血液中DNA检测方案(PCR)

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微滴式数字PCR技术服务产品优势荧光定量PCR 微滴式数字PCR系统MicroDrop⑧数字PCR 只品 滴 科研技术服务解决方案 微滴式数字PCR系统MicroDrop TM 永诺生物FOREVERGEN Makee PCR Dic MicroDrop FOREVERGEN iital 设置 00Q运行 分析 一 t日cmao vergen.cn 目录 微滴式数字PCR(ddPCR)原理 02 微滴式数字PCR实验 仪器配置· 03 实验流程 04 结果判读 04 微滴式数字PCR技术服务 产 品优势05 应用场景 07 核酸的数字化检测解决方案 10 微 滴式数字PCR检测报 告模板 11 企业介绍 12 微滴式数字PCR系统MicroDrop 简言之，微滴体系在分配过程中，引物、酶等组分过量，而模板则是不过量的。模板DNA分子随机地进入到各个小的反应体系中，经过PCR扩增后，包含模板的体系完成扩增，不包含模板的体系无扩增。模板DNA分子进入各个小的反应体系的过程满足泊松分布规律，因此，检测扩增PCR产物的信号强度，带入泊松分布计算，即可计算出起始模板分子的拷贝数。 微滴式数字PCR实验 仪器配置 MicroDrop⑧样本制备仪 ·2分钟制备8个样本。 ·20pl体系生成数万个纳升级的微滴。 ●高精度微滴生成芯片设计，三维微纳防污结构 生成足够多的微滴，最终使结果更加符合泊松分布规律，不易受各类误差因素影响。 MicroDrop⑧生物芯片分析仪 ·支持FAM/VIC双通道荧光检测，支持探针法及染料法，支持多重数字PCR； ·样本通量高达96个样本，支持灵活设定； ·线性范围达到6个数量级，灵敏度高达0.01%。 实验流程 “数出基因拷贝”●0或1的反应。 数字PCR ddPCR通过对样本的细分，使有限拷贝数的模板在独立的体系内完成扩增反应，并通过产物的荧光定量，真正实现了对待测样品的绝对定量。 核酸抽提过程中，由于样本背景不同，以及抽提试剂的影响，样本中容易混入诸如钠盐、苯酚、乙醇等PCR反应抑制剂，影响PCR扩增效率甚至阻断PCR反应。 ddPCR采用终点判读的方式，相较QPCR而言，能够在较高浓度的抑制剂环境下维持PCR的扩增效率，克服抑制物对定量结果的干扰，高度还原检测样品真实拷贝水平。 更高的检测灵敏度 Well Sample Name Target Name CT A1 DEPC gapdh 14.35 A2 gapdh 14.64 A3 gapdh 14.41 B1 0.05%苯酚 gapdh 14.72 B2 gapdh 14.94 B3 gapdh 14.73 C1 0.2%苯酚 gapdh 14.72 C2_ gapdh 15.00 C3 gapdh 15.10 D1 0.5%苯酚 gapdh Undetermined D2 gapdh Undetermined D3 gapdh 36.03 ddPCR在突变的检测中，可以提升高丰度野生型背景下的低突变(<0.1%)的检出率，理论可检出的突变率在0.0002%，事实上，我们在0.0004%以上的突变中均获得重复性较好的结果。 需要通过Ct值进行计算 ddPCR的微滴生成体系，可兼容10^6的模板浓度范围，并且在检测更低的模板浓度范围的模板或稀有模板样品时更具优势。ddPCR的数据精度也决定了它在样品间差异比较中的先天优势，能够检测更小范围的浓度差异。 痕量核酸分子的高灵敏检测 1.血液HIV检测 N Engl Med 2014；370：678 The NEW ENGLANDDOI：10.1056/NEJMc1315498JOURNAL ofMEDICINE Absence of HIV-1 after Treatment Cessation in an Infant Age HIV DNA detected byddPCR Replication-competentvirus detected 24 months 37 copies/millionPBMC No 26 months 4 copies/millionPBMC No 新生儿出生时为HIV阳性，进行抗病毒治疗后，29天后即无法通过常规检测手段检测到HIV；24，26月龄时， 采用ddPCR技术对该名婴儿HIV DNA进行检测，灵敏度高达0.0004%。 2.气溶胶中SARS-CoV-2病毒载量检测 Article Published： 27 April 2020nature Aerodynamic analysis of SARS-CoV-2 in two Wuhanhospitals Yuan Liu， Zhi Ning， Yu Chen， Ming Guo， Yingle Liu， Nirmal Kumar Gali， Li Sun， Yusen Duan， JingCai， Dane Westerdahl， Xinjin Liu， Ke Xu， Kin-fai Ho，Haidong Kan， Qingyan Fu & Ke Lan Nature 582，557-560(2020)|Cite this article Publicarea Fangcang Hospital pharmacy TSP 3 lenmin Hospital doctor office TSP lenmin Hospital outpatient hall TSP 0 tenmin Hospital outdoor TSP 7 University office doorside TSP Jniversityhospital outpatient hall TSP 0 Community checkpoint TSP Residential building TSP Supermarkceet TSP )epartment store1 TSP 11 Department store 2 TSP 3 Blank control Field blank O Field blank O 利用微滴式数字PCR技术，对采集的环境气溶胶样本进行定量分析，以确定各采样点样品的新冠病毒气溶胶载量。ddPCR可以交费准确的还原环境中的载量，对于微量、痕量样本的检测具有明显的优势。 医院和公共环境各采样点的新冠病毒载量(拷贝数/立方米空气) 3.eDNA预测种群状态 eDNA是指在环境样品中所有被发现的不同生物的基因组DNA的混合。中华鲟是我国濒危物种，目前采用ddPCR的办法检测采集江水样本中的eDNA中的中华鲟基因组成分，可以有效的检测该物种的存在和种群状况。 核酸的定量差异分析 1.miRNA的绝对定量 naturemethods 比较而言，使用ddPCR分析miRNA的差异变化可以获得更灵敏、准确的数据，同组中不同样本间的重复性也更好，对于分子较小不易准确检测的miRNA来说， ddPCR的方法更加适合。 2.血浆circRNA的绝对定量 使用绝对定量的ddPCR分析circRNA的差异变化可以更加准确地描述样本目的分子的含量，缩小组内误差，提高组内的有效重复数，对组间差异较小的circRNA有更为理想的检测结果。 J Mol Med https：//doi.org/10.1007/s00109-017-1600-y JMolMed CrossMark 包括miRNA， circRNA， IncRNA， mRNA， piRNA等RNA分子和各类DNA分子在内的核酸样本，均可以在ddPCR的体系下完成精准的绝对定量检验，并准确区分样本间的差异，助力科研假设的快速验证。 稀有突变的检测 1.白血病中稀有突变的评估 natureIdentification of pre-leukaemic 利用微滴式数字PCR实现低至单个拷贝、含量0.001%的突变分子的检测。急性髓细胞性白血病(AML) 的DNMT3a基因突变导致造血干细胞异常生长，产生白血病前干细胞， ddPCR检测到极其稀少的DNMT3a基因突变，能够帮助医生判断疾病的预后和提供用药指导的建议。 2.非小细胞肺癌EGFR T790M的鉴定 Biology of Human Tumors ClinicalC aBncerResearch WT-TET Empty drop FlOW Detection Yasuhiro Koh1.2.3 非小细胞肺癌 (NSCLC) EGFR T790M突变和靶向药抗药性被证明显著相关， ddPCR的高检测灵敏度可以检出肺癌患者肿瘤组织或外周血游离DNA (cfDNA) 中存在的甚至单个拷贝的EGFR T790M突变。 MicroDrop检测肺癌患者血浆T790M 突变率1.3%。 核酸表达差异检测 RNA差异表达检测 DNA拷贝数检测 需求 稀有突变的检测 痕量核酸样本检测 . 确定位点的融合基因检测 (包括微生物) . 环境DNA检测 FFPE原源的核酸的检测 定制Panel 微滴式数字PCR检测报告模板 实验原理 直观的结果展示 数据分析报告9 企业介绍 永诺拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR系统，系统由样本制备仪、生物芯片分析仪、QuantDrop分析软件组成。系统通过对PCR反应体系进行液相的有限稀释， 2-3mins将20ul体系分割为2-10万个皮升级的独立油包水微滴，无需依赖传统荧光定量PCR的标准曲线即可实现核酸的绝对定量。系统一次可检测96个样本，一键式操作，人性化软件设计，是一款自动化操作的高通量系统。通过FAM/VIC双通道荧光检测，支持探针法、染料法，可实现多重PCR，线性范围可达6个数量级，灵敏度高达十万分之一。配备高精度微流控芯片，同时搭载40多种检测试剂盒，支持定制开发应用试剂。广泛应用于医院、科研、工业、政府、疾控、海关等各个领域。 广州永诺生物科技有限公司成立于2010年，总部位于广州国际生物岛，是一家专注于医学科学技术开发与服务、分子诊断产品研发与生产的高新技术企业。公司目前占地面积近6000m， 其中硕、博士以上学历员工占比近40%。公司依托先进的技术力量以及优秀的人才储备，在科研服务、医学检测和数字PCR产品三大业务上保持领先的竞争优势。 公司成立至今申请国家专利40多项，授权21项，计算机软件著作权8项，广东省高新技术产品证书8项，省、市等科技计划项目10多项，2018年入围了大湾区生物科技创新企业50强，获得国家高新技术企业，广州市科技创新小巨人企业、广东省高新技术企业培育库入库企业、广州市企业研发机构等荣誉称号。 MicroDropQ 微滴式数字PCR系统 第三方医学检验 科研服务 荣誉资质 数字PCR专利证书 发明专利证书 书 书 书 书 书一 一中布 数字PCR发表文章 .●●. ●●● ●●. 自● MicroDropR一点一滴 见微知著 .●●·●●·。 · ●●●●●● ●●●● ● o ● ● MicroDropR一点一滴 见微知著 广州库基生物科技有限公司是永诺生物旗下全资子 公司，成立于2014年，位于广州国际生物岛，是一家专注于生命科学研究技术开发与服务、科研试剂生产及销售的企业。公司目前占地面积2000平方米，硕、博士以上学历员工占比近40%，依托先进的技术力量以及具有竞争优势的人才储备，建成符合国家标准的SPF级实验动物中心及常规分子生物学实验，引进国际先引进国际领先的Illmina、Oxford Nanopore、BD单细胞、MicroDrop数字PCR检测平台，构建高规格的生物标本库和数据库，开发具有自主知识产权的基因捕获技术和大数据挖掘算 法。致力于为国内生命科学领域的合作 伙伴提供专业、可靠、快速、 站式的科研解决方案。 永诺生物FOREVERGEN 广州永诺生物科技有限公司 广州库基生物科技有限公司 网址： www.forevergen.cn 地址：广州国际生物岛螺旋三路6号第四层 永诺生物 库基生物 www.forevergen.cn www.fore