蜂王浆中尸胺检测方案(离子色谱仪)

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2 离子色谱法电导测定蜂王浆中的生物胺 姜振邦 李仁勇赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 引言 生物胺是一类含氮脂肪族或芳香族有机化合物，广泛存在于食品中，尤其在富含蛋白质食品中，这些天然生物来源食品中的生物胺主要由微生物代谢产生。微量的生物胺能促进 DNA 和RNA的合成，调节生物体精神活动，对生物细胞有生理功能，但过量摄入就会引起中毒症状，甚至危及生命，因此其潜在毒性越来越引起食品安全的重视，许多国家已经将食品中生物胺的含量作为食品受污染程度的指标"。建立生物胺的检测方法为食品安全和食品储存条件确定都能提供重要支持。 目前，国内分析生物胺的方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等2.3。。气相色谱法一般需要衍生化后检测或采用气质联用检测，而高效液相色谱和毛细管电泳一般采用紫外检测，同样需要衍生化后检测，或者对特定生物胺采用荧光检测；操作复杂繁琐4.5)。而且毛细管电泳法检出限较高，重现性差。[6离子色谱法不用衍生、操作方便、灵敏度高和不使用有毒化学试剂等优点，国内已有文献报道应用离子色谱法检测水产品中的有机胺，本方法在已有研究的基础上进一步扩展应用范畴，建立蜂王浆中的生物胺检测方法。 仪器 Thermo ScientificM DionexMICS-2100* Integrated Reagent-FreeMIon Chromatography (RFICM) 试剂与标准品 去离子水，电导率18.2MQ-cm 亚精米 (spermidine) (Sigma-Aldrich) 精胺 (Spermin)((Sigma-Aldrich) 尸胺 (1，5-pentanediamine) (上海研生生化试剂有限公司) 腐胺 (1，4-Diaminobutane) (上海研生生化试剂有限公司) 组且 (Histamine) (上海源叶生物科技有限公司) 标准溶液的制备 ( 标准储备液 ) 标准储备溶液：分别准确确取取胺、腐胺、组组、亚精胺、精胺标准品，用10mM MSA水溶液配制成500 mg/L的标准储备液。 混合标准溶液：分别准确移取腐胺标准储备溶液8mL，尸胺和精胺标准储备液0.1mL，组胺标准储备液0.2mL，亚精胺标准储备液2mL 于 100mL容量瓶，作为混合标准溶液。 系列标准溶液：将该混合标准溶液依次稀释10，25，50，100和200倍得到系列标准溶液，使用 0.22pm滤膜过滤后进样。 工作曲线系列标准溶液 从各混合标准储备液配制得到系列标准溶液，如表1。 表1.系列标准溶液浓度 尸胺mg/L 腐胺mg/L 组胺mg/L 亚精胺 mg/L 精胺 mg/L 1 4.0 0.05 0.1 1.0 0.05 2 1.6 0.02 0.04 0.4 0.2 3 0.8 0.01 0.02 0.2 0.1 4 0.4 0.005 0.01 0.1 0.05 8 0.2 0.0025 0.005 0.05 0.0025 样品前处理 样品：称取蜂王浆样品0.2g，溶于10mL水中，取5mL置于10mL离心管中，加入5mL乙混匀3min， 离心过 0.22um微孔滤膜后进样分析。 实验条件 色谱柱： lonPacCG17 保护柱，50×4mm， (P/N： 060560)； lonPac CS17分离柱，250×4 mm， (P/N： 060557)； 流动相： MSA 梯度淋洗；梯度： 0-20 min， 7mmol/L； 20-40min， 7-35mmol/L；40-50 min， 35mmol/L 进样体积：50 pL 流速： 1.2 mL/min 柱温： 30C 检测方式：抑制型电导， Thermo Scientific Dionex CERS 500Electrolytically Regenerated Suppressor， 4 mm (P/N082542)自循环模式， 104 mA 系统压力： ~2100psi 背景电导：<0.8 pS 噪音： <0.6 nS 运行时间：50.0 min 图1.五种有机胺混合标准溶液的色谱图 重现性、线性和灵敏度 取稀释50倍五种有机胺混合标准溶液，重复进样9次，记录色谱图，各成分的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差为0.02%-0.19%、0.71-1.8%和0.66-1.98%，各离子重现性较好。 以标样色谱峰面积对浓度做工作曲线，具有良好线性，线性相关系数r大于0.9981。以3倍信噪比计算检出限，得到该方法最低检出限为 0.71-4.2 ug/L。线性数据及检出限见表2所示。 表2.五种有机胺的线性范围及检出限 PeakName Range(mg/L) Offset Slope LOD(ug/L) 腐胺 0.2-4.0 0.9996 0.028 0.3604 0.43 尸胺 0.0025-0.05 0.9993 0.000 0.4753 0.44 组胺 0.005-0.1 0.9981 0.0001 0.1173 1.7 亚精胺 0.05-1.0 0.9992 0.0032 0.2660 0.71 精胺 0.0025-0.05 0.9989 -0.0010 0.2719 4.2 实际样品分析及加标回收率 取3种品牌市售蜂王浆样品进行测试，照选定的样品前处理方法进行处理，按选定的色谱条件进行测定，外标法定量。取已知含量蜂王浆样品进行加标回收率试验，回收率为86.1~102.3%。实际样品典型色典型色谱图见图2。测定结果如表3 图2.实际样品溶液的色谱图 表3.样品测试结果 成分 腐胺 尸胺 组胺 亚精胺 精胺 品牌1 含量 ng/g 4.632 0.255 1.828 10.822 N.D 品牌2 含量pg/g 4.235 0.304 1.433 12.855 0.086 品牌3 含量 ug/g 12.256 0.545 N.D 14.826 N.D 结论 本文建立的离子色谱法直接测定蜂王浆中生物胺的方法。前处理方法简单无需衍生化，避免了衍生化带来的干扰和衍生物不稳定问题，提高方法稳定性，灵敏度高。将本方法应用于蜂王浆中生物胺含量的检测具有较高的实用价值。 ( 1.陆永梅 ， 董明盛，吕欣高效液相色谱法测定黄酒中生 物胺的含量，食品科学，2006年，27(1) ) ( 2 . 王 王颖，邱 ，韩北忠食品中的生物胺及其检测方法， 中国酿造，2011，1 0 (235) ) ( 3. 引 张微，李秀缺，陆容浅谈食品中生物胺的检测方法， 食品工程，20 0 7，12(4) ) ( . 4. 曹丽伟，孟建新，刘咏娟毛细管电泳分离-激光诱导 荧光检测生物胺，分析化学，2008年，36(1) ) ( 5 蔡成岗，谢铭，张慧高效液相色谱法分析鱼制品中的 生物胺，科技通报，2010年，26(1) ) ( 6. Chiu TC， Lin YW， H u ang YF， eta l . Analysis of biologically active eamines by CE[J].Electrophoresis 200 6 ，27 ( 23) ) Thermo Scientific Dionex AS-AP AutosamplerThermoFisherS CIENTIFIC AN_C_IC-