饲料中β-受体激动剂检测方案(浓缩仪)

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Knowledge Optimized Laboratory 自动化样品前处理解决方案-RK-2021 解决方案 全自动固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定饲料中的4种B-受体激动剂 B-受体激动剂；全自动固相萃取；介自动氮吹浓缩仪；液相色谱-中联质谱法；；饲料 B-受体激动剂属丁肾上腺类神经兴合剂，是一类激素的统称，包括我们耳熟能详的“瘦肉精” 盐酸克仑特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。B-受体激动剂能够促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，，因此被众多不良养殖户用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。然而B-受体激动剂对人体健康危害过大，农业部早在20多年前就发文禁止其作为饲料添加剂使用，但是“瘦肉精”事件仍时有发生，因此有必要对饲料中的1-受体激动剂进行检测。 1.介绍 β-受体激动剂属于肾上腺类神经兴奋剂，是一类激素的统称，包括我们耳熟能详的“瘦肉精”一―盐酸克仑特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。β-受体激动剂能够促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高洞体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此被众多不良养殖户用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。然而β-受体激动剂对人体健康危害过大，农业部早在20多年前就发文禁止其作为饲料添加剂使用，但是“瘦肉精”事件仍时有发生，因此有必要对饲料中的β-受体激动剂进行检测。 ·OH 图-1四种常见β-受体激动剂结构式 本文参考农业部1629号公告-1-2011 《饲料中16种β-受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法》的前处理方法，试样用盐酸-甲醇混合溶液提取、乙酸铅沉淀蛋白后使用阳离子交换固相萃取柱经睿科 Raykol Fotector Plus 全自动固相萃取仪净化，洗脱液经 Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干， 10%乙腈水溶液复溶，高效液相色谱-串联质谱检测，内标法定量。添加上机浓度为 0.1 ug/mL 的加标实验，得到4种β-受体激动剂的加标回收率在79%-88%之间， RSD 值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中4种常见β-受体激动剂的检测需求。 关键字：β-受体激动剂；全自动固相萃取；；：全自动氮吹浓缩仪；：液相色谱-串联质谱法；；饲料 全自动固相萃取仪：睿科 Raykol Fotector Plus 全自动氮吹浓缩仪：睿科RaykolEVA-80高效液相色谱 (HPLC) Agilent 1260， 质谱检测器 (MS)Agilent 6410 固相萃取小柱： MCX， 60 mg/3 mL (RayCure，货号： RC-204-72855) 乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，乙酸铅(分析纯)，盐酸(分析纯)，氨水(分析纯)：含量为25%~28% 10%乙腈水溶液：准确量取乙腈10mL与超纯水90 mL， 混匀后备用。 0.1 mol/L 盐酸溶液：量取9mL于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。 盐酸-甲醇提取液：：取 0.1 mol/L 盐酸80 mL， 加入甲醇20 mL 混匀。 饱和乙酸铅溶液：在50mL水中加入一定量的乙酸铅，超声5 min， 直至固体不再溶解。5%氨化甲醇溶液：准确量取5mL氨水和95 mL甲醇，混匀备用。 3.样品前处理 3.1提取 称取2g(精确至0.01g)配合饲料试样于 50 mL离心管中，加入100 uL 混合内标工作液，再加入 18 mL 盐酸-甲醇提取液和2mL饱和乙酸铅溶液，充分振荡20 min。在10000 r/min离心机上离心10 min， 取2mL上清液于玻璃上样管中，待净化。 3.2净化与浓缩 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Raykol Fotector Plus 固相萃取柱 MCX(RayCure， 60mg/3mL) 活化 甲醇、水 淋洗 水、甲醇 洗脱 5%氨水甲醇 将 MCX小柱安装在仪器上，分别用3mL甲醇和3mL水以2 mL/min 速度活化，将上述待净化液以 1 mL/min 上样，用2mL水清洗样品瓶，然后用2mL甲醇以2 mL/min 速度淋洗固相萃取柱，用气推的方式压干小柱。最后用5 mL 氨化甲醇以1 mL/min 速度洗脱，洗脱液用睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪在50℃、1 L/min 的条件下吹干，残渣用1mL 10%乙腈水溶液复溶，过微孔滤膜后上机检测。详细步骤见图-2。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 甲醇 1.3 2 活化 甲醇 有机废液 2 3 1.9 3 活化 水 废水 2 3 1.9 4 上样 有机废液 1 2 2.4 5 清洗样品瓶 水 废水 60 2 2.7 6 淋洗 甲醇 有机废液 2 2 1.4 7 气推 有机废液 80 30 2.2 8 清洗注射泵 5%氨化甲醇 60 3 0.4 9 洗脱 5%氨化甲醇 收集 1 5 5.4 10 气推 收集 2 2 1.4 11 气推 收集 20 10 1.3 12 结束 13 图-2.Fotector Plus饲料中β-受体激动剂固相萃取方法 4.检测条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 2.5pmx21×50mm 流速 0.20mL/min 流动相 A：10mM ammonium acetate B： acetonitrile 柱温 30°C 进样体积 5 uL 检测器 MS/MS 6410 离子模式 ESI 吹扫气 11 L/min 氮气温度 350°C 簇电压 4000 雾化压力 35 psi 时间/min 流动相A(10mM乙酸铵溶液) 流动相B(乙腈) 0.0 95% 5% 2.0 95% 5% 4.0 50% 50% 8.0 70% 70% 10.0 50% 50% 12.0 90% 10% 4.3 MRM 参数 No.序号 CompoundName 化合物名称 PrecursorIon母离子 Product Ion子离子 Dwell 离子监测时间 Fragmentor裂解电压 Collision Energy 碰撞能量 1 克伦特罗 277 203* 30 90 15 259 30 90 5 2 莱克多巴胺 302 164* 30 90 10 284 30 90 5 3 沙丁胺醇 240 148* 30 100 15 222 30 100 5 4 特布他林 226 152* 30 90 5 125 30 90 10 5 沙丁胺醇-D3 241 151* 30 100 15 6 克伦特罗-D， 286 204* 30 90 10 4.4色谱图 图-3.β-受体激动剂标准溶液色谱图(100 pg/L) 5.加标测试 5.1基质效应验证 为消除基质带来的离子抑制对定量测定的影响，需要用空白样品按照上述提取和净化步聚，1制备空白提取液，再加入一系列浓度标准品，配制成基质加标曲线。 5.2样品加标测试 理，，回收率结果如下表-2所示。 表-2添加实验的回收率及相对标准偏差结果(n=4) 化合物 回收率(%) 回收率(%) 回收率(%) 平均回收率 RSD(%) 样品-1 样品-2 样品-3 (%) 克伦特罗 91.0 87.8 85.1 88.0 3.4 莱克多巴胺 92.3 83.9 80.7 85.6 7.0 沙丁胺醇 78.0 86.2 78.6 80.9 5.6 特布他林 81.7 82.0 75.4 79.7 4.7 6.结果与讨论 6.1使用离子交换柱进行固相萃取时，为使目标物在柱子上得到较好的保留效果，上样流速应控制不能超过1 mL/min，否则将导致回收率偏低。 7.总结 7.1.采用睿科 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 7.2.睿科 Raykol EVA 80 全自动义吹浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面设计，无需手动调节氮吹针高度且耗气量小，省时省力。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 邮箱： info@raykol.com热线：址：： Vwww.raykol.com 邮箱： info@raykol.com热线：址：www.raykol.com β-受体激动剂属于肾上腺类神经兴奋剂，是一类激素的统称，包括我们耳熟能详的“瘦肉精”——盐酸克仑特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。β-受体激动剂能够促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此被众多不良养殖户用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。然而β-受体激动剂对人体健康危害过大，农业部早在20多年前就发文禁止其作为饲料添加剂使用，但是“瘦肉精”事件仍时有发生，因此有必要对饲料中的β-受体激动剂进行检测。