保留与分离

核苷类化合物是一组极性很强的化合物，通常需要在高水流动相条件下进行分析。Aurorasil（曙光）混合模式色谱柱通过独特的极性改性技术，使得色谱柱能够在100%水相下运行，对核苷类化合物具有良好的保留、极其优异的选择性和分离度。

保留时间锁定 (RTL) 向导（Agilent OpenLab CDS 的一项功能）用于展示 Agilent 8860 气相色谱系统上的保留时间稳定性。使用环氧七氯作为锁定化合物分析含有 20 种氯代农药的标准品，显示出色谱柱维护事件前后出色的峰分离度与保留时间重现性。

为分离极性化合物而设计的反相T3色谱柱，有卓越的孔径及键合C18的浓度使其能100%兼容水相又对极性化合物有很好的保留。

本技术概述介绍了如何在 Agilent Intuvo 9000 气相色谱仪上对农药分析多反应监测 (MRM) 方法进行保留时间锁定，并随后更新保留时间，以利用 P&EP MRM 数据库。针对提取离子源或惰性离子源的一般工作流程遵循以下步骤：1. 生成保留时间锁定色谱图2. 利用 dMRM 方法和加宽的左/右 Δ RT 窗口采集数据3. 使用定量分析软件更新保留时间4. 将新保留时间导入 dMRM 方法5. 验证方法

本应用介绍了一种分析香精与香料化合物的方法。该方法采用由 Agilent Intuvo 9000 气相色谱和 Agilent 5977B GC/MSD 组成的气质联用系统 (GC/MS)，在恒流模式下使用反吹和热分离进样杆进行操作。在未进行样品前处理的情况下分析复杂基质（例如肥皂、香味蜡烛、牙膏、润肤露和织物柔软剂）中的香精与香料化合物。使用热分离进样杆将样品引入 GC/MSD 系统中。使用解卷积质谱图并结合线性保留指数结果进行鉴定。此外，还创建了一个超链接，将化合物名称与香精香料网站连接，以获取感官和化妆品信息。

保留时间的精度只受液相泵的影响。保留时间的精度对于对比结果很重要。尽管如此，有了UHPLC有直接控制这些因素的方法

Aurorasil MMP-H色谱柱可与水溶性维生素发生多种相互作用，增强了对亲水性、极性化合物的保留，从而在简单实验条件下，可实现对水溶性维生素类化合物的有效分离。本应用选取了7种水溶性维生素作为分析物，旨在考察Aurorasil MMP-Z色谱柱对强极性化合物的保留能力。由于该类化合物极性很强，传统C18柱对其保留较弱，部分组分很难实现基线分离。Aurorasil MMP-Z色谱柱可与水溶性维生素发生多种相互作用，增强了对亲水性、极性化合物的保留，并提供独特的选择性。

在分析方法开发中，色谱柱的选择会对分析物的保留行为造成很大影响。因此，为获得最佳分离，较为理想的方法是对具有不同保留行为的多种色谱柱进行研究。LabSolutions MD是一款分析方法的开发支持软件，基于分析质量源于设计（AQbD）并充分考虑了科学依据和风险，为高效的分析方法开发提供支持。基于AQbD的分析方法开发由分析方法的初筛、优化和稳健性评价等阶段组成。本文将介绍通过绘制多个品牌的C18色谱柱的设计空间，高效筛选色谱柱的示例。具体而言，针对6个品牌的色谱柱，通过整个变化区域内的设计空间，对综合改变流动相和梯度条件等各种参数时的分离选择性差异进行了可视化。由此，明确了可良好分离的区域，并能够以更少的分析次数搜索出最佳的色谱柱。结果表明，与其他C18色谱柱相比，Shim-pack Arata C18具有独特的分离选择性。

本应用选取了15种含有不同取代基的苯酚类化合物作为分析物，旨在考察Aurorasil MMP-Z色谱柱对酚类化合物的选择性和保留能力。从下图中可以看出，与C18色谱柱相比，AurorasilTM MMP-Z色谱柱对苯酚类化合物表现出更为出色的分离效果。

改善分析残留溶剂的保留时间和峰面积重现性，提高灵敏度因为许多溶剂对人体健康有害，故国家和国际法规机构，如美国食品与药品管理局（U.S. FDA）、美国药典（USP）和国际协调大会（ICH）都要求对药物产品中的残留溶剂进行分析。基于可能的危害性，溶剂被分为三类：一类溶剂应当避免，二类溶剂应当限制，三类溶剂毒性较低。为了保证安全，要求残留溶剂的最低限量会越来越低，这就需要越来越灵敏和准确的分析方法。 本文使用的系统由Agilent 7890A GC和Agilent G1888自动顶空进样器（HS）组成。7890A上的EPC辅助模块（HS样品瓶压力控制）和双模式PCM模块（HS出口的反压控制）用于改善顶空进样性能。

本实验研究了用苯基键合硅胶毛细管电色谱分离五种核苷混合物时几种实验参数（PH值、电离强度、水-有机物缓冲液中有机改性剂的含量）对电渗流（EOF）、保留时间、保留因子的影响。本文说明了CEC作为一种解决复杂的中性和可电离溶质混合物分离的方法和短柱进样可作为一种减少分离时间的方式。

当大家在做分离纯化时遇到水溶性较好的样品首先会采用什么分离纯化方法进行分离呢？这里小编主要讲一些个人小经验，通常小编会优先选择C18 色谱柱进行尝试，因为该色谱柱具有更好的普适性，可解决80%左右的分离纯化任务，并且具有令人满意的分离度，因此成为最广泛应用的分离纯化方法，但它有自己的短板即采用高比例水相作为流动相时会导致疏水塌陷现象，使色谱柱瞬间保留能力下降甚至无保留作用，当遇到这种情况时小编一般会采用C18 AQ柱进行再次尝试。

本研究采用浸出法结合元素生物成像和物种分析，以了解用线性或大环钆基造影剂治疗的鼠肾脏中存在的钆化学形态。将新鲜冷冻的肾脏薄片浸入水中，冲洗出亲水性物质，然后通过激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱法进行分析。通过亲水相互作用液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析水萃取钆物种。水溶性物质的信息不仅可以从完整的肾脏中获得，还可以追溯到其在组织中的定位。在用钆丁醇治疗的纵向肾脏切片上，发现水不溶性、永久性Gd沉积主要位于肾皮质，而水溶性物质则位于髓质，在注射后1年内含有完整的造影剂。此外，钆二胺处理的大鼠肾脏样品显示，皮质和髓质中的Gd水不溶性沉积更多，而水溶性部分中完整造影剂的浓度在12个月后低于检测限。总之，这种快速方法允许水溶性和不溶性钆沉积之间的空间分辨区分，因此能够对钆的保留和运输行为产生新的见解。

在生物医药领域，磁珠分离技术由于其强大的功能性被广泛应用，可用于细胞分离、核酸提取、细胞活化与扩增等方面。其中细胞分离磁珠的使用可以通过其阳性、阴性的特质，温和地分离出高产量的、纯的、具有活性和功能性的细胞，避免让细胞穿过致密的分离柱，使得分离的细胞保留其天然特征。然而引入磁珠进行分离时常常面临一些尴尬的问题，例如磁珠残留。如何对细胞分离过程中残留的磁珠进行筛选与识别，胤煌科技(YinHuang Technology )从实际应用角度出发，推出YH-MIP系列显微计数图像法粒度分析仪，助力细胞分离磁珠残留精准识别。

采用由 12.01 版 ACD/AutoChrom 软件控制的 Agilent 1200 系列方法开发解决方案开发的分析方法，分离含水杨酸及其已报道工艺杂质的样品。在 AutoChrom 的控制下，将色谱柱置于 4 个温控区域中时，色谱仪能够筛选最多 7 种色谱柱、13 种缓冲液和 2 种有机溶剂。该软件可帮助安排最佳的后续实验，使分析人员能够获取成功几率最高的实验条件，专注于快速开发方 法。本研究采用五种流动相改性剂对三种色谱柱（Agilent ZORBAX StableBond SB-C18、ZORBAX Eclipse Plus C18 和 StableBond SB-Aq）进行了筛选。在整个实 验过程中，温度保持在 25 ° C。首先对 15 种溶剂柱实验进行了筛选。随后开展了若干次实验来建立保留模型。最终获得了在 3 分钟内完成等度分离的解决方案。

本实验采用电子舌测定鲜味，以及超纳滤、RP-HPLC从风干武昌鱼中分离纯化出纯度均一的鲜味肽，MALDI-TOF-MS、 氨基酸自动分析仪、 FTIR测定鲜味肽的分子质量、 氨基酸组成和二级结构， 探讨鲜味肽结构与风味的关系， 以为风干武昌鱼的标准化生产提供科学指导。

有机光电材料是指具有光电转换功能、光电活性的有机材料。广泛应用于有机发光二极管、有机晶体管、有机太阳能电池、有机存储器等领域。有机光电材料通常是富含碳原子、具有大π共轭体系的有机分子，分为小分子和聚合物两类。有机π-共轭材料具有柔性、易修饰以及可大面积制备的特点,在有机电致发光器件、有机场效应晶体管、有机光伏电池以及有机传感等领域具有广阔的应用前景,因此引起了科学家们的广泛关注。引入杂原子是实现有机π-共轭材料高性能化和多功能化的重要方式。利用杂原子与π-共轭体系间特殊的轨道相互作用及其自身空间结构上的特点,能够有效地调控有机光电材料的前线分子轨道能级、发光颜色、发光效率和激发态寿命等。引入硼原子进行有机π-共轭材料的修饰即为其中的典型代表，本篇主要介绍了含硼有机光电材料类样品的分离纯化方法，为光电材料合成产物的分离纯化提供了一种高效、快速且经济的解决方案。

本实验需将样品丙胺卡因与4种杂质乙酸、溴乙酸、2-溴丙酸、杂质I（丙氨酸类似物）完全分离，通过分析5种化合物酸性及极性特点，我们决定尝试同时具有反相和阳离子交换两种保留机理的CAPCELL PAK CR柱和对极性化合物具有良好保留的CAPCELL PAK ADME两款色谱柱进行分析。 实验结果表明，使用CAPCELL PAK CR 1：4和CAPCELL PAK ADME色谱柱均能得到主成分与4个杂质峰的良好分离，但使用ADME色谱柱流动相条件更为简单，客户可依据自身需求自行选择合适的色谱柱。

使用 Agilent Polaris C18-A 色谱柱对多种食品样品中的 6 种有机酸进行了分析。极性嵌入式 C18 键合相能够很好地保留和分离有机酸等极性化合物，并且不会发生固定相塌陷。小粒径色谱柱 (3 μ m) 不仅能够保持与 5 μ m 色谱柱相同的分离效果，还能节省时间和溶剂消耗。

左卡尼汀和其2个中间体杂质均为带正电荷化合物，因此我们首先选择使用CAPCELL PAK SCX色谱柱对其进行保留，并使用PDA检测器检测。由左卡尼汀杂质结构式可知，两杂质紫外吸收非常弱，因此我们使用质谱对左卡尼汀及其两杂质进行检测，并使用CAPCELL PAK CR 1:4色谱柱对其进行了保留和分离。使用CAPCELL PAK CR 1:4柱进行LC-MS分析，左卡尼汀、杂质1、杂质2间得到了较好分离结果。 在进行LC-MS分析时，由于带正电荷化合物的静电吸引作用，我们发现左卡尼丁及杂质2均有一定程度的残留。因此建议客户在分析前对进样浓度进行考察，杂质浓度建议设置为定量限浓度，左卡尼汀浓度设置为杂质浓度100倍，以避免残留的发生。

本应用简报介绍了使用新一代 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 化学键合相与亲水相互作用色谱 (HILIC) 对特别难分离的百草枯和敌草快化合物对进行分离。百草枯和敌草快上存在的两个季铵基团使这些化合物具有强极性；因此难以在反相色谱上保留或分离。以前通常使用离子对试剂来诱导这些化合物的保留。然而这种技术面临诸多局限性，例如系统污染、高背景和信号抑制，使用 HILIC 色谱柱时则无需考虑这些问题。

测试要求：中国药典要求丝裂霉素的系统适用性溶液色谱图中, 丝裂霉素峰的保留时间约为21分钟, 肉桂酰胺峰的相对保留时间约为1.3, 丝裂霉素峰与肉桂酰胺峰间的分离度应大于15.0。

中国药典要求西吡氯铵的系统适用性溶液色谱图中, 西吡氯铵峰保留时间约为10分钟, 杂质I峰与西吡氯铵峰之间的分离度应符合要求。

客户所提供三样品分别为氨基丁二酸与杂质A混合溶液、氨基丁二酸不同处理方法溶液及氨基丁二酸单标，由于使用CAPCELL PAK C8DD色谱柱无法将样品①中氨基丁二酸与杂质A分离，因此我们选择使用具有高表面极性、可以对极性样品有良好保留的CAPCELL PAK ADME色谱柱进行尝试

多肽分离是生物药物表征过程中至关重要的一步。肽谱分析在药品开发中作为主要的质量控制 (QC) 步骤，其中包括通过酶解生成多肽片段，然后进行反相分离和质谱鉴定。由于蛋白质混合物的蛋白水解消化物固有的复杂性，高效、高分离度的多肽分离显得尤为重要。保留时间和峰面积/峰 高等肽谱分析的质量属性是获得可靠肽谱分析结果的关键。因此，需要采用稳定可重现的 LC/MS 方法严格表征多肽片段，从而可靠地评估分析结果。本研究证明，使用可兼容质谱的 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱以及 含甲酸改性剂的流动相可实现高效的多肽分离。本研究筛选了多种类型的样品用于评估多肽分离的色谱柱性能。结果表现出优异的保留时间、峰面积、峰高和半峰宽 (FWHM) 重现性。

Acclaim PA2 色谱柱是一种新型的亲水性硅胶反相色谱柱，与传统的C18填料的区别不仅在于碳链的长短不同，而且表现在其结构中嵌有极性较大的磺酰胺基团，这一结构上的特点决定了该色谱柱填料既可以在一定程度上增强对极性化合物的保留，又可在一定程度上降低对极性小的弱极性化合物的保留，因此应用范围广泛。本文以Acclaim PA2为分析柱，硼酸和乙腈为淋洗液。硼酸在碱性溶液中形成四硼酸钠，四硼酸钠是一种淋洗能力较弱的淋洗液，利用四硼酸根的弱淋洗特点，将样品中的PFOA和PFOS保留在Acclaim PA2保护柱上，同时利用全氟类化合物的非极性差异，改变乙腈的浓度调整化合物在色谱柱上的分离度。实验证明：样品中含有的其他离子在Acclaim PA2色谱柱上的保留很弱，对PFOA和PFOS的分析基本无干扰。

Acclaim PA2 色谱柱是一种新型的亲水性硅胶反相色谱柱，与传统的C18填料的区别不仅在于碳链的长短不同，而且表现在其结构中嵌有极性较大的磺酰胺基团，这一结构上的特点决定了该色谱柱填料既可以在一定程度上增强对极性化合物的保留，又可在一定程度上降低对极性小的弱极性化合物的保留，因此应用范围广泛。本文以Acclaim PA2为分析柱，硼酸和乙腈为淋洗液。硼酸在碱性溶液中形成四硼酸钠，四硼酸钠是一种淋洗能力较弱的淋洗液，利用四硼酸根的弱淋洗特点，将样品中的PFOA和PFOS保留在Acclaim PA2保护柱上，同时利用全氟类化合物的非极性差异，改变乙腈的浓度调整化合物在色谱柱上的分离度。实验证明：样品中含有的其他离子在Acclaim PA2色谱柱上的保留很弱，对PFOA和PFOS的分析基本无干扰。

本应用参考药典方法，选用ChromCore C18反相色谱柱对山茱萸中莫诺苷和马钱苷进行分离和检测，各峰拥有良好的峰型及分离度，周围无干扰杂峰，符合药典规定，为该药物的质量保证提供检测依据。

本文利用Nexera UC Prep超临界流体色谱系统完成对旋光异构化合物的分离制备，并介绍了重叠进样功能和峰纯度检测功能在制备过程中的应用。实际案例分析比对，使用重叠进样方式相较传统分离制备效率提升1.9倍，但相同制备量下时间内的溶剂消耗降低了46%，可显著提升工作效率。对重叠进样的结果查看，9次重叠进样过程中，各主要色谱峰对应的峰面积的RSD在2%以内，保留时间差RSD在0.5%以内，各峰峰宽和分离度变化在5%以内，体现出良好的系统稳定性。

本方法采用Thermofisher 的针对极性化合物有特殊选择性的Acclaim PolarAdvantage II C18 色谱柱，可以很有效的将9种水溶性维生素得到很好的保留和分离，同时能够在大有机相存在的情况下，对脂溶性维生素得到很好的洗脱和分离，实现了一个方法解决两类性质差异很大的维生素的同时分离。