋→半胱、光、蛋（甲硫）氨酸→含硫氨基酸酸谷天出门：酸、谷、天→谷氨酸、天门冬氨酸→酸性氨基酸死猪肝色脸：丝、组、甘、色→丝、组、甘、色氨酸→一碳单位来源的氨基酸只携一两钱：支、缬、异亮、亮→缬、异亮、亮氨酸→支链氨基酸一本落色书：异、苯、酪、色、苏→异亮、苯丙、酪、色、苏氨酸→生糖兼生酮拣来精读之：碱、赖、精、组→赖氨酸、精氨酸、组氨酸→碱性氨基酸芳香老本色：芳香、酪、苯、色→酪、苯丙、色氨酸→芳香族氨基酸不抢甘肃来：脯、羟、甘、苏、赖→脯、羟脯、甘、苏、赖氨酸→不参与转氨基的氨基酸

小弟用液相色谱测氨基酸时，用2,4-二硝基甲苯衍生以后放入棕色容量瓶中，之后放入冰箱里面保存。可是过了4天以后再走样时候发现单标里面出来几个小峰，标品峰也变小了，而且峰型就像是2个峰没分开似的，想咨询一下大侠们这是不是衍生物发生了降解呀，谢谢！

最近在用异硫氰酸苯酯（PITC）检测氨基酸的时候出现了一个怪问题：17个氨基酸只有前面9种氨基酸可以出峰，剩下的氨基酸都不能出峰。液相条件什么都是一样的，换了新柱子问题仍然存在。一开始怀疑由于现在天气凉了衍生不充分，就放在25℃水浴中衍生2小时，问题仍然存在。让我很是苦恼。调整梯度程序、温度都不管用。液相也很正常。下面是我的液相条件：请各位高手帮忙啊！5色谱条件色谱柱: Sepax AA专用柱，4.6*250mm，由苏州赛分科技有限公司提供。检测波长:254nm。柱温:40℃。流动相A: 醋酸钠溶液：乙腈=93:7 （V/V）。流动相B: 乙腈：水=4:1（V/V）。进样量:5ul流速:1mL/min(注：分析结束后使用20%乙腈水溶液清洗，再用100%乙腈清洗后储存) 表1 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 100 0 2 100 0 14 93 7 29 70 30 32 50 50 33 0 100 39 0 100 39.1 100 0 45 100 0 6 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(设2个重复)6.1 17AA衍生准确量取氨基酸标准溶液400μl，置5.0ml塑料离心管中，加入三乙胺乙腈溶液(2.10)200μl，异硫氰酸苯酯乙腈溶液(2.11)200μl，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷800μl，振摇后放置10分钟，取下层溶液(PTC-AA)，用一次性注射器吸取上清液用0.45μm针式过滤器过滤。准确量取样品溶液400μl，置5.0ml塑料离心管中，加入三乙胺乙腈溶液(2.10)200μl，异硫氰酸苯酯乙腈溶液(2.11)200μl，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷800μl，振摇后放置10分钟，取下层溶液(PTC-AA)，用一次性注

山葡萄酒含有22种氨基酸，其中人体必需的8种氨基酸（指人体自身不能合成的氨基酸）有苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸等，总量为1350mg/L，占总氨基酸含量的45.6%，是一般葡萄酒的10~20倍；而一般葡萄酒只含有6~7种人体必需的氨基酸。

氨基酸的主要化学反应（一）茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)这是氨基酸的α-NH2所引起的反应。α-氨基酸与水合茚三酮一起在水溶液中加热，可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解，放出氨和二氧化碳，氨基酸生成醛，水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中，还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色，但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，因其α-氨基被取代，所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏，根据反应所生成的蓝紫色的深浅，在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。 （二）氨基酸与2,4-二硝基氟苯的反应 此反应又称桑格反应（Sanger reaction）。在弱碱性（pH 8~9）、暗处、室温或40℃条件下，氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯（缩写为FDNB）反应，生成黄色的2,4-二硝基氨基酸（dinitrophenyl amino acid，简称DNP-氨基酸）。该反应由F. Sanger首先发现。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应，生成一种二硝基苯肽（DNP-肽）。由于硝基苯与氨基结合牢固，不易被水解，因此当DNP-多肽被酸水解时，所有肽键均被水解，只有N-末端氨基酸仍连在DNP上，所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯，所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析，再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。（三）氨基酸与苯异硫氰酸（PITC）的反应 此反应又称艾德曼反应（Edman reaction）。在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸（phenylisothiocyanate, PITG）反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸（简称PTC-氨基酸）。在酸性条件下，PTC-氨基酸环化形成在酸中稳定的苯乙内酰硫脲氨基酸（phenylthiohydantoin，简称PTH）。蛋白质多肽链N-末端氨基酸的α-氨基也可有此反应，生成PTC-肽，在酸性溶液中释放出末端的PTH-氨基酸和比原来少一个氨基酸残基的多肽链。PTH-氨基酸在酸性条件下极稳定并可溶于乙酸乙酯，用乙酸乙酯抽提后，经高压液相层析鉴定就可以确定肽链N-末端氨基酸的种类。该法的优点是可连续分析出N端的十几个氨基酸。瑞典科学家P. Edman首先使用该反应测定蛋白质N-末端的氨基酸。氨基酸自动顺序分析仪就是根据该反应原理而设计的。（四）α-羧基的反应 氨基酸的α-羧基和一般的羧基一样，可以和碱作用生成盐，其中重金属盐不溶于水。氨基酸的羧基还能与醇类作用，被酯化生成相应的酯。酯化作用在人工合成多肽中常用来保护氨基酸的α-羧基。例如，氨基酸在无水乙醇中通入干燥氯化氢气体，或加入二氯亚砜，然后回流，生成氨基酸酯的盐酸盐。氨基酸的α-羧基被还原可产生相应的α-氨基醇，例如被氢硼化锂还原的反应。此性质在蛋白质一级结构的测定中是鉴定C-末端氨基酸的一种方法。（五）R基的反应 氨基酸的R侧链含有官能团时也能发生化学反应，例如丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸均为含有羟基的氨基酸，所以能形成酯。酪氨酸的R侧链含有苯酚基，具有还原性，所以可利用此性质定量地测定蛋白质。另外，苯酚基和组氨酸中的咪唑基具有芳香环或杂环的性质，能与重氮化合物（如对氨基苯磺酸的重氮盐）结合而生成棕红色的化合物，此反应可用于定性、定量测定。此外，半胱氨酸的侧链上的巯基（-SH）的反应性能高，在碱性溶液中容易失去硫原子并且容易被氧化而生成胱氨酸。另外，极微量的某些重金属离子，如Ag＋、Hg2+，都能与-SH基反应，生成硫醇盐，从而导致含-SH酶失活。

我按gb17378.5《海洋监测规范：沉积物》中测有机碳的方法，配制苯基代邻氨基苯甲酸指示剂，将0.5克苯基代邻氨基苯甲酸溶于2g/L的碳酸钠溶液中。但是苯基代邻氨基苯甲酸只溶解了一点点，加热也不行。做过相关实验的同行，请指点一二。

苯基代邻氨基苯甲酸是什么颜色的，今天买来的苯基代邻氨基苯甲酸有的怪怪的

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]测试2-苯基丙酸用什么柱子比较合适？

各位专家好，我刚接触拉曼光谱，现在需要检测鸡肉中的谷氨酸、丙氨酸等几种氨基酸做定量分析，有以下疑问，望了解这方面的各位专家解答：1：拉曼光谱仪能直接检测出鸡肉中的几种氨基酸吗（如谷氨酸、丙氨酸等）？ 大概有20种氨基酸，拉曼光谱的区分度怎么样？重现性怎么样？ 需要对鸡肉氨基酸进行提纯处理再测量吗？2：拉曼光谱能对某种氨基酸进行定量分析吗，如定量预测谷氨酸的含量（假设不同鸡肉中谷氨酸含量不同）？ 有专家说拉曼只能进行半定量分析，原因是什么呢？3：如果对氨基酸、脂肪等的拉曼光谱进行波峰归纳，有没有好的资料可以推荐？

0.2g N-苯基代邻氨基苯甲酸0.2g碳酸钠的100ml水中，加热溶解是先溶解0.2g碳酸钠，还是0.2g N-苯基代邻氨基苯甲酸，有顺序吗？再问一下，热水温度控制在多少？

用2,4-二硝基氟苯衍生测定氨基酸，可以把乙腈换成甲醇吗

小弟打算用HPLC测定氨基酸，用2,4-二硝基氟苯做衍生试剂，可是处理完氨基酸标准品以后发现每个氨基酸峰都有几个杂峰，想请教一下这是什么原因呢，用2,4-二硝基氟苯做衍生试剂的作用是什么呢，是是不同氨基酸衍生产物最后的吸收波长一样么？

氨基酸是氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物。无色晶体，熔点极高，一般在200℃以上。不同的氨基酸其味不同，有的无味，有的味甜，有的味苦。各种氨基酸在水中的溶解度差别很大，并能溶解于稀酸或稀碱中，但不能溶于有机溶剂。近年来，随着技术的发展，检测氨基酸的种类及含量的方法很多，目前测定氨基酸的方法主要有氨基酸分析仪法、高效液相色谱法、毛细管电泳法及液相色谱-质谱联用法等。本文主要是通过高效液相串联质谱法来对16种氨基酸的含量进行测定，方法简单，快速，不用柱前衍生，节省试剂和成本，为保健品中氨基酸的含量测定提供了新方法。1实验部分1.1 仪器和试剂 16种氨基酸的混合标准品，（包括丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸）安捷伦；乙腈（色谱纯）CNW；乙酸铵（色谱纯）；乙酸（色谱纯）。超声波清洗器（EQ-500）；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；BPZ-6090Lc型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（安捷伦1260）；色谱柱：安捷伦poroshell 120 EC-C18柱（4.6mm×50mm,2.7μm）；质谱（API3200）美国AB公司。1.2 色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂（柱长15cm，内径4.6mm，粒径2.7μm ）或同等性能的色谱柱；柱温：40℃；流速：0.5 ml/min；进样量：5μL ；流动相：流动相A：称取0.386g乙酸铵，加水500mL溶解，用乙酸调pH至3.5；流动相B：乙腈，梯度洗脱：时间（分钟）流动相A(%)流动相B(%)0.0090100.00-5.0090→8010→205.00-9.0080→9020→101.3质谱条件1.3.1以电喷雾电离源（ESI）阳离子模式，气帘气20psi，碰撞气6，喷雾电压5500V,离子源温度600°C，雾化气是50 psi，辅助气是50 psi，时间9min。1.3.2 16种氨基酸的质谱参数,见表1。表1 16氨基酸的质谱参数氨基酸Q1Q3TIMEDPEPCECXP丙氨酸90.144.2353510153精氨酸175.2116353010153天冬氨酸134.474354110153胱氨酸241.174.11002610153谷氨酸148.2102353010153组氨酸156.1110353510163亮氨酸132.386.1352610113异亮氨酸132.286352610113赖氨酸147.3130353010153蛋氨酸150.1104352510103苯丙氨酸166.4120352510143脯氨酸116.270353510143苏氨酸120.174.3354110153酪氨酸182.3136353510153缬氨酸118.272354110153丝氨酸106.160.23530101331.4 标准品溶液的配制量取16种氨基酸的混合标准品1ml，置于50ml容量瓶，加0.1%甲酸水定容，摇匀即得标准品贮备液。1.5 供试品溶液的制备 精密称取样品约0.1g，置于25ml磨口的具塞比色管内，加6mol/L盐酸15ml，加入0.2g苯酚，用旋转混合仪和超声仪使样品充分分散并溶解，充氮气，盖紧塞子，置于110℃±1℃的恒温干燥箱内，水解22小时，取出冷却，过滤，用纯化水冲洗比色管，将水解液全部转移至50mL容量瓶中，用纯化水定容至刻度，摇匀，精密吸取1mL于10mL容量瓶中，置于真空干燥箱内，于40℃～50℃减压干燥（真空干燥箱内放入五氧化二磷作为干燥剂），干燥后残留物用0.1%甲酸水定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。1.6 线性实验将标准品贮备液稀释成0.004nmol/μl，0.008nmol/μl，0.012nmol/μl，0.016nmol/μl，0.020nmol/μl浓度梯度，每个浓度以5μL注入色谱系统。1.7 精密度实验将标准品贮备液稀释至一定的浓度，按色谱、质谱条件进行测定，连续进样6次。1.8 加样回收率实验精密称取五分的供试品，每份加入0.020nmol/μl标准品溶液5ml,定容。以5μL注入色谱系统。1.9供试品的测定 把1.5制备好的供试品溶液，以5μL注入色谱系统。以标准液的峰面积和浓度，通过外标法做曲线算出样品的浓度。2 结果与讨论2.1 色谱行为由于保健品中的氨基酸，用高效液相荧光法要进行柱前衍生，成本很高而采用液质联用法，不需要衍生，可大大节约成本，用流动相（0.35g乙酸铵加水0.5L溶解，然后加入0.5L乙腈，混合，用乙酸调pH=3.5）时，5min就能把16种氨基酸全部流出。采用液质联用法，通过MRM模式进行母离子及相应的子离子进行检测，能达到准确的分离和定量，见图1 。 从左到右，分别为丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸。图1 16种氨基酸标准品的碎片离子色谱峰2.2 质谱行为在ESI(+)阳离子检测方式下，16种氨基酸的质谱定量分析，在质谱条件下，失去NH3形成+ 峰，或失去HCOOH重排生成+ 峰，从而进行色谱分离。2.3 线性回归方程和最低检测限以标准品的5个梯度浓度与其峰面积进行线性回归，拟合线性回归方程为Y=aX + b，相关系数r2 及最低检测限（S/N(信噪比)=3时，可测得标准品的最低检测限）见表2。表2 16种氨基酸线性回归方程、相关系数、最低检测限氨基酸Y=aX + b相关系数（r2）最低检测限（nmol/μl）丙氨酸Y=3.09e+006X + 6.95e+0030.99810.0013精氨酸Y=2.31e+007X + 1180.99990.0005天冬氨酸Y=3.45e+006X + 1.07e+0040.99760.0008胱氨酸Y=8.44e+005X + 1.72e+0030.99660.0006谷氨酸Y=7.6e+006X + 1.46e+0040.99840.0006组氨酸Y=7.58e+007X + 5.98e+0030.99990.0004亮氨酸Y=6.06e+007X + 5.24e+0040.99880.0001异亮氨酸Y=8.15e+007X + 6.26e+0040.99960.0001赖氨酸Y=1.24e+007X + 2.67e+0040.99780.0003蛋氨酸Y=1.34e+007X + 5.14e+0030.99890.0001苯丙氨酸Y=7.42e+007X + 4.08e+0040.99910.0001脯氨酸Y=7.9e+007X + 5.57e+0040.99970.0003苏氨酸Y=9.67e+006X + 2.49e+0040.99770.0003酪氨酸Y=1.76e+007X + 2.89e+0040.99920.0003缬氨酸Y=2.41e+007X + 3.31e+0040.99740.0003丝氨酸Y=1.06e+007X + 2.63e+0040.99810.00132.4 方法的精密度和重复性 取浓度0.012nmol/μl的16种氨基酸混合标准品连续进样6次。计算峰面积和保留时间的RSD值。结果见表3。表3 16种氨基酸峰面积和保留时间的相对标准偏差氨基酸峰面积RSD(%)保留时间RSD(%)丙氨酸4.480.57精氨酸4.670.34天冬氨酸4.570.44胱氨酸3.780.56谷氨酸3.360.24组氨酸3.330.13亮氨酸2.750.1异亮氨酸2.930.23赖氨酸4.790.43蛋氨酸3.920.09苯丙氨酸2.170.11脯氨酸4.540.28苏氨酸4.110.37酪氨酸3.610.13缬氨酸2.350.23丝氨酸3.280.162.5加样回收率实验，见表4。表4 16种氨基酸峰的回收率实验结果氨基酸平均回收率（%）RSD(%)丙氨酸94.114.05精氨酸82.912.73天冬氨酸82.694.66胱氨酸83.153.95谷氨酸98.234.1组氨酸78.671.61亮氨酸98.284.99异亮氨酸102.713.03赖氨酸98.584.49蛋氨酸95.983.34

[font=宋体]蛋白质是生物体赖以生存的物质，而蛋白质又是由氨基酸所组成除含有组成蛋白质的各种氨基酸外，还有游离存在的各种氨基酸。氨基酸含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。是组成蛋白质的基本单位，氨基酸种类分为：蛋白氨基酸、蛋白质稀有氨基酸、非蛋白质氨基酸。随着对蛋白质及多肽研究的日趋重视，氨基酸分析技术也得到了飞速发展。[/font][font=宋体]蛋白质氨基酸分为：中性氨基酸（一氨基一羧基酸）、碱性氨基酸[/font]([font=宋体]二氨基一羧基酸[/font])[font=宋体]、酸性氨基酸（一氨基二羧基酸）和杂环氨基酸四类；中性氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、胱氨酸（二氨基二羧基酸）；酸性氨基酸：天门冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷酰胺；碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸；杂环氨基酸：脯氨酸、组氨酸等二十种。其中缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和赖氨酸是八种人体必需氨基酸，不能自身合成，必须由食物供给；当食物缺少这些氨基酸时，正常生长发育就受到抑制。[/font][font=宋体]蛋白质稀有氨基酸：一些特殊类型的蛋白质水解液中分离出来的少数其他氨基酸，是正常氨基酸的衍生物，数量不会很多。如胶原蛋白的水解液中[/font]4-[font=宋体]羟脯氨酸，就是脯氨酸的衍生物。[/font][font=宋体]非蛋白质氨基酸：存在于各种细胞或组织中，游离状态或者是结合状态，但并不存在于蛋白质中，如γ[/font]-[font=宋体]氨基丁酸、鸟氨酸等大约[/font]150[font=宋体]余种。[/font][font=宋体]因此氨基酸分析技术是生命科学研究中重要的技术之一。[/font][b][font=宋体]氨基酸自动分析仪[/font][/b] [font=宋体]主要应用在农业（种子、饲料）、食品、水产、医药、生化、医学等领域。如日立全自动氨基酸分析仪[/font]L-8900[font=宋体]、英国[/font]Biochrom 30+[font=宋体]、德国赛卡姆（[/font]sykam[font=宋体]）全自动氨基酸分析仪[/font]S433D[font=宋体]等。适合蛋白质含量为常量的，大批量样品的分析测试。[/font][font=宋体]氨基酸自动分析仪原理：柱后衍生法，采用离子交换树脂（强酸性阳离子交换树脂[/font]Na+[font=宋体]型[/font][font=宋体]）分离，茚三酮醋酸溶液柱后衍生。不同氨基酸对树脂的亲和力如下：碱性氨基酸[/font][font=宋体]芳香族氨基酸[/font][font=宋体]中性氨基酸[/font][font=宋体]酸性氨基酸及羟基氨基酸，即氨基酸分析仪出风顺序如下：天冬门氨酸（[/font]Asp[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]苏氨酸（[/font]Thr[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]丝氨酸（[/font]Ser[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]谷氨酸（[/font]Glu[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]脯氨酸（[/font]Pro[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]甘氨酸（[/font]Gly[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]丙氨酸（[/font]Ala[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]胱氨酸（[/font]Cys[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]缬氨酸（[/font]Val[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]蛋氨酸（[/font]Met[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]异亮氨酸（[/font]Ileu[font=宋体]）亮氨酸（[/font]Leu[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]酪氨酸（[/font]Tyr[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]苯丙氨酸（[/font]Phe[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]赖氨酸（[/font]Lys[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]氨（[/font]NH3[font=宋体]）组氨酸（[/font]His[font=宋体]）[/font]----[font=宋体]精氨酸（[/font]Arg[font=宋体]）。[/font][font=宋体]此方法优点是衍生自动完成，检出限在[/font]0.5 umol/L-2 umol/L[font=宋体]以下，衍生生成物稳定。缺点是检测用时偏长，每个样品检测时间通常为[/font]60[font=宋体]分钟。[/font][b][font=宋体]反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]邻苯二甲醛（[font=Arial, 微软雅黑 !important]OPA[/font]）柱前衍生荧光法[/font][/b][font=宋体]主要适用蛋白质含量为超微量、微含量样品（海水、沉积物、味精、食盐等）。[/font][font=宋体]邻苯二甲醛（[/font]OPA[font=宋体]）柱前衍生荧光法原理：采用样品通过衍生剂（[/font]125 mg OPA[font=宋体]溶解在[/font]5 ml[font=宋体]甲醇中，加入[/font]100 ul[font=宋体]β[/font]-[font=宋体]巯基乙醇，用[/font]pH=10.5[font=宋体]硼酸溶液定容[/font]25 ml[font=宋体]）衍生，进入反相[/font]C18[font=宋体]色谱柱分离，荧光检测器（λ[/font]ex=334 nm[font=宋体]，λ[/font]em=425 nm[font=宋体]）检测。[/font][font=宋体]此方法优点在于其超高的灵敏度，检出限在[/font]100 fmol/L-1 pmol/L[font=宋体]以下，衍生反应瞬间即可完成，检测用时短，一般[/font]35[font=宋体]分钟可检测完成一个样品。缺点就是衍生反应强度受气温、光强限制，衍生反应后[/font]1[font=宋体]分钟之内立刻进样，衍生反应时间超过二十分钟，氨基酸就会衰减很快，脯氨酸不能和[/font]OPA[font=宋体]生成衍生物。[/font][img]http://www.qdio.ac.cn/ggjs/jlhz/202110/W020211021379701035423.png[/img][b][font=宋体]反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]异硫氰酸苯酯（[font=Arial, 微软雅黑 !important]PITC[/font]）柱前衍生紫外法[/font][/b][font=宋体]主要适用蛋白质含量为半常量、微量（沉积物、生理体液、植物等）；本法采用样品[/font]200 ul[font=宋体]先加入[/font]100 ul[font=宋体]三乙胺乙腈溶液，再加入异硫氰酸苯酯乙腈溶液[/font]100 ul[font=宋体]，混均室温反应[/font]60[font=宋体]分钟，加[/font]400 ul[font=宋体]正己烷终止反应，取下层溶液过滤，进反相[/font]C18[font=宋体]色谱柱，紫外检测器[/font]254 nm[font=宋体]检测。[/font][font=宋体]此方法相对其他柱前衍生测定氨基酸的方法而言[/font],[font=宋体]在可操作上和低成本等方面具有明显优势，检出限在[/font]200 nmol/L-800 nmol/L[font=宋体]以下，相比柱前衍生[/font]OPA[font=宋体]法和柱后衍生茚三酮法检测样品的范围更加广泛，而且衍生方法简便，不受气温和光强的限制，衍生物单一、稳定[/font]-20[font=宋体]℃可储存数月，[/font]4[font=宋体]℃冷藏可放一周。缺点就是衍生时间太长，灵敏度不高。[/font][img]http://www.qdio.ac.cn/ggjs/jlhz/202110/W020211021379701034546.png[/img]

近几年来由于饲料工业迅猛发展，对饲料产品的品质控制已经从常规的营养分析转到了微量分析，对饲料品质的评价已经从粗蛋白含量的高低，改为观测各种氨基酸含量是否符合要求，所以准确测定氨基酸含量就成了关键一环。本实验验证不同品牌的氨基酸分析仪在不同的实验室测定氨基酸含量是否有差别。

最近看了一些文献，发现做氨基酸的方法非常多，这里罗列几种，不知道各位主要用哪种？由于大多数的氨基酸在紫外区没有吸收或只有微弱的吸收，为提高检测灵敏度和分离度，需要对氨基酸进行衍生化，这样才能被紫外或荧光检测器所检测。另外氨基酸极性非常大，无法用反相分析，通过衍生化也可以变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离。1、 HPLC 柱前衍生柱前衍生：邻苯二甲醛(OPA)衍生一级氨基酸、9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)衍生二级氨基酸色谱柱：AAA专用柱检测器：DAD（338nm OPA-氨基酸；262nm FMOC-氨基酸）2、 HPLC柱前衍生柱前衍生：异硫氰酸苯酯（PITC）色谱柱：AAA专用柱检测器：UV 254nm3、 HPLC柱前衍生柱前衍生：2,4-二硝基氟苯(DNFB）色谱柱：AAA专用柱检测器：UV 360nm4、 HPLC柱前衍生柱前衍生： 6氨基喹啉基N羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC）色谱柱：反相柱（C18）检测器：UV 248 nm5、 HPLC 柱后衍生柱后衍生：邻苯二甲醛(OPA) 色谱柱：AAA专用柱检测器：荧光或紫外6、 离子色谱法：HPAEC-IPAD（高效阴离子交换分离-积分脉冲安培检测）7、氨基酸分析仪

这几天用岛津的碳18分析氨基酸，用的异硫氰酸苯酯为衍生剂。 用水代替氨基酸标准品，会出现很多杂峰，所以想应该是衍生过程引进的。衍生的方法是 标准品+三乙胺乙腈溶液+异硫氰酸苯酯乙腈溶液 反应一个小时候用正己烷萃取各位大虾有更好的衍生方法么？本实验室没有氮吹仪，没法吹干哦

有没有兄弟伙用安捷伦的氨基酸试剂包测定氨基酸的？没有氨基酸分析仪，自由安捷伦1200二元泵要测定氨基酸，具了解氨基酸有专门的分析包，不知怎么样！

N-苯代邻氨基苯甲酸与N-苯基邻氨基苯甲酸这二种试剂是不是一样的。那位教师告诉我一下。谢谢！

本标准规定了烟叶中游离氨基酸的氨基酸分析仪测定方法。