农药中叶枯酞残留分析检测方案(气质联用仪)

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方法包简介 仪器简介 多农残筛查的整体解决方案以及方法包介绍 赛默飞世尔科技 三重四极杆串接气质 目录 口方法包简介 4 二.仪器简介 5 三.化合物简介 6 匹.相关政策及法规 24 五.样品前处理方法 25 六.仪器和设备 26 七.方法包使用简介 27 八.应用文章 31 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法，数据处理方法( TraceFinder 方法文件夹)，相关应用文章，相关标准，色谱柱信息，前处理方法，数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。 由于 TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、CAS号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作信息。 方法包(Method Kit ) 对于常用分析化合物，我们可以提供方法包。 包括：邻苯二甲酸酯、PCB、PAH、PBDE、农残筛查、GB2763、烟草中农残、PM2.5、香港规管方案、亚硝胺、二恶英等。 TSQ 8000 Evo 三重四极杆串接气质联用仪 秉承着在气相色谱三重四极杆质谱中技术的谱贯领先优势，Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000之后再次创新，推出了更新的一款气相串接质谱仪 TSQ 8000 Evo， 该款高效的GC/MS/MS提供了永不停机的生产率，其出色的灵敏度，超快的扫描速度，简便的MSMS 功能，满足最苛刻的定量定性分析要求，为食品安全、环境分析、法医和制药应用分析提供基础。 TSQ 8000 Evo 主要特点： · AutoSRM 功能自动优化二级离子对信息； ·定时保留时间 SRM功能(T-SRM)和定时保留时间SIM 功能(T-SIM) 使高通量检测成为可能，并且优化方法设置参数，无需分配时间段； ·最新的 TraceFinder 软件，提供最新的技术平台，界面友好的色谱分析软件，可以直接调用数据库信息自动建立数据处理方法及进样方法； ·高达800 MRM/s 的扫描速度，即使在极限高速扫描条件下仍不会过多损失灵敏度 。在质谱不泄真空的情况下，更换整个离子源，节省常规系统维护时间，简化操作； ·双灯丝设计，并且灯丝在同一侧； ·离子源上具有双加热区，有效去除基质对离子源的污染，节省维护时间； ·弯曲的预四极杆，有效去除中性噪音，减少背景并提高灵敏度。 简介 农药残留 (Pesticide residues)，是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。农药残留问题是随着农药大量生产和广泛使用而产生的。第二次世界大战期间，人工合成有机农药开始应用于农业生产。目前，世界上化学农药年产量近200万吨，约有1000多种人工合成化合物被用作杀虫剂、杀菌剂、杀藻剂、除虫剂、落叶剂等类农药。农药尤其是有机农药大量施用，造成严重的农药污染问题，成为对人体健康的严重威胁。农药大致可以分为有机磷农药、有机氯农药、氨基甲酸酯农药、拟除虫菊酯类农药等。下表列出了本个方法包中包含的600种农药的信息。 No. 英文名 中文名 CAS号 分子式 RT 1 Trichlorobenzene， 1，2，3- 1，2，3-三氯苯 87-61-6 CHCs 6.45 2 XMC(3，5-xylylmethylcarbamate) 灭除威 2655-14-3 CoH13NO， 6.83 3 Propamocarb 霜霉威 24579-73-5 CgH20N202 6.93 4 Trichlorobenzene， 1，2，4- 1，2，4-三氯苯 120-82-1 CHCs 7.03 5 Naphthalene 萘 91-20-3 CH： 7.1 6 Chloroaniline， 3- 3-氯苯氨 108-42-9 C6HCIN 7.24 7 Bis(1-chloroisopropyl) ether 双(1-氯异丙基)醚 108-60-1 CH.CL，O 7.32 8 Trichlorobenzene， 1，3，5- 1，3，5-三氯苯 108-70-3 CHCIs 7.4 9 Hexachlorobutadiene (HCBD) 六氯-1，3-丁二烯 87-68-3 CC6 7.41 10 Methamidophos 甲胺磷 10265-92-6 CHgNO，PS 7.47 11 Dichlorvos 敌敌畏 62-73-7 CH，CI，OP 7.67 12 Carvone 香芹酮 99-49-0 C10H140 7.73 13 Thiofanox 特氨叉威(久效威) 39196-18-4 CgH18NO，S 7.83 14 Novaluron 双苯氟脲 116714-46-6 C17H，CIFN204 7.93 15 Allidochlor 二丙烯草胺 93-71-0 CgH12CINO 8.05 16 Tetrachlorobenzene， 1，2，3，4 1，2，3，4-四氯苯 634-66-2 CeHCI4 8.45 17 Dichlobenil 2，6-二氯苄腈(敌草腈) 1194-65-6 C-H，CIN 8.53 18 Trichlorphenol 三氯酚 25167-82-2 CH，CI，O 8.55 19 Dichlormid 烯丙酰草胺(二氯丙烯胺) 37764-25-3 CgHCINO 8.59 20 EPTC 茵草敌(扑草灭) 759-94-4 C，H1NOS 8.63 21 Nicotine 尼古丁 54-11-5 C10H14N2 8.7 22 Tecloftalam 叶枯酞 76280-91-6 C4H，CINO 8.75 23 Tetrachlorobenzene， 1，2，3，5- 1，2，3，5-四氯苯 634-90-2 CeHCl4 8.84 24 Biphenyl 联苯 92-52-4 C2H10 8.87 标样购买： Sigma-Aldrich公司、百灵威、泉岛等均有标样提供。 ·中国：中国2005年公布了国家标准，对食品中的农药最大残留限量进行了明确规定，2006年出台了《农产品质量安全法》，2007年出台了《农药管理规定》，2009年出台了《食品安全法》，2010年成农农药残留标准评审委员会，以对食品中的农药残留进行强行限定，保证食品安全。目前已修订和重新发布的农药残留标准中有： 《食品中农药最大残留限量》(GB 2763-2014)、 《食品中百草枯等54种农药最大残留限量》(GB 26130-2010)、《食品中百菌清等12种农药最大残留限量》(GB25193-2010)、、《食品中阿维菌素等85种农药最大残留限量》 (GB28260-2011)。 ·日本：2003年5月，日本修订了《食品卫生法》。根据《食品卫生法》，2006年5月29日起日本开始实施食品中农业化学品残留“肯定列表制度”，并执行新的残留限量标准。该制度要求：食品中农业化学品含量不得超过最大残留限量标准；对于未制订最大残留限量标准的农业化学品，其在食品中的含量不得超过“一律标准”，即0.01 mg/kg。 ·欧盟：欧盟2002年发布了《欧盟一般食品法》(EC178/2002)，规定了食品法的基本原则与要求，并专门成立了欧盟食品安全局，负责制定欧盟统一的农药最大残留限量标准，这些标准以欧盟法规《动植物产品中农药最大残留限量》(EC 396/2005)形式发布，该法规定了欧盟将对现有的农药残留限量标准相关指令进行合并和修订，统一欧盟27个成员国标准，涉及1100种杀虫剂在315种农产品中的最高残留限量，并对现有标准不能覆盖的农药在食品中的食留采用 0.01 ppm 的统一标准。 ·美国：美国食品安全管理机构主要有3个，国家环境保护署负责农药登记、注册及标识，制定农药、环境化学物的残留限量和有关法规，公布《化学农药在食品中的残留限量与残留容许量豁免》；食品药品管理局负责美国国内和进口的食品安全(肉类和家禽产品除外)；美国农业部的食品安全检验局，负责肉类和家禽食品安全。美国已制定了涉及380种农药约11000农药最大残留限量标准，此外还对有致癌性、未确定安全剂量的农药实行“零残留”制度。 ·联合国：国际食品法典委员会是负责联合国粮农组织和世界卫生组织联合食品标准项目的政府间工作机构。至2009年，国际食品法典委员会已制订168种农药3338项最低限量标准。2011年4月，第43届国际食品法典农药残留委员会会议在北京召开，会议新制定19种农药167项法典农药残留限量标准，修订13种农药50项法典农药残留限量标准。 目前，随着新型农药的不断出现，农药种类的增多，检测样品品种不断增多，残留限量不断降低，越来越要求我们采用更快捷更灵敏的仪器进行实际样品的检测。赛默飞世尔科技的三重四极杆气相色谱质谱联用仪 TSQ 8000 Evo 正是为了满足日益增加的检测要求而推出的。TSQ 8000 Evo不仅具有的高的灵敏度，可以满足残留限量不断降低的检测要求，同时也具备高通量的特性，一针进样可以同时检测几百种农药的残留量。 24 由于农药种类繁多，并且检测样品多种多样，目前，应用比较广泛且有效的方法是一种称之为 QuEChERS ( Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged 和 Safe )的方法。QuEchERS方法对大量极性及挥发性的农药回收率高，分析准确度高，并且操作简便，污染小，因而被广泛使用于农药分析的前处理中。QuEchERS的方法简单概括为提取、净化和萃取的过程，具体过程如下图所示(参考EN 15662方法)： 仪义： Thermo Fisher Scientific 气相色谱三重四极杆串接质谱仪 TSQ 8000Evo。 设备：涡旋混合器，离心机，旋转蒸发仪，氮吹仪等。 色谱柱： TG-5 MS (30 m*0.25 mm*0.25 um)毛细管色谱柱(Thermo Fisher Scientific )。 C10 保留时间为 17.26 min 14 七..方方法包的使用 1.进样方法使用：直接使用方法包中 meth 结尾的文件 Pesticide Analyper MethodSRM Xcalibur Instrarwent Method 880 KB ，进行进样分析。 不同仪器配置可能稍有不同，可以参考以下方法截图。 pesticide screening 2.数据处理方法建立：直接拷贝方法包中的文件夹 Filefolder接在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。 到C：\TraceFinderData\Methods 中，方法就可以直 将按照步骤1进样完成的数据文件与 TraceFinder 方法相关联，得到完整的数据处理方法。按需要更改保留时间等参数进一步对数据处理方法进行优化，得到准确的数据处理方法。整个过程无需输入化合物信息，离子对信息，挑选离子对信息找到化合物，所有的步骤均是自动完成，一点即可，极大得提高分析效率，简化方法流程。 八..应用文章 .wo 10 11 080 1 心 球 David Steiniger， Jason Cole， Paul Silcock， and Alex SemyonovThermo Fisher Scientifi c. Austin TX， USA 目的：介绍两种一针进样进行目标化合物和非目标化合物筛查的方法 方法：应用选择反应监测(SRM)模式，或应用选择反应监测/全扫描(SRM/FS)交替扫描模式进行600种农残的筛查分析结论：两种方法均可以应用于目标化合物和非目标化合物筛查， 灵敏度损失小 引言 由于高灵敏度 GC-MS 的出现，使得农残检测中大部分化合物的分析都可以采用统一的样品前处理方法，因而可以将不同基质中不同化合物的检测整合到一个方法中，并且一针进样检测的化合物数量越来越多。GC-MS 非常适合各种基质样品中多种残留物的分析。但是，随着目标化合物数量增多，方法优化变得更加复杂，分析性能会变差。而且，人们希望能够拓展有潜在危害的食品污染物清单。本文介绍了一种灵活的仪器分析方法和数据处理软件，能够通过优化 MS 分析过程来减少分析性能的损失，使 GC-MS/MS 能应用于分析样品中的600种农残。本文还讨论了通过选择反应监测/全扫描(SRM/FS) 交替扫描模式进行目标化合物的定量及未知化合物的定性分析。 方法1——6600 种农残的筛查分析 样品制备 从本地商店里购买莴苣菲品，用QuEChERS 方法进行萃取和净化后，再用1：1的乙酸乙酯/环乙烷进行提取，之后，将5 ml的提取液溶剂置换为 9：1 的己烷：乙腈溶剂，且定容至1ml， 最后向浓缩的空白基质中加入多种标准品的混合标样。 气相色谱条件 Thermo Scientific 的 TRACE 1310 GC 配置有一个 SSL 和一个PTV进样口，使用 PTV进样口进样，进样量1pL。系统使用一个 Siltek 惰性衬管 (Thermo Scientific 产品号 453T2120)， 键合5%联苯95%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管色谱柱(30mx0.25 mm0.25 pm)。表1 为PTV进样口和柱温箱参数。 表1. PTV和炉温参数 PTV 模式 温度(℃) 分流流量(mL/min) 不分流时间(min) 吹扫流量(mL/min) 不分流 75 50 2.00 5.00 流量梯度 阶段 流量(mL/min) 保持时间(min) 1 1.2 30 2 3 7.2 进样阶段 压力(kPa) 升温速率(℃ /sec) 温度(℃) 时间(min) 流量 (mL/min) 进样 70 0.1 50 传输 210 2.5 300 3.00 净化 14.5 330 20 75 升温程序 梯度 升温速率(℃/min) 温度(℃) 时间(min) 初始 90 5 1 25 180 0 2 5 280 0 3 10 300 5 质谱条件 使用 Thermo Scientific 的 TSQ 8000 三重四极杆质谱仪分析600种化合物，采用 SRM 模式进行目标物检测。首先进行全扫描以确定各化合物的保留时间，然后采用选择反应监测(SRM)模式建立一种定时 SRM 方法，实现一次进样分析所有化合物。该方法包含了超过 1300个离子对，来自于 TSQ 8000的农残分析化合物数据库，通过 TSQ 8000 系统的方法库自动载入处理方法和仪器方法。传输线温度设置为250℃，离子源温度设置为300℃。如图1所示， 定时 SRM(t-SRM) 能够分析600种农残，方法灵敏度高。 图1.定时 SRM 方法的一部分离子对扫描时间段 结果 通过对莴苣样品进行所有600种农残的扫描，最终定量检测出52种农残。用 Thermo Scientific 的 TraceFinder 软件绘制曲线，所有化合物的线性相关系数R>0.98。对加入40 ppb校准溶液的基质加标样品进行了10次平行分析。为了检验筛查能力，还向40 ppb 加标样中另外添加了少量校准溶液未包含的化合物，均被该方法检出。表2列举出了40 ppb 加标样中各化合物的平均浓度和RSD(%)。图2显示了 40 ppb 加标样中被检出的非标样化合物的定量离子和定性离子。这表明，该方法和仪器能够对样品中所含有的目标化合物进行定性，即使未进行仪器的定量校准。 表2.莴苣样品的40 ppb 加标样分析结果 Compound Name Avg %RSD Avg %RSD Acibenzolar-S-methyl 32.1 8.8 Flutolanil 35.1 6.0 Azinphos-methyl 48.3 4.4 Fuberidazol 45.5 9.8 Azoxystrobin 39.5 2.3 Furalaxyl 62.4 4.4 Benalaxyl 43.8 6.3 Imazalil 45.6 3.5 Bendiocarb 50.7 3.9 Indoxacarb 47.2 9.2 Bitertanol 48.4 7.1 Isoprocarb 43.9 2.3 Boscalid (Nicobifen) 44.0 3.2 Mefenacet 47.1 2.9 Buprofezin 39.6 5.5 Metalaxyl 38.8 8.3 Carbaryl 56.1 2.3 Methiocarb 58.7 4.0 Carbofuran 45.1 11.8 Mevinphos 46.2 6.0 Carboxin 44.6 4.2 Oxadixyl 41.4 4.6 Carfentrazon-ethyl 39.1 5.4 Piperonyl butoxide 42.6 2.0 Clethodim 30.6 15.4 Pirimicarb 26.6 16.5 Cyprodinil 42.5 2.9 Propargite 55.9 6.5 Diethofencarb 41.2 6.7 Propham 40.2 1.7 Difenoconazole peak 1 53.7 3.0 Propiconazole peak 1 43.7 18.5 Difenoconazole peak 2 45.5 3.6 Propiconazole peak 2 49.3 6.0 Dimethomorph-1 52.8 7.1 Propoxur 46.9 2.1 Dimethomorph-2 49.7 3.2 Pyridaben 39.0 1.4 Ethofumesate 40.9 4.3 Pyrimethanil 37.5 15.3 Fenamidone 49.8 5.0 Spiromesifen 62.8 6.0 Fenbuconazol 40.7 1.2 Spiroxamine 52.3 7.0 Fenoxycarb 44.4 3.0 Thiabendazole 49.6 9.9 Flonicamid 44.7 6.1 Triazophos 46.7 4.3 Fludioxonil 45.2 5.7 Triflumizole 48.5 14.3 Flusilazole 44.8 6.1 Zoxamide 58.6 4.3 Improvalicarb Myclobutanil 建立了第二种方法，只以52种农残作为目标化合物，仅包含104个离子对。对 5 ppb 和10 ppb标样平行分析10次，计算两种仪器方法的 MDLs，一种包含超过1300个离子对，另一种仅包含104个离子对。图3显示了两了方法的 MDLs 结果。尽管包含104个离子对的方法能提供更长的驻留时间从而得到更低的检出限，但对于本实验化合物清单中欧盟对莴苣有限值规定的农残，扫描600种化合物的筛查方法仍然能够满足要求。 图3.两种方法的 MDLs 比较：52种化合物对600种化合物 方法2——-SRM/FS 交替扫描 样品制备气相色谱条件 样品制备气相色谱条件与方法1相同。 质谱条件 使用 Thermo Scientific 的 TSQ 8000 三重四极杆质谱仪扫描147种化合物。首先进行全扫描以确定各化合物的保留时间，然后采用选择反应监测(SRM)模式建立一种定时 SRM 方法，实现一次进样分析所有化合物。建立了第二种方法，在分析过程中加入了全扫描步骤。 首先对一个果汁饮料样品进行 QuEChERS 萃取和净化，并将萃取液浓缩5倍。然后向萃取液中加入147种农残，配制从 1 ppb 到 200 ppb 的校准曲线。采用 TraceFinder 软件，为SRM 和SRM/FS 交替扫描这两种方法绘制147 种化合物的标准曲线。两种分析方法下，大部分化合物的线性相关系数 R²> 0.98。为了获得两种仪器方法——仅有 SRM 和FS/SRM 交替扫描——的MDLs， 向果汁萃取液中分别加入1 ppb 和 10 ppb校准溶液，对加标样平行分析10次。图4对这两种方法的 MDLs 进行了比较，增加了全扫描的仪器方法的MDLs的实际值略高于仅有 SRM 的方法，但非常接近。 图6.四个未知峰与 NIST 图库的匹配度 邻苯二甲酸二甲酯9.29分钟 果汁饮料中加入100 ppb标样， 并采用 FS/SRM 交替扫描的仪器方法进行分析。样品萃取液中还添加了两种1 ppm 水平的酞酸酯。从 100 ppb 农残加标样的全扫描色谱图中发现一些明显的峰，保留时间为9.29分钟、9.73分钟、10.39分钟、10.91分钟，和一个饱和峰，保留时间在31.00分钟。图5为前四种化合物的放大图，图6显示了这些非目标化合物在 NIST图库中的匹配情况。 图5.100 ppb 加标样中四个未知峰的放大图 2，4-二叔丁基苯酚9.72分钟用作塑料光稳定剂 柠檬酸三乙酯10.91分钟用作塑化剂和食品添加剂 使用 TRACE 1310 GC - TSQ8000 MS系统，建立了分析筛查目标化合物和非目标化合物的两种不同方法。方法1在一次分析运行中，使用 TSQ 8000 对600种农残进行高速扫描的 SRM 分析，不牺牲灵敏度。无需对600种农残全部进行校准，分析者也能够对样品中可能存在的其他农残定性检出。由于 TSQ 8000 能够通过高速扫描和图库检索生成高质量的全扫描谱图，方法2使用了仪器的 FS/SRM 交替扫描模式进行分析。选择部分低含量的目标化合物进行 SRM 分析，同时用全扫描对任何类型的未知化合物进行定性，例如包装材料的析出物，或食品中的营养物质与防腐添加剂的分析等。 下面对两种方法进行了总结。 600种农残筛查 ·由于 TSQ 8000 的高速扫描能力，对600种农残进行筛查而不影响灵敏度 ·52种化合物的校准线性相关系数R²>0.98 ·通过通过化合物的离子对信息及离子比例，能够对未校准的农残进行定性分析 ·应用 AutoSRM 功能优化未知化合物的离子对信息，定制化合物列表 交替 SRM/FS ·确定大量目标化合物的同时，采集全扫描数据 ·对目标化合物定量分析的同时，发现非目标化合物 ·使用 NIST 图库对非目标化合物进行定性分析 ·大部分农残的校准线性相关系数R>0.98 ·无论是否采集全扫描数据， MDLs 相近 ·能应用于检测包装材料的污染、营养成分、或食品中添加的防腐剂 ·应用 AutoSRM 功能优化未知化合物的离子对信息，定制化合物列表 赛默飞官方微信 赛默飞官方网站 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 Thermo