蒸馏白酒中三氯蔗糖检测方案(色谱检测器)

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thermoscientific热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com口3口赛默飞色谱和质谱中国 采用电雾式检测器对蒸馏白酒中三氯蔗糖进行高灵敏测定 冉良骥 金燕 赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 本文尝试采用比ELSD灵敏度更高的电雾式检测器(以简称CAD)，以及柱性能更好的AccucoreTM核壳型色谱柱对蒸馏型白酒中三氯蔗糖进行检测，取得了较为 理想的效果：方法定量限可达0.04mg/kg，满足GB22255-2014定量限7.5mg/kg的基本要求。 关键词 高效液相色谱，三氯蔗糖，蒸馏白酒，电雾式检测器 1.引言 白酒是我国传统的蒸馏酒类型，历史悠久，芳香浓郁，近年来随着市场竞争的日益激烈，个别企业为了迎合售者不断提升的产品需求，尝试添加甜味剂来改变白酒风味，增加回甜感；然而，我国强制性国家标准GB2760-2014《食品添加剂使用标准》明确规定，蒸馏酒中禁止加入各类甜味剂。因此，如何快速准确的对白酒中可能添加的甜味剂进行检测成为白酒监管部门的一大挑战。 三氯蔗糖是一种以蔗糖其为原料生产的功能性甜味剂，甜度是蔗糖的600倍，由于安全性相对较高，近年来：在食品和保健品中的应用日益广泛。与其它常见的甜 味剂(如安赛蜜、糖精钠等)不同，三氯蔗糖不含生色基团，没有明显的紫外吸收，因此国家标准GB22255-2014《食品中三氯蔗糖的测定》规定采用RI或ELSD对三氯蔗糖进行测定，但由于RI和ELSD的仪器灵敏度较低，方法检测限仅为2.5ppm，对于规定不得检出三氯蔗糖的白酒样品，可能产生假阴性结果。 本文尝试采用比ELSD灵敏度更高的CAD检测器，及柱性能更好的核壳型色谱柱对白酒中三氯蔗糖进行检测，取得了较为理想的效果：方法定量限可达0.04mg/kg， 满足GB22255-2014定量限7.5mg/kg的基本要求。 2.实验部分 2.1仪器与试剂 2.1.1 高效液相色谱仪 ( Thermo Scientific UltimateLPG 3400系列，包括带在线脱气单元的低压四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，电雾式检测器) 2.1.2超纯水机(Thermo Scientific GenPure ProUV-TOC， P/N： 50131948) 2.1.3乙腈(色谱纯， Fisher Chemical， P/N：A998-4) 2.1.4三氯蔗糖标准品(Dr. Ehrenstorfer GmBH) 2.2化合物信息及溶液配制 2.2.1 三氯蔗糖信息息(表1) 表1.化合物信息表 化合物信息表 中文名 英文名 CAS 分子式 分子量 三氯蔗糖 Sucralose 56038-13-2 C12H19Cl3O： 397.63 2.2.22标准品溶液：精密称取三氯蔗糖对照品适量，加水溶解定容为 1.0 mg/mL的混合溶液，作为1000 ppm的标准贮备液。精密量取标准贮备溶液适量，以水稀释制成浓度为10、5、2、1、0.5、0.2ppm的系列混合标准溶液。 2.2.3 样品溶液：精密称取样品5.0 g， 置于50mL蒸发皿中，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL 流动相溶解，溶液过0.45um滤膜，取续滤液作为供试品溶液. 2.3色谱条件 色谱柱：Accucore C18 (4.6×150mm， 2.6 um)(P/N：17126-154630) 柱温：35℃； 进样量：20pL；流动相：.乙乙：水(10：90)流 速：1.0ml/min检测器： CAD Veo RS， 雾化温度50℃， Filter：5.0 3.1色谱柱选择 尝试采用常规C18色谱柱结合ELSD对样品进行分析，不但分析时间长，且基质干扰严重，个别样品经质谱二次确认发现为假阳性，后改为柱效更高的Accucore C18色谱柱，结果发现可有效排除基质干扰(图1中三氯蔗糖色谱峰与附近杂质峰在普通C18色谱柱上完全重叠)。 图1.样品及加标样品色谱图(红：加标样品，黑：样品) 3.22 (CAD检测器雾化温度优化 对于挥发性较弱的化合物，可通过提高CAD检测器雾化管温度有效降低流动相本底干扰，从而提高信噪比和方法灵敏度。经对比发现， CAD对三氯蔗糖检测灵敏度明显高于ELSD，当进一步提高CAD雾化温度后(由35℃提高至50℃)，在相同进样量下，三氯蔗糖信噪比可进一步提高5倍以上，故确定本方法的雾化温度为50℃。(对于Veo检测器而言，50℃为雾化温度上限值。) 表2(CAD 雾化温度优化 图2标准品测定色谱图 ( CAD 蒸发管温度：红 50℃，黑35℃) 3.3方法的重现性 取浓度为1 ppm标准溶液，连续进样5次，保留时间和峰面积的RSD分别为0.07%和1.13%，说明本方法精密度良好。 图3加标样品重复性测定色谱图 3.4方法的线性、检出限 取不同浓度三氯蔗糖对照品溶液分别进样20pL， 以三氯蔗糖的浓度x与峰面积y直接进行线性回归。结果表明：在0.2~10.0 pg/mL浓度范围，呈现出良好的线性关系，线性方程及曲线见表3及图4. 取浓度为 0.2 ug/mL 和 0.1 ug/mL标准溶液，分别进样20pL，测得信噪比约为10和3，故本品的仪器定量限为 0.2ug/mL， 检测限0.1 ug/mL(图5)；按照前处理方法进行折算，方法定量限可达 0.04 pg/mL，方法检测限可达0.02 pg/mL。 表3方法线性考察结果 峰名称 评估类型 数据点 判定系数 CO(截距) C1(斜率) 三氯蔗糖 Area 6 0.9995 -0.0001 0.0327 图4线性回归曲线 图5方法检测限测定色谱图(0.1 ug/mL) 3.5实际样品的分析 按上述方法分别测定3种白酒样品，结果见表4。 表4样品考察结果 批号 含量mg/g #102 未检出 #152 123.9 #153 144.1 3.6 方法的加标回收率 取样品#102做加标回收率考察，结果见表5。 表5加标回收率考察结果 编号 实测值 加标量 加标测定值 回收率 平均回收率 pg/5g ug/5g % % 1 未检出 1.000 1.051 105.1 2 未检出 1.000 1.122 112.2 3 未检出 1.000 1.107 110.7 109.0 4 未检出 1.000 1.071 107.1 (RSD：2.9%，n=6) 5 未检出 1.000 1.120 112.0 6 未检出 1.000 1.067 106.7 4实验结论 本实验采用AccucoreTM柱，结合电雾式检测器建立了白酒中三氯蔗糖的灵敏快速测定方法。与ELSD方法比较，不但灵敏度更高，而且CAD检测器在中低浓度范围响应基本接近线性，选择合适的浓度范围后可直接进行线性拟合，结果统计比ELSD的‘“双对数拟合”更加方便。 表6方法线性考察结果 方法 检测限 upg/g 定量限 pg/g GB22255-201 2.5 7.5 CAD 方法 0.02 0.04 5参考文献 1GB2760-2014《食品添加剂使用标准》2 GB22255-2014《食品中三氯蔗糖的测定》 三氯蔗糖是一种以蔗糖为原料生产的功能性甜味剂， 其甜度是蔗糖的600倍，由于安全性相对较高，近年来在食品和保健品中的应用日益广泛。与其它常见的甜味剂（如安赛蜜、糖精钠等）不同，三氯蔗糖不含生色基团，没有明显的紫外吸收，因此国家标准GB22255 -2014《食品中三氯蔗糖的测定》规定采用RI或ELSD对三氯蔗糖进行测定，但由于RI和ELSD的仪器灵敏度较低，方法检测限仅为2.5ppm，对于规定不得检出三氯蔗糖的白酒样品，可能产生假阴性结果。本文尝试采用比ELSD灵敏度更高的CAD检测器，及柱性能更好的核壳型色谱柱对白酒中三氯蔗糖进行检测，取得了较为理想的效果：方法定量限可达0.04 mg/kg，满足GB22255-2014定量限7.5mg/kg的基本要求。