茶叶中农药残留检测方案(液相色谱柱)

智能文字提取功能测试中

超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923农林科技 科技展望 2017/01 茶叶中多种农药残留的液相色谱-串联质谱法测定分析 魏茹霞 (河源市质量计量监督检测所，广东 河源 517000) 【摘 要】本文主要构件茶叶中哒达酮、氟虫腈、丙溴磷、吡虫啉、三唑醇、啶虫脒、三唑酮与噻嗪酮八种农药的残留液相色谱串联质谱法测定方式，所用用品通过1：1的丙酮一二氯甲烷混合溶剂来促进溶剂的提取，经过石墨化炭黑与氨基(Carb /NH，)进行固相萃取，并通过小柱进行净化，通过 Hypersil Gold C18(150 毫米×2.1毫米，5微米)色谱柱进行分离，通过乙腈与0.1%的甲酸水溶液洗脱流动相的梯度，通过多反应的监测/MRM与电喷雾电离/ESI进行检测，然后通过外标法或是基质标准曲线同位素的内标法来测定农村残留情况。 【关键词】茶叶 农药残留 液相色谱 串联质谱法 茶叶属于国内主要出口的一种经济作物，逐渐受到很多消费者的青睐。但由于为避免茶树出现病虫害，逐渐在茶园之中应用很多化学农药，产业中的农药残留逐渐变成茶叶质检人员的关注焦点。日本与欧盟是国内茶叶出口主要市场，并且都根据对茶叶进口制定严格农药残留的限量标准规范，尤其欧盟在08年的三月份出台农药残留的限量标准与法规，这个法规中涉及茶叶的农药限量标准主要有221 项，临时限量的标准有171项，一共有390度项. 1实验的部分 1.1仪器以及试剂 选择 TSQQuantum Acess 的液相色谱——联四极杆的质谱仪，同时配合电喷雾的电离源； ASE -300 型加速溶剂的萃取仪；NEVAP-12型的氮吹仪；R-210型旋转的蒸发仪；ZM200 超离心的研磨仪，来源于德德莱驰的公司； SYNERY 超纯水的发生器。二氯甲烷、乙腈与丙酮；纯度超过96%的甲酸，选取0.5毫升超纯水进行定容，定容到500毫升，获得0.1%甲酸的水溶液；石墨化炭黑或是氨基固相萃取的小柱，规格为500毫克500毫克/6毫升；3毫升1：1丙酮一二氯甲烷进行预淋洗；0.22微升尼龙微孔的过滤膜；整个实验过程中用水是超纯水。 本次测定茶叶样品都是来源于企业送检样品，主要包含八类目标农药绿茶空白的样本，主要是哒螨酮、氟虫、丙溴磷、吡虫啉、三唑酮、三唑醇、啶虫脒与噻嗪酮标准的溶液，所有溶液浓度都是100mg/L，每一种溶液提取0.5毫升，通过丙酮进行定容到25毫升，然后配置浓度2mg/L混合标准的储备液，在1摄氏度-4摄氏度条件下进行冷藏避光的保存。选取 D3-啶虫脒与 D4-吡虫啉同位素来取代标准品的溶液，浓度都是100mg/L，分别取0.4毫升，通过丙酮进行定容到10毫升，配置为浓度 4mg/L混合标准的储备液，在1摄氏度-4摄氏度条件下进行冷藏与避光的保存。 1.2关于样品的前处理 取三克茶叶的试样，通过超离心的研磨仪将茶叶粉碎以后，进行2毫米筛网进行过滤，移到加速溶剂的萃取仪34毫升萃取池之中，同时添加0.4mg/L D3一吡虫啉与D4一啶虫脒的同位素进行混合以后的标准化溶液，把1：1丙酮一二氯甲烷当做提取的溶剂，于10.34兆帕与120摄氏度条件下，进行五分钟加热，然后静态萃取十分钟，进行两次循环，再通过30%池体积提取溶剂对萃取池进行冲洗，同时应用氮气进行一百秒的吹扫。在结束萃取以后，把萃取液转到100毫升鸡心瓶之中，在35摄氏度水域中进行旋转蒸发，指导蒸干，通过3毫升1：1环己烷一乙酸乙酯对残渣进行溶解，溶解以后转移到10毫升塑料的离心管之中，在4000r/min 的速率下进行五分钟的离心运动，获得上清液然后净化。 1.3检测的条件 1.3.1质谱的条件 电喷雾的离子源(ESI)；检测的方式为多反应的监测(MRM)；而扫描的方式是：氟虫腈采用负离子进行扫描，其他的七种农药采用正离子进行扫描；通常电喷雾的电压如下：正离子的扫描电压是四千伏，负离子的扫描电压是三千伏；雾化气，也就是氮气压力如 下：正离子的扫描压力是241。32千帕，负离子的扫描压力是137.9千帕；辅助氮气压力为34.47千帕；碰撞气，也就是高纯氮气的压力是0.67千帕，各种农药碰撞能量、保留时间、自离子与母离子具体从表1中可以看出2. 表1 各种农药碰撞能量、保留时间、自离子与母离子情况 农药名称 农药表里的时间/min 自离子(Q3)(m/z) 母例子( Q1)(m/z) 碰撞的能量/V 氟虫腈 8.1 330250 8.14 1730 吡虫啉 4.8 175209 256 1615 三唑酮 7.5 69179 294 20 11 丙溴磷 9.0 304346 374 1914 啶虫脒 5.0 12690 223 1931 噻嗪酮 8.4 116106 306 1427 三唑醇 7.0 7099 296 19 D4-吡虫啉 4.7 179213 260 2134 哒螨酮 10.2 309147 365 1314 D3-啶虫脒 4.9 12690 226 1931 1.3.2色谱的条件 色谱柱为 HypersilGold C18的色谱柱，规格为150毫米×2.1毫米，容量为5微米；柱温为25摄氏度，进样量为10微升。流动相为A为0.1%甲酸水的溶液；流动相B为乙腈，每分钟流速是200微升。梯度的洗脱程序如下：0-6分钟，80%A-2%A；6-10分钟，维持2%A；10-14分钟，80%A。 2结果 2.1评定不确定度 本文按照 JJF 1059-1999《测定不确定度评定与表示》相关规定，评定日常检测之中不合格率比较高与阳性率较高的噻嗪酮、吡虫啉与啶虫脒三种农药，在进行各个分量评定时，为保证评定的结果对产品的合格判定具有指导性意义，所有试验都要在农药 MRL噻嗪酮50pg/kg、吡虫啉50pg/kg与啶虫脒100ug/kg附近。然后评定与分析各个分量检测结果，寻找测定结果的不确定度主要影响因素，进而给今后试验不确定度降低提供改进的方向。 (下转第178页) 超星·期北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：18911849923 4.2编制信息管理系统软件并运用 根据积分量化标准，选择 ASP+ SQL SERVER 的形式编写基于 WEB 的积分量化信息管理系统。主要包括员工信息维护、固定资产信息维护、积分量化标准维护、员工网络考勤管理、工作任务管理、工作日志管理、综合查询输出和系统自身维护等八个模块。系统在设计时要考虑到系统的安全可靠和机房管理员实际操作时的良好用户体验。 机房管理员上班时登录基于 WEB 的积分量化信息管理系统，系统按照机房开放计划、机房值班计划以及发现的设备故障等信息，有选择的向机房管理员推送需要其完成的日常管理、机房值班、机器检修或由领导分派的临时任务，机房管理员根据任务内容和完成期限自定义工作进度。每完成一个工作进度，员工自助登录确认，当所有工作进度都确认完成，对应的工作任务即完成。从认领任务到任务完成，系统记录每次操作的时间，前后时间差即视为机房管理员完成该项工作的时长。通过机房管理员们对自己工作内容的简要描述，形成完整的部门工作日志。按照积分量化标准，软件系统对这些工作日志逐条赋值，按类别求和分别得出上述四类工作的积分值A，进一步对这四类工作积分值进行加权求和即得到总积分值B。 yaa；一第i件工作获得的积分值 K一第i类工作的权重系数，A一第i类工作的积分和 部门工作日志、每项工作获得的积分，分管机房领导和机房管理员本人随时可以查阅和监督。宏观上，积分值的大小能直观反 (上接第79页) 2.2优化检测的条件 分别对比乙腈-乙酸铵水溶液、乙腈-水于乙腈-甲酸水溶液三种流动相对于目标的化合物灵敏度与分离效果。对比分析结果显示，如果只使用了腈一水体系，在负离子的模式下，氟虫腈一般不会出峰，在正离子的模式下，八种农药的灵敏度都不高；在添加了0.1%甲酸以后，可以明显提高各种农药响应值；在添加5mmol/L乙酸铵以后，可以使得啶虫脒与吡虫啉峰形发生明显的变化，而且是变得相对差。因此，本次实验使用乙腈与0.1%的甲酸水溶液，然后经过梯度的洗脱以后，不仅能够获取较高的灵敏度与分离度，而且可以有效确保样品之中各种农药组分间有良好色谱的峰形。 2.3实际的应用 把本文所构建方式用在日常的测中，检测效果比较好，并且已经累计检测了出口欧盟成品茶叶与企业委托检测原料茶叶有400度种，其中，茶叶农药残留的检测中、吡虫啉与啶虫脒浓度相对较高，分别为10-600ug/kg、10-212ug/kg与10-808ug/kg。 3结论 本次所有茶叶残留农药的检测方法为液相色谱一串联质谱法，主要检测了啶虫脒与吡虫啉等八种农药残留情况，通过加速溶 映出工作量的多少。积分越多表明机房管理员的工作越多，对部门的贡献越大，员工的成就感也就越强。通过横向可以比较各机房管理员对部门工作贡献的大小，按时间纵向可以比较机房管理员工作强度的起伏变化。微观上，按照类别、级别进行进一步统计这些积分值，通过数据挖掘能分析得出自尊心、责任感、工作效率和业务能力等更为详细的信息。为进一步提升机房管理员工作积极性和加强机房管理提供决策依据，将积分量化管理的结果与员工工作业绩考核挂钩，将能激活员工工作的积极性和创造性。 5结语 虽然这种积分量化管理方式是针对机房管理工作而提出的，但是其他性质的工作也可以参照此种做法，结合自身实际，制定出相应的积分量化标准进行管理。不论采取何种管理方式，只有充分体现尊重劳动、民主参与、公平公正、多劳多得原则的管理方式才能真正提高员工工作的积极性，切实得到员工的真诚支持。 ( 参考文献： ) ( [1]顾红光.实验室工作量化考核的几个主要问题分析及对 策[J].卫生职业教育，2014，32(24)：81~82. ) ( [ 2]胡家汉，李景峰.对 SQL Server 数据库的安全和管理策略探 讨[J].计算机光盘软件与应用，2012(02)：101~102. ) ( 基金项目：本文系安徽工程大学2013年校级本科教学质量提升计划项目 — —计算机基础实验教学平台管理模式改革与创新 (项目编号：2013jyxm22) 。 ) 剂的提取一固相萃取一净化这个流程进行检测。同时对检测的结构不确定度进行分析，得出：在评定日常检测之中不合格率比较高与阳性率较高的噻嗪酮、吡虫啉与啶虫脒三种农药，为保证评定的结果对产品的合格判定具有指导性意义，应保证所有试验都要在农药MRL 噻嗪酮 50ug/kg、吡虫啉 50pg/kg与啶虫脒 100pg/kg附近，然后评定与分析各个分量检测结果，寻找测定结果的不确定度主要影响因素，进而给今后试验不确定度降低提供改进的方向。 ( 参考文献： ) ( [1]周利，罗逢健，张新忠.纳米竹炭分散固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法测定绿茶中的农药多残留[J].分析测试学报， 2014，33(6)：642~647. ) ( [2]刘妍慧，于常红，刘岩.基质固相分散萃取-高效液相色谱串联质谱法( HPLC -MS-MS)同时测定茶叶中11种农药的残留 量[ J ].茶叶科学，2014，14(3)：271~278. ) ( [3]余璐，宋伟，吕亚宁.超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查茶叶中的204种农药残留[J].色谱， 2 015，21(6)： 597~612. ) 网址：： www.yuweichina.com-邮箱watercom 本文主要构件茶叶中哒螨酮、氟虫腈、丙溴磷、吡虫啉、三唑醇、啶虫脒、三唑酮与噻嗪酮八种农药的残留液相色谱串联质谱法测定方式,所用用品通过1:1的丙酮—二氯甲烷混合溶剂来促进溶剂的提取,经过石墨化炭黑与氨基（Carb/NH2）进行固相萃取,并通过小柱进行净化,通过Hypersil Gold C18（150毫米×2.1毫米,5微米）色谱柱进行分离,通过乙腈与0.1%的甲酸水溶液洗脱流动相的梯度,通过多反应的监测/MRM与电喷雾电离/ESI进行检测,然后通过外标法或是基质标准曲线同位素的内标法来测定农村残留情况。