饲料中盐酸克伦特罗检测方案(气质联用仪)

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总结 GC-MS 衍生化法测定饲料中8种β-受体激动剂 张学彬胡学桥余翀天梁立娜赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 饲料；β-受体激动剂； GC-MS 摘要 本文采用乙酸钠缓冲溶液提取、硅烷化试剂衍生、GCMS检测，建立了饲料中8种β-受体激动剂的分析方法。考察了在该方法下，仪器对8种β-受体激动剂检测的线性、重复性以及方法的加标回收性能。结果表明： Thermo GC-ISQ对8种β-受体激动剂在浓度为 0.01 ppm-1ppm 范围内检测的线性均大于0.997； 以0.1 ppm的混合标样，平行测定6次的 RSD 小于6.88%，对各激动剂的检测限均低于农业部1063号公告-7-2008规定值；且采用同一台仪器，对系列浓度标样、样品以及加标样品在2天内反复测定5次，测定值的 RSD除氯丙那林和齐帕特罗分别在9.65%和13.62%外，其余均小于6.68%，表明了 Thermo GC-ISQ对饲料中β-受体激动剂测定方面展示了较强的可靠性以及高的稳定性。 简介 用作动物性食品中的β-受体激动剂药物主要有：莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、西马特罗、班布特罗、非诺特罗、妥布特罗及氯丙那林等，这是一类结构和生理功能上类似肾上腺素和去甲肾上腺素的化学合成苯乙醇胺类物质，他们都有类似的作用，即促进动物生长，提高洞体的瘦肉率，但作用强弱及残留量不同其中克伦特罗研究较深入，最早用做动物饲料添加剂，其效果最明显，毒副作用也最强，近几年来世界各地发生多起食用残留克伦特罗的动物性食品中毒事件，使得各国均加强了对克伦特罗的监督监测，克伦特罗的非法使用受到了极大的限制，不法分子不得不寻找新的替代品，如沙丁胺醇、班布特罗等。目前关于克伦特罗的检测方法报道很多，而关于其它β-受体激动剂的检测方法相对滞后，因此建立对于多种β-受体激动剂的同时检测方法对于饲料安全具有非常重要的意义。 我国曾于2008年颁布了农业部1063号公告-7-2008《饲料中8种β受体激动剂的检测气相色谱质谱法》2。本文参考此标准，采用赛默飞 Trace 1310-ISQ对饲料中的8种·受体激动剂进行了定量测定。 ( 实验材料 ) 仪器与试剂 ( 仪器 ) ( Trace 1310 GC-ISQ气质联用仪(The r mo Fisher Scientific ) ； Triplus RSH 三合一自动云样器(Thermo Scientific)； TG-5SilMS 色谱柱( 3 0mx0.25 mmx0.25 pm) (Thermo F ishei scient i fic ， P/N：260 9 6-1420)；混合型阳离子交固固相萃取 小柱(60mg，3ml) (Thermo Fisher s cientific， P/N： 6 0107-303)。 ) ( 试剂 ) 分析纯氨水、冰乙酸、三水合乙酸钠购于上海国药化学试剂公司，衍生化试剂(双三甲基三氟乙烯胺 BSTFA+ 三 甲基氯硅烷 TMCS=99：1)以及8种β-受体激动剂(氯丙那林、马布特罗、齐帕特罗、班布特罗、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林)购于上海安普科学仪器有限公司，色谱纯甲苯、甲醇由 ThermoFisher 提供。 反应试剂及β-受体激动剂标样的配制 乙酸钠缓冲溶液：称取31.63g三水合乙酸钠溶于水中，加入11.6mL冰乙酸， pH约为4.8，用水稀释至1L； 1 mol/L乙酸溶液：移取5.7ml 冰乙酸于100mL容量瓶中，用水定容至刻度；洗脱液：液3.5mL氨水于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度。 β-受体激动剂系列标液：0.01 ppm、0.02 ppm、0.05 ppm、0.1 ppm、0.5 ppm、1.0 ppm溶剂为甲醇，其中系列标样中盐酸克伦特罗的浓度为 0.005 ppm、0.01 ppm、0.025 ppm、0.05ppm、0.25 ppm、0.5ppm。 样品前处理 试样提取：精确称取5.0g鸡饲料于 100mL玻璃瓶中，加入50.0mL乙酸钠缓冲溶液、200rpm 下震荡30 min， 转入到50mL离心管中4000 rpm离心5 min，取上清液30ml备用。加标样品的提取：步骤同上，只是在加入提取试剂乙酸 钠缓冲液时，加入了 5 mL 1.0 ppm 的混合标样，且乙酸钠缓冲液的体积为 45.0 mL。 净化：将固相萃取小柱用3.0mL甲醇和3.0mL水活化、平衡。然后精确吸取2.0 mL试样溶液全部加到小柱上，自然过柱，然后分别用2.0mL乙酸溶液和3.0mL 甲醇淋洗一次，最后用3mL洗脱液洗脱于 4.0 mL溶剂瓶中。将洗脱液在40℃氮气吹干。对于标样溶液，取2.0mL加入到4.0mL溶剂瓶中，加入1.0mL洗脱液，40℃氮气吹干。衍生：在衍生瓶中加入100 uL 甲苯，100 uL衍生化试剂，涡旋混合后，于烘箱中70℃反应1h，冷却后转入色谱瓶中进行 GC/MS 分析。 色谱条件 色谱柱： TG-5SilMS (30 m×0.25 mm×0.25 um)；柱温：100℃ (1min)， 10℃ /min 到280℃(4min)；不分流进样，不分流时间1min；进样口温度：260℃；载气：高纯氦(99.999%)，恒流模式，1.0 mL/min。液体进样模式，进样量：1.0u。传输线温度：280℃，离子源温度：280℃；灯丝电流：25pA；选择离子模式扫描，具体扫描方法见表1) 表1.8种β-受体激动剂的定性定量离子 化合物名称 保留时间 /min 定量离子 定性离子 氯丙那林 8.91 270 72，104，180 马布特罗 11.02 277 204，296.311 特布他林 12.99 356 280，336，426 盐酸克伦特罗 13.39 262 212.243.369 沙丁胺醇 13.72 72 116，203，277 齐帕特罗 16.65 308 218，291，405 班布特罗 18.8 354 282，309，439 莱克多巴胺 19.93 267 179，250，502 结果与讨论 标准品色谱图 图1是浓度为 0.01 ppm 的8种β-受体激动剂混合标样的选择离子色谱图，可以看出各物质均达到基线分离、峰形对称性良好、无明显拖尾现象，可满足后续的分离分析需求。 线性以及方法的检出限 浓度为 0.01 ppm-1.0 ppm范围内的线性。实验结果表明，在设定的浓度范围内8种β-受体激动剂在该浓度范围内的响应与其浓度呈良好的线性关系，相关系数均大于0.997，且其检出限均低于农业部1063号公告-7-2008中的规定(见表2)。同时对浓度为 0.1 ppm 的8种β-受体激动剂标样，平行测定6次，其结果的 RSD 除齐帕特罗在10.01%外，其余均小于6.88%，这一结果进一步表明了该仪器在对8种β-受体激动剂检测时的高灵敏度和高精密度特性。 采用上述方法分别进样分析，考察β-受体激动剂标样在 图1.8种β-受体激动剂标准溶液选择离子流图(0.01ppm) 线性以及方法的检出限 采用上述方法分别进样分析，考察β-受体激动剂标样在浓度为0.01 ppm-1.0 ppm 范围内的线性。实验结果表明，在设定的浓度范围内8种β-受体激动剂在该浓度范围内的响应与其浓度呈良好的线性关系，相关系数均大于0.997，且其检出限均低于农业部1063号公告-7-2008中的 规定(见表2)。同时对浓度为 0.1 ppm的8种β-受体激动剂标样，平行测定6次，其结果的 RSD 除齐帕特罗在10.01%外，其余均小于6.88%，这一结果进一步表明了该仪器在对8种β-受体激动剂检测时的高灵敏度和高精密度特性。 表2.8种β-受体激动剂的标准曲线、检出限、定量限及农业部1063号公告-7-2008规定的检出限和定量限 化合物名称 保留时间/min 浓度范围/ppm 线性方程 相关系数 LOQmg/Kg LOQ° mg/Kg LOD mg/Kg LOD mg/Kg 氯丙那林 8.91 0.01-1 v=43.68x-552.44 0.9987 0.0005 0.01 0.01 0.05 马布特罗 11.02 0.01-1 y=104.47x-1579.97 0.9992 0.006 0.01 0.01 0.05 特布他林 12.99 0.01-1 V=1626.17x-24775.35 0.9987 0.0008 0.01 0.01 0.05 盐酸克伦特罗 13.39 0.005-0.5 y=142.22x-685.22 0.9984 0.004 0.01 0.005 0.05 沙丁胺醇 13.72 0.01-1 v=1515.51x-30065.63 0.9988 0.002 0.01 0.01 0.05 齐帕特罗 16.65 0.01-1 v=847.91x-29478.85 0.9983 0.004 0.01 0.01 0.05 班布特罗 18.8 0.01-1 v=122.28x-2887.97 0.9986 0.002 0.01 0.01 0.05 莱克多巴胺 19.93 0.01-1 y=398.80x-12863.05 0.9989 0.09 0.1 0.01 0.5 注： LOQ和LOD为农业部1063号公告-7-2008规定的检出限和定量限 实际样品测试及加标回收 按照上述方法对鸡预混饲料中的β-受体激动剂进行了分析测定，并对其做了加标回收试验(见图2)。可以看出，在鸡预混饲料中上述8种β-受体激动剂均有不同程度的检出，但是均低于农业部1063号公告-7-2008规定的定量限度值；采用该方法在加标量为0.1 mg/Kg 的水平下，8种β-受体本动剂的回收率在70.57%107.7%之间，满足 日常分析检测的要求。为了进一步验证 Thermo GC-ISQ对β-受体激动剂测定的稳定性，在两天内对8种β-受体激动剂的系列标样、样品以及加标样品进行了5次重复分析测定(见图3)，以0.1ppm 的8种β-受体激动剂在这5次测定后计算的 RSD 除氯丙那林和齐帕特罗分别在9.65%和13.62%外，其余均小于6.68%，这表明 Thermo GC-ISO对β-受体激动剂的测定具有较好的稳定性。 图2.鸡饲料样品及其加标样选择离子流图 (上方为鸡饲料样品、下方为鸡饲料样品加标，8种β-受体激动剂的加标浓度为 0.1 ppm， 其中盐酸克伦特罗为 0.05 ppm) 表3.8种β-受体激动剂测定的回收率及精密度 化合物名称 样品mg/Kg 加标量mg/Kg 样品加标 mg/Kg 回收率 7% 精密度7% 两天测试5次的精密度/% 氯丙那林 0.01415 0.1 0.08181 71.67 4.99 9.65 马布特罗 0.01513 0.1 0.09182 79.75 4.34 1.66 特布他林 0.01524 0.1 0.1165 101.05 4.6 3.38 盐酸克伦特罗 0.00482 0.05 0.00383 70.57 4.1 3.12 沙丁胺醇 0.01984 0.1 0.1228 102.51 5.99 6.18 齐帕特罗 0.03476 0.1 0.1451 107.7 10.01 13.62 班布特罗 0.03383 0.1 0.1399 104.59 6.57 6.68 莱克多巴胺 0.03229 0.1 0.1008 75.6 6.88 4.29 图3.8种β-受体激动剂混合标样在两天内重复测定5次的选择离子流图(0.1ppm) ( 本文采用 The r mo Scientific ISQ-LT 单四极杆 GC-MS系统， 以乙酸钠缓冲溶液提取、硅烷化试剂衍生，建立了饲料中8种β-受体激动剂的分析方法。该方法的操作简单、稳定，对8种β-受体激动剂在浓度为 0.01 ppm-1 ppm 范围内检测的线性均大于0.997；检出限比农业部1063号公 告-7-2008规定值低10倍； 在 0.1 mg/Kg的浓度水平下， 加标回收率在70.57%—107.7%之间；且采用同一台仪器，对系列浓度标样、样品以及加标样品在2天内反复测定5次， 测 定值的 RSD 除氯丙那林和齐帕特罗分别在9.65% 和13.62%外，其余均小于6.68%，表明 了 Thermo GC-ISQ 对饲料中β-受体激动剂测定方面展示了较强的可靠性以及高的稳定性，能够很好地满足对饲料中β-受体激动剂的日常分析检测要求。 ) ( [1]贾涛，王有月，赵营，王兰英，左文霞，李志宏，詹国静，韩丽霞，刘佳，高振明 ， 饲料中β-受体激动剂的检测研 究进展，饲料研究，2012 ， 2，67-71 。 ) ( [2]农业部1063号公告-7-2008《饲料中8种β-受体激动 剂的检测气相色谱质谱法》。 ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：800810 5118400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherS CIENTIFIC AN_C_GCMS-