双三元分析水中中9 种苯胺类化合物检测方案(液相色谱仪)

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样品处理 潘媛媛 金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 苯胺类化合物是一种重要的有机化工原料和化工产品。环境中所含的苯胺类化合物主要来自于各种化工、染料、制药等工业废水中，一般毒性较高，少量就能引起人体中毒。苯胺化合物可通过呼吸道和消化道而摄入体内，使氧和血红蛋白变为高铁血红蛋白进而影响机体供氧而造成内窒息，并且对人体有很强的致癌性。因此，苯胺类化合物对环境的污染一直被人们所关注，美国、日本等国把苯胺类列入主要监测项目或优先监测污染物的黑名单。在我国苯胺类化合物也被列为环境中的重点污染物，并制定了最高容许排放浓度。 由于水体中苯胺的含量一般比较低，因此目前常用的苯胺分析方法，如 HPLC、GC和分光光度法等，均需要对大体积的水样进行前处理，后进行检测，操作比较繁琐。《GB/T5750.8-2006生活饮用水标准检验方法有机物指标》中采用GC 和重氮偶合分光光度法测定生活饮用水及水源水中的苯胺，其中，GC 方法需前处理10L水样，对水样中苯胺的最低检测限为 20pg/L；分光光度法需处理25mL 水样，最低检测限为 80pg/L。《水和废水监测分析方法(第四版)》中采用分光光度法和 HPLC 法分别测定了5种苯胺类化合物，检测限为0.5~1.5pg/L。 本方法采用双三元在线固相萃取—液相色谱法可以实现水样中苯胺的直接检测，避免了繁琐的样品前处理过程。水样只需简单过滤，即可进样。本方法直接进样2.5mL，检出限可达0.05~0.2pg/L。 Thermo Ultimate 3000 系统： 泵：DGP-3600 自动进样器： WPS-3000SL 柱温箱：TCC-3000 检测器：DAD-3000 色谱软件： Chromeleon 7.1 分析柱： Acclaim 120A C18，4.6×150mm， 3 pm， PN：059133，SN：003149 富集柱： SolEx RSLC HRP， 2.1×20 mm， 12~14 pm， PN：075590 A： 10mM 磷酸氢二钾缓冲液(pH6.5)； B：乙腈；C：甲醇；梯度见表1。 表1：梯度淋洗条件 富集泵 分析泵 阀切换 时间 (min) 流速 (mL/min) B% C% 时间 (min) 流速 (mL/min) B% C% 时间 (min) 位置 0 2 0 10 0 1 28 0 0 10-1 1 2 0 10 9 1 28 0 1 1-2 2 0.5 0 70 15 45 0 2 10-1 20 0.5 0 70 17 1 70 0 21 2 0 10 20 70 0 20.5 1 28 0 22 28 0 进样量：2.5mL ( 柱温：30℃ 检测波长：23 0 nm、282nm、360nm ) 将水样通过 0.22 pm 尼龙滤膜过滤，滤液待测。 结果与讨论 标准品色谱图 图1.9种苯胺类化合物混标谱图(10pg/L)A： 230nm； B： 282nm； C： 360nm 1、苯胺；2、3-硝基苯胺；3、3-氯苯胺；4、联苯胺；5、4-硝基苯胺；6、4-氯苯胺； 7、2，4-二硝基苯胺；8、4-氟苯胺；9、2，6-二氯-4-硝基苯胺 线性、检出限 以标样色谱峰面积对浓度做工作曲线，具有良好线性，线性相关系数r大于0.999。以3倍信噪比计算检出限，得到 该方法最低检出限为0.05~0.2 ug/L。线性数据及检出限见表2所示。分别对1 pg/L 和 10 pg/L苯胺混合标准夜液做重现性考察， RSD 分别为<4.8%，具体见表2。 表29.种苯胺化合物线性范围、检出限及重现性 分析物 波长 线性范围 标准曲线 2 LOD (S/N=3) (1pg/L) RSD(%， n=4) 1pg/L 10pg/L (nm) (ug/L) 苯胺 230 1~100 Y=0.0652+0.0937X 0.9992 0.15 2.9 1.9 3-硝基苯胺 230 1~100 Y=0.0081+0.0687X 0.9999 0.2 1.9 1.7 3-氯苯胺 282 1~100 Y=-0.0252+0.1814X 0.9999 0.1 1.8 2.1 联苯胺 360 1~100 Y=-0.0044+0.1282X 0.9999 0.15 1.6 1.6 4-硝基苯按 230 1~100 Y=-0.0323+0.1420X 0.9998 0.1 1.6 1.5 4-氯苯胺 230 1~100 Y=0.0105+0.0761X 0.9999 0.1 4.8 1.6 2，4-二硝基苯胺 360 1~100 Y=-0.0028+0.1060X 0.9994 0.1 2.6 2.1 4-氟苯安 230 1~100 Y=-0.0501+0.0727X 0.9999 0.15 1.1 1.4 2，6-二氯-4-硝基苯胺 360 1~100 Y=-0.0046+0.0909X 0.9999 0.05 1.6 1.8 品，测定结果如下，湖水及其咖标样品的谱图见图2和图3. 按照样品前处理方法分别测定了自来水和颐和园湖水样 图2.湖水样品及样品加标谱图(230nm) A：湖水样品；B：湖水样品 1ug/L 加标；C：湖水样品10pg/L 加标1、苯胺；2、3-硝基苯胺；3、3-氯苯胺；4、联苯胺；5、4-硝基苯胺；6、4-氯苯胺； 7、2，4-二硝基苯胺；8、4-氟苯胺；9、2，6-二氯-4-硝基苯胺 图3.湖水样品及样品加标谱图(360nm) A：湖水样品；B：湖水样品1pg/L加标；C：湖水样品10pg/L 加标 1、苯胺；2、3-硝基苯胺；3、3-氯苯胺；4、联苯胺；5、4-硝基苯胺；6、4-氯苯胺； 7、2，4-二硝基苯胺；8、4-氟苯胺；9、2，6-二氯-4-硝基苯胺 实际样品中，可发现在230nm谱图(图2)中，7号峰2，4-二硝基苯胺出峰处，有明显的基质干扰，但由于该化合物的检测波长为360nm， 且在图3样品及样品加标中均未发现基质干扰，因此可以确定该基质不会影响样品的准确定量。自来水及湖水样品加标回收结果见表3。 表3.自来水和湖水样品加标回收结果 自来水回收率(%) 湖水回收率(%) 1pg/L 10pg/L 1pg/L 10pg/L 苯胺 74.7 104 102 101 3-硝基苯胺 90.4 97.4 93.9 101 3-氯苯胺 99.2 106 106 108 联苯胺 102 105 128 95.7 4-硝基苯胺 103 99.2 102 103 4-氯苯胺 93.5 98.3 101 107 2，4-二硝基苯胺 101 99.7 108 103 4-氟苯胺 116 88.1 101 108 2，6-二氯-4-硝基苯胺 98.4 101 100 103 讨论与建议 本方法在参考已有双三元“在线固相萃取-高效液相色谱测定水样中5种痕量苯胺类化合物”方法的基础上，对实验方法进行优化，使能够检测水体中包括苯胺、硝基苯胺和氯苯胺在内的9种常见苯胺类化合物。 上样条件采用磷酸缓冲盐-甲醇体系，分析条件磷酸缓冲盐-乙腈体系。该方法在分析条件上对原有方法做了较大改动，主要为流动相组成、梯度条件：当采用水-乙腈体系分析时，3-氯苯胺会出现丢峰现象，而采用磷酸缓冲盐-乙腈体系分析时，可避免该现象的发生；在目前确定的梯度条件中，9种化合物均可以达到很好的分离， 22min 内即可完成样品的检测。 该方法样品仅需简单过滤后，即可直接检测。分析时间短，22min 即可完成9种苯胺类化合物的检测。 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherSCIENTIFIC AN_C_LC-   苯胺类化合物是一种重要的有机化工原料和化工产品。环境中所含的苯胺类化合物主要来自于各种化工、染料、制药等工业废水中，一般毒性较高，少量就能引起人体中毒。苯胺化合物可通过呼吸道和消化道而摄入体内，使氧和血红蛋白变为高铁血红蛋白进而影响机体供氧而造成内窒息，并且对人体有很强的致癌性。因此，苯胺类化合物对环境的污染一直被人们所关注，美国、日本等国把苯胺类列入主要监测项目或优先监测污染物的黑名单。在我国苯胺类化合物也被列为环境中的重点污染物，并制定了最高容许排放浓度。