化妆品中4- 甲基苄亚基樟脑检测方案(液相色谱仪)

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2 4 引言 太阳中紫外线可分为紫外线-A(400-320nm) 和紫外线-B(320-290nm)， 以及紫外线-C(280mm以下)。通常，295nm以下的光线不能到达地表，所以会到达人体皮肤的是前两个波长。紫外线会导致皮肤晒黑、晒伤，甚至会诱发皮肤癌，特别是臭氧层空洞，使得到达地球的紫外线增多。为体现防晒功能，化妆品生产厂家会添加一定量具有防晒功能的紫外吸收剂于防晒霜、隔离霜等化妆品中。但是过量的紫外吸收剂，会使人体皮肤致敏机率增加，影响人体健康。我国2007版《化妆品卫生规范》对防晒化妆品中的紫外吸收剂进行了限制；世界主要化妆品生产和消费国都对化妆品中的紫外吸收剂的种类和使用量进行了规定。由于不同国家的地域差别，对化妆品中紫外吸收剂的限用量差别较大，比如甲氧基肉桂酸异戊酯已经得到欧盟批准使用，但日本禁止把甲氧基肉桂酸异戊酯与一些特定成分一起使用“。 测定化妆品中紫外吸收剂的方法主要有：薄层色谱法、气相质谱法和高效液相色谱法4-8。其中，高效液相色谱法使用最为广泛。在2002年出版的《进口化妆品中紫外吸收剂的测定液相色谱法》这一标准中，采用甲醇、四氢呋喃和水的混合溶液作为流动相，其中四氢呋喃除了具有较大的毒性外，还容易引起色谱系统的不稳定，导致峰脱尾和新峰的产生等问题。本文拟采用常用的高效液相色谱法，以乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相，对化妆品中的2-羟基-4甲氧基二苯甲酮-5-磺酸，对-氨基苯甲酸，2，2，4，4-四羟基二苯甲酮，4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮，水杨酸苯酯，对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯，水杨酸-2-乙基己酯，丁基甲氧基二苯酰基甲烷，4-甲基苄亚基樟基，3，3， ( 5-三甲基环已烷水杨酸酯等11种紫外吸收剂进行同时测定，为规范化妆品中紫外吸收剂的使用提供技术支持。 ) ( 仪器 ) ( Thermo Scient i ficM DionexMUltiMateM 3 000RS四元系统， 包括： ) ( -LPG-3400RS四元分析泵(具备溶剂脱气功能) ) ( -WPS-3000RS 自动进样 器 (配置100pL定量环) ) ( -TCC-3000RS 柱 温 箱(具备控温功能) ) ( -DAD-3000RS (检测池体积 SST 2.5 pL) ) ( Thermo Scientific Ch r omeleon 色谱系统控制软件，版本6.80 或以上 ) ( 试剂 ) ( 去离子水， 18. 2 M Q-cm (Thermo Scien t ific GenPure Pro UV-TOC， P/N 50131948) ) ( 乙腈(CH，CN)， HPLC 级 (Fisher Chemical， P / N AC610010040) 甲酸，优级纯(上海安谱科学仪器有限公司) ) 标准品 2-羟基-4甲氧基二苯甲酮-5-磺酸，对-氨基苯甲酸，2，2，4，4-四羟基二苯甲酮，4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮，水杨酸苯酯，对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯，水杨酸-2-乙基己酯，丁基甲氧基二苯酰基甲烷，4-甲基苄亚基樟脑，3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯等11种紫外吸收剂标准品购买于上海安谱科学仪器有限公司。 标准溶液的制备 标准储备液1 分别称取0.1g上述11种紫外吸收剂标准品，用甲醇定容至10mL， 得到浓度均为10000mg/L的单标。各取1mL 浓度为 10000mg/L的单标，用甲醇定容至20mL，得到浓度为500mg/L的混合标准储备液1。 标准工作溶液 将标准储备液1按照标线要求逐级稀释成所需的浓度。 样品前处理 样品 分别称取两种不同的化妆试样0.05g，用甲醇定容至20 mL，充分混匀，超声萃取 30 min， 以 10000 r/min 速率离心10 min，取上清液，用0.45 um 滤膜过滤后直接进样。 样品加标 称取其中的一份化妆品试样0.05g， 加入4mL浓度为500 mg/l的混标于样品中，用甲醇定容至20mL， 充分混匀，按样品前处理步骤与样品同步处理，样品加标的理论浓度为100 mg/L。 色谱条件 色谱柱： Acclaim 120， C18， 3 pm (3.0×150mm) (P/N063691) 流动相：乙腈/0.1%甲酸水溶液(梯度条件见表1) 进样体积：1pL 流速：0.425 mL/min 柱温：40℃ 检测：紫外吸收，入311nm 表1.流动相的梯度条件 时间(min) 流动相A-乙腈(%) 流动相 C-0.1%甲酸(%) Curve 0 15 85 5 2 15 85 5 3 75 25 5 6 84 16 5 6.1 100 0 5 9 100 0 5 9.5 15 85 5 11.5 15 85 5 结果与讨论 实验条件的优化 本文比较了甲醇/0.1%甲酸水溶液、乙腈/0.1%甲酸水溶液，结果表明乙腈/0.1%甲酸水溶液的分离效果较好。在优化的实验条件下，11种紫外吸收剂可在11.5 min 内完成分离，目标化合物色谱峰的分离度均大于1.5，见图1。 重现性、线性和检出线 为考察方法的重现性，本文采用八次连续进样浓度为50 mg/L 的标准溶液，得到的保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)都分别小于0.06%和1.20%，说明该方法具有良好的重现性；另外，11种紫外吸收剂在 5-500 mg/L 内都具有良好的线性。重现性、线性及检出限结果见图2和表2。 样品的测定 为考察紫外吸收剂在不同化妆品的添加情况，本文选择了两种不同的化妆品用于测试。结果表明，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、、.丁基甲氧基二苯苯基甲烷、水杨酸-2-乙基己酯、3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯等四种紫外吸收剂在两种化妆品中都有检出，见图3和表3，其中3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯在两个化妆品中的检出浓度都最高。另外，为考察方法的回收率，根据目标化合物在样品中的检出浓度，加标的理论浓度为100 mg/L， 结果表明11种紫外吸收剂的回收率为77-116%，说明该方法具有良好的可靠性，见图4和表3. 200 图1.11种紫外吸收剂在C18色谱柱上的分离色谱图 (出峰顺序依次为：1-对-氨基苯甲酸，2-羟基-4甲氧基二苯甲酮-5-磺酸，2，2，4，4-四羟基二苯甲酮，2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮，水杨酸苯酯，对甲氧基肉桂酸-2-乙基 己酯，4-甲基苄亚基樟脑，丁基甲氧基二苯酰基甲烷，4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯，水杨酸-2-乙基己酯，3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯) 图2.连续八次进样的标样(浓度：50mg/L)色谱图 表2.重现性、标线、检出线 名称 RSD (RT，%) RSD (峰面积，%) 检出限(mg/L) 标准方程 对-氨基苯甲酸 0.04 0.43 0.80 A=0.0832c+0.2247(R=0.9995) 2-羟基-4甲氧基二苯甲酮-5-磺酸 0.05 0.62 0.86 A=0.0604c+0.0689(R=0.9998) 2，2，4，4-四羟基二苯甲酮 0.02 0.42 0.53 A=0.0959c+0.2148(R=0.9995) 2-羟基基-4-甲氧基二苯甲酮 0.01 0.87 0.61 A=0.0987c+0.1608 (R’=0.9997) 水杨酸苯酯 0.01 0.88 1.52 A=0.0409c+0.0387(R=0.9998) 对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯 0.03 0.56 0.22 A=0.1928c+0.6309(R=0.9990) 4-甲基苄亚基樟脑 0.02 0.54 0.23 A=0.1858c+0.7391(R=0.9990) 丁基甲氧基二苯酰基甲烷 0.02 0.35 1.32 A=0.0433c-0.034(R=1) 4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯 0.03 0.33 0.33 A=0.1654c+0.4911 (R=0.9994) 水杨酸-2-乙基己酯 0.03 1.20 1.60 A=0.0414c+0.0745(R=0.9996) 3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯 0.03 1.20 2.24 A=0.028c+0.0299 (R=0.9999) 备注：c代表目标化合物的浓度(mg/L)， A代表目标化合物的峰面积。 图3.空白、标样(浓度为100mg/L) 和样品的色谱图 图4.空白、标样、样品和样品加标的色谱图 名称 样品1(mg/g) 样品2(mg/g) 回收率(%) 对-氨基苯甲酸 ND ND 77 2-羟基-4甲氧基二苯甲酮-5-磺酸 ND ND 77 2，2，4，4-四羟基二苯甲酮 ND ND 78 2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮 18.3 51.6 104 水杨酸苯酯 ND ND 78 对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯 ND ND 78 4-甲基苄亚基樟脑 ND ND 78 丁基甲氧基二苯酰基甲烷 34.4 22.6 91 4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯 ND ND 78 水杨酸-2-乙基己酯 8.4 53.1 106 3，3，5-三甲基环已烷水杨酸酯 89.1 114.1 116 ( 张贵民，浅谈防晒化妆品防晒功效的评价方法，日用 化学平科学，2004，27，65 - 67. ) ( . 2. 中华人民共和国卫生部.化妆品卫生规范，2007. ) ( 3 . F o o d and dr u g administration， Su n screen drug p r od u cts for over - the-counter human use， HHS，USA，1999， ) ( 4 . 何乔桑，徐娜，李晶，廖上富.高效液相色谱法测定化妆品中的12种紫外吸收剂，色谱，2011，29，762- 767. ) ( 55. 妙 姚孝元，王艳，金鑫，戚其平，防晒化妆品中8种常用紫外吸收剂使用量分析，环境与职业医学，2005， 22， 3 48-350. ) ( 6 夏平，李勇.薄层色谱法测定化妆品中多种紫外吸收 剂，1 9 97，1 4 ，227-228. ) ( 7. 李英，王成云，刘丽，防晒霜防晒指数的光谱分析， 分析试验室，2003，22，78. ) ( 8 杉 林维宣，孙兴权， 卫 马杰.液相色谱. 串联质谱法同时检测防晒化妆品i申；韵11种紫外吸收剂， 2 013. 31，410-415. ) ( . 9. 中华人民共和国出入境检验检疫标， SN/T2032-2002进 出口化妆品中紫外吸收剂的测定，2002. ) ThermoFisherS CIENTIFIC SCIENTIFICAN_C_LC-