焦糖色素中4-甲基咪唑检测方案(液相色谱仪)

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Application)n NNo. L551Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2019年11月400-650-0439 ApplicationNewsNo.L551 高效液相色谱法 焦糖色素中4-甲基咪唑的常规分析及快速分析研究 焦糖色素是在各类食品中广泛应用的食品添加剂，用于将食品着上褐色。焦糖色素可通过加热白糖或葡萄糖等糖类物质制得，但制造过程中有时会生成副产物4-甲基咪唑。国际毒理学计划 (NTP)动物实验结果表明，4-甲基咪唑有高致癌性，据此，国际癌症研究机构(IARC) 的专题论文中刊载其为有致癌风险的化合物。”基于此背景，欧洲和美国对焦糖色素中的4-甲基咪唑制定了限量标准，此外，加尼福尼亚州也对其每日最大摄入量设定了限值。” 本文将对使用“Nexera-iMMT”分析可乐中的4-甲基咪唑的相关实验展开介绍。 K. Nakajima 利用 Nexera-i MT的 HPLC流路系统分析4-甲基咪唑 表1为分析条件。图2为在可乐原液中加入50 ug/L 的4-甲基咪唑，按上述条件进行分析时的色谱图。按照表1的条件，4-甲基咪唑的色谱峰不受可乐内其他基质成分的影响。 接着，将4-甲基咪唑的标准物质溶于超纯水中，配成5mg/L的储备溶液。使用流动相将储备溶液稀释成5 mg/L、1 mg/L、500 ug/L、100 ug/L、50 ug/L的标准溶液，绘制标准曲线。在浓度范围内，包括低浓度区域，所得校准曲线线性关系良好，R’>0.9999。表2所示为添加 50 ug/L 4-甲基咪唑到可乐原液对应的峰的峰面积重复性与添加回收试验结果。 图1焦糖色素与4-甲基咪唑的化学结构式 表1分析条件(常规分析) System ：Nexera-iMTColumn ： Shim-packMVP-ODS(250 mmL.×4.6 mml.D.，5 um)Mobile phase ：A： methanolB：water containing25 mmol/L (sodium) phosphatepH=2.825 mmol/Lsodium 1-octanesulfonateA/B=1/9Flow rate ： 1 mL/minColumntemp.1.：40℃Injection vol. ：20 uLDetection ：PDA (214 nm) 图2可乐中的4-甲基咪唑的色谱图 (黑：可乐原液、红：可乐中加入4-甲基咪唑后的试样) area 图34-甲基咪唑标准曲线(常规分析) (5mg/L， 1 mg/L，500 ug/L， 100 pg/L， 50 pg/L) 表2常规分析条件下4-甲基咪唑的分析结果 4-methylimidazole (50 ug/L in cola) %RSD (peak area，n=6) 3.61% Spike and Recovery Test 106.8% |利用Method Transfer功能建立4-甲基咪唑的快速分析方法 岛津“Nexera-i MT”系统拥有 HPLC 和 UHPLC2个流路系统，1台仪器可实现从常规分析条件到快速分析条件的切换。利用这个功能，对表1可乐中4-甲基咪唑的常规分析条件进行了研究。此外，运用 UHPLC 系统提高 HPLC 系统的分析速度时，需要切换分析条件。利用 LabSolutionsM搭载的“Method Transfer”功能即可实现到快速分析方法的转换(图4)。 图4利用 Method Transfer 功能设定快速分析条件画面 使用Nexera-iMT的UHPLC流路系统对4-甲基咪唑进行快速分析 利用“Method Transfer”功能建立的分析条件如表3所示。图5为按照表3中的条件对可乐中加入的4-甲基咪唑进行分析后的色谱图。图6为同样分析条件下的标准曲线，线性良好，相关系数R’>0.9999。此外，表4为重现性试验与添加回收试验结果，表明建立的快速分析条件与常规分析条件对于数据的定性定量分析具有等效性。 1)国际癌症研究机构关于对人类的致癌危害物识别的专题论文，第101卷2)加州第65号提案 图5可乐中的4-甲基咪唑分析的色谱图 (黑：可乐原液、红：可乐中加入4-甲基咪唑后的试样) area 图64-甲基咪唑标准曲线(快速分析) (5 mg/L， 1 mg/L， 500 ug/L， 100 ug/L， 50 pg/L) 表4快速分析条件下4-甲基咪唑的分析结果 4-methylimidazole (50 ug/L in cola) %RSD (peak area， n=6) 2.41% Spike and Recovery Test 106.8% 结论 使用“Nexera-i MT”进行了可乐中4-甲基咪唑的 HPLC分析。此外，利用LabSolutions 的 MethodTransfer 功能，可轻松实现由HPLC分析条件到 UFPLC 快速分析的条件的转化，将原本1台装置需要花费50分钟的分析缩短至10分钟，同时获得与 HPLC分析等效的定性定量结果。 焦糖色素是在各类食品中广泛应用的食品添加剂，用于将食品着上褐色。焦糖色素可通过加热白糖或葡萄糖等糖类物质制得，但制造过程中有时会生成副产物4-甲基咪唑。国际毒理学计划（NTP）动物实验结果表明，4-甲基咪唑有高致癌性，据此，国际癌症研究机构（IARC）的专题论文中刊载其为有致癌风险的化合物。基于此背景，欧洲和美国对焦糖色素中的4-甲基咪唑制定了限量标准，此外，加尼福尼亚州也对其每日最大摄入量设定了限值。本文将对使用“Nexera-i MT”分析可乐中的4-甲基咪唑的相关实验展开介绍。