奶粉中香兰素和乙基香兰素检测方案(气相色谱仪)

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2 吕建霞梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：奶粉；香兰素；乙基香兰素； GC-FID 样品的测定 摘要 以二氯甲烷为溶剂，提取奶粉中的香兰素和乙基香兰素，经分散固相萃取方法净化后，用Trace1310气相色谱仪测定，外标法定量，线性良好，回收率和重现性均满足分析要求。 引言 香兰素(vanillin)，又叫香草醛，学名3-甲氧基-4-羟基苯甲醛；乙基香兰素( ethyl vanillin)， 学名3-乙氧基-4-羟基苯甲醛。两者均为白色或微黄色结晶粉末，微溶于水，具有香荚兰香气及浓郁的奶香，是重要要食品品加剂，广泛用作食品、饮料以及日化用品等的增香剂。但是，大剂量使用香兰素等香料将有害健康。根据《食品安全国家标准食品添加剂使用规定》GB2760-2011要求，凡使用范围涵盖0至6个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。2012年7月有报道称，几大洋品牌的|段奶粉被检出添加了国家禁止的香兰素，因此需要建立相关检测方法对奶粉中的香兰素进行检测。 目前关于香兰素和乙基香兰素的测定方法主要有分光光度法、电化学法、高效液相色谱法、、气相色谱和气质联用法，由于HPLC法对样品净化程度要求不高，因此样品预处理方面的研究较少。本方法采用二氯甲烷提取，分散固相萃取净化，建立同时测定婴幼儿配方奶粉中香兰素和乙基香兰素含量的气相色谱法。 实验部分 主要仪器设备与试剂 仪器：气相色谱仪， Trace 1310， 美国ThermoFisher。 试剂：：二二氯甲烷，色谱纯；氯化钠，分析纯；Cleanert C18固体吸附剂；香兰素和乙基香兰素标准品。 样品前处理方法 称取5g奶粉(精确到0.01g)于100mL容量瓶中，加入20mL水，振荡，使成为均匀奶液，加水定容至刻度，摇匀。用移液管移取5mL奶液于15mL离心管中，加入2g NaCl， 5mL二氯甲烷，盖好盖子振荡提取5min，静置2min， 然后以10000rpm离心5 min，小心全部移取下层有机层，过无水硫酸钠后，定容至5mL，加入150mgC18吸附剂，涡旋1min， 静置后吸取上层清液过0.2um滤膜，待气相色谱仪测定。 上述得到的样品溶液直接进样，气相色谱仪检测，外标法定量。仪器参数设置见表1. 表1仪器参数设置 仪器型号及配置 TRACE 1310 色谱柱类型尺寸及柱温 TG-35MS， 30m， 0.25mm， 0.25pm柱温：100℃(3min)， 20℃/minto 280℃， hold 3min。 P/N：26094-1420； S/N： 1072375 检测器类型、工作参数 FID，温度：260℃；氢气：35mL/min；空气：350mL/min；氮气：30mL/min。 进样口类型、工作参数 PTV进样口，进样模式splitless，splitless time： 1 min。进样口温度：50℃(0.05min)， 14.5℃/min到240℃(1min)。 载气类型及流速 氮气，恒流模式，流速：1.0mL/min。 结果与讨论 标准样品的色谱图和线性 标准样品中香兰素和乙基香兰素的色谱图如图1所示。用标准样品配制成浓度分别为1 pg/mL， 2.5 pg/mL，10pg/mL， 35ug/mL， 50pg/mL的系列标准工作液，进样1uL，然后按照以上所述的测定方法进行GC-FID测定，以标准物质的浓度为横坐标，以各标准物质的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到香兰素和乙基香兰素的标准工作曲线如图2。香兰素和乙基香兰素的相关系数分别为0.9980和0.9991。 图1香兰素和乙基香兰素混合标准溶液的色谱图 图2香兰素和乙基香兰素的标准曲线 表2奶粉样品中香兰素和乙基香兰素加标回收情况(pg/mL) 名称 检测限 1pg/mL 回收率 2pg/mL 10pg/mL 1 pg/mL RSD (n=3) 2pg/mL 10pg/mL 香兰素 0.33 113.0% 106.8% 108.2% 4.57% 3.88% 5.13% 乙基香兰素 0.25 109.0% 96.00% 100.8% 3.69% 5.23% 4.82% 方法的精密度和回收率 对香兰素和乙基香兰素的1 pg/mL， 2pg/mL， 10pg/mL三个水平加标样品分别进行了3次测定，平均回收率和相对标准偏差列于表2中。样品加标的色谱图见图3。选择1 pg/mL的标准溶液，以噪声的3倍计算，本方法中香兰素和乙基香兰素的检测限分别为0.33pg/mL和0.25pg/mL。 图3标准品、样品、样品加标的谱图对比 对市售4个奶粉样品中香兰素和乙基香兰素的测定 按上述前处理方法测定了4个奶粉样品中的香兰素和乙基香兰素含量，其中样品1为|段奶粉，为禁止添加香兰素和乙基香兰素。样品2、3、4为Ⅲ段奶粉，可以添加香兰素和乙基香兰素，允许添加量为5 mg/100mL，即50 pg/mL。其中100mL以即食食品计，即冲调好的奶液，按照奶粉冲调说明一般为每100mL水加入14g奶粉。样品中的香兰素和乙基香兰素的含量采用外标法定量，配制一系列标准工作溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，定量结果按公式(1)换算为奶液中的含量，列于表3中。 其中：C为按照冲调说明冲调好的奶液中的含量，单位为pg/mL Vi 为前处理后最终定容液的体积，单位为mLMs为最终定容液中包含的奶粉的质量，单位为g，本方法中为0.25g Ci 为经前处理后最终定容液中的含量，单位为pg/mL 表3奶粉样品中香兰素和乙基香兰素含量(ug/mL) 名称 英文名称 样品1 样品2 样品3 样品4 香兰素 Vanillin 4.396 30.66 9.632 6.132 乙基香兰素 Ethyl vanillin ND 13.58 9.632 50.43 结论 建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素和乙基香兰素的气相色谱测定方法。本方法步骤简单、快捷，精密度高，具有较好的分离度，杂质干扰少，测定结果准确可靠，灵敏度高，是测定婴幼儿配方奶粉中香兰素、乙基香兰素的较好的方法。 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your ) local sales representative for details. 上海 北京 免费服务热线：上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 800 8105118邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118电话：021-68654588 邮编：100007传真：021-64457830 电话：010-84193588传真：010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC o’Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.SCIENTIFIC