化学发光中成像分析检测方案

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天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 如何对化学发光Western Blot (1D 和2D) 进行高质量的成像及定量分析 概述： SDS PAGE 分离蛋白质，再电泳转运到化学发光 Blot 膜上进行检测，是一种用于鉴别复杂混合物中特定蛋白质是否存在及含量的理想方法，被称为 Western Blot。基本过程是：混合蛋白质先溶于 SDS缓冲液中，随后通过电泳进行分离。-一次电泳结束后，通过二次电泳，将胶上的蛋白质转运到膜上，以便蛋白质与免疫试剂进行反应。该 Blot 膜通常使用醋酸纤维膜或 PVDF膜，是原始蛋白质胶的完全复制，并便于膜上的蛋白质与试剂进行反应。预先显色的分子量 marker， 使待测蛋白质的识别，定量，及其大小的分析变的简单(请见图1，2) 图2..使用 VisionWorks 软件对成像后的条 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 方法简介： 1.按照常规要求对蛋白质 Blot 膜进行一抗、二抗处理。通常使用发光物质(如，HRP)或碱性磷酸酶(Alkphos)标记的试剂。 2.将处理好的 Blot 膜放在一层薄的塑料上，加入1-2ml反应试剂。 3.由于化学发光反应和发色反应都具有对温度敏感的特性，如果可能，最好将 Blot 膜放在温度可控的表面上(如，30℃)。可选择使用美国 UVP公司的加热盘(请见图3)，用于免疫 Blot 膜的保温成像，以更获得重复一致的实验结果。 图3. UVP加热盘，使温度保持稳定 4 封好 Blot膜，并快速的将其放入 Biospectrum 成像系统暗箱内(请见图4)，光圈调至1.2，参数按照图5进行参考设置。通常的成像结果如图6或图1。 图4.UVP Biospectrum成像系统 图5.使用VisionWorks 软件进行化学发光成像时的常规参数设定 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 图6.细菌蛋白质2D胶。1stAb 是兔抗大肠杆菌抗体， 2ndAb 是HRP-标记的羊抗兔抗体 结论： 使用 UVP 公司的 Biospectrum 成像系统，配以 VisionWorks 成像分析软件，可以对 1D 或 2D Western Blot 进行高灵敏性的成像，并进行定量和定性分析。 有关 Biospectrum 成像系统的详细资料请见以下介绍： 型号： BioSpectrum 510 或 BioSpectrum 610 或 BioSpectrum 810 品牌： UVP 产地：美国 主要应用范围： BioSpectrum 系列为全自动、计算机控制的高级凝胶成像系统。 适用于化学发光( Western Blot ，Northern ，Southern等)，荧光成像(单色或多色荧光， 如EB，SYBR Green， SYBR Red， Alexa Fluo， Cy2， Cy3，Cy5， Cy7， GFP， RFP， Qdot 525， Qdot 655， SYPRO等染料)，以满足不同 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 荧光染色的核酸胶和蛋白胶成像。也可对考马斯蓝、铜离子、银离子等染色的蛋白胶成像，也应用于色度分析，克隆/斑点计数，微孔板定量，放射自显影等，是一款具有高灵敏度，低检出限的凝胶成像系统。Biospectrum系统采用 Peltier 制冷的高分辨率 CCD 技术(610相机可达-50°C)，可获得极高的灵敏度。系统配有功能强大的 VisionWorks 专业分析软件，用于图像采集和数据分析。 主要相机参数请见下表： 如欲了解更多相关信息，请随时联系天美(中国)科学仪器有限公司市场部。