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氨基酸序列分析

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氨基酸序列分析相关的论坛

  • Q-TOF能做氨基酸全序列分析吗

    本人最近在准备做一个环脂肽的氨基酸全序列分析，仪器是Q-TOF，不知道能不能做，还没有什么思路，希望各位大神们恩给你慷慨解囊，赐教赐教。。。感激不尽。。。

  • 蛋白质氨基酸残基组成分析以及蛋白预测软件

    http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378379551.jpg 氨基酸是蛋白质的基础组成单位，通过研究蛋白质中氨基酸的性质和组成来预测蛋白质的结构和功能，蛋白质氨基酸残基组成分析主要是通过氨基酸分析仪来完成的，本文推荐了2个基于氨基酸组成进行蛋白质预测软件。基于氨基酸组成的蛋白质预测软件根据组成蛋白质的20种氨基酸的物理和化学性质可以辨析电泳等实验中的未知蛋白质，也可以分析已知蛋白质的物化性质。ExPASy工具包包涵的程序：AACompIdent：与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同，AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白。该程序分析时需提交的相关信息包括：蛋白质的氨基酸组成、等电点pI和分子量(如果知道)、正确的物种分类及特别的关键词。此外，用户还需在六种氨基酸“组合”中作出选择，这影响到分析如何进行。例如，某种“组合”会把残基Asp/Asn(D/N)和Gln/Glu(Q/E)组合成 Asx(B)和Glx(Z);或者某种残基会在分析中被完全除去。对数据库中的每一个蛋白序列，算法会对其氨基酸组成与所查询的氨基酸组成的差异打分。由电子邮件返回的结果被组织成三级列表：第一张列表中的蛋白都基于特定的物种分类而不考虑pI和分子量;第二张列表包含了不考虑物种分类、pI和分子量的全体蛋白;第三张列表中的蛋白不但基于特定物种分类，并且将 pI和分子量也考虑在内。虽然计算所得结果各不相同，但零分表明了该序列与提出的组成完全相符。AACompSim：AACompIdent的一个变种，AACompSim提供类似的分析，但与前者以实验所得的氨基酸组成为依据进行搜索不同，后者使用SWISS-PROT中的序列为依据。有报道称，氨基酸组成在物种之间是十分保守的(Cordwell等，1995)，并且通过分析氨基酸的组成，研究者能从低于25%序列相似性的蛋白之间发现弱相似性(Hobohm和Sander，1995)。因此，在“传统的”数据库搜索基础上辅以组成分析，能为蛋白质之间关系提供更多见解。PROSEARCH：PROPSEARCH也提供基于氨基酸组成的蛋白质辨识功能。用144种不同的物化性质来分析蛋白质，包括分子量、巨大残基的含量、平均疏水性、平均电荷等，把查询序列的这些属性构成的“查询向量”与SWISS-PROT和PIR中预先计算好的各个已知蛋白质的属性向量进行比较。这个工具能有效的发现同一蛋白质家族的成员。可以通过Web使用这个工具，用户只需输入查询序列本身。分子量搜索(MOWSE)分子量搜索(MolecularWeightSearch，MOWSE)算法利用了通过质谱(MS)技术获得的信息。利用完整蛋白质的分子量及其被特定蛋白酶消化后产物的分子量，一种未知蛋白质能被准确无误地确认，给出由若干实验才能决定的结果。由于未知蛋白无需再全部或部分测序，这一方法显著地减少了实验时间。MOWSE的输入是一个纯文本文件，包含一张实验测定的肽段列表，分子量范围在0.7到4.0Kda之间。计算过程基于在OWL非冗余蛋白质序列库中包含的信息。打分基于在一定分子量范围内蛋白中一个片段分子量出现的次数。输出的结果是得分最佳的30个蛋白的列表，包括它们在OWL中的条目名称、相符肽段序列、和其它统计信息。模拟研究得出在使用5个或更少输入肽段分子量时，准确率为99%。该搜索服务可通过向mowse@daresburg.ac.uk发送电子邮件实现。为获得更多关于查询格式的细节信息，可以相该地址发送电子邮件，并在消息正文中写上“help”这个词。蛋白质氨基酸组成分析用盐酸在110 ℃将蛋白或多肽水解成游离的氨基酸，用氨基酸分析仪测定各氨基酸的含量。采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似，但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统)，利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较快，基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。分析效果：从目前已知的氨基酸分析方法比较来看，除灵敏度(即最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC：0.5 pmol;氨基酸分析仪：10 pmol)，其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面，都优于其他分析方法。蛋白质氨基酸残基组成分析的主要步骤包括：首先是蛋白被水解为氨基酸，其次是采用离子色谱等方法进行游离的氨基酸含量和组成的分析。总之利用蛋白可以分析氨基酸，利用氨基酸也可以研究蛋白质。

  • 【资料】通过氨基酸分析仪实现对蛋白的鉴定

    把蛋白完全水解成氨基酸，可以在pmol到nmol水平上分离和定量。虽然氨基酸的序列信息已经无法得到，但是组成蛋白的氨基酸种类及含量信息可以得到,利用氨基酸的指纹信息可以鉴定蛋白。

  • 氨基酸分析仪和蛋白质测序仪的区别以及价格

    大家好，氨基酸分析仪与蛋白质测序仪有主要区别在什么地方呢？目前实验室需要进行氨基酸的测序分析，究竟买一台蛋白质测序仪好呢，还是氨基酸分析仪好呢？价格大概有多少呢？这些仪器有没有国产的呢 QQ：2392795357

  • EGFP蛋白全称、大小、序列分析

    [b][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白全称[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]，全称为增强型绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Enhanced Green Fluorescent Protein[/font][font=宋体]），是一种在生物科学研究中广泛应用的荧光报告蛋白。它是由普通绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）进行突变和优化得到的，相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白大小[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的大小为[/font][font=Calibri]238[/font][font=宋体]个氨基酸，分子量约为[/font][font=Calibri]27kDa[/font][font=宋体]。这个分子量相对较小，使其在融合蛋白、抗体标记等生物分子标记领域中具有广泛的应用价值。同时，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的相对分子量较小也意味着它对其他蛋白质的负担较小，这有助于保持标记蛋白质的天然状态和功能。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白序列[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以下是[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]MVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMEEEEDVMKDVEEETPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDP[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过分析[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列，我们可以发现其中包含一些重要的结构域和功能位点。例如，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基端，有一个由数个甘氨酸和丝氨酸组成的“环状结构”，这个结构对于荧光发射起着关键作用。在羧基端，我们还可以看到一个“多肽区”，这个区域对于荧光亮度和稳定性也有重要影响。此外，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列中还包含多个突变位点，这些位点使得[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]四、总结[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]是一种重要的荧光报告蛋白，通过对其全称、大小和序列的深入了解，我们可以更好地理解其性质和应用。在实际的生物科学研究中，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]已被广泛应用于细胞生物学、分子生物学、生物医学等多个领域，为科研工作者提供了强有力的工具，有助于推动生命科学研究的进步。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以查看义翘神州网：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 【仪器心得】赛卡姆氨基酸分析仪S433D

    【仪器心得】赛卡姆氨基酸分析仪S433D

    1. 简介 Sykam(赛卡姆)公司位于德国工业重镇慕尼黑，这里是著名汽车制造商宝马的总部，更是全世界最著名的分析仪器展--慕尼黑分析生化展的所在地。自成立以来，Sykam(赛卡姆)一直专注于氨基酸分析仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的应用研究、开发、生产。作为欧洲色谱仪器的主要制造商，Sykam(赛卡姆)的历代色谱仪器均具有开创性的先进技术，第一台全惰性流路氨基酸分析仪（1984年）、第一台带真空度实时显示的脱气机（1988年）、第一台线性梯度氨基酸分析仪（1995年）、第一个具有DiaDur钻膜保护技术的进样阀（2006年）、第一台具有XYZZ三轴四驱动技术的自动进样器（2012年）、第一台具有大容量长寿命管膜抑制技术的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]（2015年）…… 1987年，Sykam(赛卡姆)以OEM合作方式为中国部分[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]厂商提供核心部件和技术支持，推动了国内[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的快速发展。2004年，Sykam(赛卡姆)最新第五代氨基酸分析仪S-433D进入中国，经过十几年的市场检验，其优异的产品品质和贴心的售后服务赢得了用户的高度赞誉，如今已经成为氨基酸分析仪领域的领导者。 我们单位有一台S433D氨基酸分析仪，主要用于检测肥料中17种氨基酸。该仪器装备于2015年左右，运行到现在还算稳定，没出过大幺蛾子。2. 仪器硬件和软件仪器整体视图如图1，分为四个部分。最上面的为溶剂柜，可以制冷的，使用氮气来驱动溶液。左下方为自动进样器，也是可以制冷。右边下面是试剂泵，用来输送流动相。右边中间是衍生泵+检测器，做柱后衍生和检测。[align=left] [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205111705186837_5480_2963297_3.jpeg[/img][/align][align=left]图1[/align]该仪器利用茚三酮柱后衍生法来分析氨基酸，一共需要使用7种溶液。淋洗液（流动相）为4种，缓冲液A，缓冲液B，稀释液C和再生液D，衍生泵会用到两种溶液茚三酮和水，还有一路为洗针液。所以在使用仪器时，需要关注这几个溶液的量。使用的溶液过多，容易忽略造成溶液抽干的情况，所以赛卡姆工程师很巧妙的想到了溶液估算和预警。在编辑序列表时，工作站会计算当前序列所需的溶液总量，然后和库存量做对比，从而做出预警提示。如图2.对于衍生泵，可以直接给出是哪个溶剂不够，缺多少毫升。厉害的是这玩意儿还可以对废液做预警，避免废液溢出。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205111705189923_7525_2963297_3.jpg[/img]图2 此工作站使用很简单，只需要输入样品位置，进样次数和样品名称即可。数据文件名可以根据样品名称自动生成，这个大部分工作站都可以。因为只用作氨基酸分析，所以方法很少做改动。 工作站可以建立校正表，积分方法然后保存到方法中，样品一键调用方法后输入样品质量和稀释倍数，直接计算样品质量分数，这样很方法。不然10多个氨基酸一个一个计算很繁琐。工作站可以直接输出为PDF报告而且速度很快，这一点好评。安捷伦和岛津的也可以生成PDF报告，只是要麻烦一些，需要安装pdf虚拟打印机或者用批处理来生成。 工作站的帮助文件很有用，有很详细的使用，维护，故障排除指南。也有溶液配制，部件拆解，分析方法等。有此指南可以解决很多问题。如图3[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205111705191163_3068_2963297_3.jpg[/img]图33. 一些不足和其他[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]一样，S433D也需要排空，但是这玩意儿的排空废液管是悬空的，每次使用需要用烧杯来接废液。虽然是为了观察排液是否正常，但是能把衍生泵的管子接长一点，别悬那么高就好了。如图4另外工作站不能准确提示试剂泵哪个溶液不够，试剂泵中一个试剂不够或废液瓶不够时，只提示溶液不够，需要手动排查。希望后续工作站升级后能完善这个功能。对了，这个氨基酸分析仪的工作站升级免费，好评。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205111705192369_3517_2963297_3.jpeg[/img]图4 上面衍生泵的排空管悬的太高了

  • 【求助】请专家指点--氨基酸分析仪采购，急！

    [size=4]小可的单位近期计划采购一台氨基酸分析仪，目前正在选型阶段，碰到了一些问题请高手指点下。1.目前我们联系到的氨基酸分析仪厂家有2家，分别是日立和德国的塞卡姆。请问市面上比较好的氨基酸分析仪品牌都有哪些？2.就日立和塞卡姆的氨基酸分析仪相比较来说，哪个技术更成熟，口碑更好一些？3.在对比氨基酸分析仪优劣方面，我们应该主要看哪些指标？4.一台氨基酸分析仪的价位大概在多少钱？是不是必须要配浓缩仪？最后请给位给我们推荐一款氨基酸分析仪的牌子吧。更适合质检领域应用。因为为两家销售各执一词，我们对此也很困惑。快要决定了，比较着急，请各位不吝赐教。谢谢！[/size]

  • 【仪器心得】氨基酸分析利器-赛卡姆S433D

    【仪器心得】氨基酸分析利器-赛卡姆S433D

    1. 简介 Sykam(赛卡姆)公司位于德国工业重镇慕尼黑，这里是著名汽车制造商宝马的总部，更是全世界最著名的分析仪器展--慕尼黑分析生化展的所在地。自成立以来，Sykam(赛卡姆)一直专注于氨基酸分析仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的应用研究、开发、生产。作为欧洲色谱仪器的主要制造商，Sykam(赛卡姆)的历代色谱仪器均具有开创性的先进技术，第一台全惰性流路氨基酸分析仪（1984年）、第一台带真空度实时显示的脱气机（1988年）、第一台线性梯度氨基酸分析仪（1995年）、第一个具有DiaDur钻膜保护技术的进样阀（2006年）、第一台具有XYZZ三轴四驱动技术的自动进样器（2012年）、第一台具有大容量长寿命管膜抑制技术的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]（2015年）…… 1987年，Sykam(赛卡姆)以OEM合作方式为中国部分[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]厂商提供核心部件和技术支持，推动了国内[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的快速发展。2004年，Sykam(赛卡姆)最新第五代氨基酸分析仪S-433D进入中国，经过十几年的市场检验，其优异的产品品质和贴心的售后服务赢得了用户的高度赞誉，如今已经成为氨基酸分析仪领域的领导者。 我们单位有一台S433D氨基酸分析仪，主要用于检测肥料中17种氨基酸。该仪器装备于2015年左右，运行到现在还算稳定，没出过大幺蛾子。2. 仪器硬件和软件仪器整体视图如图1，分为四个部分。最上面的为溶剂柜，可以制冷的，使用氮气来驱动溶液。左下方为自动进样器，也是可以制冷。右边下面是试剂泵，用来输送流动相。右边中间是衍生泵+检测器，做柱后衍生和检测。[align=left] [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211091633309218_4427_2963297_3.jpeg[/img][/align][align=left]图1[/align]该仪器利用茚三酮柱后衍生法来分析氨基酸，一共需要使用7种溶液。淋洗液（流动相）为4种，缓冲液A，缓冲液B，稀释液C和再生液D，衍生泵会用到两种溶液茚三酮和水，还有一路为洗针液。所以在使用仪器时，需要关注这几个溶液的量。使用的溶液过多，容易忽略造成溶液抽干的情况，所以赛卡姆工程师很巧妙的想到了溶液估算和预警。在编辑序列表时，工作站会计算当前序列所需的溶液总量，然后和库存量做对比，从而做出预警提示。如图2.对于衍生泵，可以直接给出是哪个溶剂不够，缺多少毫升。厉害的是这玩意儿还可以对废液做预警，避免废液溢出。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211091633313111_9912_2963297_3.jpg[/img]图2 此工作站使用很简单，只需要输入样品位置，进样次数和样品名称即可。数据文件名可以根据样品名称自动生成，这个大部分工作站都可以。因为只用作氨基酸分析，所以方法很少做改动。 工作站可以建立校正表，积分方法然后保存到方法中，样品一键调用方法后输入样品质量和稀释倍数，直接计算样品质量分数，这样很方法。不然10多个氨基酸一个一个计算很繁琐。工作站可以直接输出为PDF报告而且速度很快，这一点好评。安捷伦和岛津的也可以生成PDF报告，只是要麻烦一些，需要安装pdf虚拟打印机或者用批处理来生成。 工作站的帮助文件很有用，有很详细的使用，维护，故障排除指南。也有溶液配制，部件拆解，分析方法等。有此指南可以解决很多问题。如图3[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211091633315010_770_2963297_3.jpg[/img]图33. 一些不足和其他[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]一样，S433D也需要排空，但是这玩意儿的排空废液管是悬空的，每次使用需要用烧杯来接废液。虽然是为了观察排液是否正常，但是能把衍生泵的管子接长一点，别悬那么高就好了。如图4另外工作站不能准确提示试剂泵哪个溶液不够，试剂泵中一个试剂不够或废液瓶不够时，只提示溶液不够，需要手动排查。希望后续工作站升级后能完善这个功能。对了，这个氨基酸分析仪的工作站升级免费，好评。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211091633311084_352_2963297_3.jpeg[/img]图4 上面衍生泵的排空管悬的太高了

  • 请教大家，氨基酸分析中使用aglient AAA柱问题

    请教大家，氨基酸分析中使用aglient AAA柱在线衍生时，色谱柱使用几次后柱子就会出问题，出现峰拖尾。请教大家的平时用什么方法维护aglientAAA柱，如果柱子出现拖尾时，用什么方法冲洗aglient AAA色谱柱使其再生，谢谢。

  • 氨基酸出峰有问题，找不到原因

    氨基酸分析仪在走样品序列中，发现中间偶尔有几针出现了出峰异常的情况。两张图是平行样的出峰对比，图二出峰异常。排除了试剂、管路气泡、样品等基础问题，目前无法确定是什么原因导致。仪器是日立LA8080[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205161612151735_1341_5550976_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205161612151635_8915_5550976_3.png[/img]

  • 氨基酸分析仪分析氨基酸

    氨基酸分析仪分析的柱子为阳离子交换柱，要求分析之前要去除核酸，为什么呢？核酸对柱子有什么影响吗？还是说核酸的存在会影响氨基酸的测定？

  • 【资料】不同氨基酸自动分析仪氨基酸分析结果之比较

    近几年来由于饲料工业迅猛发展，对饲料产品的品质控制已经从常规的营养分析转到了微量分析，对饲料品质的评价已经从粗蛋白含量的高低，改为观测各种氨基酸含量是否符合要求，所以准确测定氨基酸含量就成了关键一环。本实验验证不同品牌的氨基酸分析仪在不同的实验室测定氨基酸含量是否有差别。

  • 氨基酸分析仪怎样选择

    由于目前测定一种氨基酸(非人体必需),需购买一台氨基酸分析仪,但从目前调研来看,柱后衍生仪器的太贵,但一些采用柱前衍生的仪器不知又能不能保证测定这种氨基酸.请教大家有什么好办法啊.

  • 氨基酸分析技术的特点与内涵

    氨基酸分析技术的特点与内涵文章来源：国家产品质量安全与法信息中心网 添加时间：2009-7-19 3:13:19 点击：1510摘要：在传统蛋白质分析技术基础上，结合现代分析仪器技术发展优势，针对氨基酸分析技术难点及存在问题，概括比较分析评价当前氨基酸分析技术特点。关键词：蛋白质 氨基酸 分析技术 研究进展1 前言迄今为止，自然界中已发现180多种氨基酸，其中参与蛋白质合成的氨基酸只有20多种，称为基本氨基酸。氨基酸主要有两种存在形式，一种是以游离态存在于生理体液(血浆、尿)、食品(酒、饮料)中；另一种是以结合态存在于肽和蛋白质中。蛋白质在乳中含量为3.0%~3.5%，是乳的主要成分，对乳品的理化特性和营养价值有重要的影响。由于国标法对蛋白的检测是通过检测样品含氮量而得到的，实际上是将样品消化分解，经蒸馏碱吸收后，测定的挥发性“氨基氮”，因而部分不法商贩用添加外源动植物蛋白粉或脲等含氮化合物（虚“氮”）来增加原料乳的氮含量，钻传统检测方法表征“虚氮”的漏洞，以蒙混过关。这些掺入水解动物蛋白或者含氮化合物的乳粉因其氨基酸的组成不合理，根本不能代表动、植物蛋白，不易消化，所以营养价值低下，导致人体吸收利用率降低，严重地影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。因此，对氨基酸分析方法的研究与改进逐渐得到各国家、全社会的高度重视。在一般情况下，质量监督检验单位在市场上抽到产品进行检验所得的数据中，蛋白质含量实际上是用总氮含量表示的，所以在加工企业常规检验时、含氮化合物、水解动物蛋白等杂蛋白是测不出来的，因此需要建立快速分析、测定乳制品中蛋白质、氨基酸的检测方法，保障乳制品的质量与安全。,1958年，Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸，实现了氨基酸分析的自动化。其后，人们不断地发展新的氨基酸分析方法，柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法、毛细管电泳法、蛋白质芯片技术等相继应用于氨基酸分析。现已是多种氨基酸分析方法并存、互补。本文就目前应用于氨基酸分析的主要方法作一比较分析。,,2 氨基酸分析技术的光谱分析优势及特点利用光谱探针方法定量分析蛋白质的研究在国际上十分活跃，其中，对有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法和金属离子-有机染料(包括显色剂和荧光染料)结合分光光度法的研究倍受重视。 2.1 有机染料结合分光光度技术因为有机染料结合分光光度法测定蛋白质操作简便，比较灵敏，又不需特别的仪器，方法应用比较广泛。现在研究较多的可作为探针的染料分子中，大部分都含有带正电荷的亲水性基团如羟基、磺酸基、酚羟基及不带电荷的疏水性基团，如苯环。这类方法的基础是在溶液pH小于等电点时，蛋白质的肽键亚胺和N端氨基质子化成阳离子，若有阴离子染料存在时，由于电荷作用，蛋白质便与染料结合沉淀或改变结合染料的光吸收特性，借染料颜色的减褪或变化的程度测定蛋白质的含量。已经应用的染料有酸性橙红、考马斯亮蓝G-250、溴甲酚绿、溴甲酚紫、埃铬青R和溴酚蓝。2.2金属离子-有机染料结合分光光度技术近几年发展了利用金属离子和有机染料特别是荧光染料形成配合物体系结合光光度法来测定蛋白质含量。金属离子与含有-OH或C=O的有机染料相遇时，氧原子中的孤对电子可顺利进人杂化轨道，形成稳定的配合体系，在酸性条件下，该体系遇到结构不对称的蛋白质分子时，互相极化产生静电作用而结合成新的大分子团，改变了原体系的光谱性能，从而能定量测定蛋白质的含量。该方法具有灵敏度高、线性范围广、干扰离子少、操作简单、快速及适用于常规应用等特点。2.3 荧光光度分析技术荧光法是定量测定蛋白质的另一种常用方法通常比分光光度法更灵敏。常用的方法有内源荧光法、荧光探针法、荧光偏振、时间分辨荧光法及激光诱导时间分辨免疫分析法。2.3.1 内源荧光分析技术蛋白质中存在着Tyr、Trp、phe残基，能够吸收270~300 nm的紫外光而发出紫外荧光。当测定体系中加入小分子配体（SM）时，SM与蛋白质发生相互作用，会导致蛋白质荧光的猝灭，利用SM对蛋白质内源荧光的猝灭这一现象可以确定蛋白质与SM的作用类型及其结合部位等。2.3.2 外源荧光分析技术对于蛋白质的研究仅利用其内源荧光是不够的，需要通过外源荧光性质的研究才能获得更多关于蛋白质分子的各种信息，这就使得荧光探针对蛋白质分析有着极其重要的意义，这已成为蛋白质微量检测及溶液的构相分析中不可缺少的手段之一。在外源荧光法中，又可分为有机荧光探针法和稀土荧光探针法。作为一个好的荧光探针应满足以下条件：探针分子与蛋白质分子的某一微区必需有特异性的结合，并且结合比较牢固；探针的荧光必须对环境条件敏感；蛋白质分子与探针结合后不影响其原来的结构和特性。在满足这些条件的基础上可进行蛋白质的测定和与金属离子结合的计量化学等。与光度法类似，蛋白质在和某些具有荧光特性的染料结合后，能引起荧光强度的变化，并且在一定浓度范围内与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的测定。利用这些化合物在不同蛋白质分子中量子产率、峰位及谱带的变化，就可探测蛋白质分子结合区的极性、疏水性的大小，从而推论构象的稳定情况及变化等。2.3.3 荧光偏振分析技术利用荧光体在转动扩散速度上的差异而导致偏振荧光的差别，建立了荧光偏振测定法。利用荧光偏振还可以研究：酶与荧光底物的结合程度；蛋白质聚合与解离；蛋白质从螺旋到无规卷曲的研究。,3 氨基酸分析技术的色谱分析优势及特点3.1 柱后衍生高效阳离子交换色谱分析技术高效阳离子交换色谱（HPCEC）-柱后茚三酮衍生光度检测分离测定氨基酸是一种经典的氨基酸分析方法。此方法是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子而在阳离子交换柱中分离，分离后的氨基酸用茚三酮衍生、紫外可见光检测器检测。该方法以阳离子交换树脂为固定相、酸性缓冲液流动相，在柱后流出液中加入茚三酮使氨基酸生成具有可见光吸收的衍生物进行检测，具有重现性好、仪器稳定、结果可靠、适合于大量常规样品分析等优点。另外，由于衍生化反应发生在氨基酸与其物质分离之后，因而避免了其他物质的干扰，适合复杂样品中氨基酸的分析。其缺点是仪器复杂、体积大、费用高。此外，由于脯氨酸的测定波长在440nm，而其他氨基酸的测定波长为570nm，因脯氨酸不能和其他氨基酸同时测定。氨基酸分析自动仪就是基于阳离子交换色谱分离、柱后茚三酮衍生光度检测技术设计的。商品化的自动氨基酸分析仪是在20世纪60年代初问世，目前的自动氨基酸分析仪已实现了程控自动化和数据处理电脑化，分析时间已缩短至1 h以内。氨基酸自动分析仪实际上属专门用来分析氨基酸的高效液相色谱仪，其优点是高压、快速、灵敏，试剂和样品用量少、重现性好、分析结果稳定。广泛用于食品、医学、农业以及微生物等领域。3.2 柱前衍生反相高效液相色谱分析技术近20年来，柱前衍生反相高效液相色谱法（RP-HPLC）分析氨基酸得到了迅速发展，逐渐取代柱后衍生高效阳离子交换色谱（HPCEC）在许多领域中的应用。RP-HPLC分析方法更加快速灵敏。与专业氨基酸分析的自动分析仪不同，HPLC仪适用性更广、更灵活。RP-HPLC要求将氨基酸在柱前转化为适于反相色谱分离并能被灵敏检测的衍生物，柱前衍生的关键在于衍生试剂的选择。选择衍生试剂的标准是能与各氨基酸定量反应，每种氨基酸只生成一种化合物且产物有一定的稳定性，不产生或易于排除干扰物，操作简单，色谱分离分辨率高、检测灵敏度高，分析时间短，便于实现自动化和使产物能在不同型号的高效液相色谱仪上测定。目前比较常用的柱前衍生试剂有邻苯二甲醛（OPA）、异硫氰酸苯酯（PITC）、氯甲酸芴甲酯（FMOC-Cl）及丹酰氯（Dansyl-Cl）。衍生后的氨基酸一般键合在C18柱上，利用液液分配原理进行分离。流动相多以乙酸盐或磷酸盐缓冲液为主，以乙腈、甲醇或四氢氟喃为调节剂。由于氨基酸衍生物仍保留着两性化合物的特点，除改变调节剂之外，还可通过调节缓冲液pH值、离子强度、柱温等使之达到理想的分离。当然，不同衍生物所选用的柱型、流动相以及氨基酸的洗脱时间和顺序不尽相同。柱前衍生反相高效液相色谱法可用于分析蛋白质水解液、生理体液和食品等样品中的氨基酸。当与质谱技术结合时，采用电离喷雾质谱（ESI-MS）或电离喷雾串联质谱（ESI-MS/MS）联用技术方式，借助计算机的联机检索，可以实现高通量筛选和鉴定蛋白质混合体系。目前，，蛋白质组研究的高效液相色谱-质谱联用的方式有一维色谱-质谱联用技术、多维色谱-质谱联用技术以及亲和色谱-质谱联用技术等。一维色谱-质谱技术仅能分析一些不太复杂的蛋白质体系，而对复杂的多肽混合物常不能满足分离的要求。多维色谱分离的方法在某种程度上满足了对复杂蛋白质混合分离鉴定的要求。,,,3.3 两种氨基酸直接分析技术大多数氨基酸不具备生色团，因此无法利用分光光度法直接检测，故需采用化学衍生技术，使之生成可在紫外或可见光区有吸收的化合物，或者采用荧光法检测。但对于分析工作者来讲，尤其是在新化合物研制的过程中，面对多种未知的降解物，如采

  • 【求助】氨基酸分析中碰见不常见的氨基酸

    最近忙氨基酸分析，用柱前衍生。发现样品有一个峰很高，尤其是水解之后更高。它不是17中氨基酸标准品中的一个，不知道是什么。。。。。。。。这样的话我怎么得知它是什么氨基酸呢？我算总量的时候可不可以用峰面积估算出这个峰代表的氨基酸的含量? 可不可以用质谱做？但是样品比较复杂。。。。。。。。。。。。。要怎么办呢？大侠们出手试试

  • 氨基酸分析仪选哪家？

    -------氨基酸分析仪算是LC的种，所以我把帖子发到这里，如有违规，请版主处理。-------------单位准备进一台氨基酸分析仪，目前有两家提供资料，其中一家的分离柱填料颗粒较小，另一家填料颗粒较大，但这家的氨基酸谱图上cysthi , Hylys两种氨基酸均有分裂峰，按销售的说法是他的分离能力更高（从参数上看，分离度与第一家无明显区别）。按我对LC的理解，填料颗粒小分离能力应该更强，为什么会出现相反的情况？是第二家销售夸大其词吗？ 另外 ，这家销售说他的产品用的是陶瓷泵，在氨基酸高碱高脂环境下比第一家的不锈钢泵更有优势，貌似有些道理。请有经验用户给点意见。谢谢大家了！

  • 氨基酸分析检测

    氨基酸检测是不是只能用氨基酸分析仪，液相色谱检测氨基酸如何？前天来个天美公司的说代理日立氨基酸分析仪，报价真贵呀，买不起了，日立的氨基酸分析仪真有那么贵吗？求各位大侠帮助！

  • 氨基酸分析仪采购

    请版主谅解，实在没有找到氨基酸的专版，才发在液相版。问题：我们今年希望采购一台能分析游离氨基酸的氨基酸分析仪，主要是生物制品。之前有一台日立的L8900，请问有没有国内生产的氨基酸分析仪可以满足分析游离氨基酸要求的，谢谢。

  • 氨基酸分析仪可以检测混合氨基酸吗？

    请教各位老师一个问题。我们有一个混合氨基酸，想用氨基酸分析仪检测。但有的检测实验室讲，高纯度的氨基酸用氨基酸分析仪检测误差会比较大，这种说法有道理吗？谢谢！

  • 【求助】如何采用高效液相色谱仪分析氨基酸(买人家的氨基酸分析包)

    我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸（呵呵，我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪，没有氨基酸分析仪），请问大家都用什么方法啊，我们买了郑州牧专的氨基酸分析包，可是作出来结果老是不准，就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了，可我只见过她前处理的大致步骤，不知道里面有啥关键点要必须掌握，所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊，请指教一下吧，谢谢了

  • 【求助】请问如何分析氨基酸

    我这里将要分析氨基酸，我公司的色谱有两台，一个混合器，可以做梯度。我查资料看分析氨基酸有三种方法：柱前衍生，梯度；柱后衍生，梯度；氨基酸分析仪三种，我想问哪种分析方法最好？如果用液谱，那么具体条件是什么？柱前和柱后衍生又是怎么回事呢？我在色谱上安装衍生装置？还是有一个专门的衍生过程？分析氨基酸的具体方法是什么？

  • 【原创大赛】【仪器故事】我与S-433D型氨基酸分析仪的故事

    【原创大赛】【仪器故事】我与S-433D型氨基酸分析仪的故事

    [b]记S-433D型氨基酸分析仪的一次维修[/b][align=center]事件始末[/align]样品室下发了几个饲料样品，要做17种水解氨基酸的检测。虽说做氨基酸比较复杂，但经过几个月的学习和实践我也可以说是驾轻就熟，蛮有自信。所以我并不着急做这些样品，而是等到最后几天才开始前处理。经过一天一夜的前处理后终于等到出结果的关键步骤——上机进样，我们使用的是S-433D型氨基酸，虽然之前没有接触过该仪器，但经过几个月的上机学习，已掌握了它的工作原理，并能够熟练操作。所以，这次检测基本上是常规工作，由于样品较多，加之处理样品比较耗时，等到排好样的时候已经下班，再加上回家心切，序列建好后略微检查了一下，点击运行序列，就溜之大吉，等着明天出报告。[align=center][img=,690,383]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810240829580985_3151_3152916_3.jpg!w690x383.jpg[/img][/align][align=center]图1 奇怪的谱图[/align]然而，第二天一早看到谱图的我傻了眼——根本没有出峰，而且谱图非常奇怪（见图1）。这怎么办？交报告的截止日期马上就要到了，我却没有任何结果。但是着急也没有用，有问题还得解决，第一次遇到这种情况的菜鸟来说手足无措，只能求助于设备工程师了，结果被告知——应该是没有进茚三酮衍生剂。在工程师的热心帮助下，我进行了一步步排查和维修。首先，确定是不是的确没有进茚三酮。方法是关掉试剂泵S2100，打开缓冲泵S4300，流速设为0.1mL/min，发现废液口没有废液流出并且压力显示为0，这就可以断定谱图没有出峰的原因的确是是没有进衍生剂——茚三酮。那为什么没有进茚三酮呢？我通过以下三个步骤来排查：第一步，确定是不是由于管路有气泡导致的。对茚三酮流路进行重新排气后重复刚才的操作，没有废液流出，说明并非是管路中气泡导致不流液；第二步，检查单向阀是否损坏。拆下两处单向阀阀芯，用注射器（去掉针头）分别向单向阀两头注水，顺着单向阀流速方向有水流出，逆着单向阀的方向无水流出证明单向阀没有损坏；第三步，检查管路是否堵塞。按照流速的方向，将PEEK管的接头与泵或放空阀一一分离，设定一定流速，发现均有液体流出，说明管路都没有堵塞。通过逐步排查，可以断定与泵连接的外面可视部件均没有问题，问题只能存在于泵的内部，所以必须开泵。开泵对我这样的菜鸟来说绝对是个挑战，因为这毕竟是第一次拆卸这种仪器，但好在有较为详细的说明书和工程师的远程协助，拆起来也并非难事。泵头拆了下来后，按先后顺序放在干净的桌面或纸上（如图2），已免安装的时候出现错误。仔细观察，发现密封圈附近有许多脏兮兮的东西（如图4中红圈所示），可以断定是茚三酮试剂结晶。[align=center][img=,690,285]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810240832063011_7487_3152916_3.jpg!w690x285.jpg[/img][/align][align=center]图2 泵头拆开后结构图[/align][align=center][img=,88,88]https://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][img=,88,88]https://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][img=,690,409]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810240834350044_7128_3152916_3.jpg!w690x409.jpg[/img][/align][align=center]图4 茚三酮试剂结晶[/align]工作进行到这里，真相基本已经大白于天下。回形管由于缺少水，导致无法清洗掉结晶的茚三酮，结晶析出的盐加大柱塞杆和密封圈的摩擦，使得茚三酮溶液在柱塞杆和密封圈的缝隙中流出而无法流向反应器和样品发生衍生反应，最终无法形成正常谱图。随后，将拆下来主副密封圈、柱塞杆、弹簧和回形管都放在超纯水中超声20min左右（超声后的密封圈如图5所示），并将其他部件也冲洗干净，最后按照与拆卸相反的顺序安装好泵头。打开缓冲泵S4300，流速设为0.1mL/min，发现有压力显示，并且废液口有废液流出。[align=center][img=,690,1226]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/10/201810240835088954_5224_3152916_3.jpg!w690x1226.jpg[/img][/align][align=center]图5 清洗后的密封圈[/align]此时已经下午四点了，准备工作做好后，开始运行序列。吸取了经验教训，这次我不敢太着急了，直到第一针标品走完，确定谱图正常之后才放心离开。[align=center]总结[/align]通过这次事故，我总结出以下几个经验教训：1、做实验不能着急，不能以为点击运行序列之后就万事大吉、打卡下班了，应该等到第一针标品全部走完之后再离开，再着急也要等到出第一个峰才离开。这样就可以确保谱图没有问题或者是有问题也可以及时解决，以免浪费时间；2、平时对仪器的维护保养很重要，解决因疏忽维护保养出现的问题所用的时间比维护保养所用的时间多很多。比如这次，如果平时做好保养，定期往回形管中加入纯净水花不了几分钟，而因为没有加水导致的密封圈漏液得问题解决起来几乎花费了一整天；3、当出现问题是要敢于动手，因为是第一次遇到这种问题，没有经验，所以在这次问题之初，我本打算请工程师上门。工程师说拆装并不很困难，只要按照说明书来操作基本没有大问题，虽然心里依然打鼓，但最终还是下定决定动手，而且值得欣慰的仪器修好了。这不但节省了请工程师上门的时间和金钱，还让我有机会学习更多东西。所以，遇到问题，可以说既是挑战，也是机遇。

  • 超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    [align=center][font='宋体'][size=16px][color=#000000]超高速全自动氨基酸分析仪的应用[/color][/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]中广测配备了日立超高速全自动氨基酸分析仪（LA8080），该仪器采用离子交换色谱分离和茚三酮柱后衍生技术，是分析检测氨基酸的专用设备，具有操作简便、灵敏度高、分离度好、稳定性强、检出限低、数据可靠性高等优点，短时间内可实现18~23种氨基酸的分离，分离度最少可达到1.62以上，各种氨基酸达到完全基线分离，定性强、定量准，同时配备含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸）30min标准分析程序和6min高速分析程序，极大的提高了分析的速率，标配了Open LAB CDS 2控制软件，全面符合CFDA和FDA的要求。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146272196_9721_2862401_3.jpeg[/img][/align][font='宋体'][size=16px]一、仪器信息[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.仪器名称：超高速全自动氨基酸分析仪[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.英文名称：Ultra-high speed automatic amino acid analyzer[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.生产制造商：HITACHI/日立[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.型号：LA8080[/size][/font][font='宋体'][size=16px]二、主要技术参数[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.基线噪声≤0.02mV；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.分离度≥1.62；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.仪器线性≥0.999；[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.检出限：各氨基酸最少检测浓度可达到0.002nmol。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]三、应用领域[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸分析仪的应用领域可以归结为以下几类：在农业农产品的开发研究中，用于培养农作物优良的品种、饲料研发以及各类饲料氨基酸含量的分析、研制新型农药等。在食品轻工产品研究中，氨基酸分析仪可用于各种食品、保健品、口服液、牛奶及其奶制品、肉及肉制品等产品的研制开发、成分的分析， 在生物制药方面，用于药物开发以及各种药物氨基酸含量的测定，在石油化工、生物医学检测方面，氨基酸分析仪的应用也十分广泛。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]四、服务范围[/size][/font][font='宋体'][size=16px]各类食品、保健品、农产品、饲料、医药样品中，各种氨基酸含量的测定，包括GB/T 5009.124-2016方法规定的各种水解氨基酸，GB/T 18246-2019 规定的水解氨基酸、游离氨基酸，各种含硫氨基酸以及色氨酸的测定。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]五、应用案例[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸作为生物体蛋白质组成的单体，在各种生物体中均有存在，氨基酸按照对生物体的需求来说，分为必需氨基酸和非必需氨基酸，非必须氨基酸不一定非要从食物直接摄取，生物体可自行合成；但必需氨基酸（指人体或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不能满足机体需要，必需氨基酸一定要从食物中获得，否则就不能维持机体的氮平衡并影响健康，对于成人而言，必需氨基酸有九种，即：赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、组氨酸；故准确定量食物中各种氨基酸的含量，特别必需氨基酸尤为重要，生物体可根据对各种氨基酸，特别必需氨基酸的每日需求，选择合适的食物，补充各种营养，达到营养摄入的均衡，保持身体机能的健康，故在各类食品、保健品、宠物食品、饲料中，氨基酸各组分的分析尤为的重要。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146274484_2813_2862401_3.png[/img][/align][align=left][font='等线'][size=13px] 图1. 17种氨基酸标准图谱[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146277743_8653_2862401_3.png[/img][font='等线'][size=13px]图2. 肉制品17种氨基酸图谱 [/size][/font][/align]

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