食品中磷检测方案(紫外分光光度)

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METASH上海元析仪器有限公司 前言 本标准对应于ISO3946《淀粉和淀粉制品中总磷的测定一一分光光皮法》(1982年英文版ISO2962乳和乳制品中总磷的测定一分子吸收光谱法》(1984年英文版)。 本标准与IS03946和ISO2962的一致性程度为非等效。 本标准代替GB/T12393-1990食物中磷的测定方法》和GB13101-1991《西式蒸煮、烟熏火腿卫生标准》中6.2磷酸盐的测定。 本标准与GB/T12393-1990相比主要修政如下： ――修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品中磷的测定》 -按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。 一将GB13101-1991《西式蒸煮、烟火腿卫生标准》中6.2磷酸盐的测定纳入本标准，改为第三法食品中磷酸盐的测定。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口 本标准第一法、第二法由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、北京市卫生防疫站负责起草；第三法由上海市食品卫生监督检验所、山东省食品卫生监督检验所、浙江省食品卫生监督检验所负起草 本标准第一法、第二法主要起草人：王光亚、曲宁、涂晓明、门建华；第三法主要起草人：姜培珍、张理、浦惠莉、郑理、郑蕾霞原标准于1990年首次发布，本次为第一次修订 ( 地址： 上 海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6 层 电话：0 2 1-64550709 021-64550390 传 真：0 2 1-64550709*8010 ) “元析仪器”微信公众号 ( 邮 箱： mail@metash.com metash@163.com ) ( 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 ) 食品中磷的测定 1范围 本标准规定了用分光光度法测定食食中的磷含量。 本标准第一法、第二法适用于各类食品中总磷的测定，第三法适用于西式蒸煮、烟熏火腿中复合磷酸盐(以磷酸盐计)的测定本方法第一法、第二法检出限均为2ug，线性范围：第一法分光去度法为5 ug~50ug， 第二法分吸收光谱法为2 u g~10ug 第一法 分光光度法 2原理 食物中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物被对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物一钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸收光值，以定量分析磷含量。 3试剂 3.1 硫酸：相对密度1.84 3.2 高氯酸-硝酸消化液：1+4混合液。 3.3 15%硫酸溶液：取15mL硫酸徐徐加入到80mL水中混匀。冷却后用水稀释至100mL。 3.4 钼酸铵溶液：称取0.5g钼酸铵[(NH4)sMo-024·4H20]用15%硫酸稀释至100mL 3.5 对苯二酚溶液：称取0.5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加人一滴浓硫酸(减缓氧化作用) 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010 “元析仪器”微信公众号 邮箱： mail@metash.com metash@163.com 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 3.6 亚硫酸钠溶液：称取20g无水亚硫酸钠于100mL.水中，使其溶解。此溶液于实验前临时配制，否则可使钼蓝溶液发生混浊。 3.7 磷标准储备液(100g/mL)：精确称取在105℃下干燥的磷酸二氢钾(优级纯)0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升含100pg磷。 3.8 磷标准使用液(10g/mL)：准确吸取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混勺。此溶液每毫升含磷10g 4 仪器 4.1 实验室常用设备。 4.2 分光光度计。 5分析步骤 5.1 试样处理 5.1.1 称取各类食物的均匀于试样0.1g~0.5g或混样2g~5g于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸、3mL高氯酸-确酸消化液，置于消化炉上。瓶中液体初为棕黑色，待溶液变成无色或微带黄色清亮液体时，即消化完全将溶液放冷，加20mL水，赶酸。却，转移至100mL容量瓶中，用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为试样测定液 5.1.2取与消化试样同量的硫酸、高氯酸-硝酸消化液，按同一方法做空白溶液 5.2磷标准曲线 准确吸取磷标准使用液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mnL(相当于含磷量0、5、10、20、30、40、50 ug)， 分别置于20mL具塞试管中，依次加入2mL钼酸溶液摇匀，静置几秒钟。加入1mL亚硫酸钠溶液，1m[.对苯二酚溶液，摇匀。加水至刻度，混匀。静置0.5h以后，在分光光度计660nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com “元析仪器”微信公众号 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 5.3测定 准确吸取试样测定液2mL及同量的空白溶液(5.1，2)，分别置于20mL具塞试管中，以下操作步骤同标准曲线(5.2)。以测出的吸光度在标准曲线上查得试样液中的磷含量。 5.4结果计算 式中： X――试样中磷含量，单位为毫克每百克(mg/100g)； m1——由标准曲线查得或回归方程算得试样测定液中磷的质量，单位为毫克(mg) V1——试样消化液定容总体积，单位为毫升《mL)； V2——-测定用试样消化液的体积，单位为毫升(mL)； M—―试样的质量，单位为克(g)。 计算结果保留两位有效数字。 6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5% 第二法分子吸收光谱法 7原理 食品中的有机物经酸破坏以后，磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。用氯化亚锡、硫酸肼还原钥酸铵成蓝色化合物一一钼蓝。蓝色强度与磷含量成正比，可进行比色定量 8试剂 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com “元析仪器”微信公众号 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 8.1硝酸 8.2硫酸：相对密度1.84。 8.3高氯酸 8.415%硫酸溶液：取15mL硫酸，加人到80mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。 8.55%硫酸溶液：取5mL硫酸，加入到90mIL.水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL。 8.63%蘋酸溶液：取3mL硫酸，加入到90mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100mL8.7钼酸铵溶液：同3.4。 8.8氯化亚锡-硫酸肼混合液：称取0.1g氯化亚锡(SnC12·2H20)，0.2g硫酸肼(NH2NFH2H2SO)，加3%硫酸溶液并用其稀释至100mL。此溶液置棕色瓶中，贮冰箱至少可保存一个月。 8.9磷标准储备液：精确称取在105℃千燥至恒量的磷酸二氢钾(优级纯)0，4394g，用水溶解于100mL容量瓶中，并加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含1mg磷。置聚乙烯瓶贮于冰箱中保存 8.10磷标准使用液：准确吸取磷标准储备液1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀 此溶液每毫升含10g碳 9仪器 分光光度计 10分析步骤 10.1试样处理 称取各类食品的均匀干样0.1g~0.5g，湿样5g左右于100mL三角瓶中，加硝酸15mL， 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010 “元析仪器”微信公众号 邮箱： mail@metash.com metash@163.com 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 高氯酸mL，硫酸2mL，混匀。于电热板或电炉上小火加热消化，瓶中液体开始变棕黑色时，不断沿瓶壁补加硝酸至有机质分解完全；加大火力，至消化液产生浓密的白烟，溶液澄明或做带黄色。消化液放冷，加水20mL。放冷以后转移至100mI.容量瓶中，用水多次洗涤三角瓶，合并洗液于容量瓶中，加水至刻度，混匀。作为试样测定溶液取与消化试样同量的硝酸、高氯酸、硫酸，按同一方法做试剂空白溶液 10.2标准曲线绘制 取磷标准使用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、、1，0mL(相当于磷0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0gg)，分别置于25mL比色管中，各加水约15mL，5%硫酸溶液2.5mL，钼酸铵溶液2mL，氯化亚锡-硫酸肼混合液0.5mL，各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min以后，用2cm比色杯，在60nm波长处，以零管作参比，在分光光度计上分别测定其吸光度，以吸光度对磷含量绘制标准曲线。 10.3测定 准确吸取试样测定溶液 1mL~2mL 及同量的试剂空白液，分别置于 25mL 比色管中，各加水约15mL，5%硫酸溶液 2.5mL，钼酸铵溶液 2mL，氯化亚锡-硫酸井混合液0.5mL。各管均补加水至25mL，混匀。在室温放置20min 以后，用 2cm 比色杯，在660nm 波长处，用水作参比，在分光光度计上分别测定其吸光度。以测出的吸光度在标准曲线上查得试样液的合量。 11结果计算 式中 X—―试样中磷含量，单位为毫克每百克(mg/100g)； M1——由标准曲线上查得试样测定溶液中磷的质量，单位为微克(pg)； 地址：上海市松公区南乐路1276弄115号9号楼6层 “元析仪器”微信公众号 电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 mo_-一空白溶液中磷的质量，单位为微克(g)y -试样的质量，单位为克(g) V1―—试样消化的总体积，单位为毫升(mL) v2——测定用试样消化液的体积，单位为毫升(mL) 计算结果保留两位有效数字。 12 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5% 第三法食品中磷酸盐的测定 原理 试样中的磷酸盐与酸性锶酸铵作用，生成淡黄色的磷铝酸盐，此盐可经还原呈显蓝色，一般称为钼蓝。蓝色的深浅，与磷酸盐含量成正比。 14试剂 14.1稀盐酸(1+1) 14.2铝酸铵溶液(50g/L)：称取25g钼酸铵溶于300mL水中，再加75%(体积分数)硫酸溶液(溶解 75mL 浓硫酸于水中，再用水稀释至100mL)使成 500mL。 14.3对氢配(对苯二酚)溶液(5g/L)：称取0.5g对氢配(对苯二酚)，溶解于100mL水中，加硫酸1滴以使氧化作用减慢。 14.4亚硫酸钠浴液(200g/L)：称取20g 亚硫酸钠溶解于 100mL 蒸馏水中。此溶液应每次试验前临时配制，否则可能会使钼蓝溶液发生混浊。 14.5磷酸盐标准溶液：精确称取 0.7165g 磷酸二氢钾(KH1P0)溶于水中，移入1000mL 容量瓶中，并用水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于500g磷酸盐。吸取10.0mL此溶液，置于500mL容量瓶中，加水至刻度，此溶液每毫升相当于10g磷酸 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层 “元析仪器”微信公众号 电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 盐(PO-)。 15分析步骤 15.1标准曲线绘制 分别吸取磷酸盐标准溶液(每毫升相当于10 ng磷酸盐)0.0，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分别置于 25mL比色管中，再于每管中依次加入 2.0mL 铝酸铵溶液， 1mL200g/L 亚硫酸钠溶液， 1mL 对氢醌(对苯二酚)溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静止30min后，以零管溶液为空白，在分光光度计于660nm处比色，测定各标准溶液的光密度，并绘制标准曲线 5.2测定 15.2.1将瓷素发器在火上加热灼烧、冷却，准确称取均匀试样 2g~5g，在火上灼烧成炭分，再于550℃下成灰分，直至灰分呈白色为止(必要时，可在加人浓硝酸湿润后再灰化，有促进试样灰化至白色的作用)，加稀盐酸(1+1)10mL 及硝酸2滴，在水浴上蒸千，再加稀盐酸(1+1)2mL，用水分数次将残渣完全洗入 100mL 容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，过滤(如无沉淀则不需过滤)。 15.2-2取波液0.5mL(视辞量多少定)，置于25mL比色管中，加入2mL钼酸铵溶液，以下按15.1自“1mL200g/L 亚硫酸钠溶液，…”起依法操作。根据测得的光密度，从标淮曲线上求得相应磷的含量。 16结果计算 式中 X——试样中磷酸盐含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； m—―从标准曲线中查出的相当于磷酸盐(PO)3“)的质量，单位为毫克(mg)； m——测定时所吸取试样溶液相当于试样的质量，单位为克(g)。 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com “元析仪器”微信公众号 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 计算结果保留两位有效数字 17精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5% 地址：上海市松江区南乐路1276弄115号9号楼6层电话：021-64550709021-64550390传真：021-64550709*8010邮箱： mail@metash.com metash@163.com “元析仪器”微信公众号 上海元析主要产品紫外可见分光光度计、微波消解仪、TOC分析仪、原子吸收分光光度计、火焰光度计 上海元析触屏紫外可见分光光度计X-8本标准对应于ISO3946《淀粉和淀粉制品中总磷的测定一一分光光度法》(1982年英文版ISO2962乳和乳制品中总磷的测定一分子吸收光谱法》(1984年英文版)。本标准与ISO3946和ISO2962的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T12393-1990食物中磷的测定方法》和GB13101-1991《西式蒸煮、烟熏火腿卫生标准》中6.2磷酸盐的测定。本标准与GB/T12393-1990相比主要修政如下：——修改了标准的中文名称,标准中文名称改为《食品中磷的测定》——按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。——将GB13101-1991《西式蒸煮、烟火腿卫生标准》中6.2磷酸盐的测定纳入本标准,改为第三法食品中磷酸盐的测定。