葡萄中提取物检测方案

智能文字提取功能测试中

硫酸高铈铵分光光度法测定葡萄籽 提取物中原花青素 马亚军，朗惠云*，贾婴琦 （西北大学化学系，西安 710069） 摘 要：建立了葡萄籽提取物中原花青素测定的新方法－硫酸高铈铵分光光度法。它基于原花青素与Ce4+在强酸介质中反应生成无色的Ce3+，通过测定黄色高铈盐的吸光度，间接测定原花青素，Ce4+在319nm波长处具有最大吸收。该方法的线性范围炜0.12～10μg/mL，RSD为0.98％～1.1％，回收率为97.2％～102.8％，相关系数r=0.9992，检出限为0.04μg/mL。 关键词：硫酸高铈铵；葡萄籽；原花青素；分光光度法 中图分类号：0657.32 文献标示码：A 文章编号：1000－0720－（2004）04－0042－03 原花青素（Procyanidins PC）属于缩合单宁（Condensed tannin），主要由儿茶素和表儿茶素聚合而成的低聚混合物，广泛分布于植物界。原花青素的测定方法尚无统一标准，文献报道的有正丁醇－盐酸法、香草醛－盐酸法[1]及铁盐催化比色法[2]等，另外还有薄层层析法[3]、HPLC、HPLC－MS[4]法等。硫酸高铈铵分光光度法测定葡萄籽提取物中原花青素尚无报道。本文基于原花青素与Ce4+在强酸介质中反应生产无色的Ce3+，通过测定黄色高铈盐的吸光度，间接测定原花青素，Ce4+在319nm波长处有最大吸收。原花青素在0.12～10μg/mL范围内符合比尔定律。已用于实际样品的测定。 1 材料与方法 1.1 仪器及试剂 TU－1800S型分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；Plus 420A型酸度计（美国ORION公司）；原花青素标准储备液（0.6μg/mL）：准确称取0.15g原花青素标准品（质量分数为99.5％，云南生物资源开发公司）用水溶解定容至250mL容量瓶中，使用时稀释为6.0μg/mL的标准溶液；硫酸高铈铵溶液（2.0×10-3mol/L）：用0.3 mol/LH2SO4溶液配置而成，用时新鲜配置。 以上试剂均为分析纯，水为二次离子交换水。 1.2 试验方法 于两支25mL比色管中，一支加入原花青素标准溶液8mL，另一支加入代测液，并分别加入2mL2.0×10-3 mol/L的硫酸高铈铵溶液，摇匀，用0.3 mol/LH2SO4溶液稀释至刻度，前者置参比池中，后者置样品池中，在319nm处测其吸光度。 1.3 工作曲线的绘制 依次移取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0mL原花青素标准溶液于25mL比色管中，按试验方法处理之后进行测定，其线性回归方程为A=-0.5276ρ（μg/mL）+0.9508，相关系数r=0.9992。根据IUPAC规定，计算得到检出限为0.04μg/mL，原花青素质量浓度在0.12～10μg/mL范围内完全符合比尔定律。 2 结果与讨论 2.1 吸收光谱 将一定量的原花青素标准溶液按试验方法处理之后，在250～500nm波长范围内进行扫描，结果见图1。黄色高铈盐溶液在319nm波长处有最大吸收，以次作为测定波长。 2.2 酸度的影响 Ce（Ⅲ，Ⅳ）的电极电位与酸的性质和浓度有直接关系[5]。本文用H2SO4、HNO3和H3PO4作为介质在不同pH条件下进行试验。结果表明，以H2SO4溶液为反应介质，在pH 0～1范围内，吸光度大也稳定；当pH>1时，高铈盐易水解而析出难溶的碱式盐沉淀。因此本文选择在0.3 mol/L H2SO4溶液介质中进行。 2.3 试剂用量的影响 高铈盐溶液的用量对测定结果有一定影响，取不同量（0.5～4mL）的高铈盐溶液（2.0×10-3mol/L）进行试验。试验结果表明，当高铈盐溶液的用量小于0.5mL时，样品反应不完全；当高铈盐溶液的用量大于3mL时，吸光度虽然大，但吸光度不稳定；当高铈盐溶液的用量为2mL左右时，效果最佳，线性关系也好。本文选择2.0×10-3mol/L硫酸高铈铵溶液2mL。 2.4 温度及时间的影响 取2mL原花青素标准溶液按试验方法处理之后，在20～100℃范围内进行试验，测定其吸光度。结果如图2所示。本文选择在70℃水浴中反应35min后进行测定。 图1 高铈盐的吸收光谱 Fig.1 Absorption spectrum of ammonium cerium sulfdte 图2 温度对吸光度的影响 Fig.2 Effect of temperature 1－50℃；2－60℃；3－70℃ 2.5 干扰试验 在最佳试验条件下，本文考察了可能存在的药物赋型剂对原花青素测定的影响。结果表明：10倍的滑石粉、糊精、硬脂酸镁、淀粉、羟甲基纤维素对测定无干扰，况且这些物质水溶性差，即使有干扰，也可通过过滤除去。 2.6 样品的分析 2.6.1 样品的前处理 准确称取葡萄籽提取物保健药品5粒，研细混匀，称取适量（相当于原花青素30mg）溶解，定容于100mL容量瓶中，干过滤后取其滤液5mL定容于250mL容量瓶中，待测定。 2.6.2 样品测定 取样品溶液2mL，按实验方法测定，结果见表1。 表1 样品测定结果及回收率 Tab.1 Determination results 样品 标示量ω/% 测定结果ω/% 加入量ρ/(μg/mL) 测得量ρ/(μg/mL) 回收率 /% 1 50.0 (mg/粒) 48.7 (mg/粒) 0.480 0.960 0.49 0.933 102.1 97.2 2 95 96.1 0.480 0.960 0.485 0.987 101.0 102.8 1- Grape seed (瑞士中草药有限公司)； 2- 四川大力天然产物公司 参考文献 [1] 姚 开，何 强，吕远平等。化学研究与应用，2002，14（2）：230 [2] 傅武胜，蔡一新，林丽玉等.食品与发酵工业，2001，27（10）：57 [3] Lea A G H.J Food Agric Sci，1978，29：471 [4] Rigand J，Escribano－Bailon M T，Prieurc et al .J Chromatogr，1993，654：255 [5] 易宪武，黄春晖，王 慰等.无机化学丛书（第九卷）.北京：科学出版社，1998 Detrmination of functional compoents in grape seeds ammonium cerium sulfate MA Yajun，LAN Hui－yun and JIA Ying－qi（Department of Chemistry，Northwest University，Xi'an 710069），Fenxi Shiyanshi，2004，23—（4）：42～44 Abstract：A new method for determination of oligomeric procyanidins by ammonium cerium sulfate was studied. The method was based on the reaction of oligomeric procyanidins with Ce4+ in strong acid solution 。The amount of residual Ce4+ was determined by spectrometry 。Then the content of oligomeric procyanidins was determined indirectly。The linear was 0.12～10μg/mL and RSD was 0.98％～1.1％， and the recovery was 97.2%~102.8% with a detection limit of 0.04μg/mL. Keyword：Ammonium cerium sulfate；Grape seed；Procyanidins；Spectrometry