虫草灵芝圣酒中腺苷检测方案

智能文字提取功能测试中

63Shanghai Nano Industrial Co.，Ltd. 食品与发酵工业Food and Fermentation IndustriesVol. 27 No. 964 高效液相色谱法测定虫草灵芝圣酒中腺苷含量 石志红王燕桓1王文贵? 傅承光 1(河北大学化学与环境科学学院，保定，071002)2(河北长天药业有限公司，保定，071000) 摘 要 建立了高效液相色谱法测定法草灵芝圣酒中腺苷含量的方法。在 Sulpelcosil LG18DB色谱柱(150mm×4.6mm i. d.，5lm)上，以V(乙腈)：V(水)=4：96为流动相，检测波长260 nm， 腺苷的检出限为 0. 626ng。成功地测定了不同批号虫草灵芝圣酒中腺苷的含量，平均回收率为101%。分析方法灵敏、准确，重现性好。 关键词 高效液相色谱法 虫草灵芝圣酒 腺苷 虫草灵芝圣酒以虫草菌丝粉和灵芝菌丝粉为主要原料，加入其他药用有效成分调制而成，具有补肾养肺，益气健脾之功效。腺苷是虫草灵芝圣酒中主成分冬虫夏草菌丝粉的主要活性成分，故腺苷含量是评价虫草灵芝圣酒质量的重要指标。目前腺苷的分离检测方法较多11，21，但灵敏检测药酒中腺苷含量的方法并不多。虫草灵芝圣酒中成分复杂，，干扰较多，高效液相色谱法以其较强的分离优势可将腺苷与其他杂质分开以便检测，本文所建立的高效液相色谱法配合紫外/可见分光光度检测器测定虫草灵芝酒中腺苷含量的方法尚未见报道。 1 实验部分 1.1 仪器 日本岛津LG-6A 高效液相色谱仪，配用 SPD-6AV紫外/可见分光光度检测器；7125进样阀； G-R3A数据处理系统。 1.2试剂 乙腈为优级纯(Fisher 试剂进口分装)；乙醇为分析纯；腺苷标准品为中国药品及生物制品检定所提供；水为3次蒸馏水，虫草灵芝圣酒为河北长天药业集团提供。 1.3 样品预处理 1.3.1 标准品溶液的制备 ( 第一作者：硕士，讲师。 ) 精密称取腺苷标准品 20.1mg，加入体积分数50%乙醇，溶解成0.201 mg/mL的储备液，用时稀释。 1.3.22样品溶液的制备 精密量取虫草灵芝圣酒20mL，置具塞三角瓶中，称定重量，超声提取 20 min， 冷却至室温，用体积分数50%乙醇补足损失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液后，供 HPLC分析。 1.4 色谱条件 Supelcosil LG-18-DB 色谱柱(150mm×4.6 mm i.d.， 5lm)，流动相V(乙腈)：V(水)= 4： 96，流速1.0mL/min， 紫外检测波长260nm， 进样量 5HL。 2 结果与讨论 2.1 检测波长的选择 称取腺苷标准示 10 mg 于50mL容量瓶中，加入体积分数50%乙醇溶液20mL， 混匀，取1mL于50mL 容量瓶中。加体积分数4%乙腈水溶液稀至刻度，进行波长长描，由紫外吸收图谱可见，在260nm 腺苷有最大吸收，故选择腺苷的测定波长为260 nm。 2.2 流动相的选择 本文试验了不同比例乙腈水二元体系对样品的分离效果。结果发现：随着乙腈浓 度的增大，腺苷峰的保留时间缩短，但腺苷与样品中其他组分的分离度降低。为了避免样品中杂质的干扰，经反复试验，确定 V(乙腈)：V(水)=4：96作为流动相的最佳配比，这时腺苷与相邻峰的分离度>1.5。腺苷标准品、空白样品(其中不含虫草和灵芝)及虫草灵芝圣酒样品的色谱分离图见图1，图2和图3. 图3 虫草灵芝圣酒样品色谱图 图1 腺苷对照品色谱图 2.3 方法的线性回归方程、检出限及精密度试验 精密分取腺苷储备液，加体积分数50%乙醇配制成含腺苷0.00503、0.01005、0.01508、0.02010、0.030 15、0.04020、0.05025mg/mL的标准品溶液，准确进样 54L，记录腺苷峰面积。以浓度(mg/mL)为横坐标(C)，峰面积为纵坐标(A)求得线性回归方程为：：A=1400.17+3.77×10°c.r=0.9994，线性范围0.63~ 50.25 Hg/mL。以2倍信噪比计算检出限为0.626 ng。取0.0201 mg/mL 腺苷对照品溶液，重复进样5次，测得精密度 RSD(%)=0.089(n= 5)。 2.4 虫草灵芝圣酒样品的测定 应用本文建立的方法进行了实际样品的测定，结果如表1所示。 表1 不同批号虫草灵芝圣酒中腺苷含量Hg/mL 图2 不含虫草和灵芝的空白样品色谱图 批号001201001202001203010301 010302 010303 腺苷 29.2 28.0 36.2 36.4 37. 6 35.5 RSD /% 0.43 0.61 0.57 0.95 0.93 1.0 (n= 5) 2.5 回收率试验 准确量取虫草灵芝圣酒(腺苷含量24.0Hg/mL) 20mL 5份，分置于5个25mL容量瓶中，准确吸取腺苷标准品(201Pg/mL) 2.0、2.4、2.8、3.2、3.6mL，分别加入各容量瓶中，用体积分数50%乙醇稀释至刻 表2 腺苷回收率测定结果 理论值 实测值 回收率 平均值 CV /mgmL- /mg*mL- /% /% /% 0.03528 0.03510 99.5 0.03850 0.03957 102.8 0.04171 0. 04213 101.0 101 1.8 0.04493 0.04458 99.2 0.04814 0.04968 103.2 度，按选定色谱条件进样，测定回收率，结果如表2所示。 3 结 语 本文所建立的虫草灵芝酒中腺苷含量的高效液相色谱测定方法简便、快速、灵敏、准确，可以满足产品质量控制的要求。 ( 参 考 文 献 ) ( 1 王新华，傅智宏.中国现代应用药学，1997， 14(6) ： 33~ 3 4 ) ( 2 李雪芹，王雁，包天桐.中国中药杂志， 1999，24(1) ： 12~13 ) Determination of Adenosine in Chongcao Lingchi Liqueur by HighPerformance Liquid Chromatography Shi Zhihong Wang YanhuanWang Wengui FFiu Chengguang 1 ( Colleg e of Chemistry and Environmental Science， Hebei University， Baoding， 071002)2 (Changtian Phar maceutical Co. Ltd， Baoding， 071000) ABSTRACTIn this paper， an HPLC method for the determination of adenos ine in Chongcao(Cordy ceps sinensis) Lingchi ( Ganoderma lucidum) liqueur w as established. The determinationwas performed on a supelcosil LG-18-DB column (150 mm×4.6mm i. d.，5Pm) with acetoni-trile-w at er(4 96， v/v) as mobile phase Set the determ inat ion wavelength at 260nm.The determination limit was 0. 626 ng.Adenosine contents in different batches of Chongcao Lingchiliqueur were det erm ined successfully， the average recovery was 101%. The proposed method wassensitive， accurate and precise. Key words high performance liquid chrom atography， Chongcao Lingchi liqueur， adenosine 行业动态 雪津啤酒喜获国家“绿色食品”认证 ◎ China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//wwv