原子吸收光谱法直接测定末梢血和静脉血的比较

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原子吸收光谱法直接测定末梢血和静脉血中铅结果的比较 摘要 血铅是预防、治疗、诊断铅吸收和中毒的一项重要指标。上世纪60年代，随着原子吸收光谱技术的发展，原子吸收光谱测定血铅的方法随之建立，并逐步成熟稳定。但血铅测定大多采集静脉血，很难为被儿童及家长所接受。因此建立一种用外周末梢微量血(以下简称末梢血)代替静脉血测定血铅具有重要意义。本文以 PdClz/TritonX-100/HNOs 为基体改进剂，不需进行样品的湿消化或酸萃取等复杂的预处理步骤，，可直接进样测定血中铅[1，2]。应用本法对末梢血和静脉血血铅含量进行了测定结果比较及2份冻干牛血质控血铅含量进行测定，结果满意，现将结果报告如下。 15实验部分 1.13主要仪器与试剂PE公司AA800 型原子吸收分光光度仪， PE原装铅空心阴极灯，PE公司THGA型石墨炉， AS800自动进样器。1.5ml具盖聚乙烯塑料离心管；微量吸液器；硝酸(优级纯)；氯化化(分析纯)；3+97硝酸溶液；75%乙醇；去离子水；混合基体改进剂：0.05%PdC12/0.5%TritonX-100/0.5%HNO3；铅标准溶液(GBW08619)： 1000ug/ml铅，购于国家标准物质中心，临用时用1+99硝酸溶液逐级稀释成 10 ug/ml铅标准溶液，最后用基体改进剂稀释成0.4 ug/ml铅标准溶液。 1.2实验方法 1.2.1样品采集 1.2.1.1末梢血 依次用3+97硝酸溶液、去离子水、碘酒、75%乙醇清洗无名手指或耳垂后，常规采集手指或耳垂血(去掉第一滴)，用微量取液器抽取血样40p1，置于盛有0.36ml改进剂的1.5ml具盖聚乙烯塑料离心管中，充分振摇混匀。，于冰瓶运到实验室4℃下至少可保存14天。 1.2.1.2静脉血依次用3+97硝酸溶液、去离子水、碘酒、75%乙醇清洗取血区皮肤，用通过检验的同一批号的一次性注射器抽取静取血 0.5-2ml，立即盛于通过检验的肝素抗凝瓶中混混。 1.2.2仪器工作条件 波长283.3nm，灯电流10mA，狭缝宽0.7nm，氩气流量250ml/min，原子化阶段停气，进样体积20p1，读数方式为峰面积，横向加热，纵向塞曼背景校正，石墨炉升温程序如表1。 1.2.3工作曲线的绘制取6只塑料离心管，按表2配制标准系列，然后按仪器测定条件依次测定吸光度，从1~5管的吸光度减去0管的吸光度为纵坐标， 以铅浓度(ug/L)为横坐标绘制工作曲线。 1.2.4样品测定按测定工作曲线的仪器条件测定样品溶液和试剂空白溶液(0.04ml去离子水加入0.36ml基体改进剂中)，样品吸光度减试 剂空白吸光度后，由工作曲线得铅浓度。 表1 石墨炉升温程序 步骤 温度(℃) 升温时间(S) 保持时间(S) 干燥1 110 10 25 干燥2 130 15 30 灰化 850 10 25 原子化(停气) 1800 0 4 清洗 2450 3 1.2.5结果计算按下式计算血液中铅浓度： C=c×F 式中：：C一血液中铅的浓度，.71ng/L； c-由标准工作曲线求得稀释血样中铅的浓度，ug/L；F一血液稀释倍数；本法为10。 2 结果与讨论 2.1末梢血与静脉血血铅浓度比较 取同一人按本法采集末梢血和静脉血测定血铅浓度，结果见表3。 19例血铅测定结果经统计学处理发现，末梢血与静脉血测定值之间呈显著相关(P<0.05，相关系数为 0.9831)；从血铅浓度上观察，末梢血要比静脉血血铅约高一点，但两者之间无显著性差异(t=0.092，P>0.05)，因此用末梢血可完全代替静脉血进行血铅测定。 2.2方法的线性范围与检出限 按1.2.3工作曲线的绘制测定吸光度，测得铅浓度在0~50ug/L之间工作曲线呈直线，相关系数r=0.9998，，回归方程Y=0.00203X+0.00069，测定空白溶液11次，得空白标准偏差 SD=0.00046，按照 DL=3S/(dA/dc)计算检出限为 0.68ug/L，则血样最低检测浓度为6.8ug/L。 表3 末梢血与静脉血血铅浓度比较(ug/L) 标本号 末梢血 静脉血 259 276 2 415 371 3 176 159 4 235 208 5 246 279 6 447 465 7 75 59 8 178 195 9 56 63 10 639 672 11 486 479 12 239 217 13 109 127 14 176 194 15 316 279 16 335 286 17 294 315 18 267 225 19 283 276 均值 275 271 标准偏差 148 145 2.33方法精密度和准确度 取血铅含量为低、、中、高3个血样按本法进行精密度和加标回收实验以及冻干牛血质控盲样检测，结果见表4、表5。从表4、表5可知，2份质控盲样中铅的测定结果在真值质控范围内，精密度和准确度均符合生物材料中有害物质测定规范要求。 表4 精密度和准确度实验(n=6) 样品 均值 RSD 加标 10 pg/L 加标40pg/L 号 (ng/L) (%) 均值 回收率(%) 均值 回收率(%) 1 6.5 8.2 16.3 97.5 49.7 107.9 2 15.7 4.7 26.0 102.6 57.9 105.6 3 32.2 3.9 42.8 106.2 75.5 108.2 表5 东干牛血质控盲样中铅的测定(均值±S， ug/L) 样品编号 n 真值 测定值 相对误差(%) GBW09139 6 110±20 115±8.4 4.55 GBW09140 6 335±30 339±6.2 1.19 3 小结 本文以0.05% PdC1z/0.5%TritonX-100/0.1%HNO3混合液为基体改进剂直接稀释末梢血和静脉血，测定血中铅含量，结果对19例同一人的末梢血和静脉血铅值进行了测定比较，测定结果两者非常接近，相关性好，据此可充分说明以末梢血代替静脉血测定血铅浓度是完全可行的；在实际应用中不需静脉抽血，易被儿童及家长接受，特别适用于大量儿童的血铅检测工作。本文还对低、中、高3个血铅浓度的样品进行了精密度和准确度实验及两份冻干牛血质控的血铅测定，其结果均符合生物材料中有害物质测定规范要求；由于末梢血取样量少，石墨炉原子吸收法直接测定血铅操作简便快速，灵敏准确，重现性、稳定性好等优点，因此用末梢血代替静脉血测定血铅浓度值得推广应用。 ( 参考文献： ) ( [1]线引林.生物材料中有毒物质分析方法手册[M].北京：人民卫生出版社， ， 1 994： 13-24. ) ( [2]徐伯洪，闫慧芳主编.工作场所有害物质监测方法[M].北京：中国人民公安大学生出版 社，2003： 3 21-323. ) PerkinElmer， Inc.大中华区总部地址：上海张江高科园区李冰路67弄4号邮编：201203电话： (021)38769510传真：(021)38791316 www.perkinelmer.com.cn ( ◎2 009 PerkinElme r ， I n c . 保 留所有权利。Pe r k inElm e r徽标 和外 观 设计是P erkinElm e r的注 册 商标 。 文中提 及的其它非Perk inE l me r 及 其 子 公 司所有的 其示 商标均 为 其各自所有者 的 财产。 Perkin Elmer保留随时更改 此 文 档的 权利 ，恕 不另行通 知 。对 于编辑、图片或 排 版错误概不承担任 何 责 任 。 ) PerkinElmerFor the Better