食品中邻苯二甲酸酯检测方案(气质联用仪)

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2 RT： 3.98-1744 SM： 7G广州广州市东风中路410-412号时代地产中心3001-04室邮编：510030电话：020-83145188传真：020-83145288SCIENTIFICPart of Thermo Fisher Scientificanalyze.cn@thermofisher.comwww.thermo.com.cn 朱曼洁 赛默飞世尔科技 自从台湾发生塑化剂问题事件以来，中国卫生部已于2011年6月1日发布公告，将塑化剂邻苯二甲酸酯类物质列入食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单。近日，国家质检总局官方网站称，经湖南省商品质量监督检验院对某知名品牌白酒的样品进行检测，酒样品中DBP(邻苯二甲酸酯类物质，俗称塑化剂)最高检出值为1.04 mg/kg， 远远超过卫生部于2011年6月关于食品中此类物质0.3mg/kg的临时限定标准。白酒中塑化剂超标事件是近年来“三聚氰胺”奶粉、“瘦肉精”猪肉和毒胶囊之后又一起影响重大的食品安全事件，再度引发社会对整个白酒行业食品安全的严重担忧。 邻苯二甲酸酯是一种常用的增塑剂，可增大产品的可塑性和柔韧性，广泛用于塑料产品，驱虫剂，农药载体，染料助剂，涂料及润滑油等工业产品中，本不应该出现在食品中，但由于食品的包装材料或在其生产工艺中可接触到部分塑料产品，以致食品中含有塑化剂，对人体造成健康危害。 本文介绍了赛默飞世尔科技全新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪TSQ8000分析检测食品中19种邻苯二甲酸酯的方法。通过二级质谱扫描充分减少了在复杂基质样品中的背景干扰影响，提高目标化合物的检测灵敏度，并且尽可能去除假阳性的干扰，使得检测结果更加准确可靠。 2.实验部分 2.1仪器和试剂 TSQ8000气相色谱-三重四极杆质谱仪(赛默飞世尔科技，美国)，TR-5MS 30mX0.25mmX0.25pm毛细管色谱柱。 2.2仪器方法 气相方法： 柱温箱：70℃保持1min， 以20℃/min升至280℃，再以6C/min的速率升至310℃，保持1.5min；进样口：PTV进样，进样口初始温度为70℃，进样时间0.2min， 再以8℃/sec的速率升至300℃，保持1min， 清洁程序用320℃，保持15min；载气：恒流，1.2ml/min；传输线：300℃ ( 质谱方法： ) 离子源温度为250℃，采用EZ-SRM的方法，具体检测离子对如表1所示： 2.3前处理方法 2.3.1不含油脂样品的前处理方法 量取液体试样5ml(含二氧化碳的饮料要先出去二氧化碳)，加入正己烷2ml，振荡1min， 静置分层或者离心分层，取上清液分析。 2.3.2含油脂样品的前处理方法 禾取样品0.5g，用乙酸乙酯：环己烷(1：1)定容至10ml，涡旋混合2min， 0.45um滤膜过滤，滤液经凝胶渗透色谱装置净化，收集流出液，浓缩至2ml后分析。 注：整个处理过程必须在玻璃容器中进行，严禁使用塑料制品，防止处理样品过程中混入非样品中的邻苯二甲酸酯。 3.结果 3.1 AutoSRM自动优化19种邻苯二甲酸酯的离子对信息及碰撞能量 对于串接气质来说，方法优化及建立是非常重要的部分。常规的方法开发需要对每个未知化合物挑选母离子，子离子以及优化碰撞能量，当未知化合物越多，花费的时间也就越多。赛默飞世尔科技全新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪TSQ 8000独有的AutoSRM功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当一次优化的化合物数目较多时，可以智能得调整进样的次数以期在最少的时间内得到最优化的方法，使得整个方法建立部分更加简单方便。整个AutoSRM的步骤如图1所示： NO. Name 中文名 Parent Product (CE) RT Time Window 1 DMP 邻苯二甲酸二甲酯 163 77(26)，135(20) 7.15 1 2 DEP 邻苯二甲酸二乙酯 149 65(32)，93(20) 8.02 1 3 DPrP 邻苯二甲酸二丙酯 149 65(34)，93(24) 9.07 1 4 DIBP 邻苯二甲酸二异丁酯 149 65(36)，93(26) 9.57 1 5 DBP 邻苯二甲酸二丁酯 149 65(38)，93(24) 10.061 6 DMEP 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 149 65(34)， 93(22) 10.251 7 BMPP 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 167 121(20)，149(10) 10.631 8 DEEP 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 149 65(38)，93(26) 10.78 1 9 DPP 邻苯二甲酸二戊酯 149 65(34)，93(26) 10.97 1 10 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 149 65(36)，93(24) 11.83 1 11 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 149 65(38)，93(24) 11.92 1 12 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 149 65(30)，93(20) 12.451 13 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 249 149(24)， 167(6) 12.781 14 DEHP 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 279 149(22)，167(6) 12.8 1 15 Diphenyl phthalate 邻苯二甲酸二苯酯 225 77(34)，141(28) 12.94 1 16 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 149 65(38)，93(26) 13.821 17 DINP 邻苯二甲酸二异壬酯 293 127(8)，149(22) 14.42 5 18 DIDP 邻苯二甲酸二异癸酯 307 85(18)， 141(6) 15.055 19 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 149 65(38)，93(26) 15.051 表1：19种邻苯二甲酸酯的SRM列表 第一步：选择母离子 第二步：选择子离子 第三步：优化碰撞能量 图1：AutoSRM步骤预览 最终优化的离子对结果可以导出成excel表格，直接导入到方法中，无需手动输入离子对编辑方法。 3.2色谱分离及最低检测限 由于溶剂中可能含有邻苯二甲酸酯，所以每次做样一定要做溶剂对照，以便排除溶剂中的干扰效应。并且，由于19种邻苯二甲酸酯的离子对信息有一些比较相似，所以尽可能选择分离度比较好的色谱柱让邻苯二甲酸酯在色谱上可以分开，从而使定性定量更加准确。本实验选择TR-5MSⅡI30mX0.25mmX0.25pm毛细管色谱柱，各化合物通过此种方法可以实现有效的分离。图2为10ppb 19种邻苯二甲酸酯扣去溶剂背景的色谱图。 3.3标准曲线及重现性 以正己烷为溶剂，分别配制5ppb， 10ppb， 50ppb， 100ppb， 500ppb， 1000ppb的混标溶液，建立标准曲线，各化合物的标准曲线如表2所示，相关系数R2均大于0.99，表明这19种化合物的标准曲线线性良好。由于溶剂本底中各类邻苯二甲酸酯的含量是不同的，所以干扰程度也不同。对于溶剂中存在干扰的化合物，需要将本底减去再计算标准曲线，以使标准曲线更加准确。本次实验除了DIBP， DBP， DMEP和DEHP的线性范围最低做到5ppb，其余化合物的最低定量限都在1ppb或者以下，其中溶剂中的DIBP， DBP，DMEP和DEHP含量估计是5ppb标准品的20-30%，所以可以将最低定量限做到5ppb，其余几种邻苯二甲酸酯在溶剂中未发现干扰。将10ppb的样品重复进样5针，得到各化合物的重现性如表2所示： 图2： 5ppb19种邻苯二甲酸酯扣去溶剂背景的色谱图 No. Name 中文名 线性方程 R2 RSD% 1 DMP 邻苯二甲酸二甲酯 Y=6.173e4x--6.162e5 0.9940 2.93 2 DEP 邻苯二甲酸二乙酯 Y=7.518e4x-8.338e5 0.9953 2.52 3 DPrP 邻苯二甲酸二丙酯 Y=1.033e5x-8.518e5 0.9977 1.7 4 DIBP 邻苯二甲酸二异丁酯 Y=1.28e5x-1.261e6 0.9962 2.89 5 DBP 邻苯二甲酸二丁酯 Y=1.354e5x-1.236e6 0.9960 1.48 6 DMEP 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 Y=1.092e4x-6.947e4 0.9996 5.52 7 BMPP 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Y=5.517e3x-3.683e4 0.9966 4.60 8 DEEP 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 Y=1.322e5x-1.461e6 0.9973 1.93 9 DPP 邻苯二甲酸二戊酯 Y=1.4e5x-1.298e6 0.9972 3.65 10 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 Y=1.374e5x-1.997e6 0.9957 1.29 11 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Y=6.181e4x-4.289e4 0.9988 3.38 12 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 Y=1.921e4x-2.676e5 0.9947 3.04 13 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 Y=3.433e4x-2.806e5 0.9976 0.78 14 DEHP 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 Y=6.365e4x-1.695e5 0.9991 3.51 15 Diphenyl phthalate 邻苯二甲酸二苯酯 Y=1.237e5x-1.89e6 0.9958 2.3 16 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 Y=1.442e5-1.933e6x 0.9976 1.37 17 DINP 邻苯二甲酸二异壬酯 Y=6.618e4x-3.592e5 0.9986 3.16 18 DIDP 邻苯二甲酸二异癸酯 Y=5.627e4x-3.868e5 0.9983 1.45 19 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 Y=1.513e5x-1.943e6 0.9967 2.26 表2：16种邻苯二甲酸酯的线性方程及RSD值 3.4实际样品检测 本次实验使用的是油脂类样品，按照2.3.2的处理方法，得到基质样品进行检测。同时，将溶剂正己烷也按照2.3.2的处理方法得到溶剂对照，以扣除溶剂中的邻苯二甲酸酯干扰。采用串接气质检测邻苯类物质，其去除基质干扰的能 力比单四极杆更好，这样能尽可能得去除假阳性的干扰。图3为油脂类样品按照上述方法进样得到的串接气质色谱图以及采用单四极杆进样得到的色谱图，明显看出采用串接气质检测，基线更平稳，更能得到准确的结果。 图3：油脂类样品扣去正己烷背景的邻苯二甲酸酯串接气质色谱图及单四极杆色谱图 采用Thermo Fisher公司全新一代三重四极杆质谱TSQ 8000，同时配合TR-5MS色谱柱，使19种邻苯二甲酸酯在16min内分析完毕，并且能得到很好的分离。并且TSQ8000提供的离子对扫描可以极大得去除假阳性的干扰，从而使检测结果更加准确。 需要注意的是，由于邻苯二甲酸酯样品的特殊性，几乎存在于大部分的工业产品如塑料、染料助剂、涂料及润滑油中，所以在样品采集以及处理过程中要尽量避免塑料产品的干扰，配样和样品处理时都需要使用玻璃容器。并且，在使用溶剂方法，需要用到尽可能干扰较少的溶剂，从而使检测结果更加准确。 ( 上海浦东 新金 桥 路27号6号楼 ) 邮编：201206 电话：021-68654588 传真：021-64457830 北京东城区安定门东大街28号 雍和大厦西楼F座7层 邮编：100007 电话：010-84193588 传真：010-66210845