清热解毒片中龙胆苦苷检测方案(液相色谱仪)

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thermoscientific 结果与讨论 400 6505118(支持手机用户)A Thermo Fisher Scientific Brand Accucore C ；色谱柱分析清热解毒片中的13种有效成分 刘兴国刘晓达金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 目标： 建立清热解毒片中的13种有效成分的分析方法 引言 清热解毒片用于治疗热毒壅盛所致发热面赤，烦躁口渴，咽喉肿痛；流感、上呼吸道感染见上述证候者。由板蓝根、地黄、黄芩、金银花、连翘、龙胆、麦冬、生石膏、甜地丁、玄参、知母、栀子等中药组成，其中金银花、栀子、黄芩、连翘、龙胆是其君药与臣药，2015版药典规定只测定黄芩苷和栀子苷两个组分，有关文献测定了其中的绿原酸、黄芩苷和连翘翘成分[2.3]，均不足以很好地控制该产品质量。本方法采用 Accucore色谱柱分析了13个主要有效成分，分别归属于以上5味中药，该方法对于清热解毒片的作用物质基础研究和质量控制具有很好的参考意义。 仪器 Thermo U3000 高效液相色谱仪(Thermo Scientific)，超声振荡器(Thermo Scientific )， Thermo ScientificChromeleon 7.2色谱系统控制软件。 试剂与标准品 磷酸、乙醇为分析纯级别(国药集团)，乙腈为色谱纯级别( Fisher Scientific )。所有试剂均作空白实验，符合质量控制要求方可使用。水为超纯水机制备 (ThermoScientific) 。 供试品溶液制备 取本品20片，除去包衣，研细，精密称取0.5g， 置具塞锥形瓶中，加70%乙醇50mL，密塞后称定，超声处理(功率250W，频率50 kHz)30分钟，放冷，再称定重量， 用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。另取金银花、栀子、黄芩、连翘和龙胆对照药材各0.5g，置具塞锥形瓶中，分别加70%乙醇10mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀后滤过，取续滤液，分别得上述5味药材的对照药材溶液。分别取上述提取液用超纯水稀释3倍后直接进样。 色谱条件 ( 色谱柱： Accucore C18， 2.6 um， 2.1×100 mm (PN 17126- 102130) ) ( 流动相：A：乙乙，B：0.4%磷酸水溶液；梯度分离：Omin A：B (5：95)， 5 min A：B (5：95)， 8 0 min A：B ( 45：55) ) 流速：0.4mL/min 进样体积：3uL 柱温：35℃ UV 检测波长：210nm (2)龙胆对照药材 1.标准品测定谱图 图4.龙胆对照药材色谱图 (3)连翘对照药材 图1.标准品测定色谱图 2.样品测定谱图(9批清热解毒片样品) 图5.连翘对照药材色谱图 图2.样品测定色谱图(9批清热解毒片样品) (4)栀子对照药材 样品品应批号：1-2277，2-2173，3-2723，4-2640，5-3028，6-2201，7-3283，8-2270，9-2703 3.对照药材测定谱图 (1)金银花对照药材 图6.栀子对照药材色谱图 (5)黄芩对照药材 图3.金银花对照药材色谱图 图7.黄芩对照药材色谱图 4.样品测定结果 表1.2703号样品测定结果 Peak Peak Ret.Time Rel.Area Area Height Asym Resol. Name min % mAU*min mAU EP. EP 1 新绿原酸 2.040 3.88 4.2027 30.76 0.93 8.34 2 绿原酸 4.133 6.49 7.0231 34.96 1.27 4.93 3 隐绿原酸 5.503 3.94 4.2650 24.67 1.01 8.58 4 龙胆苦苷 8.213 3.13 3.3852 15.05 1.20 2.22 5 栀子苷 8.960 3.24 3.5099 16.60 1.18 41.59 6 木樨草苷 20.060 2.24 2.4218 16.69 0.97 16.95 7 连翘酯苷 23.363 9.63 10.4189 89.11 n.a. 19.70 4，5-二咖 8 啡乙酰奎 27.217 3.07 3.3270 25.10 1.15 10.23 宁酸 9 黄芩苷 29.550 48.30 52.2658 319.47 1.05 8.57 10 连翘苷 31.643 2.77 2.9975 19.14 1.03 2.47 11 汉黄芩苷 32.273 3.05 3.3047 18.70 1.26 15.68 12 黄芩素 36.433 8.89 9.6148 57.36 1.13 37.75 13 汉黄芩素 48.363 1.36 1.4677 5.54 1.86 n.a. 表2.13个化合物组分中药归属(结合对照药材谱图和文献确定) 中药 成分 新绿原酸，绿原酸，隐绿原酸，4，5-二咖啡乙酰奎宁酸，木樨 金银花 草苷 连翘 连翘苷，连翘酯苷 栀子 栀子苷 黄芩 黄芩苷，黄芩素，汉黄芩苷，汉黄芩素 龙胆 龙胆苦苷 赛默飞色谱及痕量元素分析 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 www.thermofisher.com 本方法采用 Accucore C色谱柱分析清热解毒片，由于该中药药味较多，并且为了保留其大多数组分，提取工艺就是简单地使用70%乙醇超声提取，没有经过其他的纯化步骤，而分析结果需要尽可能多地反映相关中药的代表性组分，并且需要将干扰组分分开。所以本方法采用 Accucore 核壳型色谱柱将一些含量低的杂质峰平抑掉，从而减少其对主要活性成分的测定干扰。为了在同一波长下同时测定这13个组分，本方法采用了210nm作为采集波长。 Accucore 色谱柱采用实心核表面多孔增强核技术，，可实现快速高分离度的分离，而反压则比常见超高效液相色谱柱大大降低，从而使得2.6 um 填料的色谱柱可以在620 bar 的常规 U3000 液相上使用。本方法成功分析了清热解毒片中的13个有效成分，对相关制剂的质量控制也有较高的借鉴意义。 ( 参考文献 ) ( [1]中国药典，第一部[M].北京 ： 中国医药科技出版社， 2015版： 1553. ) ( [2]卢卫平；胡耿；清热解毒片中绿原酸含量的 HPLC 测 定[]；江西中医药；20 0 9，04：78 ) ( [3]黄永刚；顾旭霞； HPLC 同时测定清热解毒片中黄芩 苷和连翘苷含量[J]； ；中国药师，2009， 12(6)：771- 773. )