动物性蛋白质饲料中胃蛋白消化率检测方案(生物显微镜)

智能文字提取功能测试中

参考标准： GB/T 17811-2008 雪实验原理： 已脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定)，在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。 二、实验仪器配置 仪器设备 主要作用 参数要求 用于试样的GB、T保温酶解消化过 控温范围20C~50℃， 水浴式或空气浴式即可，转速可调， 15r/min~300r/min 恒温式平转摇床 程 粉碎机 用于固体饲料样品的粉碎 实验室样品粉碎机 分析筛 样品前处理设备，用来筛选目标大小的物质 孔径0.84mm(20目) 分析天平 用于样品和试剂的称量 感量0.0001g 索氏抽提器 样品的前处理阶段，用于样品的脱脂处理 (FOSS索氏提取系统) 题凯氏定氨仪 用于蛋白质含量的测定 以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪 三、试剂和材料 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。实验用水应符合GB/T 6682 中三级水的规格。 试剂名称 规格/浓度 配制方法 备注 乙醚 AR 无需配制 在空气中会慢慢氧化成过氧化物，过氧化物不稳定，加热易爆炸，应避光保存。 丙酮 AR 无需配制 易燃、易挥发。 胃蛋白酶溶液 胃蛋白酶活性1：10000 将6.1ml浓盐酸稀释至1000ml水中(溶液PH1~ 2)，水浴加热至42℃~45℃， 加入2g(精确至±0.0002g)活性为1：10000生化级胃蛋白酶， (1)此溶液临用前配制。 20 IU/ml 并缓慢搅拌直至溶解。 (2)勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。 浓硫酸 AR， 98% 无需配制，直接使用 具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。 混合催化剂 AR 称取0.4g CuSO45H20， 6gK2SO4，磨碎混匀 氢氧化钠 AR， 40%水溶液 称取40g氢氧化钠用去去子水配成100ml溶液。 此溶液置于塑料桶中保存。 硼酸 AR，2%水溶液 称取2g硼酸固体，加热溶于水，配成100ml溶液。 混合指示剂 称取0.1g甲基红溶于95%乙醇，配成100ml溶液； 阴凉处保存 称取0.5g溴甲酚绿溶于95%乙醇， 配成100ml溶 液 有效期三个月 两溶液等体积混合。 硫酸铵 AR 无需配制 使用前在105℃干燥箱中干熳至恒重 蔗糖 AR 无需配制 糖类物质，不能在105℃干 燥箱中干燥，使用时可不干燥。 盐酸标准溶液 AR 具体见附录2 四、实验内容 序号 实验项目 操作内容 注意事项 样品制备 选取有代表性的样品用四分法缩减至200g， 粉碎后全部通过20目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。 试样勿吸潮变质。 2 样品脱脂 称取4g试样于滤纸筒中，用FOSS 索式提取系统按粗脂肪检测方法进行，脱脂后的样品只需在室温风 干，去掉石油醚即可。 含脂肪小于1%可不脱脂；含脂肪1%~10%建议脱脂；含脂肪大于10%则应脱脂。 胃蛋白酶消化 称取已脱脂风干后的试样1.0000g(精确至±0.010g)于250ml干燥的带盖磨口瓶中，加150 ml新配制的并已预热至42℃~45℃的胃蛋白酶溶液，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床上，于45℃、80 r/min恒定速度搅动16小时进行保温酶解消化。 (1)应确保磨口瓶中样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿。(2)同时做酶液空白测定(即不加试样，其它步骤一样) 4 消化残渣的处理 从搅动器上取下磨口瓶，呈45°角放置，让残渣沉 淀15minl以上，随后在铺有纸纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。 (1)先过上层清液，液体通过滤纸 的速度应与倾入的速度相同。 (2)过滤过程要小心操作，保证残渣毫无损失。 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml丙酮， 用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶 口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和 残渣流到濾纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小 心取下载有残渣的的纸(用滤纸将将残包裹好)，无损 地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。 磨口瓶内的残渣要全部冲洗至滤纸儿；上 粗蛋白质的测定 将上述已烘干的滤纸包无损地移入凯氏烧瓶中，按 《FOSS 定氨仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定残渣粗蛋白质的质量分数(w2)。同时，称取脱脂风干的样品0.3g(精确至0.0002 g)，直接按《FOSS 定氨仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》 测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数 (w1)。 测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。 6 计算 X 1-“：x100 X-试样胃蛋白酶消化率，以质量分数计(%)； w1-脱脂末酶解的样品中粗蛋白质的质量分数(%)； w2-脱脂每解后的残渣中粗蛋白质的质量分数(%)。 质量分数(%)。 国标 GB/T 17811-2008 中规定了动物性蛋白质饲料 胃蛋白酶消化率的测定 方法，适用于鱼粉、肉粉、虫粉、乳、乳制品、水解蛋白以及其他动物产品等所有动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定。 动物性蛋白质饲料    胃蛋白消化率的测定   过滤法 参考标准：GB/T 17811-2008 一、实验原理：已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。 二、实验仪器配置 仪器设备主要作用参数要求恒温式平转摇床用于试样的GB、T保温酶解消化过程控温范围20 ℃~50℃，水浴式或空气浴式即可，转速可调，15r/min~300r/min粉碎机用于固体饲料样品的粉碎实验室样品粉碎机分析筛样品前处理设备，用来筛选目标大小的物质孔径0.84mm(20目)分析天平用于样品和试剂的称量感量0.0001g索氏抽提器样品的前处理阶段，用于样品的脱脂处理（FOSS索氏提取系统）凯氏定氮仪用于蛋白质含量的测定以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪孙庆磊 17615852702