含生物碱类成分中药中活性筛选检测方案(薄层色谱仪)

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CAMAL薄层色谱应用报告 F.34 基于HPTLC-生物自发光技术的含生物碱类成分中药的活性筛选 目的： 该方法展示了采用生物发光细菌-费氏弧菌(Vibrio fischeri) -进行活性相关检测的步骤。植物成分首先通过HPTLC进行色谱分离，随后具有特殊生物活性或毒性的成分被检测得到。 供试液制备： 含小檗碱类生物碱的中药：如十大功劳属( Mahonia spp.)、黄连属( Coptis spp.)、黄柏属(Phellodendron spp.) 和青牛胆属(Tinospora spp.) 药材等。0.3g药材粗粉加入10mL甲醇，超声处理10 min， 离心。取上清液作为供试品溶液。 标准品(可选)： 1mg盐酸巴马亭和盐酸小檗碱分别溶解于5 mL甲醇中。 BioluminexTM分析： 采用BioluminexTM试剂盒 (ChromaDex分析公司， Boulder， CO， USA)， 将冻干制备的Vibrio fischer细菌在Bioluminex培养基中生长过夜。临分析前将Bioluminex缓冲液A加入发光完全的细菌溶液中。 色谱条件： 固定相 HPTLC 硅胶60 F254 高效预制薄层板(Merck)， 10x10 cm 或 20x10 cm大小。 展开剂 甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水 (60：30：20：15：3) 点 样 1pL供试品溶液和对照品溶液，条带状点样，8mm条带宽度，最小2mm条带间距，点样原点距底边8 mm. 展 开 10x10 cm 或 20x10 cm双槽层析缸，浓氨水与展开剂各5 mL (或10mL)分分 置于2个槽内，饱和20 min。再将薄层板置于盛有展开剂的槽内，自底边起上行展开70mm。展开后将薄层板吹风机干燥(冷风)5 min。检 测 a) 在UV 366 nm下检视；b) BioluminexTM分析：将薄层板浸渍于发光细菌溶液中2 s。然后置于BioLuminizerM生物发光成像仪中拍照检视(培育时间3min， 曝光时间55s)。 结果： 比较所获得的下列HPTLC-生物自显影图谱： 1：巴马亭 2：小檗碱 3-8：十大功劳(Mahonia sp.)9-10：黄连 (Coptis chinensis) 11-12：黄柏 (Phellodendronchinensis) 13-14：金果榄 (Tinospora sp) 15：巴马亭+小檗碱 UV366 nm HPTLC荧光图谱 HPTLC-生物自显影图谱 通过小檗碱类生物碱在UV 366nm下的黄绿色荧光斑点，该类成分可被清晰鉴别。它们被认为是许多药用植物的活性成分，其生物活性被BioluminexTM分析所揭示。除了白色箭头所示的已知成分外，蓝色箭头所示处为一个在UV 366nm下无法观察到的未知强活性成分。进一步若采用CAMAG HPTLC-MS接口装置即可对薄层板上感兴趣的成分进行行线快速初步结构解析，该提取和分析操作通常所需时间小于1 min。 ( 参考文献： ) ( [1] Method adapted from Pharmacopoeia of the P.R. of China， 2005 ) ( [2] ChromaDex BioluminexTM assay： http：//www.bioluminex.com/ ) ( [3] CAMAG BioLuminizerM： http：//www.camag.com/v/products/evaluation/bioluminizer.html ) ( C A M A G 应用报告 F.34 中 文版 ·瑞士 卡 玛 中 国技术支持中心·inf o @ c a mag-china.com ) I CAMAG 应用报告 F.中文版·瑞士卡玛中国技术支持中心· info@camag-china.com