蔬菜、水果及制品中添加及非法添加检测方案

智能文字提取功能测试中

亚硝酸盐含量检测的方法 摘要：近几年来我国人口中患消化系统癌症的人数明显增多，这与我国人口摄入过多的硝酸盐和亚硝酸盐是分不开的。人体持续摄入少量的硝酸盐会引起消化不良、精神抑郁和头痛,当摄入0.3-0.5g亚硝酸盐即可引起中毒, 3克可致死。为了更加健康的饮食习惯，本文开始研究亚硝酸盐含量测试方法。针对亚硝酸盐的测定，本文借鉴前人的经验设计出一套合理可行的分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐的方案，该方案的线性范围为0 mg/L～0.3 mg/L，线性相关系数r=0.999 x，检出限为0.14 mg/kg，回收率为94.61%～104%的亚硝酸钠含量。 Abstract: In recent years the number of digestive system cancer in our population increased significantly, this and our country population, excessive intake of nitrate and nitrite are inseparable. The human body continuously nitrate intake amount will cause indigestion, depression and headache, when the intake of 0.3-0.5g nitrite can cause poisoning, 3 grams of death. In order to healthier eating habits, the beginning of this test method of nitrite content. According to the determination of nitrite, using a spectrophotometric determination of nitrite in vegetables is reasonable and feasible scheme design of previous experience, the linear range of the scheme is 0 mg/L ~ 0.3 mg/L, the linear correlation coefficient of r=0.999 x, the detection limit is 0.14 mg/kg, the recovery rate of sodium nitrite content of 104% ~ 94.61%. 关键词：分光光度法 蔬菜 亚硝酸盐 探究 前言 1.1 概述 亚硝酸盐是广泛存在于自然环境中的化学物质, 特别是在食物中。自然界中很多食物, 包括粮食、 蔬菜、 鱼类、 蛋类、 肉类中, 都含有亚硝酸盐。蔬菜是一种易于富集硝酸盐的作物, 尤其是叶类蔬菜,人体摄入的硝酸盐有 81.2%来源于蔬菜。硝酸盐、亚硝酸盐含量超标已成为影响蔬菜品质的一个重要因素。 关于亚硝酸盐的含量测定问题，前人已经研究出许多的方法，比如利用酚二磺酸法测亚硝酸盐、比色法测亚硝酸盐、α-萘胺法、亚硝酸盐与番红形成重盐（引起橘红色溶液在酸性介质中变成蓝色）、返滴定法测亚硝酸盐、甲基紫褪色分光光度法测测腌制品中亚硝酸盐、高锰酸根褪色法测亚硝酸盐等。 参考很多前辈研究出的蔬菜中亚硝酸盐含量检测的方法以及亚硝酸盐在各种蔬菜中亚硝酸盐的含量情况，我们设计出属于我们自己的一套检测方法，来探究不同条件下以芹菜、西红柿、大蒜为例的叶菜类、茄果类和鳞茎类蔬菜中的亚硝酸盐含量，以及如何处理减少蔬菜中的亚硝酸盐含量来方便人们健康食用。 1.2 意义 亚硝酸盐的测定方法较多，在众多的分析方法中，以分光光度法为基础的测 定方法，使用得最为广泛，分析亚硝酸盐时，硝酸盐对测定产生较强的干扰；催 化动力学法，虽然灵敏度较高，但精密度差，分析条件要求苛刻；采用重氮化偶 合法，测定亚硝酸盐时，新鲜蔬菜和瓜果中含有的色素及抗坏血酸等有机物会对 亚硝酸盐的提取及测定造成严重的干扰，本文以传统的重氮化偶合法为基础，改 进了样品预处理的方法，消除了抗坏血酸带来的干扰，提高了对亚硝酸盐测定的 精确度，得到了满意的测定结果。[9] 本文对蔬菜中亚硝酸盐的来源、危害以及蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的累积机制、影响因素、控制措施等方面在文献调研的基础上进行了科学的阐述。同时利用了重氮化偶合法主体针对常见的蔬菜在不同的贮存条件下，硝酸盐和亚硝酸盐的含量及转化关系作了对比实验研究，总结出它们的变化规律，从而为人类在日常生活中如何选择蔬菜、如何科学食用蔬菜、如何贮存蔬菜等方面提供了科学的依据。 通过正确的蔬菜处理方法，平时少食用硝酸盐和亚硝酸盐含量高的叶菜类蔬菜，如香菜、芥菜、芹菜等，多吃一些鳞茎类和茄果类蔬菜。也可以从将蔬菜浸泡10min左右，煮沸时间要控制在5-10min以内，减少煮熟蔬菜的放置时间，隔夜菜不食用等方面减少亚硝酸盐的摄入量。蔬菜亚硝酸盐含量的探究这个课题符合了当今社会的“绿色”主题，减少疾病的发生，有益于我们人类健康，有益于人类社会的发展。 方案 2.1 实验原理 亚硝酸盐采用重氮化偶合法测定， 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪及抗坏血酸后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。 2.2 实验条件探究 2.2.1 最佳吸收波长的选择 针对亚硝酸盐的最大吸收波长，我们搜集了大量的文献，比如《亚硝酸盐硝酸盐含量测定GB 5009.33-2010》中采用的是538nm为最佳吸收波长，《亚硝酸盐测定方法的比较与分析》中格里斯试剂比色法中采用的是550nm作为最佳吸收波长。大多数文献都采用的是538nm，极少数的采用550nm。而本实验的选择的关键还是在于自己的实验数据。 为了使标准液在测定过程中的吸光值在0.2-0.8之间，需通过多次的摸索在400-600nm波长之间每隔10nm改变一次波长来测定同一亚硝酸盐标准溶液的吸光度，所测得的吸光度有一个最大吸收峰，及最大吸收波长。 2.2.2 如何消除抗坏血酸对实验的影响 新鲜蔬菜中含有一定量的抗坏血酸，而抗坏血酸对亚硝酸盐的测定具有一定的影响，如何消除其影响？我们就想到了活性炭本身对抗坏血酸具有吸附作用而且对亚硝酸盐不会产生化学作用，因此初步判断活性炭可以消除抗坏血酸对亚硝酸盐含量测定产生的干扰。 参考《食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》将蔬菜用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用研钵制成匀浆备用。称10g（精确至0.01g）制成匀浆的试样，置于50mL的烧杯中，加10mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70°C左右的水约50mL，将试样洗入100mL容量瓶，于70°C中加热30min，取出至冷水浴中冷却，并放置至室温。在震荡上述提取液时，加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，再加入1g活性炭以脱色和除去抗坏血酸。加水定容至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上层清液用滤纸过滤，并弃去30mL初滤液，滤液备用。吸取40mL上述滤液于50mL带塞比色管中，试样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，放置3-5min，加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度。 2.3 实验部分 2.3.1 仪器 1、可见分光光度计；2、比色皿；3、电子天平；4、捣碎机；5、常用实验仪器 2.3.2 试剂及溶液配制 试剂均为分析纯，水均为去离子水。 1 试剂 亚铁氰化钾、乙酸锌、冰醋酸、硼酸钠、盐酸、氨水、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠 2 溶液配制[12] （1）饱和硼砂溶液（50g/L） ：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却备用。 （2）亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000mL。 （3）乙酸锌溶液（220g/L）：称220g乙酸锌，先加30mL乙酸溶解，用水稀释至1000mL。 （4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%（V/V）盐酸中，混匀后，至棕色瓶中，避光保存。 （5）盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中混匀后，至棕色瓶中，避光保存。 （6）亚硝酸钠标准溶液（100g/L）:准确称取0.1000g亚硝酸钠，加水移入1000mL容量瓶，加水稀释至刻度，混匀。 （7）亚硝酸钠标准溶液（10g/L）：临用前，吸取10mL亚硝酸盐标准溶液，置于100mL容量瓶，加水稀释至刻度。 2.3.3 分析步骤 1 试样处理 将蔬菜用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用研钵制成匀浆备用。 2 提取 称10g（精确至0.01g）制成匀浆的试样，置于50mL的烧杯中，加10mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70°C左右的水约50mL，将试样洗入100mL容量瓶，于70°C中加热30min[3]，取出至冷水浴中冷却，并放置至室温。 3 提取液净化 在震荡上述提取液时，加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，再加入1g活性炭以除去抗坏血酸。加水定容至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上层清液用滤纸过滤，并弃去30mL初滤液，滤液备用。 4 亚硝酸盐的测定 吸取40mL上述滤液于50mL带塞比色管中，试样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，放置3-5min，加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min[9]，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm[6]处测吸光度。 2.3.4 计算公式 根据第一章中标准曲线的绘制，我们得到的线性方程y=1.4242x+0.084（后面实验得知），可以推算出求亚硝酸盐含量的公式为： W：蔬菜中亚硝酸盐含量，mg/Kg； A：试液的吸光度； m：所称样品的质量，g； 87.7686：体积比换算出来的系数。 II