肉制品中罗丹明B检测方案

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离子阱-飞行时间串联质谱定性检测禽肉中的罗丹明B 摘 要：建立了离子阱-飞行时间串联质谱仪快色检测禽肉中罗丹明B的分析方法。利用多级质谱分析，推测出罗丹明B的结构式和质谱裂解规律，极大地增加定性结果的准确性。 关键词：离子阱-飞行时间串联质谱仪，禽肉，罗丹明B 前言 玫瑰红B，也称罗丹明B，俗称花粉红，是一种碱性荧光染料。其作为荧光试剂已被广泛用于环保、矿业和钢铁等领域，是荧光分析常用的试剂，但是由于其具有潜在的致癌和致突变性，我国和欧盟等都不允许在食品中使用。其分子结构见图1。 图1罗丹明B的化学结构式 目前，我国没有检验食品中罗丹明B的国家标准及行业标准，也没有快速检测与鉴定方法。为了满足出入境检验检疫中对污染物残留监控的需要，以及食品出口企业对外贸易的需要，亟需建立食品中罗丹明B的检测方法。本文利用岛津LCMS-IT-TOF离子阱-飞行时间质谱仪建立了检测禽肉中罗丹明B的快速分析方法。 仪器概况 岛津超快速液相色谱仪(UFLCXR)和离子阱飞行时间串联质谱仪(LCMS-IT-TOF)。具体配置为： LC-20ADXR×2输液泵， DGU-20A 在线脱气机， SIL-20ACXR 自动进样器， CTO-20AC 柱温箱，CBM-20A 控制器， LCMS-IT-TOF 质谱仪，工作站LCMSsolution V3.50。 液相色谱条件色谱柱： Shimadzu Shim-pack XR-ODS， 2.0 mm×75 mm， 2.2 um流动相：A相，含0.1%甲酸的水溶液；；B相，含 0.1%甲酸的甲醇溶液 洗脱方式：梯度洗脱 时间(min) B相(%) 0.00 10 7.00 40 7.01-20.00 95 20.01-23.00 10 流速：0.3 mL/min 进样量：4pl 质谱条件 离子化模式： ESI 源 分析模式： 正离子模式 雾化气流速： 1.50L/min 干燥气流速： 10 L/min CDL温度： 200℃ 加热模块温度：200℃ 检测器电压： 1.70 kV 离子源电压： 4.5 kV 采集范围： Msm/z150-1000， MS²m/z100-500，MS’m/z100-500 校准方法： 自动调谐优化电压， 分析结果 1... Ms定性分析结果 样品为加标的禽肉提取液，图2是其提取离子流色谱图。 图2罗丹明B加标样品的 EIC 图 2.质谱图和分子式预测结果 对于分子式预测，元素组成是非常重要的。考虑到化合物元素组成是未知的，因此将元素组成设为 C，H，N，O，S，CI，F。多种元素组成将大大增加预测出来的候选化合物数量。因此， MS-结果可能有多个候选化合物是正常现象。可以通过MS"的分析来减少候选化合物的数量。 所有离子的质量数偏差均小于5ppm，仪器具备良好的质量数准确度。 图3罗丹明B加标样品的MS结果 3. MS质谱分析结果 为了给出更加可靠的定性结果，使用仪器多级质谱功能对目标离子进行分析，以减少分子式预测结果中候选化合物的数量。三级质谱图、分子式预测结果和推测的裂解规律如下。 (注：元元组成仍旧是C，H，N，O，S，CI，F) 图4罗丹明B加标样品的MS结果 MS结果中有2个候选化合物， MS结果中仅有唯一的候选化合物。增加了分子式预测准确性。 4.裂解规律推测 为更好地演示仪器器 MS"功能，我们对罗丹明B进行了五级质谱分析。采用 direct 模式直接分析罗丹明 B从MS以后的裂解规律，各级质谱图如下： 图5罗丹明B加标样品的 MS结果 罗丹明B的裂解规律推测如下： 图6罗丹明B的裂解规律推测结果 5.实际样品的分析结果 图7 实际样品的 EIC 图 Event#：2MS/MS[E+] Ret. Time：7.092>7.177 Scan#：2026>2050 Precursor： 443.2329 Cutoff：122inten.(x1，000000) Base Peak：399.1666/624.106 miz 101.28 Abs.Inten. 1，573 Rel.Inten. 0 0.251.0- 399.11666274.1541 413.1795 0.0- 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 mz 图8实际样品的 MS质谱图 尽管一级质谱图因基质干扰无法判断，但 是 MS到 MS4的质谱图信息清晰， 与加标样品 中罗丹明B的多级谱图信息完全相符，同时 m/z399.1703 提取离子流图出峰时间也与标准 品相符，可以肯定实际样品中也含有该违禁添加剂―-罗丹明 B。岛津 LCMS-IT-TOF 具有多级质谱扫描功能，选定母离子碎裂出子离子， MS"质谱图中可大大降低基质干扰，因此具有极佳的定性准确性。 结论 使用岛津的串级质谱仪LCMS-IT-TOF 可以定性检测出禽肉样品中的罗丹明 B， 并对其进行了多级质谱分析，推测出其结构式和质谱裂解规律。在化合物分子式和元素组成均未知的情况下，多级质谱数据可以极大地增加分子式预测结果的准确性，为定性确证提供强有力的证据。