食品中组胺检测方案(液相色谱仪)

智能文字提取功能测试中

定量及灵敏度 使用配备喷射流技术的 Agilent 6490 三重四极杆LC/MS对食品中的组胺进行快速、简便和可靠的分析 应用简报 食品检验 作者： 前言 Nick Byrd Campden BRI 格洛斯特郡坎普登 英国 生物胺(BA)是微生物、植物及动物在代谢过程中产生的碱性含氮化合物。这些化合物以不同浓度水平广泛存在于鱼、奶酪、肉、红酒、啤酒、蔬菜及巧克力等食物中。存在于食物中的生物胺会引发毒性作用进而影响健康。造成健康问题的最多见的食物源性生物胺是组胺。 英国Campden BRI实验室基于液相色谱/三重四极杆质谱开发了多种不同的多生物胺分析方法，涵盖组胺、酪胺和色胺等化合物。然而，通常只需对组胺进行分析，因为现有法规(见下文)只对它进行了要求。该应用简报将介绍该特定的组胺分析。 组胺污染也称为靖鱼中毒，因为这种疾病与食用鲭科鱼类如金枪鱼有关。实际上，在2011-2012十二个月内，欧盟食品与饲料快速预警系统(RASFF) 已就鱼类产品发出了7个食品中毒警告以及10个边个拒绝通告。欧盟法规 No. 1441/2007 规定了在靖科鱼、鲱科鱼、鲲科、鲜鳅科(Coryfenidae)、蓝鱼科(Pomatomidae)以及够科 (Scombresosidae)鱼中组胺的最大限量值为100-400mg/kg。 Agilent Technologies 现今食品中生物胺的检测方法通常是高效液相色谱法(HPLC)，并在衍生后采用荧光检测器进行检测。以上方法费时(运行时间接近60min)；另外，由于提取不完全以及衍生步骤的干扰，该方法通常会导致测定不准确和结果不一致。 该应用简报介绍了一种采用 UHPLC-MS/MS和多反应监测(MRM)模式的简单、快速的分析方法。该方法结合了本实验室已验证适合后续 LC/MS分析的快速酸萃取及过滤步骤，不仅适合于组胺的分析，同时也可应用于酪胺和色胺的分析。质谱的使用则可省掉衍生步骤。实际上，质谱的使用也可增加结果的可靠性，因为气代内标可跟踪分析的全过程。 实验部分 试剂和标准品 天然组胺和气代组代标准品标Qmx实验室(Thaxted，UK) 获得。天然标准品用乙腈配制成1000 ppm 的工作溶液。然后用0.1MHCI稀释得到校准曲线所需的浓度梯度。 仪器 本方法采用 Agilent 1290 Infinity LC 系统联用配有安捷伦喷射流离子聚焦技术的 Agilent 6490三重四极杆 LC/MS系统。仪器条件在表1中列出。 样品前处理 将10g食品样品和代内标物加入50 mL 0.1M HCI中。涡旋混合并通过 0.2 um 尼龙滤膜进行过滤。校准溶液的浓度范围为1-50 mg/L。以往分析中常见的生物胺的浓度为5-250 mg/kg， 因而需将样品稀释5倍以满足准确定量要求。若样品浓度更大，则需加大样品的稀释倍数，使得待分析液的最终浓度在校准浓度范围之内。 分析参数 组胺的三重四极杆 LC/MS系统分析参数见表2。 表2. 组胺的采集参数 目标化合物 前体离子 子离子 碰撞能量 碰撞池加速电压 组胺(定量离子对) 112 68.1 24 7 组胺 112 95.1 16 7 组胺 112 54.1 48 组且 D4 116 99.1 12 7 组且 D4 116 85.1 16 7 结果与讨论 色谱分离 硬奶酪样品 采用C3色谱柱可使组胺在色谱柱上有较好的保留，同时又能最小化基质效应并能确保与干扰组分的分离。在较低浓度时，具有相同 MRM 离子对的其化化合物也出现在谱图上。然而，内标可让色谱图上峰的归属毋庸置疑。 样品A的浓度较最低校准浓度低，然而该方法的灵敏度完全满足分析的要求，可基于校准拟合得到半定量的结果。在该分析实例中，提取过程是将10g样品溶羊50mL 0.1M HCI中提取， 初步估计组胺的天然浓度为1 mg/kg。样品B则是添加了 300 ppm组胺的样品，可确定方法的回收率。第二个实例中的提取则是将10g样品溶于 100 mL 0.1 M HCI中，该实验结果为 289 mg/kg(回收率大于96%)。 图1. 硬奶酪样品中组胺的定量和定性离子对 从 0.1 M HCI 中组胺的校准曲线可知，组胺在1-50mg/L浓度范围内具有很好的线性， R2值大于0.999(图2)。实际上，该范围的下限显著低于欧盟法规限量要求的水平。因此，该方法非常有潜力对更低浓度水平的样品进行定量分析，如图1所示，这对于食品基质中生物胺的初期形成的考察是非常有用的。 其它工作 回收率实验通过在鱼组织中添加100 mg/kg 标准品 (n=10)进行。组胺的回收率为99±4.6%。另外两种生物胺的数据没有在此列出，若有需要可向作者索要。 目前已开发了一种简单、快速、便于操作的分析技术来进行食品中组胺的检测。它结合了快速经济的提取过程及高灵敏度的LC/MS/MS分析检测。该检测基于配备安捷伦喷射流技术的6490三重四极杆 LC/MS系统。该方法的检测限显著低于欧盟法规限量值。另外，该方法也很有可能被应用于其它的安捷伦三重四极杆系统。也可以采用相同的离子对，尽管安捷伦对于其它类型的仪器会推荐不同的离子源条件。该方法也可进行其它生物胺的同时测定。在 Campden BRI 实验室，为应对及支持食品检测工作，已经建立了部分生物胺的反应离子对通道及相关条件。 图2. 0.1 M HCI中1-50mg/L组胺的校准曲线 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料中可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2013 ( 中国印制 ) 2013年3月22日 5991-1286CHCN Agilent Technologies 生物胺(BA) 是微生物、植物及动物在代谢过程中产生的碱性含氮化合物。这些化合物以不同浓度水平广泛存在于鱼、奶酪、肉、红酒、啤酒、蔬菜及巧克力等食物中。存在于食物中的生物胺会引发毒性作用进而影响健康。造成健康问题的最多见的食物源性生物胺是组胺。英国Campden BRI 实验室基于液相色谱/三重四极杆质谱开发了多种不同的多生物胺分析方法，涵盖组胺、酪胺和色胺等化合物。然而，通常只需对组胺进行分析，因为现有法规（见下文）只对它进行了要求。该应用简报将介绍该特定的组胺分析。组胺污染也称为鲭鱼中毒，因为这种疾病与食用鲭科鱼类如金枪鱼有关。实际上，在 2011-2012 十二个月内，欧盟食品与饲料快速预警系统(RASFF) 已就鱼类产品发出了7 个食品中毒警告以及10 个边境拒绝通告。欧盟法规No. 1441/2007 规定了在鲭科鱼、鲱科鱼、鳀科、鲯鳅科(Coryfenidae)、蓝鱼科(Pomatomidae) 以及鲹科(Scombresosidae)鱼中组胺的最大限量值为100 – 400 mg/kg。