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AN_C_LC-54 冉良骥 金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 高效液相色谱;乙酰磺胺酸钾; WAX-1色谱柱 目的 利用高效液相色谱仪,采用 WAX-1色谱柱建立食醋中安赛蜜的检测方法,在现有国家标准和参考文献基础上,进一步消除基质干扰,确保分析过程快速、准确。 引言 安赛蜜(化学名:乙酰磺胺酸钾 Acesulfame-k, 又称AK糖), 属第四代合成甜味剂,其甜度为蔗糖的200倍,具有口感好,对热、酸稳定性好、安全性高等特点,我国卫生部于1992年5月已正式批准安赛蜜用于食品、饮料领域。但在食 图1安赛蜜化学机构 醋酿造工业中,为了确保产品的原 始风味,防止商家借助添加剂擅自改变醋液口感并进行商业炒作,在GB 2760-2011食品安全国家标准《食品添加剂使用标准》中规定,安赛蜜在食醋中不得检出。 目前安赛蜜常见的国家标准及文献方法如表1所示。 由表1内容可知,目前安赛蜜检测常用洗脱系统为硫酸铵或醋酸铵体系,分析柱通常为 C18色谱柱,但采用上述方 法检测食醋中的安赛蜜时发现:由于检测波长接近末端吸收,基线噪音较大(特别是醋酸盐体系);同时由于食醋的基质干扰较强,导致难以通过检测结果直观判定食醋样品中是否含有安赛蜜。 表1.安赛蜜的检测方法 方法出处 样品基质 色谱柱 流动相 检测波长 国家标准 饮料 C18色谱柱 0.02M 硫安铵·甲醇·乙腈-10%硫酸 214nm GB/T 5009.140-2003 (800:150:50:1) 方法开发报告 APPBJ-LC-090728 食品 C18色谱柱 0.02M 醋酸铵-甲醇(90:10) 230nm 文献3 液体调味料 C18色谱柱 0.02M醋酸铵-甲醇(93:7) 230nm 阴离子交换结合反相分离的混合模式,以磷酸盐-乙腈洗脱系统实现了安赛蜜色谱峰与基质成份的良好分离,无需复杂前处理过程(简单稀释过滤即可),方法快速简便(测试周期约为10min),灵敏度高(检测限按供试品取样量折算可达0.8 ug/ml, 而 GB/T 5009.140-2003的方法检测限为4 ug/ml),精密度和回收率好,为食醋类样品中安赛蜜的测定提供了较好的方法参考。 材料与方法 仪器 高效液相色谱仪(Thermo Scientific Dionex LPG 3400 系列,包括有带在线脱气单元的低压四元梯度泵,自动进样器,柱温箱,二极管阵列检测器。) 超纯水机 (Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC/UF xCAD plus,P/N: 50136146) 针式过滤器(Fisherbrand,尼龙膜,孔径0.45 pm,P/N:CNG#431225) 试剂和对照品 乙腈(色谱纯, Fisher Chemical, P/N:A998-4) 磷酸二氢钾(分析纯, Acros, P/N:424205000) 氢氧化钠(优级纯, Acros, P/N: 134070010) 结果与讨论标准品色谱图(0.5pg/ml) 安赛蜜(含量99.5%, Dr. ErenstorferGmbH , P/N:10010800) 标准品溶液制备 精密量取安赛蜜适量,以纯水逐级稀释为浓度分别为20.0、10.0、5.00、2.00、1.00、0.50、0.05、0.025 pg/ml的标准工作溶液。 样品溶液制备 精密量取样品1.00ml, 加水稀释定容至100ml,过0.45 pm针式过滤器(尼龙膜)后待测。 加标溶液制备 精密量取样品1ml,准确加入5ml标准品溶液(浓度10 ug/ml),加水稀释定容至100ml, 过0.45 pm针式过滤器(尼龙膜)后待测。 色谱条件 分析柱: Acclaim Mixed-Mode WAX-1 3pm, 3.0×150mm(P/N:001056, S/N:070088) 流动相:100mM磷酸盐缓冲液(pH6.8)-乙腈(80:20)流速:0.8 ml/min 进样量:10pL 柱温:30℃ 图3.羊品2#及加标样品色谱图 (下-样品;上-加标样品,安赛蜜色谱峰纯度指数994) 检测波长的选择 通过 DAD 检测器测得安赛蜜色谱峰的最大吸收波长为 227nm,由此确定方法检测波长 图4.安赛蜜紫外吸收图谱 色谱柱及流动相的选择 分别选择 Acclaim C18、Acclaim PA2、Acclaim WAX-1色谱柱对样品和对照进行分离,结果发现Acclaim PA2 色谱柱对安赛蜜保留较弱,峰形不佳(见图5);采用 Acclaim C18 分析,杂峰洗脱时间长,且基质干扰大(见图6);而采用Acclaim WAX-1 色谱柱,色谱分离效果最好,且其他杂质保留时间均小于安赛蜜,便于控制总分析时间,故最终将其确定为本法的分析柱。 分别对流动相中缓冲液种类、浓度、pH值进行筛选, 结果发现: (1)采用磷酸盐缓冲液时,基线噪音最小; (2)当缓冲盐浓度≤50mM时,安赛蜜色谱峰在多次重复进样后容易发生变形,推测可能是样品中无吸收的物质在柱头处占据了活性位点,将缓冲盐浓度提高至100mM时,该问题可得到明显改善; (3)当 pH由6.0调节至7.0过程中,2#样品中主要杂峰与安赛蜜分离度逐渐增大,当 pH 达6.8~7.0时,分离效果最佳。综上,最终确定本法的流动相比例。 图5.PA2柱-对照品色谱图 图6.C18柱-样品及标准品色谱图(上-样品;下-标准品) 取浓度为 0.5 ug/ml 的对照品溶液重复进样7针,保留时间RSD 为0.13%,色谱峰面积 RSD 为0.36%。 线性、检出限 取不同浓度安赛蜜标准工作溶液依次进样10pl分析,在0.025 pg/ml~20.0 pg/ml范围,以安赛蜜浓度和峰面积进行 图7.方法定量限色谱图 表2.样品检测及回收率考察结果 序号 基质 检测结果(pg/kg) 国标GB/T 5009.140-2003 本方法 加标回收率(%,n=3) 1 果醋 基线不平,有干扰 N.D 95.3 2 陈醋 基线不平,有干扰 N.D 90.3 结论 测定 ( 2]赛默飞世尔公司方法开发报告 APPBJ -LC-090728 “食品 中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸同时测定的方法” ) 本方法使用 WAX-1色谱柱对食醋中安赛蜜进行测定,操作简便易行,大大降低基质的干扰,提高了方法重现性和准确度。 ( [1]国家标准 GB/T 5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾的 ) ( [3]董明,反相高效液相色谱法同时检测复合液体调味料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量[J]商品与 质量,2013(3):244 ) 目前安赛蜜检测常用洗脱系统为硫酸铵或醋酸铵体系,分析柱通常为C18 色谱柱,但采用上述方法检测食醋中的安赛蜜时发现:由于检测波长接近末端吸收,基线噪音较大(特别是醋酸盐体系);同时由于食醋的基质干扰较强,导致难以通过检测结果直观判定食醋样品中是否含有安赛蜜。
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赛默飞色谱与质谱为您提供《食醋中安赛蜜检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于食醋中食品添加剂检测,参考标准《暂无》,《食醋中安赛蜜检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有赛默飞 Vanquish™ UHPLC超高效液相色谱系统、赛默飞UltiMate3000制备液相色谱。
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