川乌中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱检测方案(液相色谱仪)

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中药材川乌中乌头碱、)次乌头碱、新乌头碱含量检测 1.背景介绍 川乌为毛莨科植物乌头的干燥母根。川乌含有生物碱类成分，具有较交的药用价值，具有祛风除湿、温经止痛、抗炎降压等功效，也可用于治疗风寒湿痹、心腹冷痛、寒疝作痛、关节疼痛等病症，因其能够刺激皮肤，继而有麻木感产生，故可用作镇痛剂。其主要药用有效成分为生物碱类化合物，如乌头碱、次乌头碱及新乌头碱等，而不同产地川乌中所含药用有效成分的含量差异较大，所以，有必要采用一种有效的方法对中药材川乌中所含的有效成分乌头碱、次乌头碱及新乌头碱进行检测。因此，本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-UV建立了中药材川乌中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱含量的测定方法，可有效实现川乌中药材的质量控制。 2.样品制备 对照品溶液制备：取乌头碱对照品、次乌头碱对照品、新乌头碱对照品适量，甲异丙醇-三氯甲烷(1：1)混合溶液分别制成每1mL含乌头碱 50 pg、次乌头碱和新乌头碱各0.15 mg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取川乌粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3mL，精密加异丙醇-乙酸乙酯(1：1)混合溶液50mL， 称定重量，超声处理(功率300W， 频率40 kHz；水温在25℃以下)30分钟，放冷再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯(1：1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 25 mL，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-三氯甲烷(1：1)混合溶液3 mL溶解，滤过，取续滤液，即得。 3.测试条件 仪器 EasySep@-1020液相色谱系统，配备UV检测器 色谱柱 Global Chromatography GS-120-5-C18-AP 250×4.6 mm， 5 pm 流速 1.0 mL/min 柱温 35°C 流动相 流动相A：乙腈-四氢呋喃(25：15)，流动相B ： 0.1 moL/L醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5mL)；梯度洗脱 检测波长 235 nm 梯度洗脱程序 4.测试结果 1)对照品色谱图 时间( min ) A% B% 0 15 85 48 26 74 49 35 65 58 35 65 65 15 85 80 15 85 序号保留时间名称峰面积 峰分离度理论塔板数 1 38.579 3706848 2.80 17010 2 41.772 4450076 4.70 24688 3 46.380 1358874 0.00 45941 图1对照品检测色谱图 2)样品色谱图 38.659 1552240 3.56 29254 2 41.876 817328 5.18 36516 3 46.388 439307 0.00 48941 总计 2808875 图2样品检测色谱图 3)重复性考察 精密吸取对照品溶液，进液相色谱测定，重复进样6次，计算保留时间RSD≤0.5%，峰面积RSD≤2.0%，方法的定性定量重复性良好。 5.结论 采用 EasySep@-1020 液相色谱系统，配备 UV 检测器、Global Chromatography GS-120-5-C18-AP色谱柱可以实现中药材川乌中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱含量的检测，方法准确、灵敏度高，可以满足日常分析检测要求。 6.配置列表 仪器配置 EasySep@-1020 二元梯度液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱) EasySep@-1020 UV 检测器 Unimicro 色谱工作站 上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd. 地址：上海市浦东新区张江高科技园区松涛路489号C01座 邮编：201203 电话：021-3895358850801569(技术服务专线) 传真：021-38953636 邮箱： info@unimicrotech.com.cn 网址： www.unimicrotech.com.cn